甾体激素对乳腺癌细胞钠碘转运体基因表达的调控

目的：通过甾体激素对乳腺癌细胞钠碘转运体(NIS)基因表达的影响，探讨乳腺肿瘤组织NIS的表达特点和调控因素。方法：乳腺癌细胞(MCF7)进行培养，分别给予不同浓度的甾体激素包括雌二醇、孕酮、睾酮和地塞米松等刺激72h。采用RT-PCR方法检测细胞中NIS的mRNA表达情况。结果：乳腺癌细胞MCF7在经过雌二醇、孕酮和睾酮刺激后，细胞中NIS的mRNA表达比对照组有明显增加，并且与刺激物浓度成正相关，较大剂量地塞米松则明显抑制乳腺癌细胞中NIS的mRNA表达。结论：甾体激素对乳腺癌细胞NIS基因表达具有调节作用。     

细胞因子对乳腺癌细胞钠碘转运体基因表达的调控

目的 :研究 3种细胞因子 (肿瘤坏死因子 α ,干扰素 γ和IL 6 )对乳腺癌细胞钠碘转运体 (NIS)基因表达的影响 ,探讨乳腺肿瘤组织NIS的表达特点和调控因素。方法 :采用乳腺癌细胞株MCF 7进行培养 ,分别给予不同浓度的肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ或IL 6进行刺激 72h培养。采用RT PCR方法检测细胞中NIS的mRNA表达情况。结果 :乳腺癌细胞MCF7在经过肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ或IL 6刺激后 ,细胞中NIS的mRNA表达比对照组有明显降低 ,并且与细胞因子浓度浓度成反比趋势。结论 :细胞因子肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ和IL 6对乳腺癌细胞MCF 7的NIS基因表达有抑制作用 ,这提示细胞因子可能通过调节乳腺癌NIS基因的表达 ,从而影响乳腺癌细胞对放射性碘治疗的敏感性。     

高碘摄入对SD大鼠钠/碘同向转运体蛋白表达影响的免疫组化研究

目的:动态观察长期高碘摄入对SD大鼠甲状腺细胞钠/碘同向转运体(NIS)蛋白表达的影响.方法:SD大鼠分别饲以去离子水及不同碘浓度的碘化钾水,给碘后1 d及1,2,4,8周处死.测定尿碘、组织碘含量,免疫组织化学方法观察甲状腺细胞NIS蛋白表达水平.结果:高碘摄入可引起甲状腺滤泡细胞膜表面NIS蛋白表达的下降.短期较低浓度的高碘摄入对NiS蛋白的表达无明显影响,而较高浓度的碘摄入则引起NIS蛋白表达的明显减少;长期高碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用,可在机体自我调节机制作用下得以部分恢复,但NIS蛋白表达仍处较低水平.结论:高碘摄入可导致甲状腺细胞表面NIS蛋白表达下降,随摄碘浓度的增加抑制作用增强;不同浓度的碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用表达时间不同.     

中药夏枯草对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘率的影响

目的:探讨中药夏枯草对甲状腺癌细胞株K1钠/碘同向转运体(NIS)基因表达及摄碘率的影响,为夏枯草辅助放射性碘治疗甲状腺癌提供依据.方法:分别以不同浓度(0,20,50,100,150,200 g/L)的夏枯草处理体外培养的甲状腺癌细胞株(K1),48 h后利用半定量RT-PCR检测细胞NIS mRNA表达,γ-计数仪检测细胞摄碘能力.结果:夏枯草浓度在0～100 g/L范围内,细胞NIS基因表达及摄碘能力随夏枯草浓度的增加而增加(P<005).当夏枯草浓度达150～200 g/L时,增加后浓度与100 g/L浓度相比差别无统计学意义(P>0.05).结论:夏枯草可上调甲状腺癌K1细胞NIS基因表达,增强其摄碘率,而且这种作用在一定浓度范围内具有剂量依赖性.     

萝卜硫素对分化型甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘能力的影响

目的:研究萝卜硫素对分化型甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘能力的影响。方法:选择乳头状甲状腺癌细胞系K1及滤泡状甲状腺癌细胞系FTC133进行体外培养,给予不同浓度萝卜硫素处理24h,通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测钠/碘同向转运体(NIS)mRNA的表达;通过γ计数仪检测甲状腺癌细胞摄碘能力。结果:反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结果表明,萝卜硫素可以上调NIS基因的表达,并呈浓度依赖性;γ计数仪检测结果表明,萝卜硫素可以提高分化型甲状腺癌的摄碘能力。结论:萝卜硫素为放射性碘治疗分化型甲状腺癌提供了新的思路。     

ATRA对甲状腺鳞癌SW579细胞株NIS表达的影响

目的 观察全反式维甲酸体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学和NIS表达的变化.方法 分别以终浓度为2×10-5 mol/L、4×10-5 mol/L、6×10-5 mol/L、8×10-5 mol/L的维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用RT-PCR的方法观察钠碘转运体表达的变化.结果 ATRA作用48小时后,可见细胞形态改变;但NIS mRNA表达水平未见明显变化(P＞0.05).结论 不同浓度的ATRA可诱导SW579细胞形态学变化,但不能提高NIS的表达.     

槲皮素对K562/A02细胞株热休克蛋白mRNA及蛋白质表达的影响

目的了解槲皮素对K562/A02细胞株70kd热休克蛋白(HSP70)基因及蛋白质表达的影响.方法热处理前后加入终浓度为10μmol/L的槲皮素,RT-PCR方法检测HSP70基因mRNA表达,Western blot方法检测HSP70蛋白表达. 结果热处理明显增加K562/A02细胞HSP70基因mRNA转录和蛋白表达;热处理前加入槲皮素,HSP70基因mRNA及蛋白表达均显著下调;热处理后加入槲皮素,HSP70基因mRNA及蛋白表达无明显变化. 结论热处理能明显增加K562/A02细胞HSP70基因转录和蛋白表达;槲皮素能抑制K562/A02细胞HSP70基因mRNA及蛋白的表达,并且抑制点早于HSP70的基因转录;槲皮素在K562/A02细胞HSP70基因转录启动后则不再有抑制作用.     

MEK基因在黑米花青素抗HER-2阳性乳腺癌转移中的作用研究

目的 探究丝裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)基因在黑米花青素(black rice anthocyanins,BRACs)抗HER-2阳性乳腺癌转移中的作用.方法 MDA-MB-453细胞经过BRACs、MEK抑制剂U0126、SiRNA沉默MEK单独或联合处理24 h,采用划痕愈合实验、Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力,使用免疫沉淀法、免疫印迹法检测MEK磷酸化水平及其与HER-2蛋白的相互作用,利用RT-PCR检测MEK mRNA在MDA-MB-453细胞中的表达.结果 与对照组比较,BRACs、U0126及MEK-SiRNA单独或联合处理的实验组均能有效抑制MDA-MB-453细胞转移及侵袭能力,差异有统计学意义(P＜0.05).MEK蛋白磷酸化水平经BRACs处理后显著降低,MEK蛋白与HER-2蛋白之间的相互作用减弱,U0126联合BRACs处理MDA-MB-453细胞较BRACs单独处理更明显地抑制MEK磷酸化水平(P＜0.05).MDA-MB-453细胞MEK mRNA和蛋白的表达水平经MEK-SiRNA、BRACs单独或联合处理后均下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MEK基因与HER-2阳性乳腺癌的侵袭、转移有密切关系,其在BRACs抗HER-2阳性乳腺癌转移中起重要作用.     

重组杆状病毒载体介导钠碘转运体基因在胰岛细胞中表达的研究

目的 探讨以杆状病毒为载体,钠碘同向转运体(NIS)基因作为报告基因监测胰岛细胞的可行性.方法 通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备绿色荧光蛋白(GFP)和NIS基因重组杆状病毒(Bac-GFP和Bac-NIS).分别以不同感染复数(MOI)的Bac-GFP感染大鼠胰岛细胞,荧光显微镜观察胰岛细胞的感染百分比和荧光表达强度;以MOI为40的Bac-GFP感染胰岛细胞,荧光显微镜下观察荧光表达时间及细胞生存状态.以不同MOI的Bac-NIS感染胰岛细胞,测定感染细胞的碘摄取情况;以MOI为40的Bac-NIS感染胰岛细胞,动态观察感染细胞摄碘能力的变化以及高氯酸钠(NaClO4)对细胞摄碘的影响.结果 Bac-GFP可高效感染SD大鼠胰岛细胞,对细胞无毒性作用;感染的胰岛细胞百分比和荧光强度随MOI的提高而上升,细胞感染百分比可高达95％以上(MOI =40),且荧光表达时间可持续2周左右.Bac-NIS感染的胰岛细胞表现出摄碘功能增强和NaClO4抑制摄碘的特性,且感染细胞摄碘的放射性计数随MOI的提高而增加;MOI为40时,Bac-NIS感染细胞摄碘的放射性计数是空白对照的12倍.结论 杆状病毒介导的NIS基因在胰岛细胞中高效表达,有效介导放射性碘摄取,可用对胰岛细胞移植情况的监测.     

干扰素-γ对甲状腺细胞钠/碘转运体基因调控的研究

目的研究干扰素-γ(IFN-γ)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位.方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5天后,吸去培养液,换用含不同浓度IFN-γ的试验液,与单层培养的滤泡上皮细胞共同孵育48 h,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测钠碘转运体(NIS)mRNA表达的变化.结果IFN-γ浓度在0、1 U/ml时,GD甲状腺滤泡上皮细胞膜上NIS mRNA表达无明显差异;IFN-γ浓度在10、100U/ml时,NIS基因表达比前一浓度时明显受抑制(P＜0.05);IFN-γ浓度为1000U/ml时,NIS基因表达量与前一浓度比较无统计学差别.结论IFN-γ可抑制甲状腺滤泡细胞基膜上NIS基因的表达,提示细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中发挥重要作用.     

含hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒的构建及其功能鉴定

目的构建乏氧应答启动子调控的人钠/碘共同转运体（hNIS）报告基因重组质粒,为实体瘤微环境乏氧的实时监测提供研究基础。方法合成乏氧反应元件（HRE）的核苷酸片段,克隆入pGL3-promoter,构建为pGL3-promoter-5×HRE载体。然后将扩增的hNIS基因插入pGL3-promoter-5×HRE载体中,构建为pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒并进行测序验证。以DMSO处理组作为对照,CoCl_2处理HEK293细胞模拟乏氧;将经验证的pShuttle-NIS质粒转染HEK293乏氧细胞,同时将构建的pcDNA3.1-HIF-1α质粒和pShuttle-NIS质粒按照3：1比例转染HEK293细胞,转染空质粒pcDNA3.1和pShuttle-NIS质粒组作为对照。通过qRT-PCR法检测hNIS基因表达的变化。并用高锝酸盐（~（99m）TcO_4~-）处理双质粒共转染的HEK293细胞,洗脱游离~（99m）TcO_4~-后通过γ计数器采集细胞放射性计数,检测所表达NIS蛋白的功能。结果克隆的基因产物与预期一致,序列无碱基的突变。共转染HIF-1α质粒组及转染pShuttle-NIS的CoCl_2处理组,其hNIS mRNA的表达量显著高于转染空质粒及DMSO处理组（均P〈0.01）。共转染HIF-1α质粒组细胞的~（99）TcO_4~-摄取率显著高于空质粒对照组（P〈0.01）。结论 pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒转染后能介导细胞摄取~（99m）TcO_4~-,为微环境细胞乏氧的核素显像提供实验依据。     

甲状腺乳头状癌中促甲状腺激素受体与钠碘转运体mRNA的表达

目的钠碘转运体(Na+/I-symporter,NIS)是介导甲状腺细胞摄取碘的重要载体,其表达、定位与促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)关系密切。文中主要研究甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)及癌旁组织中TSH受体(TSH receptor,TSHR)与NIS基因的表达。方法实时荧光定量PCR法测定36例PTC及癌旁组织,20例正常组织中TSHR mRNA及NIS mRNA的表达水平。结果 PTC及癌旁组织中TSHR mRNA表达水平明显低于正常组织,P<0.05;NIS mRNA表达水平在PTC组织中显著下降,P<0.05。结论 PTC组织中TSHR与NIS mRNA基因表达水平呈现同步下降趋势,可能与TSH-TSHR信号通路的调控有关。     

5,7-DMF对MDA-MB-453细胞凋亡和14-3-3σ基因表达的影响

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)诱导人乳腺癌MDA-MB-453细胞凋亡作用及机制.方法:体外培养乳腺癌MDA-MB-453细胞.MTT法测定细胞活力;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)观察14-3-3σ基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应(RT-P...     

分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与^131I辐射的关系

目的研究体外培养的分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与放射性碘（^131I）辐射的关系。方法体外培养的甲状腺癌细胞株FTC-133分为实验组（以经筛选不造成细胞增殖抑制剂量的Na^131I辐射细胞48h,长期传代培养）、对照组（不加入Na^131I,长期传代培养）和空白组（细胞冻存,实验时复苏）。测定各组细胞摄碘率;分别采用RT—PCR、Western blotting和放射免疫分析法（RIA）检测各组细胞甲状腺球蛋白（Tg）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、钠碘转运体（NIS）、促甲状腺激素受体（TSHR）mRNA和蛋白表达。结果细胞摄碘率为空白组〉对照组〉实验组,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。与空白组比较,实验组和对照组细胞Tg、TPO、NIS、TSHR蛋白表达均明显下降,且以实验组下降尤为显著,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;三组Tg、TPO、NIS和TSHRmRNA与蛋白表达变化一致。结论分化型甲状腺癌细胞FTC-133长期体外培养自动经历失分化过程,^131I辐射促进这一过程的发展,可能与甲状腺特异蛋白表达下降有关。     

甲状腺组织中钠/碘转运体基因表达的研究

目的：研究各种病理甲状腺组织中钠／碘转运体（NIS）基因的表达情况，探讨NIS与甲状腺疾病之间的关系。方法：甲状腺组织取自3例Graves病（GD）患者，2例桥本甲状腺炎（HT），2例甲状腺乳头状癌（TC），2例癌旁正常甲状腺组织，运用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测NIS mRNA的表达情况。结果：癌旁正常甲状腺组织表达NIS mRNA,GD甲状腺组织NIS基因表达量明显增多（P＜0．05）；HT组织中，1例NIS mRNA表达量减少，1例不表达；甲状腺癌组织不表达NIS基因。结论：不同病理甲状腺组织中NIS基因表达存在一定变化，NIS可能参与自身免疫性甲状腺疾病及甲状腺癌的发病机理。     

Effects of retinoic acid on the beta-catenin/TCF pathway in cultured porcine tracheobronchial epithelial cells.

The effects of retinoic acid on the beta-catenin/TCF pathway in cultured porcine tracheobronchial epithelial cells (TBEC) were investigated. After TBEC were treated with retinoic acid at various concentrations, mRNA and protein changes of beta-catenin in cytoplasm, nucleus and whole cell of the TBEC were observed by immunocytochemical stain, RT-PCR and Western blotting. And the changes of the target gene cyclinD1 of beta-catenin/TCF pathway were also observed. It was found that there was no significant difference in beta-cat mRNA level after retinoic acid treatment. However, the expression of beta-catenin in the whole cell and cytoplasm was elevated with the increase of retinoic acid concentration (P<0. 01). The nuclear protein beta-catenin and target gene cyclinD1 of beta-catenin/TCF pathway was decreased (P<0.05). It was indicated that retinoic acid could increase beta-catenin level of the whole cell protein and decrease nuclear beta-catenin, downregulating beta-cat/TCF signaling activity and reducing target gene cyclinD1 protein level. As a result, retinoic acid can downregulate beta-catenin/TCF pathway in porcine tracheobronchial epithelial cell, suggesting that retinoic acid can inhibit the proliferation and accelerate differentiation of tracheobronchial epithelial cells.     

Effects of Retinoic Acid on the β-catenin/TCF Pathway in Cultured Porcine Tracheobronchial Epithelial Cells

The effects of retinoic acid on the β-catenin/TCF pathway in cultured porcine tracheobronchial epithelial cells (TBEC) were investigated. After TBEC were treated with retinoic acid at various concentrations, mRNA and protein changes of β-catenin in cytoplasm, nucleus and whole cell of the TBEC were observed by immunocytochemical stain, RT-PCR and Western blotting. And the changes of the target gene cyclinD1 of β-catenin/TCF pathway were also observed. It was found that there was no significant difference in β-cat mRNA level after retinoic acid treatment. However,the expression of β-catenin in the whole cell and cytoplasm was elevated with the increase of retinoic acid concentration (P＜0.01). The nuclear protein β-catenin and target gene cyclinD1 of β-catenin/TCF pathway was decreased (P＜0.05). It was indicated that retinoic acid could increase β-catenin level of the whole cell protein and decrease nuclear β-catenin, downregulating β-cat/TCF signaling activity and reducing target gene cyclinD1 protein level. As a result, retinoic acid can downregulate β-catenin/TCF pathway in porcine tracheobronchial epithelial cell, suggesting that retinoic acid can inhibit the proliferation and accelerate differentiation of tracheobronchial epithelial cells.