组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A对细胞周期素D1调控的影响?

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A( TSA)对细胞周期素D1表达的影响,探讨TSA抑制细胞周期素D1表达的分子机制。方法以不同浓度(20、100、400 nmol/L)的TSA处理A549细胞24 h,以RT-PCR、Western blot等方法检测细胞周期素D1 mRNA和蛋白的表达水平;以染色质免疫沉淀技术分析400 nmol/L的TSA处理A549细胞24 h后,细胞周期素 D1基因核心启动子组蛋白3第9位赖氨酸乙酰化( Ac -H3k9)水平。结果随着TSA处理浓度的增加细胞周期素D1 mRNA和蛋白表达水平下降。在400 nmol/L TSA作用下,细胞周期素D1启动子区组蛋白乙酰化程度下降。结论 TSA 造成细胞周期素D1表达下调可能与细胞周期素D1启动子乙酰化程度下降有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对U266细胞增殖的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测P21、Cdk4、Acetyl—histone H3及PARP等的蛋白表达。结果MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0／G1期,细胞发生明显变化。出现P21表达增加,Cdk4表达下降,同时出现PARP的裂解。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275具有抑制人骨髓瘤细胞U266增殖作用,使细胞阻滞在G0／G1期,最终诱导U266细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤机制的研究

机体细胞维持正常功能的前提是基因有序的转录调控,如果基因转录调控功能紊乱,细胞可能发生癌变。组蛋白乙酰化、去乙酰化修饰作为基因转录调控的关键机制之一,与肿瘤的发生、发展关系密切。真核细胞内组蛋白乙酰化酶（histone acetyltransferase,HAT）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,     

血液恶性肿瘤的组蛋白去乙酰化及靶向去乙酰化酶抑制剂治疗进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)作为一种新型靶向药物,它通过调节染色质和某些非组蛋白的乙酰化状态,调控基因的转录,并发挥一系列生物学效应如诱导肿瘤细胞凋亡等.近期临床试验发现,HDACIs对某些类型肿瘤,尤其是血液恶性肿瘤有良好疗效.本文主要在血液恶性肿瘤的组蛋白去乙酰化及靶向去乙酰化酶抑制剂治疗进展方面进行介绍.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在肾脏疾病中的研究进展

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)可以诱导组蛋白和非组蛋白去乙酰化,在基因表达的表观遗传调节方面发挥重要作用.越来越多的证据表明HDAC参与各种肾脏疾病的发生、发展,强调抑制其活性可作为肾脏疾病的一种重要治疗策略.该文综述了组蛋白去乙酰化酶抑制剂在肾小管间质纤维化、糖尿病肾病、多囊肾病、急性肾损伤和狼疮性肾炎等肾脏疾病中的作...     

新型靶向组蛋白去乙酰化酶抑制剂的抗肿瘤作用及其机制

探讨3种新型靶向组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂D16,D22,D29的抗肿瘤活性作用及其抑制人宫颈癌细胞增殖的机制。MTT法检测D16,D22,D29对MCF-7、HCT-116、A549、HeLa以及K562的增殖抑制作用;测定D16,D22,D29对HDAC及其HDAC-1的酶活抑制作用;流式细胞术观察D16,D22,D29对HeLa细胞周期及凋亡诱导作用;Western blot测定D16,D22,D29对HeLa细胞中乙酰化组蛋白H3(Ac-H3),p21^cip/WAF的蛋白表达影响。结果显示,D16,D22,D29明显抑制多种肿瘤细胞株的增殖,有效抑制HDAC及其HDAC-1的活性,其效果优于阳性对照药Vorinostat(SAHA),并诱导HeLa细胞产生G₁期细胞周期阻滞及凋亡,Ac-H3及p21^cip/WAF的蛋白水平明显上升。D16,D22,D29具有一定的抗肿瘤活性,其机制与诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,促进p21^cip/WAF的蛋白表达有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗血液肿瘤的研究进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)可通过调节组蛋白和非组蛋白的乙酰化水平,调控基因的表达。体内及体外实验均显示,HDACI可通过细胞周期阻滞、促进细胞分化、诱导细胞凋亡等多种生物学效应发挥其抗血液肿瘤的作用。HDACI与其他药物联合应用在抗血液肿瘤方面展现了良好的应用前景。     

U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法：台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymer-ase,PARP]裂解情况.结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论：MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在糖尿病治疗中的作用

糖尿病的发病率逐年升高,临床迫切需要更加安全、简便、有效的治疗药物.组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)在改善胰岛β细胞功能,保护其免受炎症因子攻击,改善外周组织胰岛素抵抗,调节免疫系统而改善代谢,减缓糖尿病并发症等方面的作用日益受到重视,有望成为糖尿病甚至是妊娠期糖尿病预防和治疗的新型药物.文章就HDACi在糖尿病治疗中的作用进行综述.     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

曲古抑菌素A对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制

目的本研究探讨曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌细胞的杀伤作用和机制.方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的膀胱癌BIU-87细胞株;采用MTT法检测细胞生长抑制率;以流式细胞术(FCM)测定不同浓度的TSA作用前后膀胱癌细胞的凋亡情况及细胞周期变化;应用RT-PCR分析了TSA作用前后膀胱癌细胞中p21^WAF1 mRNA表达的变化.结果 TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制膀胱肿瘤细胞增殖,FCM结果表明TSA能显著诱导细胞发生凋亡且主要诱导G1期细胞发生凋亡而出现凋亡峰,RT-pCR结果示TSA处理能显著诱导p21^WAF1 mRNA表达.上述结果都呈现出明显的量-效与时-效关系.结论 TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人膀胱癌细胞生长,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21^WAF1蛋白水平实现的.     

p27蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨p27蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理意义。方法：应用免疫组化SP法检测118例乳腺癌及27例良性乳腺病变组织p27蛋白表达水平,采用x^2检验其与临床病理学持征的关系。结果：良性乳腺p27蛋白的高阳性表达率为96．30％（26／27）,癌组织为60．17％（71／118）,p27基因蛋白表达水平与乳腺肿瘤的良恶性有差异性（P＜0．05）;p27蛋白表达水平与乳腺癌病理组织学分级,淋巴结转移呈显著负相关（P＜0．05）,组织分化差,有腋淋巴结转移其p27蛋白阳性表达明显降低。结论：p27蛋白表达的下降可能与乳腺癌的发生发展有关,并可作为估价乳腺癌预后的重要指标。     

组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制研究

目的 研究组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制.方法 采用LNCaP细胞系建立前列腺癌异种移植体动物模型,分为对照组和HDAC抑制剂组,对照组动物常规饲养,HDAC抑制剂组采用0.4％HDAC抑制剂丙戊酸（VPA）饮用水连续饮用35 d.免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3、p21WAF1/CIP1、p27KIP1、细胞周期蛋白D1、雄激素受体（AR）表达.结果 与对照组相比,HDAC抑制剂组乙酰化组蛋白H3阳性染色MOD值显著升高[（0.63±0.12）比（0.75±0.11）,P＜0.05],p21 WAF1/CIP1[（0.27 ±0.06）比（0.79±0.10）,P＜0.05]和p27KIP1 [（0.31 ±0.08）比（1.09±0.18）,P＜0.05]阳性染色MOD值显著增加,细胞周期素D1的阳性染色MOD值显著减少[（0.69±0.09）比（0.58±0.08）,P＜ 0.05],AR阳性染色MOD值显著降低[（0.62±0.10）比（0.53±0.07）,P＜0.05].结论 HDAC参与前列腺癌细胞的细胞周期调控并与AR过表达有关,HDACI可通过诱导癌细胞周期阻滞及下调AR表达水平等机制抑制前列腺癌肿瘤移植体生长.     

Disabled-1在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞周期的影响

目的：探讨Disabled-1（Dab1）基因在乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况,并阐明Dab1对乳腺癌细胞周期的影响。方法：体外培养永生化的乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和MDA-MB-231,实时荧光定量（Real-time PCR）法检测MCF-10A、MCF-7、BT-549和MDA-MB-231细胞中Dab1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测Dab1蛋白的表达水平。取对数生长期的BT-549细胞,分为对照组、转染pKH3组和转染pKH3-Dab1组,采用流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。结果：Real-time PCR法检测,与MCF-10A细胞（0.998±0.020）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.504±0.037）、BT-549（0.302±0.027）和MDA-MB-231（0.330±0.031）中Dab1 mRNA相对表达水平明显下降（P<0.05）。Western blotting法检测,与MCF-10A细胞（0.227±0.021）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.134±0.014）、BT-549（0.076±0.01）和MDA-MB-231（0.074±0.005）中Dab1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。流式细胞术检测,与对照组和转染pKH3组比较,转染pHK3-Dab1组BT-549细胞出现细胞周期G₁期阻滞。结论：Dab1在体外培养乳腺癌细胞系中表达下调,Dab1过表达可阻滞乳腺癌细胞G₁细胞周期进展。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Chidamide抑制C2C12骨骼肌细胞分化及其机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达苯胺（Chidamide）对C2C12小鼠骨骼肌细胞分化作用及其分子机制。方法:CCK-8（cellcountingKit-8）法检测0、0.5、1、2、4μmol/LChidamide处理后C2C12细胞的活力;将C2C12骨骼肌细胞分为对照组（control）和Chidamide组,Western印迹检测Chidamide处理后组蛋白H3乙酰化（Pan-acetylH3）水平,细胞免疫荧光染色肌管细胞分化成熟标志蛋白肌球蛋白重链（MyHC）,检测肌细胞分化,Western印迹和qPCR检测MyHC、成肌分化抗原（MyoD）、肌细胞生成素（MyoG）的表达及肌原纤维Ⅰ型（Myh7）、Ⅱa型（Myh2）、Ⅱb型（Myh4）和Ⅱx型（Myh1）的表达。结果:0、0.5、1、2、4μmol/L的Chidamide均不影响细胞活力。Chidamide升高Pan-acetylH3蛋白水平（t=3.22,P<0.05）。细胞免疫荧光结果显示,与对照组相比,Chidamide处理后肌细胞融合受损,分化程度降低。Western印迹和qPCR结果显示,与对照组相比,Chidamide下调MyHC、MyoD和MyoG蛋白水平（t=5.71、6.05、7.37,均P<0.01）和mRNA水平（t=26.87、5.81、4.86,均P<0.01）;降低Myh7蛋白（t=3.93,P<0.01）和mRNA水平（t=4.85,P<0.01）;降低Myh1、Myh2蛋白（t=14.13、5.05,均P<0.01）和mRNA水平（t=15.48、16.82,均P<0.001）,但不影响Myh4的蛋白（t=2.19,P>0.05）和mRNA水平（t=1.50,P>0.05）。结论:Chidamide可能通过下调MyoD和MyoG的表达抑制C2C12骨骼肌细胞分化,且主要抑制Ⅰ型、Ⅱa和Ⅱx型肌原纤维,不影响Ⅱb型肌原纤维。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制研究

目的分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制。方法利用0.1、0.2、0.5、1.0及2.0μmol/L丁酸钠(NaBut)对U266细胞株48 h进行处理,使用0.5μmol/L丁酸钠对细胞8、16、24、36、48 h进行处理,使用1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6μmol/L NaBut、6μmol/L VPA对细胞48 h进行处理,另在对照组中加入同等剂量的溶剂,使用MTT法对细胞存活率进行检测,对其检测结果进行比较。结果 (1)与对照组比较,不同浓度丁酸钠处理细胞48 h后细胞存活率逐渐降低,差异显著(P0.05);丁酸钠浓度越高,细胞存活率则越低。(2)与对照组比较,0.5μmol/L丁酸钠处理细胞16、24、36、48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05);处理花费时间越长,细胞的存活率则越低。(3)与对照组比较,1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6 mmol/L NaBut及6 mmol/L VPA处理48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut有效的抑制了多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡,在抗癌方面有着良好的应用前景。     

PTEN体外转染对乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响

目的探讨外源野生型PTEN基因对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法利用脂质体介导法将重组质粒pBP-wt-PTEN导入人乳腺癌细胞ZR-75-1中,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果经嘌呤霉素筛选得到稳定表达细胞株;重组质粒pBP-wt-PTEN稳定转染可明显抑制ZR-75-1细胞的体外增殖,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个较为明显的凋亡峰。结论转染外源性野生型PTEN基因可使ZR-75-1细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

［摘 要］目的：探究 DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法：利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1( + )质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果：成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组（P<0.05）,DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多（P<0.05）,DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%（37/37）;在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%（7/37）,两者比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。