急性百草枯中毒所致急性肺损伤机制研究

目的从病理学改变、酶学指标、肺组织细胞内钙离子浓度变化等方面,探讨急性百草枯中毒的损伤机制。方法取SD大鼠36只,随机分为2组,实验组大鼠腹腔内注射百草枯20mg/kg,用无菌生理盐水配成5mg/mL的溶液,一次性染毒。对照组大鼠腹腔内注入等体积无菌生理盐水。在6个不同时间点观察其肺组织病理学改变,测量肺组织匀浆内的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力及肺组织细胞内钙离子浓度变化。结果百草枯中毒可引起弥漫性毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损害,主要表现为肺泡水肿、出血、透明膜形成和程度不等的肺泡炎,炎症细胞浸润;肺组织匀浆内MDA含量显著高于对照组(P<0·01);SOD活力下降(P<0·01);肺组织细胞浆内钙离子浓度明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01),以第2~4d明显,钙离子荧光强度分别为82·91±28·68和55·42±29·61。结论急性百草枯中毒的损伤机制可能与联吡啶阳离子产生反应态氧、胞内钙稳态失衡有关,最终导致不可逆的肺间质纤维化。     

320排CT评价磨玻璃影相对体积对百草枯所致肺损伤的诊断价值

目的 应用320排CT测定肺部磨玻璃影 (ground glass opacity, GGO) 相对体积评估家兔百草枯中毒后肺损伤程度.方法 48只健康家兔随机分为4组, 以梯度浓度为25、35、45 mg/kg百草枯及等剂量生理盐水灌胃处理, 于中毒后第1、7、14及28 d行320排CT检查, 行GGO相对体积半定量分析, 并于上述时间点每组随机处死1只家兔取肺组织行病理观察.结果 3组实验组与正常对照组比较, GGO相对体积在各时间段均明显大于对照组 (P<0.05) ;3组中毒组家兔之间两两比较, 不同药物浓度作用时存在剂量依赖性 (P<0.05) , 即GGO相对体积随药物剂量增加而增加;光镜下中毒组家兔肺组织表现为不同程度炎性细胞浸润, 局灶性充血, 肺泡间隔增宽, 肺泡萎陷, 部分肺泡腔闭塞, 上述病理改变随时间延长加重.结论 320排CT测定GGO相对体积可以较好量化评价百草枯所致肺损伤, 为临床评价百草枯所致肺损伤提供客观依据.     

百草枯对肺组织细胞凋亡的影响

百草枯是一种高效、高毒性的除草剂,急性百草枯中毒主要损伤肺,研究发现细胞凋亡参与百草枯所致的急性肺损伤及肺纤维化的形成。百草枯通过氧化损伤、钙稳态失衡及线粒体损伤诱导肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡,且通过死亡受体活化途径、线粒体途径、内质网应激途径调控细胞凋亡相关基因的表达。除此之外,百草枯通过激活核转录因子,抑制多型核中性粒细胞(PMN)凋亡,延长PMN生存时间,造成炎性因子大量释放,导致组织细胞损伤。     

百草枯中毒致大鼠肺纤维化模型中肺组织的IL-17A表达

目的观察百草枯中毒大鼠血浆和肺组织匀浆中的IL-17A的动态变化,探讨大鼠百草枯中毒肺损伤的机制。方法将雄性SD大鼠24只随机分成百草枯中毒模型组和生理盐水对照组,分别给予20 mg/kg百草枯或等体积生理盐水1次性灌胃染毒,并在给药后7 d和14 d处死大鼠,观察其肺的病理变化。肺组织匀浆和血浆中IL-17A的含量。结果百草枯中毒后大鼠肺部病理切片表现为肺泡炎,肺纤维化等不同程度的肺损伤改变。血浆和组织匀浆中IL-17A在中毒后与对照组大鼠比较明显升高,并随时间变化,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在百草枯中毒肺损伤中,IL-17A可能发挥了重要作用。     

血小板激活因子所致的大鼠肺损伤依赖于细胞外钙离子的存在

血小板激活因子(PAF)1.8 ng/ml可引起离体大鼠灌注肺血管通透性升高,并使肺重量持续增加。无钙PAF灌注组的肺重量增加、液体滤过系数、标记白蛋白渗出血管外的量分别比有钙PAF灌注组低89.2％、70.9％和75.5％(35 min内),接近正常。肺毛细血管压和肺动脉压的变化幅度在35 min内分别从+0.725±0.389 kPa和+1.187±0.32 kPa下降至-0.708±0.315 kPa和-0.025±0.279 kPa。无钙灌注对未经PAF处理的大鼠离体肺也有轻度的影响。上述结果提示PAF所致的肺损伤依赖于细胞外钙离子的存在。     

TRPV4对高血压小鼠胸主动脉内皮细胞钙离子稳态的调节作用

目的:探讨瞬时受体电位香草素亚型4（transient receptor potential vanilloid type 4,TRPV4）在高血压小鼠胸主动脉内皮细胞中对于钙离子稳态的调节作用。方法:通过高盐饮食诱导小鼠高血压模型,分别在细胞和组织水平上使用钙离子荧光探针Flou-4/AM标记胸主动脉内皮细胞内钙,测定在TRPV4特异性激动剂GSK1016790A刺激下高盐饮食组和普通饮食组中细胞的钙离子浓度变化。结果:在胸主动脉内皮细胞的细胞和组织水平上通过使用GSK1016790A特异性激活TRPV4通道,普通饮食组和高盐饮食组细胞内钙离子浓度均增高（P<0.05）,但和普通饮食组相比较,高盐饮食组在GSK1016790A刺激下钙离子荧光强度增幅低于普通饮食组（P<0.05）。结论:TRPV4参与了小鼠胸主动脉内皮细胞钙稳态的调节,通过激活TRPV4,促进内皮细胞外钙离子内流进入胞内,从而维持细胞内钙离子的稳态,而在病理模型,高盐饮食诱导的高血压状态下,TRPV4调节小鼠胸主动脉内皮细胞钙内流的作用受损。     

百草枯中毒致大鼠急性肺损伤时NF-κB抑制剂对中性粒细胞凋亡的影响

目的:探讨在百草枯(PQ)中毒所致大鼠急性肺损伤时NF-κB抑制剂(PDTC)对中性粒细胞凋亡的影响。方法:120只大鼠随机分为4组:1正常对照组(C组):腹腔注射生理盐水3ml/kg;2PDTC对照组(PC组):腹腔注射PDTC120mg/kg,半小时后腹腔注射生理盐水3ml/kg;3急性肺损伤组(L组):大鼠腹腔注射2%PQ(25mg/kg);4急性肺损伤+PDTC干预组(L+P组):腹腔注射PDTC(120mg/kg),半小时后腹腔注射2%PQ。后两组分别以腹腔注射PQ后的1d、3d、5d作为观测点,处死动物、取材,每个时间点16只大鼠。取肺组织HE染色来评价肺组织损伤情况;检测血清中TNF-α水平、肺泡灌洗液中PMN的NF-κBp65表达、PMN中胞浆蛋白IκBα的含量和中性粒细胞凋亡率。结果:肺组织病理结果显示,C组和PC组大鼠的肺组织结构基本完整。L组炎性细胞浸润明显增多,肺组织损伤程度加重。P+L组肺组织损伤程度较轻。L组血清TNF-α水平较C组显著增加,P+L组降低。L组3d时PMN的凋亡率最低(3.52±0.34)%,P+L干预组与相应时间点L各组相比凋亡率均增加。结论:百草枯中毒导致了大鼠急性肺损伤,在预先应用NF-κB抑制剂(PDTC)后,使延缓的中性粒细胞凋亡恢复正常,从而有效地减轻了百草枯中毒所致的κB大鼠急性肺损伤。     

CT对百草枯中毒肺损害诊断价值

目的 探索CT对百草枯中毒肺损害影像学改变及其演变过程.方法 回顾性分析18例患者(少量组、中量组和大量组)在早期(<3 d)、中期(3～14 d)和后期(15 d)的胸部影像学资料,分析患者肺损害的影像学特点.结果 依百草枯中毒患者肺部影像学表现其口服计量的大小和中毒时间的不同而不同,但肺问质改变是百草枯中毒的最终改变.结论 CT对百草枯中毒肺损伤的发现和演变有诊断价值,影像表现有一定的特异性.     

氢气对百草枯中毒大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨氢气对百草枯中毒大鼠急性肺损伤的保护作用。方法:24只大鼠随机分为3组:对照组、百草枯组和氢气组,百草枯组和氢气组腹腔注射百草枯(35mg/kg),氢气组于注射后立即开始吸入含2%氢气的空气。72h后检测肺湿/干比、肺泡灌洗液PMN、PaO2、肺损伤评分、肺组织丙二醛含量。结果:与对照组比较,百草枯组、氢气组肺湿/干比、肺泡灌洗液PMN、肺损伤评分、肺组织丙二醛含量升高,PaO2降低;与百草枯组比较,氢气组肺湿/干比、肺泡灌洗液PMN、肺损伤评分、肺组织丙二醛含量降低,PaO2升高。结论:吸入氢气能够通过抑制脂质过氧化,抑制白细胞在肺部的聚集,从而减轻百草枯中毒后引起的急性肺损伤。     

CT对百草枯肺损伤的诊断价值

目的探讨CT对百草枯中毒肺损伤的诊断价值和影像学特征。方法回顾性分析28例百草枯中毒患者胸部的影像学资料。评估CT对百草枯中毒肺损伤的诊断价值,分析影像学特点。结果28例百草枯中毒患者中23例存活3周以上, 5例与2周内死亡,依次将病例分成2组。第1组,叫规律观察组,按时间分成中毒早期(2d以内)、中期(3-14d),中后期(14d 以上)。早期CT表现以肺通气过度、毛玻璃密度为相对特征,占52.2%(12/23)。中期以广泛毛玻璃密度、肺间质改变、肺实性变和渗出性病变为主,占100%(23/23)。晚期病变呈迁延改变,转归决定影像特征.肺渗出实变、肺纤维化仍为主要影像征表现.第2组,以肺实变和渗出为主要表现,并提示预后差。CT检查具有病变发现早、提供影像信息多、表现相对特异的优势。结论CT检查对百草枯中毒肺损伤的发现和进展分析具有明显优势,影像表现具有特征性,对指导临床治疗及判断预后具有重要意义。     

牛奶灌胃减轻大鼠急性百草枯中毒肺损伤的实验研究

目的探讨牛奶灌胃对大鼠百草枯中毒肺损伤的治疗效果。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组,其中5只为空白对照组,牛奶实验组及生理盐水对照组各20只。百草枯染毒后1 h进行干预,染毒后3、6、24、48 h(每个时间点5只)处死大鼠,取肺组织进行组织切片,血液送检分析百草枯浓度。结果中毒后3、6、24和48 h牛奶实验组大鼠血浆百草枯浓度[(0.544±0.037)μg/ml、(0.460±0.047)μg/ml、(0.374±0.032)μg/ml和(0.126±0.031)μg/ml]低于生理盐水对照组[(3.592±0.164)μg/ml、(3.054±0.165)μg/ml、(2.350±0.184)μg/ml和(0.736±0.080)μg/ml](均P0.05)。组织病理学结果提示牛奶实验组大鼠肺组织的炎症细胞浸润、肺充血水肿及肺实变等损伤情况较生理盐水对照组明显减轻。结论牛奶灌胃可降低百草枯中毒大鼠的血浆百草枯浓度,减轻肺组织损伤。     

氢氧气体共同吸入对百草枯中毒大鼠早期肺损伤的影响

目的探讨氢氧气体共同吸入对百草枯中毒早期肺损伤的影响。方法通过观察百草枯中毒大鼠共同吸入不同浓度的氢氧气体,监测肺损伤指标的变化。结果氢氧气体共同吸入组肺湿/干比、PaCO2较对照组减低,P<0.05;pH值、PaO2较对照组升高,P<0.05。结论氢氧气体共同吸入可有利于重建早期肺损伤的氧化和还原系统的平衡,显著改善、延缓肺组织的氧化损伤进程。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的影响

目的:观察不同时限内神经肽Y(NPY)对心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的作用。方法:用Fluo3AM荧光标记细胞内游离钙离子,用NPY(100nmol/L)刺激WISTAR乳鼠心肌细胞,检测0min、5min、10min及24h内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化。结果:加入100nmol/LNPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量差异均无显著性。经100nmol/LNPY刺激24h后,心肌细胞胞浆钙含量(16.81±2.1)明显高于对照组(7.45±1.96)(P<0.01),核内钙含量(30.65±4.06)也显著高于对照组(15.64±2.16)(P<0.01)。结论:较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙浓度增加。     

生脉注射液对百草枯中毒大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨生脉注射液对急性百草枯中毒大鼠所致肺损伤(ALI)的保护作用.方法 将50只SD大鼠随机分成5组,空白组、阴性对照组、阳性对照组、生脉低剂量组和生脉高剂量组.观察大体标本,组织病理以及生物学标志:肺湿/干重比、肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞比和蛋白含量.同时测定血清和BALF中MDA含量、SOD和GSH-Px活力,以及肺组织核因子-κB和iNOS活性.结果 与阴性对照组相比,生脉低剂量组肺组织病理显示肺淤血、肺水肿明显减轻;而且血浆和BALF中MDA含量下降,差异有显著性(P<0.01);GSH-Px和SOD活力升高,差异有显著性(P<0.01);核因子-κB和iNOS降低(P<0.05,P<0.01). 结论 急性百草枯中毒可以引起肺组织脂质过氧化损害,而且核因子-κB及iNOS在百草枯所致肺损伤中起重要作用.生脉注射液可使急性百草枯中毒引起的脂质过氧化损害得到改善,并且能降低核因子-κB及iNOS水平,减轻百草枯中毒大鼠肺组织损伤.     

肾上腺髓质素对缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞Ca2+浓度动态变化的影响

目的　观察缺氧对肺动脉内皮细胞 (PAEC)的损伤作用 ,缺氧不同时间对PAEC内钙的影响 ,探讨新型血管舒张肽肾上腺髓质素 (ADM)的细胞内信息传导通路。方法　制备缺氧性肺动脉高压大鼠模型及应用活细胞消化分离技术 ;采用激光扫描共聚焦显微镜技术和微量注射法 ,给予外源性ADM ,观察PAEC内钙的动态变化。结果　①缺氧 2 0d ,PAEC细胞表面不光滑 ,细胞肿胀变形 ,大部分细胞胞核和胞质较对照组均有高密度萤光区。②给予外源性ADM注射第 1次后 ,细胞内钙含量快速升高 ,一般于 2 0s达高峰 ,再次注射不出现快速升高 ,两次注药间期钙含量持续在高位维持。结论　缺氧导致细胞内钙稳态失衡。PAEC损伤是细胞内钙稳态失衡的形态学基础。外源性ADM使PAEC内钙含量增加 ,ADM通过调节细胞内钙信息传导通路而发挥作用。     

Nrf2在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤中的表达和意义

目的研究转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤(ALI)中的表达和意义。方法 48只SD雄性大鼠随机平均分成百草枯中毒组和对照组。在注射百草枯后4、8、24和72 h时,收集血清和肺组织标本。采用生化法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,采用ELISA检测血清中IL-1β和TNF-α含量,检测大鼠肺湿/干重比,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blot检测肺组织中Nrf2蛋白表达水平,采用免疫组织化学法检测Nrf2在肺组织中的表达。结果大鼠百草枯中毒后血清中SOD活性降低,MDA含量增加,而炎症细胞因子IL-1β和TNF-α含量均明显增加。肺湿/干重比以及肺损伤呈时间依赖性增加。Nrf2在正常肺组织中有少量表达,当百草枯中毒1 d后其蛋白的表达量明显增加。结论 Nrf2参与了百草枯导致ALI的过程,并产生内在的保护作用。Nrf2有望成为治疗百草枯中毒新的靶点,具有良好的临床应用前景。     

Aβ诱发细胞钙失衡中蛋白激酶A的表达变化及二苯乙烯苷的影响

目的探讨β-淀粉样肽(Aβ)诱发的细胞内钙失衡机制中蛋白激酶A(PKA)的作用及二苯乙烯苷的干预效果。方法在立体定向仪下大鼠海马部位注射Aβ1-42造AD模型,大鼠随机分为对照组、手术组、模型组、二苯乙烯苷(TSG)组;免疫荧光法检测的胞内钙离子,在激光扫描共聚焦显微镜观察;磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKA活性,免疫印迹法检测PKA蛋白表达。结果与对照组比较,模型大鼠细胞内钙离子浓度增高;PKA活性及表达均明显增高,差异有显著性;与模型组相比,二苯乙烯苷干预后,细胞内钙离子降低,PKA活性及表达均下降,差异有显著性。结论 Aβ神经毒性作用引起的细胞内钙失衡机制涉及PKA活化后促进钙内流,并以细胞膜相活化更明显;二苯乙烯苷通过抑制PKA活化及表达,以纠正细胞内的钙超载。     

红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织保护作用的研究

目的 通过观察红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织转化生长因子-β 1（TGF-β 1）表达、TNF-α含量和血清IL-6水平的影响,探索其对肺损伤的保护作用.方法 将90只SD大鼠随机分为正常对照组、百草枯模型组、红景天苷治疗组,后两组再分为1、6、24、72h 4个亚组,每组10只.百草枯模型组和红景天苷治疗组采用百草枯溶液1ml/kg一次性灌胃制备急性百草枯中毒肺损伤模型,然后分别予等容积的0 9％氯化钠溶液、红景天苷1m l/kg腹腔注射.3组大鼠麻醉后,取股动脉血测定IL-6水平,处死后取肺组织,观察病理变化,采用免疫组化和RT-PCR测定肺组织中TGF-β 1及其mRNA的表达情况,并测定肺组织中TNF-α含量.结果 百草枯模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,红景天苷治疗组大鼠肺组织损伤程度较百草枯模型组减轻.与正常对照组比较,百草枯模型组、红景天苷治疗组肺组织6、24、72h TGF-β 1表达显著增加（均P＜0.01）,但红景天苷治疗组较百草枯模型组为低（均P＜0.05）.百草枯模型组与红景天苷治疗组中毒后第1h起大鼠肺组织TGF-β 1mRNA水平开始增加,但红景天苷治疗组较百草枯模型组为低（均P＜0.05）.与正常对照组比较,百草枯模型组及红景天苷治疗组肺组织中TNF-α含量、血清IL-6水平从第6h开始显著增加（均P＜0.01）,但红景天苷治疗组在各时点均较百草枯模型组为低（均P＜0.05）.结论 TGF-β1参与了百草枯中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程,红景天苷能抑制TGF-β 1的表达,降低肺组织TNF-α含量、血清IL-6水平,从而减轻百草枯对大鼠肺组织的损伤.     

大鼠体内百草枯组织分布研究

目的 探索性研究百草枯在大鼠体内的组织分布情况。方法 雄性大鼠36只采用数字表法随机分为9组,分别为给药前组、给药后0.5、1、3、6、10、24、48、72 h组,给药前组不给予百草枯,直接处死取组织;给药后组单次灌胃给予90 mg/kg百草枯,分别于对应时间点处死大鼠,处死前取血浆,处死后分别取心、肝、肺、肾、大脑、小脑、胃组织,对组织进行匀浆提取,采用高效液相色谱－质谱联用法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）测定各组织和血浆中百草枯浓度。结果 大鼠灌胃给予百草枯后,胃、肾、肺和肝的最高质量浓度均>30 μg/g,心、大脑和小脑的最高质量浓度均<10 μg/g。胃和肺1 h质量浓度最高,分别为（205.5±69.5）μg/g、（35.5±28.0）μg/g;肾和肝3 h浓度最高,分别为（124.8±146.9）μg/g、（30.9±42.1）μg/g。各组织和血浆大多数浓度点个体间变异超过50%,呈现较高的个体差异。结论 百草枯体内分布状况与其中毒后靶器官损伤部位及损伤程度高度一致,百草枯血浆质量浓度仅能间接反映百草枯体内情况,并不能代表受损伤器官中毒物质量浓度水平,临床中应重点关注各靶器官的损伤和器官衰竭情况,及时干预和救治。     

EGCG对百草枯致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在百草枯(paraquat,PQ)致小鼠急性肺损伤中的保护作用.方法 72只C57BL小鼠随机分为空白对照(NS)组,百草枯对照(PQ)组,EGCG对照组,EGCG处理组.空白对照组给予生理盐水60mg/kg腹腔注射,百草枯组给予PQ60mg/kg腹腔注射.EGCG对照组和EGCG处理组给予EGCG 4.0mg/kg腹腔注射.给药后观察各组小鼠肺组织病理改变,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及高迁移率蛋白(high-mobility group box 1,HMGB1)的含量,real-time PCR法测定肺组织TNF-α,HMGB1 mRNA表达水平.并观察HMGB1在肺组织中表达的改变.结果 百草枯对照组小鼠染毒后6h血清及肺组织TNF-α、HMGB1水平即明显高于NS对照组(P＜0.05).经EGCG处理组小鼠百草枯中毒第3天血清HMGB1和TNF-α水平低于PQ对照组(P＜0.05或P＜0.01).与百草枯对照组小鼠相比,EGCG处理组小鼠百草枯染毒后肺组织炎性改变明显减轻,肺组织HMGB1表达也明显减弱.结论 EGCG可明显减轻百草枯中毒导致的急性肺损伤.