菌斑生物膜的透射电镜样品制备

1　材料和方法1 .1　材料　收集拔除的正常第一恒磨牙 ,去除表面的菌斑 ,将其制备成直径为 4mm、厚度为 0 .5mm的牙釉质磨片 ,常规高压消毒 .将直径为 3mm、厚度为 1 mm,孔径为 1 mm的硬塑料环消毒后粘于牙釉质磨片上 (用 3M光固化树脂 ) .将这种装置用光固化树脂粘结于志愿者的同侧第一磨牙上 ,分别于 4,5,6和 7d后取下 .1 .2　方法　将取下的菌斑生物膜装置投入 40 m L· L-1戊二醛 ,0 .1 mol· L-1 磷酸缓冲液 (p H 7.4)前固定 4 h,其间在真空中放置 1 5 min(JY- 71 2 4型真空泵 ,上海微型电机厂 ) ,磷酸缓冲液漂洗 ;1 0 g· L-1 四…     

显示小鼠肠肌间神经丛铺片的方法

1　材料和方法1.1　材料　健康成年雄性昆明小鼠 5只 ,体质量 2 0～ 30 g,ip肌松药后以颈椎脱臼法通过腹部正中切口暴露腹腔 ,暴露的消化道器官不断用温和的 0 .0 1mol· L- 1 PBS(p H7.0 )清洗保持湿度 .食管、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠取材后用含尼莫地平 (10 - 6mol· L- 1 )的 0 .0 1m ol· L- 1 PBS冲洗 ,以 40 g· L- 1 的多聚甲醛充盈到最大程度后将各肠段两端扎紧 ,立即用 40 g· L- 1多聚甲醛液灌注固定 ,再放置其中固定6～ 8h(4℃ ) ,再移入 30 0 g·L- 1蔗糖液中 4℃过夜 .1.2　方法　各肠段沿肠系膜纵行剪开以 0 …     

反相高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪的血药浓度

目的　建立测定人血清中西替利嗪浓度的反相高效液相色谱法。方法　以羟嗪为内标 ,样品用乙酸乙酯提取两次。提取液用氮气吹干 ,残留物用 1. 7%磷酸复溶后进样分析。采用Shim packCLC ODS柱 (15 0mm× 6mm ,i d ,5 μm) ,0 0 2mol·L-1磷酸二氢钠—甲醇 (40∶6 0 ,V/V)为流动相 ,流速 1 2ml·min-1;检测波长 2 2 9nm。结果　在 2 0～ 10 0 0 μg·L-1范围内 ,西替利嗪血药浓度与色谱峰高比线性关系良好 ,r =0 . 9999(n =7,P <0 . 0 0 1) ,最低检测限为 4 μg·L-1。平均回收率为 99. 80 % ,日内RSD≤ 4 .83% (n =4 ) ,日间RSD≤ 4 . 93% (n =5 )。结论　本方法简便、灵敏、结果准确、重现性好 ,适用于西替利嗪药代动力学研究和临床血药浓度测定。     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

血浆置换抢救重症血栓性血小板减少性紫癜1例

1　病例报告　女 ,38岁 ,因恶心、呕吐 1 0余d ,意识不清 2d ,于 2 0 0 3 0 8 1 3急诊入院 .查体 :意识障碍 ,脑膜刺激征阳性 ,无局灶性定位体征 ,T 38℃ ,P 1 0 6·min-1 ,R 1 8·min-1 ,BP1 5 /9kPa.心肺 (- ) ,肝脾淋巴结无肿大 .Hb 78g·L-1 ,PLT1 1 6× 1 0 9·L-1 ,WBC 7.4× 1 0 9·L-1 .尿常规 :PRO( ) ,ERY( ) ;总胆红素 2 5 .6 μmol·L-1 ,直接胆红素 1 1 .3μmol·L-1 ,纤维蛋白原 1 .81 g·L-1 ;骨髓穿刺结果报告符合血栓性血小板减少性紫癜 (thromboticthrombocytopenicpurpura ,TTP) .入院后PLT进行性下降 ,全…     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨胰岛素对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响 .方法　体外进行大鼠血管平滑肌细胞的培养 ,以 5～ 10代细胞为实验对象 ,随机分成空白对照组和胰岛素组 ,胰岛素组又按浓度 1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6 mol· L- 1分为 4小组 ,在加药后 2 4 h、4 8h和 72 h用 MTT法分析细胞增殖活力 ,免疫细胞化学观察细胞核增殖抗原 (PCNA)的表达 ,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法检测 H2 O2 诱导的细胞凋亡 .结果　加药 4 8h后 ,1× 10 - 9mol· L- 1胰岛素组的 MMT A值 (0 .4 2± 0 .0 4 )高于空白组(0 .30± 0 .0 2 ) ,P<0 .0 5 ,低于 1× 10 - 6 mol· L- 1 胰岛素组(0 .5 2± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ;1× 10 - 9mol·L- 1胰岛素作用 4 8h后细胞的 MMT A值比空白组增加 4 0 % ,高于 2 4 h细胞的MMT A值增加率 (2 7% ) ,P<0 . 0 5 ;1× 10 - 9～ 1× 10 - 6mol· L- 1 胰岛素作用 4 8h后细胞 PCNA的表达率 (5 0 %～80 % )均高于空白对照组的 (30 % ) P<0 .0 5 ;加药 2 4 h后 ,1× 10 - 6 mol· L- 1胰岛素组细胞凋亡率 (30 % )低于空白组(70 % ) P<0 .0 5 .结论　胰岛素有明显促 VSMC(vascularsmooth m uscle cells)增殖的作用 ,并且这种作用时间和浓度依赖性 ;同时胰岛素     

小鼠睾丸中神经激肽B受体(NK3r)的免疫组织化学

1　材料和方法1.1　材料　雄性成年 BAL B/ c小鼠 6只 ,体质量 2 5～ 2 8g.以颈椎脱臼法处死后立即取材 ,用 9g· L- 1 生理盐水迅速冲洗干净置入 40 g· L- 1 多聚甲醛固定 2 4h,再浸入含 30 0 g·L- 1蔗糖的缓冲液中浸泡 4℃过夜 ,包埋剂包埋后恒冷箱切片 ,分两套收集 ,片厚 4μm,贴于涂明胶载玻片上室温晾干 .1.2　方法　经 30 m L· L- 1 的甲醇双氧水封闭 30 min后 ,第一套切片按照 ABC法进行染色 :1进兔抗神经激肽 B受体 [1 ](1∶ 5 0 )染色 12～ 2 4h;2 Biotin标记的山羊抗兔 Ig G抗体(DAKO 1∶ 40 0 )染色 6～ 8h;3 Avidin…     

稀土离子对BEL-7402细胞蛋白质构象变化的影响

应用傅立叶变换红外光谱 (FT IR)方法 ,考察了稀土离子作用于BEL 740 2细胞后所引起的整个细胞蛋白质构象的变化。结果 :在Hepes缓冲液介质中 ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1La3+对BEL 740 2细胞蛋白二级结构的影响随时间变化 ,作用 1h没有影响 ;作用 2h和 3h结果类似 ;作用 3h ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1的不同稀土离子相比较 ,使Random上升的程度是Yb3+>La3+>Gd3+。提示 :稀土离子可使BEL 740 2细胞蛋白质构象发生变化 ,这种变化可能是由于蛋白质很大一部分氢键作用发生了变化和蛋白质发生了聚集造成的     

大鼠血浆及组织中阿霉素含量测定方法(HPLC内标法)的建立

目的 :建立测定大鼠血浆及组织中阿霉素含量的方法 ,以揭示脂质体阿霉素的靶向性及体内的药物动力学特性。方法 :采用高效液相色谱法。色谱柱为Nova Pak ,C18柱 ( 15 0mm× 3 .9mm ,粒径为 4μm ) ;流动相为甲醇 乙腈 0 .0 1mol·L-1磷酸二氢铵 冰醋酸 (体积比为 5 0∶2 2∶2 8∶0 .6) ;流速 1.0ml·min-1;激发波长 479nm ,发射波长 5 87nm ;柱温 3 0℃。结果 :血浆阿霉素线性范围为 2 .3 2～ 1160 .0 0 μg·L-1,线性相关系数r=0 .9998(n =8) ;组织阿霉素为 0 .0 2 7～ 5 .4μg·g-1,线性相关系数r =0 .9995 (n =7) ;血浆阿霉素RSD为 2 .40 %～ 4.2 2 % ,组织阿霉素为 1.98%～ 9.17%。血浆及组织内药物平均回收率分别为 10 0 .41%和 95 .6%。血浆中阿霉素最低检测浓度为 2 μg·L-1,组织中为 0 .0 2 7μg·g-1。结论 :此方法灵敏度高、省时、简单、方便。     

鼠心肌成纤维细胞NOS活性的变化和AVP对NO合成的影响

目的　探讨在基础状态和精氨酸升压素 (AVP)干预下 ,心肌成纤维细胞 (CFs)一氧化氮合酶 -一氧化氮 (NOS-NO)系统活性的变化 .方法　胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,采用硝酸还原酶法和分光光度法分别测定基础状态和 AVP干预下 CFs的 NOS活性和 NO含量 .结果　 1基础状态下 CFs的 36 h组 NO含量 (4 2± 5 ) μm ol· L- 1 和 NOS活性 (6 17± 83)μkat· L- 1 ,显著高于 6 h组 (14± 3)μmol·L- 1 ,(16 7± 6 7)μkat· L- 1 . 2 AVP干预下 36 h组 NO含量(6 2± 1) μm ol· L- 1和 NOS活性 (115 0± 10 0 ) μkat· L- 1也显著高于 6 h组 (34± 4) μmol· L- 1 ,(6 0 0± 33) μkat· L- 1 ,且AVP干预组的 NO含量和 NOS活性均高于同时间点基础状态组(P<0 .0 5 ) . 3CFs的 NO含量和 NOS活性随 AVP浓度的增高而增加 ,其中 10 - 6mol· L- 1 AVP组 (6 3± 6 ) μmol· L- 1 ,(110 0± 5 0 )μkat· L- 1 和 10 - 7mol· L- 1 AVP组 (6 9± 6 )μmol· L- 1 ,(12 0 0± 5 0 )μkat· L- 1 都显著高于对照组 (2 9± 5 )μmol· L- 1 ,(4 5 0± 83) μkat· L- 1 ,10 - 9mol· L- 1 AVP组(32± 2 )μmol· L- 1 ,(5 0 0± 133)μkat· L- 1 和 10 - 8mol·L- 1 AVP组 (37± 2 ) μmol· L- 1 ,(6 0 0