中枢胆碱能系统的改变对老年痴呆大鼠行为的影响

目的观察Meynert核损害对大脑内胆碱乙酰转移酶（ChAT）和突触素（P38）的影响。方法Ibotenicacid定位损伤大鼠脑建立AD模型，利用水迷宫和跳台观察其行为学改变，利用原位杂交、免疫组化及图像分析测定大鼠内胆碱乙酰转移酶（ChAT）和突触素的表达。结果胆碱能损害组大鼠的学习记忆能力低于正常对照组和假手术组，其脑内ChAT和突触素的表达也明显下降．结论保护中枢胆碱能系统和增加突触素水平有助于改善认知记忆力。     

骨形态发生蛋白诱导大鼠胚胎NSCs分化研究

目的：建立骨形态发生蛋白（BMP7）诱导大鼠E14中枢神经系统神经干细胞（Neural stem cells，NSCs）分化的模型。方法：50μg／LBMP，处理大鼠E14中枢神经系统NSCs，以RT—PCR、Western杂交和免疫细胞化学方法，检测平滑肌细胞标记物SMA、Calponin的表达。结果：骨形态发生蛋白BMP，处理E14大鼠胚胎NSCs，作用6d后以抗Rip、抗-GFAP和抗pHI—tubulin抗体分别鉴定少突胶质细胞、星形胶质细胞和神经元，发现无一细胞表达Rip抗原，10％左右细胞表达GFAP，约1．4％细胞βⅢHI—tubulin阳性；以抗-平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actin，SMA）和抗-Calponin检测平滑肌细胞标志物SMA和Calpo—nin蛋白的表达，65％的细胞共同表达SMA和Calponin。结论：50μg／LBMP，处理大鼠E14中枢神经系统NSCs，大部分细胞分化为平滑肌细胞，其次为星型胶质细胞。     

慢性脑缺血对大鼠海马微血管构筑及胆碱乙酰基转移酶蛋白表达的影响

目的：探讨慢性脑缺血致大鼠海马胆碱能神经元损伤的作用,初步阐明其作用机制。方法：选取90只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（30只）和实验组（60只）。实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法,建立慢性脑缺血模型;假手术组大鼠颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,不做结扎。分别于术后第7、14和21天随机各取假手术组大鼠10只、实验组大鼠20只处死取材。免疫组织化学SP法观察海马神经元胆碱乙酰基转移酶（ChAT）蛋白表达水平的动态变化,单宁酸-氯化铁媒染法观察大鼠海马微血管构筑的动态变化,采用MiVnt图像分析系统定量分析免疫组织化学阳性结果、大鼠海马水平部的微血管密度（MVD）和微血管面积密度（MVA）。结果：实验组大鼠海马神经元ChAT的表达水平较假手术组大鼠明显降低（P<0.05);且随缺血时间的延长,ChAT的表达水平逐渐降低,实验组14 d时大鼠ChAT的表达水平明显低于实验组7 d时（P<0.05),实验组21 d时明显低于实验组14和7 d（P<0.05）。实验组各时间点大鼠海马的MVA和MVD均较假手术组明显降低（P<0.05）。随着造模时间的延长,MVA逐渐降低,实验组14和21 d时大鼠的MVA明显低于实验组7 d时（P<0.05）;随着造模时间的延长,MVD也逐渐降低,实验组14和21 d时的MVD明显低于实验组7 d（P<0.05）,实验组21 d时明显低于实验组14 d（P<0.05）。结论：慢性脑缺血可致大鼠海马MVA、MVD及ChAT蛋白的表达水平进行性下降,进而导致学习和记忆功能障碍逐渐加重,这可能是血管性痴呆发生的原因之一。     

Nogo-A及NgR在墨西哥钝口螈脑组织中的表达及意义

目的探讨勿动蛋白A(Nogo-A)及勿动蛋白受体(NgR)在正常墨西哥钝口螈及其中脑胆碱能神经元损伤后脑组织中的表达。方法以正常墨西哥钝口螈脑组织和中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织作为研究对象,采用免疫荧光技术观察正常墨西哥钝口螈脑组织中Nogo-A及NgR的表达;分别用荧光定量PCR和蛋白质印迹法(WB法)检测正常墨西哥钝口螈和损伤组脑组织中Nogo-A及NgR的mRNA含量和蛋白含量的变化。结果正常墨西哥钝口螈脑组织中存在Nogo-A及NgR的表达,在墨西哥钝口螈中脑胆碱能神经元损伤后(注入AF64A)第3天,中脑乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性细胞数明显减少,与正常组比较差异有统计学意义(P0.01),损伤后第7、14、21天均有ChAT、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)双阳性细胞,且随时间的延长而增加。中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织中,Nogo-A的mRNA和蛋白水平的表达量与正常组比较差异均无统计学意义;而NgR的mRNA和蛋白水平的表达量均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论中枢神经系统损伤后的再生可能与NgR表达量的下降有关。     

脑栓通对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元的保护作用

目的：观察中药脑栓通对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元主要成分神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的保护作用。方法：30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和1g/（kg·d）脑栓通组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血损伤模型,1.5h后拔出线栓实施再灌注。再灌注24h时后进行大鼠神经功能缺损评分,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷原位末端标记法结合神经元核抗原、胶质纤维酸性蛋白及CD31免疫荧光双染检测缺血再灌注24h时缺血灶周边的神经元、星形胶质细胞以及脑血管内皮细胞的凋亡情况。结果：脑栓通能显著改善脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损,减少缺血灶周边星形胶质细胞、脑血管内皮细胞和神经元的凋亡。结论：脑栓通通过保护脑缺血再灌注后大鼠的神经血管单元促进神经功能的改善。     

不同类型脑震荡对基底前脑胆碱能神经元的影响

目的 通过免疫组织化学的方法，观察不同类型脑震荡大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响，初步探讨脑震荡认知障碍的机制。方法 成年SD大鼠36只，复制不同损伤程度的脑震荡模型，用胆碱乙酰转移酶（ChAT）标记基底前脑的胆碱能神经细胞，光镜下计数，并捡测反映ChAT活性的荧度值。结果 单纯型、复杂型脑震荡与对照组相比，复杂型脑震荡组与单纯性脑震荡组相比，大鼠基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支ChAT阳性表达细胞数减少，ChAT活性降低，差异具有显著性。结论 不同类型的脑震荡基底前脑胆碱能神经元变化程度不同，这种变化可能是脑震荡后不同程度认知障碍的病理学基础。     

桩蛋白在大鼠星形胶质细胞中的表达

目的：初步探讨桩蛋白（paxillin）在大鼠星形胶质细胞及神经元中的表达。方法：通过组织切片、细胞培养、免疫荧光和RT-PCR方法,观察桩蛋白在大脑皮层及体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达。结果：桩蛋白在大鼠脑皮质的星形胶质细胞中表达,神经元未见明显表达;在体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达情况与体内一致,主要表达于星形胶质细胞的胞浆及突起中。结论：桩蛋白主要表达于星形胶质细胞而非神经元中。本实验结果为进一步研究桩蛋白在星形胶质细胞中的生物学作用奠定了基础。     

束缚-浸水应激对大鼠疑核胆碱能及儿茶酚胺能神经元活动的影响

目的 研究束缚-浸水应激(RWIS)大鼠疑核(NA)中胆碱能、儿茶酚胺能神经元的活动情况。方法 随机将10只雄性Wistar大鼠分为对照组和应激组(RWIS组),采用Fos、胆碱乙酰转移酶(ChAT)或酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学双标技术,统计对照组和应激组Fos、ChAT或TH单标阳性神经元以及Fos+ChAT或Fos+TH双标阳性神经元数目。结果 NA中ChAT免疫阳性神经元胞体呈梭形或多角形,有较多的TH阳性终末。与对照组相比,RWIS组大鼠NA大量神经元表达Fos(P<0.05);RWIS组Fos+ChAT双标阳性神经元数目也较对照组显著增加(P<0.05),占ChAT免疫阳性神经元的比例在对照组和RWIS组中分别为7.5%、29.8%(P<0.01)。结论 NA中胆碱能神经元参与RWIS调控过程,而这些神经元可能接受其他核团儿茶酚胺能神经元的纤维投射。     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓，收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后，胞体增大，并伸出细长突起，与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200，MAP-2，NeuN和Nestin表达阳性，(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性，(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性，而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞，部分细胞可表达GAD与ChAT。     

电针对老年性痴呆大鼠胆碱能神经元损伤的保护作用

目的探讨电针对老年性痴呆(Alzheimer’sdisease,AD)大鼠胆碱能神经元损伤的保护作用及其作用机制。方法36只SD老龄大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和电针治疗组,采用穹隆-海马伞损伤法制作大鼠AD模型。电针治疗组施以电针百会、涌泉、太溪、血海等穴。采用放射免疫法检测脑中隔区胆碱乙酰转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)活性,免疫组化法检测海马CA3区神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)和c-fos蛋白的表达。结果电针治疗组ChAT活性高于模型组;电针治疗组NGF和c-fos蛋白的表达较模型组增加。结论电针对AD模型大鼠胆碱能神经元损伤的保护作用可能与促进c-fos合成及诱导海马NGF的表达相关。     

肝脏X受体β对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响

目的 观察肝脏X受体β(liver X receptor β,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响.方法 在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear ant...     

海马放射状胶质细胞体外诱导激活后PEBP蛋白的表达变化

目的：探讨切割穹窿海马伞的侧海马提取液对放射状胶质细胞中磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）表达的影响。方法：将培养的海马放射状胶质细胞接种于培养板中,分成对照组和诱导组,对照组中加入含5%正常海马提取液的DMEM/F12细胞培养液,诱导组中加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM/F12培养液。培养7 d后,通过免疫荧光标记法观察PEBP在放射状胶质细胞中的表达,并提取总蛋白,采用Western blot的方法观察对照组及诱导组中PEBP蛋白的表达变化。结果：PEBP蛋白在放射状胶质细胞中能够表达,诱导组的表达比对照组明显增加（P〈0.05）。结论：PEBP的表达增加可能与切割侧海马提取液＂激活＂的放射状胶质细胞向神经元分化有关。     

神经干细胞在体外诱导向胆碱能神经元定向分化后移植治疗脊髓损伤

目的 研究神经干细胞向胆碱能神经元定向分化后对脊髓横断损伤的修复作用.方法 采用GFP转基因孕鼠(E 12～14d)的海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化.SD成年大鼠以显微剪横断脊髓制成SCI模型.将SD大鼠18只分为3组:A组注入DMEM/F12培养液;B组注入神经于细胞的细胞液,C组注入在体外定向诱导为胆碱能神经元的细胞液;3组实验动物均于细胞移植后采用B B B评分法定期评估运动功能.于移植后第8周末,取出相应的脊髓阶段,行ChAT免疫组织化学染色,光镜观察.结果 从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,胎鼠骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的11.8%分化成为胆碱能神经元,与对照组差异明显.B组和C组所有大鼠BBB评分在移植细胞3周以后明显高于A组(P＜0.05),C组所有大鼠BBB评分在移植细胞4周以后明显高于B组(P＜0.05).在移植第8周末,冰冻切片中可见ChAT染色阳性细胞.结论 神经干细胞可以在体外诱导向胆碱能神经元定向分化,定向分化后移植应用在脊髓横断损伤治疗中,可明显改善运动功能.     

生长因子诱导骨髓基质细胞向胆碱能神经元分化的研究

目的建立生长因子定向诱导骨髓基质细胞（BMSCs）分化为胆碱能神经元的体系。方法 SD大鼠原代BMSCs体外培养,分别用神经生长因子（NGF）、NGF加碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、NGF加bFGF和表皮生长因子（EGF）诱导1、3、5 h,免疫荧光染色鉴定神经元表面标志微管联合蛋白-2（MAP-2）和胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶（ChAT）,计数阳性细胞率。结果原代培养BMSCs传至第5代已基本纯化,NGF 100 ng/ml能有效诱导BMSCs分化为神经元,NGF、bFGF和EGF联合诱导可使BMSCs定向分化为胆碱能神经元,分化率为（67±8）%。结论 NGF、bFGF和EGF联合使用是诱导BMSCs定向分化为胆碱能神经元的有效组合,细胞分化率高。     

不同年龄组抑郁症模型鼠Meynert基底核形态学研究

q目的探讨不同年龄组抑郁症模型鼠中枢胆碱能系统神经毡突触超微结构及胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫组化变化情况,并探讨二者之间的关系。方法选择中枢胆碱能系统发源地Meynert基底核为观察对象,采用透射电镜从形态学上观察Meynert基底核神经毡突触的变化,应用ChAT免疫组化观察胆碱能神经元的变化。结果透射电镜观察显示,模型组突触囊泡数量较对照明显减少,且与年龄呈正相关。突触囊泡分布不均匀,聚集于激活的突触带附近,各年龄模型组CqchAT免疫反应与对照组相比明显增强,且与年龄呈正相关。结论抑郁症模型鼠中枢胆碱能系统发源地Meynert基底核神经毡突触囊泡明显减少,而ChAT免疫反应阳性细胞明显增多,差异有统计学意义（P〈0．01）。     

Molecular basis of behavioral recovery following spinal cord decompression: an immunocytochemical study

Objectives To examine whether the expression of choline acetyltransferase (ChAT), a marker for cholinergic neurons, and growth-associated protein (GAP-43), a marker for synaptogenesis, occurs differently following compression vs. decompression of spinal cord, and whether the reactions have any relationship with the time course of behavioral recovery. Methods A spinal cord compression model was studied quantitatively with an immunohistochemical method. The behavioral recovery of the rat was assessed by combined behavior score (CBS). Results The rebound in the ChAT-positive cell ratio was higher in decompressed cord than in compressed one. The time course of the change in the ChAT-positive cell ratio coincided with the recovery of CBS in the two models. Increased GAP-43 expression was found in the region of injured cord in the two models. Increased GAP-43 expression was partially parallel to the recovery of CBS, both in the decompression and continuous compression groups. Conclusions The results indicate that there are ChAT reversible neurons in both the compressed and decompressed cord, the number of which is closely related to the recovery of behavior following cord injury. Synaptogenesis plays a limited role in behavior recovery.     

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究

目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞。结果分离培养出了大量具有不断增殖的能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞,并能稳定传代20代以上。结论无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫荧光鉴定为神经干细胞,成功建立了大鼠神经干细胞的分离培养方法。     

慢性铝中毒对大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元的影响

目的：从慢性铝中毒大鼠海马CA3区胆碱乙酰转移酶（Choline Acetytransferase,ChAT）变化的角度,探讨铝的神经毒性作用机制。方法：40只4～5月龄SD大鼠,随机分为铝中毒组和正常对照组,采用尼氏染色及ChAT免疫组化染色,计数阳性细胞,用细胞形态学计量方法测量ChAT阳性产物的平均光密度。结果：铝中毒组大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元减少,合成的乙酰胆碱（Acetychdine,Ach）也减少。结论：铝可对大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元产生神经毒性作用。     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

海马放射状胶质细胞体外诱导激活后的PEBP mRNA表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞侧海马提取液对海马放射状胶质细胞中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)mRNA表达的影响。方法:将培养的海马胶质细胞接种于培养板中,分成诱导组和对照组,诱导组中加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM/F12培养液,对照组加入单纯的细胞培养液。培养7d后,提取总RNA,然后逆转录合成cDNA,用real-timePCR观察诱导组及切割组中PEBPmRNA的表达情况。结果:PEBPmRNA在放射状胶质细胞中能够表达,诱导组的表达比对照组明显增加(P<0.05)。结论:表达增加的PEBPmRNA可能与切割侧海马提取液"激活"的放射状胶质细胞向胆碱能神经元分化有关。