索拉非尼联合放射治疗肝癌研究进展

索拉非尼是多靶点激酶抑制剂,通过抗增殖和抗血管形成作用抑制肿瘤细胞生长和血管形成,其作用机制是靶向抑制丝裂原活化蛋白激酶（Ras／Raf／MAPK）、血管内皮生长因子／血管内皮生长因子受体（VEGF／VEGFR）和核因子KB（NF-KB）等信号传导通路,而这些信号通路在放射时被激活,在肿瘤发生发展过程中起着重要的作用。研究显示,索拉非尼联合放射治疗原发性肝癌有协同效应,但联合方案的基础和临床研究有待进一步探索。     

Raf激酶抑制剂的设计、合成及抗肿瘤活性

目的:设计并合成新型Raf激酶抑制剂并测试其在体外的抗肿瘤活性.方法:根据Raf激酶抑制剂的构效关系和药效团研究成果,设计了一系列双芳基脲类化合物(N-1～N-12);采用MTT法对目标化合物进行4个瘤株(SMMC-7721、A549、BGC-823和HL-60)的体外抑制肿瘤细胞增殖的活性测定;通过FRET法测试对Raf激酶的抑制活性.结果与结论:合成了12个Raf激酶抑制剂.其结构均经IR、1>H NMR和MS确证.目标化合物对所测的4种肿瘤细胞均有一定程度的增殖抑制作用;11个目标化合物对Raf激酶有一定程度的抑制作用,其中2个化合物的活性与索拉非尼相当.     

Raf激酶抑制蛋白与肿瘤

Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)是磷酯酰乙醇胺结合蛋白家族的成员。RKIP在Raf、核因子κB及G蛋白耦联受体(GPCR)等蛋白激酶信号转导通路中起重要调节作用。RKIP在膜的生物合成、精子发生、神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用,并参与了老年痴呆症及糖尿病等的病理过程。近年来研究表明,RKIP在多种恶性肿瘤中表达减弱或丢失,且RKIP可以抑制前列腺癌、人乳腺癌和黑色素瘤细胞的转移,其在恶性肿瘤中作用机制已经成为研究的热点。RKIP与肿瘤的研究将为肿瘤治疗提供新的靶点,本文就此研究状况予以简要综述。     

Ras／Raf／MEK／ERK通路与低氧性疾病关系的研究进展

Ras／Raf／MEK／细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal‐regulated protein kinase ,ERK ）信号通路又称 ERK 通路,该通路主要由一个三级酶联功能单位构成,其通过“瀑布式”的级联反应,将细胞外刺激信号传至细胞内,引起一系列细胞反应,从而调控细胞增殖、分化、凋亡、转移等功能。ERK通路与低氧性疾病的发生、发展及治疗存在着不可忽视的联系。现结合相关文献,对 Ras／Raf／M EK／ERK信号通路的生物学特征及与多种缺血低氧性疾病关系的研究进展综述如下。     

GW5074抑制高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化

目的：评估C?Raf抑制剂GW5074对高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化的影响。方法：观察GW5074处理对高剂量放射线引起的细胞形态学改变;细胞经GW5074处理或转染sh?Twist1后,通过Western blot 检测C?Raf、 p?C?Raf、Twist1、α?平滑肌肌动蛋白（alpha?smooth muscle actin,α?SMA）和E?钙黏蛋白（E?cadherin）的表达量。应用高剂量小范围放射线照射小鼠后,通过对损伤组织的HE染色及免疫荧光染色观察上皮间质转化现象。结果：在细胞实验中,GW5074可有效减轻高剂量放射线引起的细胞形态学变化。高剂量放射线可使C?Raf蛋白激活,且在照射后48 h的作用最强。照射前应用GW5074和sh?Twist1预处理,能使Twist1和α?SMA的表达量减少而E?cadherin的表达量增加,sh?Twist1组p?C?Raf的表达量与照射组无明显差异。在动物实验中,GW5074可有效减轻放射线造成肺损伤的程度,明显减少α?SMA并增强E?cadherin的表达。结论：GW5074可能通过抑制C?Raf/Twist1信号通路有效减轻高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化。     

白藜芦醇抑制胃癌细胞株MKN45增殖的机制研究*

目的 通过研究白藜芦醇抑制胃癌MKN45细胞增殖及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响,探讨白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法 体外常规培养胃癌MKN45细胞,将细胞分为对照组、MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059组（PD98059组）、白藜芦醇低剂量组（100?μmol/L）、 白藜芦醇高剂量组（400?μmol/L）。各组细胞处理1、2和4?h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blotting法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白的表达,细胞免疫化学法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白荧光强度的变化。结果 与对照组比较,PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞在处理1、2和4?h后,细胞增殖受到抑制（P?<0.05）,且呈时间剂量依赖性;PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞Ras、Raf、MEK和ERK1/2表达下降,差异有统计学意义（P?<0.05）,且白藜芦醇的作用呈剂量依赖性（P?< 0.05）;MEK和ERK1/2蛋白主要定位于细胞质中,且PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞ERK1/2的荧光强度均减弱。结论 白藜芦醇呈剂量依赖性抑制胃癌细胞株MKN45的增殖,可能与抑制MEK/ERK信号通路,减弱Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达有关。     

替米沙坦对大鼠心肌肥厚组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响

目的：观察替米沙坦对心肌肥厚大鼠左室心肌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法：清洁级健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和干预组3组,每组10只。模型组和干预组给予异丙肾上腺素皮下注射,干预组在给予异丙肾上腺素注射同时灌胃应用替米沙坦,对照组给予生理盐水皮下注射。进行心肌相关指数、病理学检测,并采用RT-PCR方法检测大鼠左心室心肌心房钠肽（atrial natriuretic peptide,ANP）表达,检测模型建立成功情况;模型建立成功后,各组大鼠取左心室心肌组织采用免疫组化检测磷酸化Raf（phosphorylation of Raf,p-Raf）和磷酸化细胞外调节激酶1/2（phosphorylation of extracellu－lar regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2）表达。结果：模型组p-Raf 阳性区域平均积分光密度明显高于对照组（P=0.000）,干预组介于模型组与对照组之间（P=0.041,P=0.031）;模型组p-ERK1/2阳性区域平均积分光密度明显高于对照组（P=0.000）,干预组介于模型组与对照组之间（P=0.0039,P=0.023）。结论：替米沙坦可能抑制p-Raf、p-ERK1/2蛋白表达而抑制Raf/MEK/ERK信号通路激活,具有抗心肌肥厚的作用。     

Raf和Spry蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Raf和Spry蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法选择2013年1月至2015年12月河南科技大学第一附属医院病理科保存的宫颈组织石蜡切块133例,其中宫颈鳞状细胞癌50例,高度上皮内病变32例,低度上皮内病变22例,正常宫颈组织29例。采用免疫组织化学法检测Raf、Spry蛋白在不同宫颈组织中的表达,分析Raf、Spry蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系及Raf与Spry蛋白的相关性。结果随着宫颈组织病变的加重,Raf蛋白阳性表达率呈逐渐升高趋势,Spry蛋白阳性表达率呈逐渐降低趋势;Raf、Spry蛋白在不同宫颈组织中的表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Raf蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌的临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、病理分级无关(P>0.05);Spry蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌的病理分级有关(P<0.05),与患者年龄、临床分期及淋巴结转移无关(P>0.05);Raf与Spry蛋白表达呈负相关(r=-0.460,P<0.05)。结论 Raf和Spry蛋白与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展有关,二者在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达呈负相关。     

Raf激酶抑制蛋白(PKIP)与肿瘤

Raf激酶抑制蛋白(PKIP)广泛存在于各种不同的生物中,1999年Yeung等发现其可以与Raf-1结合,从而抑制Raf-1/MEK/ERK信号通路,命名为PKIP,后来进一步研究发现PKIP还参与了对NF-κB信号通路和G蛋白偶联受体信号通路的调控.2003年发现PKIP可以抑制肿瘤细胞转移的作用后[1],PKIP成为肿瘤领域的一个新的热点,现就近年来有关PKIP与肿瘤的研究综述如下.     

控制前列腺癌转移的关键蛋白

据近期出版的美国《国立癌症研究所杂志》报道,Raf激酶抑制蛋白(RKIP)似乎可以抑制前列腺癌细胞的转移。该研究发现有可能导致产生新的癌症治疗干预手段。美国密歇根大学的Evan T.Keller博士及其同事在此前的研究中证实,与转移的前列腺癌细胞相比,RKIP在非转移的前列腺癌细胞中的水平更高。尽管如此,仍然缺乏RKIP可阻止癌转移的直接证据。在目前进行的试验中,研究     

RKIP和E-cadherin在前列腺癌组织中的表达

目的:联检Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein, RKIP)、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad)在人前列腺癌（prostate cancer,PCa)组织中的表达并分析两者之间的相关性。 方法:运用免疫荧光组织化学的方法,检测26例前列腺癌组织和14例良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中RKIP和E-cad的表达情况,并探讨其与前列腺癌?plusmn;矸旨丁⒘俅卜制诘墓叵?分析两者之间的相关性。 结果:RKIP和E-cad在前列腺癌组织中的表达均较前列腺增生组织显著下降;在前列腺癌组织分化不良组（Gleason 8~10分)中的表达均较分化良好组（Gleason 5~7分)明显下降（P<0.05);在前列腺癌组织无转移组（T2N0M0期以内)中的表达均较侵袭转移组明显下降（P<0.05);二者在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.491, P=0.011)。结论:RKIP和E-cad均是肿瘤转移抑制因子,其表达的下降能促进前列腺癌的转移,抑制前列腺癌的分化,RKIP可通过增加E-cad的表达而抑制前列腺癌的转移。     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞凋亡的细胞外信号调节激酶信号通路研究

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞凋亡的相关机制,为抗肿瘤新药研发和临床治疗提供借鉴。方法 HEC-1细胞株在达尔伯克改良伊格尔培养基中进行贴壁培养,将生长状态良好的细胞分为4组:对照组及25、50、100 mg·L~(-1)大蒜素组。人子宫内膜癌细胞株HEC-1经大蒜素孵育处理后,甲基噻唑基四唑法检测HEC-1细胞增殖的抑制率,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白的表达。结果大蒜素能有效抑制HEC-1细胞的增殖,且具有时间和剂量依赖性。25 mg·L~(-1)大蒜素组与对照组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),50、100 mg·L~(-1)大蒜素组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平显著高于对照组和25 mg·L~(-1)大蒜素组(P<0.05,P<0.01),100 mg·L~(-1)大蒜素组HEC-1细胞株中Ras、Raf、MEK、ERK1/2、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平显著高于50 mg·L~(-1)大蒜素组(P<0.05,P<0.01)。结论大蒜素可能通过激活人子宫内膜癌细胞株HEC-1细胞ERK信号通路发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路与肿瘤血管新生的关系

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路参与调控肿瘤的生长和转移,而肿瘤的生长需要新生血管的维持,肿瘤血管的生成需要血管内皮细胞的参与,包括内皮细胞的增殖、迁移、侵袭。作为Ras/Raf/MEK/ERK途径是该网络信号的核心,本文就MAPK/ERK信号通路中各环节与肿瘤血管新生的联系做一综述,进一步研究其在抑制肿瘤生长方面做出推论。     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

Up-regulation of Ras/Raf/ERK1/2 signaling in the spinal cord impairs neural cell migration, neurogenesis, synapse formation and dendritic spine development

Background The Ras/Raf/ERK1/2 signaling pathway controls many cellular responses such as cell proliferation, migration, differentiation, and death. In the nervous system, emerging evidence also points to a death-promoting role for ERK1/2 in both in vitro and in vivo models of neuronal death. To further investigate how Ras/Raf/ERK1/2 up-regulation may lead to the development of spinal cord injury, we developed a cellular model of Raf/ERK up-regulation by over- expressing c-Raf in cultured spinal cord neurons （SCNs） and dorsal root ganglions （DRGs）.     

双丁酰环腺苷酸抑制甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖

目的：探讨双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对甲状腺癌细胞株 FTC-133增殖的影响。方法将 FTC-133细胞进行常规培养,分为对照组,处理组(dbcAMP 0.5、1.0、2.0 mmol/L)共4组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、生长曲线法观察0.5、1.0、2.0 mmol/L dbcAMP 经24 h、48 h 对甲状腺癌细胞株 FTC-133细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,使用反转录定量 PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)方法检测 Raf1的 mRNA 和蛋白表达水平。结果与对照组比较,不同浓度 dbcAMP 和时间处理的 FTC-133细胞增殖均受抑制,并表现出时间-剂量依赖性;S 期细胞显著减少,G2/M期细胞显著增加;Raf1 mRNA 和蛋白水平明显减低。结论dbcAMP 显著降低甲状腺癌细胞株 FTC-133的增殖能力,促进凋亡,可能与激活 ERK MAPK 通路有关。     

麦门冬汤合苇茎汤抑制小鼠Lewis肺癌生长的体内实验研究

目的?研究麦门冬汤合苇茎汤（简称金方/JIN）对Lewis肺癌小鼠移植瘤的抑制作用并初步探讨药物作用机制。方法?皮下注射LLC（Lewis lung carcinoma,Lewis肺癌细胞）于C57/BL6小鼠右腋下,观察小鼠生存期、抑瘤率、胸腺指数和肿瘤组织EGFR/Raf/MEK的表达。结果?金方可以显著延长小鼠的生存时间,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）,金方、DDP组对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为35%、89%,金方组胸腺指数明显升高,DDP组胸腺指数明显下降,金方、DDP组的EGFR表达均下降(P<0.05,P<0.01),而各组Raf和MEK表达无显著性差异。结论?金方可以显著延长荷瘤小鼠的生存期,有一定的抑制肿瘤增长和增强免疫能力的作用,其机制可能与其下调肿瘤组织中EGFR的表达进而影响其下游信号通路的传导相关。      

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展

自噬是机体保守的自我防御机制,是将细胞内变形坏死的细胞器和多余蛋白降解为小分子,以供循环利用。自噬在生理和病理状态下均发挥重要作用,可通过多条信号通路影响胞内物质的表达。目前已知Ras/Raf/MEK/ERK信号通路不仅广泛参与调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个生理病理过程,并且参与调控自噬,并具有促进肿瘤细胞发生自噬性死亡的作用,但是其具体参与调控自噬的作用机制尚未完全阐明。本文就Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与调控自噬的作用的研究进展进行详细阐述,以期为研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬的作用机制提供参考。     

Raf激酶抑制蛋白在鼻咽癌中的研究进展

鼻咽癌是我国南方较为常见的一种恶性肿瘤。近年来,其5年生存率有明显提高。然而,远处转移仍然是其最常见的治疗失败的原因之一,寻找可靠、有效的分子标记来筛选具有鼻咽癌高转移风险的患者,并为这些患者提供更合适的治疗策略显得格外重要。Raf激酶抑制蛋白（raf kinase inhibitor protein,RKIP）是众多有前景的分子标记之一,在许多实体瘤^[1]中它的表达下调或缺失。在基因水平上,RKIP功     

Mfn2介导缬沙坦抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 研究缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响,并探讨其新的作用机制.方法 体外培养VSMCs,采用AngⅡ诱导其增殖,用不同浓度的缬沙坦(10-5、10-6、10-7mol/L)进行干预,细胞计数及四氮唑盐试验(MTT)检测VSMCs增殖情况,Western blot检测各组线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)、Raf、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinase 1/2,ERK1/2)表达水平的变化.结果 AngⅡ能够明显促进VSMCs的增殖,下调Mfn2的表达、增强Raf和ERK1/2的表达;缬沙坦10-5、10-6mol/L可以拮抗AngⅡ的上述作用,而缬沙坦10-7mol/L无此作用;缬沙坦对无AngⅡ刺激的VSMCs增殖无明显影响.结论缬沙坦能有效抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖,其机制与调节Mfn2的表达、抑制Ras-Raf-ERK/MAPK信号通路有关.