全反式维甲酸对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法划痕愈合和侵袭实验检测ATRA对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;real-time PCR、Western blotting检测 ATRA作用SMMC-7721细胞后CD147、MMP-2的表达。结果划痕实验结果显示,以10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P <0.05),表明ATRA可抑制SMMC-7721细胞迁移。Transwell实验结果显示,10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P <0.05),表明ATRA可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力。real-time PCR结果显示,以10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,CD147和 MMP-2 的mRNA表达均明显下调(P <0.05)。Western blotting结果表明,10,20,40μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24h后,CD147和 MMP-2蛋白表达均明显降低,差异具统计学意义(P <0.05)。结论ATRA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调CD147和MMP-2有关。     

钙敏感受体在3,3′-二吲哚甲烷抑制肝癌细胞增殖与迁移侵袭中的作用

目的:探讨钙敏感受体（calcium-sensing receptor,CaSR）在3,3′-二吲哚甲烷(3,3′-diindolylmethane, DIM)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭影响中的作用。方法:采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）DIM分别处理人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞24 h,采用MTT法检测肝癌细胞增殖能力,蛋白免疫印迹法检测CaSR蛋白表达,筛选合适的DIM浓度,Transwell法检测DIM对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。另将HepG2和SMMC-7721细胞分为4组:对照组、60 μmol/L DIM组、300 μmol/L氯化钆（CaSR激动剂）组及氯化钆+ DIM组（用300 μmol/L氯化钆预处理细胞0.5 h,再与60 μmol/L DIM共处理24 h）,评价细胞增殖、CaSR蛋白表达以及细胞迁移和侵袭能力。结果:与对照组相比,60 μmol/L和40 μmol/L DIM处理后可分别显著抑制HepG2和SMMC-7721细胞增殖能力（P均<0.05）,降低两株细胞CaSR蛋白表达量（P均<0.05）；DIM抑制两株细胞迁移和侵袭能力呈效应剂量关系；与60 μmol/L DIM组相比,300 μmol/L氯化钆+60 μmol/L DIM组细胞CaSR蛋白表达、增殖、迁移和侵袭能力均明显升高（P<0.05）。结论:激活CaSR可以缓解DIM引起的抗肝癌效应,提示CaSR可能是DIM抗肝癌作用的潜在靶点。     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响

目的 探讨外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响。方法 细胞划痕法检测外源性p16基因导入对人肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响；免疫细胞化学法分析外源性p16基因导入对VEGF表达的影响；Western blotting法分析外源性p16基因导入对nm23表达的影响。结果 外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组细胞迁移能力较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞明显下降。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组VEGF表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞减弱。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组nm23表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞增强。结论 外源性p16基因导入能降低人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移能力。     

虫草素对人肝癌细胞迁移及侵袭的机制研究

目的 研究虫草素对人肝癌细胞Bel-7402迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 以人肝癌细胞Bel-7402为研究对象,虫草素处理Bel-7402细胞。MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞迁移能力;侵袭小室实验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测MMP-2和MMP-9 mRNA 表达情况;Western blotting实验检测MMP-2、MMP-9、ERK、p-ERK、EGFR及p-EGFR蛋白表达水平。结果 虫草素在0～80?μmol/L时对细胞活力无明显影响;而在80～640?μmol/L时,细胞活力出现下降;在320和640?μmol/L时显著降低（P?<0.05）。40和80?μmol/L虫草素均能显著抑制细胞迁移和侵袭活动（P?< 0.05）。与空白对照组比较,虫草素（40和80?μmol/L）处理Bel-7402细胞48?h后,MMP-2和MMP-9 mRNA 及蛋白表达均下降（P?<0.05）。与空白对照组比较,虫草素（40和80?μmol/L）处理明显下调p-ERK和p-EGFR蛋白表达（P?<0.05）。结论 虫草素可能通过EGFR-ERK通路介导MMP-2和MMP-9表达下调,从而调控人肝癌细胞Bel-7402的迁移和侵袭活动。     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

沉默CRAF基因表达对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的：探讨肝癌细胞中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（CRAF）高表达对肝细胞癌（HCC）侵袭和转移的影响,并阐明其机制。方法：以CRAF高表达的SMMC-7721细胞作为研究对象,采用shRNA技术下调CRAF表达。将SMMC7721细胞分为对照组和沉默组（shCRAF#1转染组和shCRAF#2转染组）。细胞划痕法观察各组SMMC7721细胞创口愈合指数,Transwell实验检测各组SMMC-7721细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组SMMC7721细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平。结果：细胞划痕实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的创口愈合指数明显降低（P<0.05）。Transwell实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的穿膜细胞数降低（P<0.05）。Western blotting法检测,沉默组细胞中MMP-2和MMP-9表达水平明显低于对照组（P<0.05）。结论：下调CRAF可以通过抑制MMP-2和MMP-9表达抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和迁移。     

实时定量PCR检测氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721中CHOP和GRP78 mRNA表达的影响

目的：观察氯化镉（CdCl2）处理人肝癌SMMC-7721细胞系中CHOP和GRP78 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨氯化镉对肝癌细胞内质网应激的影响。方法：以人肝癌细胞株SMMC-7721细胞为研究模型,细胞暴露于氯化镉浓度为0、5、10、20、30及40 μmol?L-1的培养液中24 h,0 μmol/L组为对照组。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测CHOP和GRP78 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果：随着氯化镉剂量的增加,CHOP mRNA表达水平有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中10、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）;GRP78 mRNA表达有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中5、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：氯化镉可诱导人肝癌SMMC-7721细胞中CHOP和GRP78 mRNA表达增多。     

11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯抗胃癌细胞增殖、侵袭迁移的机制研究

目的研究脱水穿心莲内酯衍生物[11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯]抑制胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭及迁移的作用,并探讨其可能的作用机制。方法取SGC7901细胞,加入11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯中,分别设置20、40、60、80和100μmol·L-1 5个药物浓度组;不加11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯的单纯细胞为空白对照组,分别置于培养箱孵育24、48、72h;采用MTT法检测细胞增殖与细胞活力;采用Transwell小室测定24h后SGC7901细胞的侵袭能力,并通过蛋白免疫印迹(Western blot)法检测48h细胞增殖与迁移相关蛋白Akt、p-AKT、JNK、p-JNK、MMP-2、MMP-9的表达情况。结果与空白对照组相比:20、40、60、80和100μmol·L-1 5个药物浓度组能明显抑制SGC7901细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性(P<0.01)。空白对照组迁移和侵袭能力无显著变化,11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯(40μmol·L-1组)处理SGC7901细胞迁移和侵袭能力较空白对照组明显减弱(P<0.01)。采用11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯(40μmol·L-1)处理SGC7901细胞48h后,可明显抑制p-AKT、p-JNK、MMP-2及MMP-9的表达水平。结论 11,12-脱水-二(2-氯乙基)氨基-3,19-环磷酸酯穿心莲内酯可降低胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能是通过抑制p-AKT、p-JNK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。     

蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究蛇床子素在体外对人肝癌HepG2、SMMC-7721、Bel-7402细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法：取人肝癌细胞进行复苏,传代,培养。实验分为空白组和给药组,给药组给予不同浓度梯度（50、100、150、200 μmol/L）蛇床子素药液处理。利用MTT法和细胞集落实验测定不同浓度蛇床子素体外抑制人肝癌细胞增殖作用;利用细胞划痕实验和Transwell小室实验测定不同浓度蛇床子素对人肝癌细胞的迁移和侵袭的抑制作用;利用蛋白质印迹（Western blot）法评价蛇床子素对人肝癌细胞中上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达情况的影响。结果：蛇床子素能在体外抑制人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721 和Bel-7402 的增殖,IC50 值分别为147.62、141.57、179.67 μmol/L,呈现一定的浓度依赖性。与空白组相比,给药组在蛇床子素50、75、100 μmol/L浓度条件下可以显著抑制人肝癌细胞增殖（P ＜0.05）。与空白组相比,给药组人肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著降低（P ＜0.05）;给药组细胞MMP-2 蛋白的表达量降低（P ＜0.05）,E-cadherin蛋白的表达量增加（P ＜0.05）。结论：蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭具有抑制作用,其抑制侵袭作用机制与下调MMP-2 蛋白和激活E-cadherin蛋白的表达有关。     

维生素K3诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤中Bcl-2和Bax表达的变化及意义

目的：探讨Bcl-2、Bax在维生素K3 (VK3)诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤过程中的变化,为研究VK3诱导肝癌细胞损伤的机制提供参考。方法：体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组和不同浓度VK3处理的实验组（20、40和60 μmol•L^-1）,MTT法检测各组SMMC-7721细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;RT-PCR检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平;Western blotting检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果：与对照组比较,20 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率、LDH释放率、Bcl-2和Bax mRNA表达量及其蛋白表达量未见明显变化;与对照组比较,40和60 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);LDH释放率增加(P<0.05或P<0.01);Bcl-2 mRNA表达率降低(P<0.05);Bax mRNA表达量率升高(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);Bax 蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论：40 μmol•L^-1剂量的VK3能够诱导SMMC-7721细胞损伤,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

氯化镉对人癌细胞株的抑制作用及其对细胞增殖核抗原和金属硫蛋白表达的影响

目的:研究氯化镉(CdCl2)抗肿瘤作用及其对细胞增殖核抗原(PCNA)和金属硫蛋白(MT)表达的影响,为其作为抗肿瘤药的开发利用提供理论依据.方法:以1、5、10、50和100 μmol·L-1 CdCl2作用于5种人癌细胞株SMMC-7721、BEL-7402、Hela、A549和MCF7,24 h后应用MTT法检...     

Smac过表达增强氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

目的:研究Smac过表达联合氯化镉(CdCl2)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为以Smac为基础的肿瘤基因治疗以及镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据.方法:实验共设立5组,分别为对照组、pcDNA3.1+组、pcDNA3.1+-hSmac组、CdCl2组以及CdCl2联合Smac组.对照组细胞不进行细...     

实时定量PCR检测镉对人肝癌细胞SMMC-7721中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的影响

目的：观察氯化镉（CdCl₂）处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响。方法：以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40 μmol·L^-1的培养液中24 h。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测TRPC1和TRPC4 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果：随着剂量的增加,TRPC1 mRNA表达有降低的趋势,除20 μmol·L^-1组外,各组mRNA表达均高于对照组（P<0.01）;TRPC4 mRNA表达有先增高后降低的趋势,5、10和30 μmol·L^-1组mRNA表达均高于对照组（P<0.01）。2个基因均在低剂量（5和10 μmol·L^-1）组表达增加幅度较大（P<0.01）。结论：低剂量镉可显著增加人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4的表达,镉可在mRNA水平对SMMC-7721细胞钙通道产生影响。     

miR-144通过影响TLR/MyD88通路抑制肝癌SMMC-7721细胞侵袭

目的 探讨miR-144基因过表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及Toll样受体（TLR）/髓样分化因子88（MyD88）免疫通路的影响。方法 培养人正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞系SMMC-7721,采用荧光实时定量PCR法检测两组细胞miR-144基因表达差异,将SMMC-7721细胞分为空白组、miR-144 NC组、miR-144 mimics组,倒置荧光显微镜检测转染效率,qRT-PCR法检测转染后各组miR-144基因表达情况,通过细胞计数试剂盒（CCK8）法各组SMMC-7721细胞存活情况,通过Transwell法检测各组SMMC-7721细胞侵袭情况,应用免疫印迹法检测各组侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）以及TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况,观察添加40 μmol/L MyD88抑制剂TJ-M2010-2组对SMMC-7721细胞TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况。结果 与正常组相比,SMMC-7721组miR-144基因相对表达量显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组miR-144基因表达显著升高（P<0.05）;CCK-8实验显示,与对照组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组转染48、72、96 h后细胞存活率显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组、TJ-M2010-2组Toll样受体4（TLR4）、MyD88、磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）/核因子-κB（NF-κB）蛋白表达显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics组与TJ-M2010-2组TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 miR-144过表达可能通过抑制TLR/MyD88通路转导降低SMMC-7721细胞存活、抑制SMMC-7721细胞侵袭。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制.方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Ca...