耐甲氧西林葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性的关系

目的 为获得成都地区耐甲氧西林葡萄球菌的HVR－PCR基因型,比较HVR基因型与耐药谱的关系,从而指导临床合理选用抗生素,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法 从成都地区四家三甲医院收集到临床分离的葡萄球菌114株。其中86株MRSA、10株MRSE（Mc‘S.epidemidis)、5株MSSE（Mc‘S.epidemidis)、8株MRSH（Mc‘S.haemolyticus)和5株MSSH（Mc‘S.haemolyticus)。用琼脂平皿二倍稀释法测定其MIC值,优良的碱裂解法提取DNA,应用PCR技术,扩增mec基因高变区（HVR区）,聚丙烯酰胺凝胶垂直板和琼脂糖凝胶电泳分型。结果 根据PCR产物片段大小,MRSA、MRSE和MRSH分别被分为4种、3种和2种基因型,其中有9株MRSE的PCR扩增产物片段大小与MRSA相同。MRSA主要为A、D型,分别占52．32％和39．53％;B、C型最为耐药,而D型对多种药物敏感。MRSE的Ⅰ型为高度多重耐药株,而Ⅲ型对多种抗生素敏感。MRSH的a型比b型耐药。结论 HVR－PCR法对于由MRSA引起的院内感染的流行病学调查是一种快速、简单、可靠的分型法,且有利于抗菌药物的选用。这种方法能够部分比较MRSA菌株和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌（Mc‘CNSt)的mec决定因子,从而探讨其起源。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因多态性分型研究

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的基因多态性分型特征，为控制感染提供分子流行病学依据。方法利用一条10bp随机引物，建立随机引物多态性（RAPD）分析方法，并利用这一方法对44株MRSA进行基因分型的研究。结果44株MRSA中有30株产生RAPD指纹图谱，经电泳得到2．8条片段，可分为5个型，其中Ⅲ型菌株占50％。结论通过RAPD分型研究，可了解MRSA的基因型流行特征，为控制感染提供分子流行病学依据。     

型特异性引物PCR技术在HBV基因分型中的应用

目的 应用乙型肝炎病毒（HBV）型特异性引物PCR的基因分型方法，了解武汉地区HBV基因型的分布及其临床意义。方法 选择298例HBV感染者，分成表面抗原携带者（ASC）、急性肝炎（AH）、慢性肝炎（CH）、重型肝炎（SH）、肝硬化（LC）和原发性肝癌（HCC）6组，用多对型特异性引物PCR方法检测HBV的基因型；并对4份血清HBVDNA进行序列分析。结果多对型特异性引物PCR法可简便、快速、准确地鉴定HBV基因型；298份HBVDNA阳性的血清标本中，B基因型197例（66．1％），BC混合型68例（22．8%），C基因型33例（11．1％）；B基因型在ASC、AH、CH、SH和HCC组患者中均占绝对优势，分别为63．6％、71．9％、68．7％、89．5％和65．9%，C基因型在各组患者中的分布差异无显著性意义，BC混合基因型在各组患者中的分布存在差异，更多见于肝硬化患者；各基因型在ALT水平、HBeAg阳性率及HBV DNA水平上差异无显著性意义（均P〉0．05）。结论 多对型特异性引物PCR扩增法能快速准确地进行HBV基因分型检测，可用于大规模的流行病学调查；武汉地区HBV感染者中，优势基因型为B型，其次为BC混合型和c型，BC混合型更多见于肝硬化患者。     

改进的PCR法克隆带小棒链霉菌cefD基因

以GC含量高达74％的带小棒链霉素（S．clavuligerus）染色体DNA为模板，从引物设计、退火温度、有机辅剂及DNA聚合酶等方面改善PCR反应体系和扩增条件，成功地克隆得到了异青霉素异构酶的cefD基因。改进后的PCR体系中ψDMSO＝0．05并加入适量的TaqDNA聚合酶，退火温度比常规选选择高一些，从而克服了常规PCR法扩增链霉菌基因遇到的二级结构复杂、引物与模板难以配对及引物间的引物内部易形成碱基配对等问题。改进后的PCR法提高了链霉菌基因克隆的效率，也可以广泛应用于高GC含量目的的基因的快速扩增。     

应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型（A—F）分型

目的：建立乙型肝炎病毒（HBV）基因型（A－F）多重PCR分型方法，并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法：将GenBank中114例HBV全序列进行比较分析，找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列，并根据这些独特序列设计出六对分别针对A－F基因型的特异引物，利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法，结果：多重PCR与以前用PCR－限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示，主要为B型和C型，分别占45．00％和38．75％，另外还有16．25％的D型，结论：用多重PCR分别法准确易行，灵敏性高，便于推广应用。     

深圳市乙型肝炎病毒基因型分子流行病学研究

目的探讨深圳市宝安区乙型肝炎患者血清中乙肝病毒（HBV）基因型的分布情况,了解各基因型与HBV—DNA水平、HBeAg、肝损程度、抗病毒疗效、疾病进展和预后关系。方法采用s基因片段测序的基因分型法,通过上下游引物经PCR反应体系和操作程序扩增S基因片段,经1．5％琼脂糖凝胶电泳,用3730双向测序技术,将130例HBV—DNA阳性患者测序结果在NCBI上进行HBV基因分型,得出基因型。结果宝安区HBV基因型只有B型和C型,无其他型和混合型,B型占55．74％,C型占44．26％,无性别和年龄分布差异（P〉0．05）。B型与C型HBV—DNA水平无显著性差异（P〉0．05）,B基因型HBeAg阳性率较c基因型高,C型肝损程度比B型重,进展为肝硬化、肝细胞性肝癌的几率高,两者相比有显著性差异（P〈0．01）。结论研究病例HBV基因型以B型为主,C型次之。C基因型患者病情重,进展快,预后差,值得引起临床医生重视。     

耐甲氧西林葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性的关系

目的　为获得成都地区耐甲氧西林葡萄球菌的 HVR- PCR基因型 ,比较 HVR基因型与耐药谱的关系 ,从而指导临床合理选用抗生素 ,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法　从成都地区四家三甲医院收集到临床分离的葡萄球菌 114株。其中 86株 MRSA、10株 MRSE(Mcr S.epidemidis)、5株 MSSE(Mcs S.epidemidis)、8株 MRSH(Mcr S.haemolyticus)和 5株 MSSH(Mcs S.haemolyticus) ,用琼脂平皿二倍稀释法测定其MIC值 ,改良的碱裂解法提取 DNA,应用 PCR技术 ,扩增 mec基因高变区 (HVR区 ) ,聚丙烯酰胺凝胶垂直板和琼脂糖凝胶电泳分型。结果　根据 PCR产物片段大小 ,MRSA、MRSE和 MRSH分别被分为 4种、3种和 2种基因型 ,其中有 9株 MRSE的 PCR扩增产物片段大小与 MRSA相同。 MRSA主要为 A、D型 ,分别占 5 2 .32 %和39.5 3% ;B、C型最为耐药 ,而 D型对多种药物敏感。 MRSE的 型为高度多重耐药株 ,而 型对多种抗生素敏感。MRSH的 a型比 b型耐药。结论　 HVR- PCR法对于由 MRSA引起的院内感染的流行病学调查是一种快速、简单、可靠的分型法 ,且有利于抗菌药物的选用。这种方法能够部分比较 MRSA菌株和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌 (Mcr CNSt)的 mec决定因子 ,从而探讨其起源。     

厦门市乙型肝炎病毒基因型分子流行病学研究

目的采用多对型特异性51物，通过巢式PCR法检测厦门市乙型肝炎病人血清中乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布情况。方法自HBV前S1基因和S基因中区域内设计出10条内外51物，并将其中8条型特异性内引物分成A、B两组，分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV，然后将第2轮PCR产物以用3％琼脂糖进行电泳，根据PCR产物片断大小直接判定HBV基因型。应用此法检测了154例厦门市慢性乙型肝炎病人对血清中的HBV基因型，了解厦门HBV基因型分布情况。结果厦门市乙型肝炎病人HBV基因分型结果为B型60例（39．0％）、C型53例（34．4％），B／C混合型41例（26．6％）。HBeAg阳性者中以B基因型占63．3％，B／C型混合感染22．0％（P〈0．005）；HBeAb阳性者中以B／C型混合感染63．4％，B型25．0％（P〈0．005）。各基因型在疾病谱分布中无明显差异。结论本研究提示厦门市乙型肝炎病人HBV基因型B、C型者的患病率大致相同；B／C混合感染是一个值得重视的问题。     

双引物聚合酶链反应同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型

目的 建立双引物聚舍酶链反应（PCR）用于同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型。方法 基于单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的DNA聚合酶基因以及梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因序列，自行设计2对特异性寡核苷酸引物，建立了同时检测上速2种痛原体的双引物PCR。结果 各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA，即单纯疱疹病毒Ⅱ型扩增产物为202bp以及梅毒螺旋体扩增产物为252bp。其他11种生殖道常见微生物及正常人基因组DNA不被扩增。检测了51例临床标本，梅毒螺旋体暗视野显微镜检查阳性检出率为15．7％，双引物PCR阳性检出率为19．6％；二种方法检测结果间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。HSV阳性培养率23．6％，双引物PCR阳性率47．1％，双引物PCR阳性检出率显著高于HSV培养且差异有统计学意义（P=0．019）；上速临床标本分别进行了2种痛原体的单引物PCR，与双引物PCR对照结果完全一致。结论 我们建立的双引物PCR一次可同时检测2种病原体，且有快速、敏感、特异以及简便的特点。     

MRSA的随机扩增多态DNA分型研究

目的：应用随机扩增多态性DNA技术（RAPD），对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行基因分型研究，以确定医院内是否存在MRSA流行。方法：收集我院临床分离的40株MRSA，采用RAPD技术进行同源性分析。结果：40株MRSA经电泳可得到1～11条片段，分为6个基因型。结论：RAPD分型技术简便、快速，在医院感染流行病学调查中具有较大应用价值。