汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖活力的影响及其在瘢痕治疗中的意义.方法:利用瘢痕成纤维细胞体外培养模型,采用MTT记数、流式细胞仪记数及氯胺T法,观察并分析了汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞增殖活力以及细胞外胶原量的影响,并采用直线相关法分析两者的关系.结果:汉防己甲素剂量及时间依赖性地使细胞生长曲线压低,群体倍增时间延长,细胞外胶原蛋白量减少且两者呈直线正相关.结论:汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,且此正为其抗瘢痕作用机理之一.     

雷公藤甲素抑制TGF—β1的促皮肤成纤维细胞增殖效应的实验研究

目的 观察雷公藤甲素抑制转化生长因子-β^1（TGF-β^1）促皮肤成纤维细胞增殖的作用并阐明其作用机制。方法用MTT法分别检测不同浓度外源性TGF—β^1及雷公藤甲素作用下皮肤成纤维细胞增殖的情况以及10^-7mol／L雷公藤甲素对25ng／mlTGF—β^1引起的皮肤成纤维细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测10^7mol／L的雷公藤甲素和25ng／ml的TGF—β^1、作用下皮肤成纤维细胞ERK1／2的磷酸化情况。结果TGF—β^1促进皮肤成纤维细胞的增殖呈浓度依赖性,而雷公藤甲素抑制皮肤成纤维细胞增殖也呈浓度依赖性;10^-8mol／L的雷公藤甲素即可抑制皮肤成纤维细胞增殖（P〈0．01）,10^-7mol／L的雷公藤甲素基本达到最大的效应（P〈0.01）。10^-7mol／L雷公藤甲素可以显著抑制25ng／ml的TGF-β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用及对ERK1／2促磷酸化作用。结论雷公藤甲素能够抑制TGF—β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用。     

积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

【目的】探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。【方法】采用光镜、电镜、3H-TdR、3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。【结果】积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,而且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。【结论】积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

人参皂苷Rg3对培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性的影响

目的：研究人参皂苷Rg3(GS-Rg3)对体外培养人瘢痕疙瘩的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度GS-Rg3(25、50、100和200 mg·L^-1)在不同作用时间(24、48和72 h)对成纤维细胞增殖活性的影响。 结果：与对照组相比GS-Rg3对瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,随着时间延长及浓度增加,抑制作用有增加趋势。最大抑制浓度为100 mg·L^-1。 结论：GS-Rg3对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,且随着时间延长及浓度增加,其抑制作用增强。     

白黎芦醇对人皮肤成纤维细胞及兔耳增生性瘢痕的影响

目的了解白黎芦醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及兔耳增生性瘢痕的影响。方法用FCM法检测及建立兔耳增生性瘢痕动物模型，用不同浓度的白黎芦醇作用不同时间后，成纤维细胞的增殖指数及兔耳瘢痕增生指数进行了研究。结果①随着白黎芦醇浓度增大和作用时间延长而人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖指数呈下降趋势。②白黎芦醇在150μmol/L、300μmol/L、400μmol/L时能明显降低瘢痕增生指数，分别为对照组的78．8％、61．2％、47．0％。结论①白黎芦醇降低成纤维细胞增殖指数是其抑制瘢痕增生的途径之一，且呈剂量时间依赖性。②随着白黎芦醇浓度增大，兔耳瘢痕增生指数下降，与瘢痕的体外实验相吻合。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖及转化的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ的促成纤维细胞增殖及转化作用的影响。方法原代培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞，随机分为对照组、ADM组、AngⅡ组及AngⅡ加不同浓度ADM（10^-9～10^-4mol／L）组。用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性，流式细胞分析仪检测细胞周期，蛋白免疫印迹法测定细胞内α—SM actin表达情况。结果与对照组相比，AngⅡ组S期和G2/M期细胞增多，MTTA值检测细胞增殖抑制率为-23．8％；ADM对基础水平的细胞周期中各期细胞构成比及细胞增殖抑制率并无明显影响：与AngⅡ组相比，AngⅡ加ADM组S期细胞构成比明显减少，细胞增殖抑制率提高了。经AngⅡ刺激后主动脉外膜成纤维细胞表达α～SM acfin转变为肌成纤维细胞。ADM可抑制AngⅡ上述作用，下调α—SMacdn表达。结论ADM对成纤维细胞的增殖及转化无明显影响，但ADM抑制AngⅡ诱导的血管成纤维细胞增殖及转化。     

五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩的作用机制。方法采取瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度药物对原代培养的第4~8代瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。结果各不同浓度的药物组对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用(P<0.01),并且有时间和剂量依赖。对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞周期研究表明,各药物组S期的细胞百分比显著高于对照组,其间有显著性差异(P<0.01);而各药物组G2 M期细胞百分比却明显低于对照组,其间有显著性差异(P<0.01),并且这种对S期的阻滞作用和对G2 M期细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。结论不同浓度的五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用,其重要的作用途径是使瘢痕疙瘩成纤维细胞S期的细胞数上升,出现S期阻滞,分裂期的细胞数下降,从而抑制了瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并且这种抑制作用有一定的时间和剂量依赖。     

重组人干扰素-γ对腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞的影响

目的 探讨重组人干扰素γ(rhIFN-γ)对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响.方法 制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,将rhIFN-y加入瘢痕成纤维细胞培养基内,采用MTT法测定细胞增殖率,应用流式细胞仪分析rhIFN-γ对腭裂瘢痕成纤维细胞的细胞周期生物学行为的影响;采用SPSS 13.0软件对数据进行分析.结果 和对照组比较,实验组加入rhIFN-γ后,腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞增殖活性及DNA合成被明显抑制,S-G2-M期细胞百分数明显降低.结论 rhIFN-γ可以抑制腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞的DNA合成及增殖,其与细胞数量改变之间有一定的剂量-效应关系,提示rhIFN-γ是成纤维细胞负性调节因子,在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值.     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞有丝分裂的调控

目的:探讨汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞有丝分裂的影响.方法:将不同浓度梯度的汉防己甲素与瘢痕成纤维细胞体外共培养,不同时间点分别取细胞标本检测其分裂指数,并使用流式细胞仪检测其细胞周期及不同周期细胞分布.将以上检测值与空白对照及阳性对照比较.结果:汉防己甲素组在各个时间点的分裂指数均较空白对照组明显下降,使峰值时间缩短,...     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：探讨粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的生物学作用及其在瘢痕治疗中的意义。方法：采用瘢痕成纤维细胞培养和兔实验性瘢痕模型。观察粉防己碱对瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响。结果：体外试验显示。粉防己碱各实验组^3H-TdR掺入率和^3H-脯氨酸掺入率均较对照组明显降低。呈剂量依赖关系。动物实验透射电镜表明,对照组瘢痕成纤维细胞中有丰富,高度发达的粗面内质网;粉防己碱治疗组瘢痕成纤维细胞内粗面内质网明显减少。提示其蛋白合成与分泌功能受抑。结论：粉防己碱对瘢痕成纤维细胞增殖,胶原合成与分泌功能具有抑制作用。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的了解粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的超微结构的影响.方法培养来自人体瘢痕的成纤维细胞,在加入粉防己碱后,用透射电镜观察其超微结构.结果使用粉防己碱后,成纤维细胞胞体变小,胞质突起变少,核变小,核仁不明显,细胞器变少且小.结论粉防己碱可影响瘢痕成纤维细胞的超微结构,从而可能降低其胶原蛋白等细胞外基质的合成.     

人皮肤瘢痕成纤维细胞原代培养及其生长曲线的研究

目的 建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,探索细胞的生长规律,为皮肤瘢痕体外研究提供平台.方法 采用组织块贴壁法原代培养瘢痕成纤维细胞,波形蛋白免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞,CCK-8测定细胞生长曲线.结果 人皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,细胞形态为长梭形,波形蛋白表达阳性,16～18天可传第1代,以后每7～8天可传1代,传代后5～6天时为活跃期,第7天进入停滞期.结论 培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞在传代后第5～6天最适于于体外实验研究.     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

醋酸曲安缩松及丝裂霉素对瘢痕成纤维细胞整联蛋白表达的影响

目的：了解醋酸曲安缩松、丝裂霉素对瘢痕成纤维细胞整联蛋白表达的影响,初步探讨两种药物抗瘢痕增生的作用机制。方法：体外培养瘢痕组织成纤维细胞,利用β１,α１～４整联蛋白单克隆抗体,通过原位ＥＬＩＳＡ技术检测瘢痕成纤维细胞在不同质量浓度醋酸曲安缩松（１,１０,５０,１００μｇ／ｍｌ）和丝裂霉素（１,５,１０,２０μｇ／ｍｌ）作用下整联蛋白的表达水平。结果：醋酸曲安缩松、丝裂霉素均能不同程度地抑制瘢痕成纤维细胞整联蛋白的表达,抑制效果在实验范围内随药物浓度的增加而提高。其中醋酸曲安缩松对β１,α１～４整联蛋白表达的最大有效抑制浓度（μｇ／ｍｌ）分别为５０,１００,１００,５０,１００,抑制率分别达１６．４４％,３４．７４％,１５．９２％,３７．９５％和３２．１７％;丝裂霉素对它们的最大有效抑制浓度（μｇ／ｍｌ）分别为     

Transplantation of 5-azacytidine treated cardiac fibroblasts improves cardiac function of infarct hearts in rats

Background Cellular cardiomyoplasty by transplantation of various cell types has been investigated as potential treatments for the improvement of cardiac function after myocardial injury. A major barrier for the clinical application of cell transplantation is obtaining sufficiently large quantities of suitable cells. AIIogeneic cellular cardiomyoplasty may provide an alternative source of abundant, transplantable, myogenic cells by in vitro manipulation of cardiac fibroblasts using chemicals including 5-azacytidine. This study evaluated cardiomyogenic differentiation of cardiac fibroblasts, their survival in myocardial scar tissue, and the effect of the implanted cells on heart function. Methods Primary cardiac fibroblasts from neonatal rats were treated with 5-azacytidine （10 pmol/L） or control. Treatment of 5-azacytidine caused myogenic differentiation of cultured cardiac fibroblasts, as defined by elongation and fusion into multinucleated myotubes with sarcomeric structures as identified by electron microscopy, and positive immunostaining for cardiac specific proteins, troponin I and 13-myosin heavy chain （13-MHC） and the gap junction protein connexin 43. The myogenic cells （1.0x106） were transplanted into the infarcted myocardium 2 weeks after coronary artery occlusion. Results By 1 month after transplantation, the converted fibroblasts gave rise to a cluster of cardiac-like muscle cells that in the hearts occupied a large part of the scar with positive immunostaining for the myogenic proteins troponin I and 13-MHC. Engrafted cells also expressed the gap junction protein connexin 43 in a disorganized manner. There was no positive staining in the control hearts treated with injections of culture medium. Heart function was evaluated at 6 weeks after myocardial injury with echocardiographic and hemodynamic measurements. Improvement in cardiac function was seen in the hearts transplanted with the 5-azacytidine-treated cardiac fibroblasts which was absent in the hearts treated with control. Conclusion The 5-azacytidine has a unique capacity to induce myogenesis in cardiac fibroblasts in vitro and transplantation of cardiac-like muscle cells into ventricular scar tissue improves myocardial function.     

内毒素对人皮肤成纤维细胞基因表达谱的影响

目的 观察正常皮肤成纤维细胞经大肠杆菌内毒素(lipopolysaccharides,LPS)刺激后基因表达谱的变化,探讨LPS对后期瘢痕形成的影响及可能机制.方法 用0.1μg/ml LPS刺激正常皮肤成纤维细胞并进行连续传代培养,选择第3代成纤维细胞,采用基因芯片技术检测成纤维细胞基因表达谱的变化,与自身增生性瘢痕...     

珍珠水解液对皮肤增生性瘢痕及正常皮肤来源成纤维细胞bFGF、TGF-β1表达的影响

目的：观察珍珠水解液对正常皮肤及瘢痕皮肤来源成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth fac-tor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）的影响,并探讨其对病理性瘢痕的作用.方法：原代培养、分离纯化获得人类皮肤瘢痕和正常皮肤成纤维细胞系.采用荧光实时定量RT-PCR及免疫细胞化学法分别检测成纤维细胞在珍珠水解液作用下bFGF、TGF-β1 mRNA及蛋白表达变化的情况.结果：珍珠水解液可下调增生性瘢痕及正常皮肤来源的成纤维细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,同时上调bFGF的mRNA和蛋白的表达,且呈现浓度依赖性.结论：珍珠水解液能调节成纤维细胞bFGF、TGF-β1的分泌,其对皮肤瘢痕作用的功效及机制值得进一步研究.