NEDD4促进非小细胞肺癌继发厄洛替尼耐药

目的 探讨NEDD4(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)继发厄洛替尼耐药中的作用.方法 以HCC827细胞及耐厄洛替尼的HCC827 (HCC827/ER)细胞为工具,CCK-8法检测HCC827/ER细胞的耐药指数;实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)及Western blot检测厄洛替尼处理48 h后,NEDD4mRNA和蛋白在两种细胞中的表达及PI3 K/AKT信号通路活化情况.NEDD4小干扰RNA(siNEDD4)转染HCC827/ER细胞,比较处理前后HCC827/ER细胞的厄洛替尼IC50变化以及PI3K/AKT信号通路活化情况.裸鼠成瘤实验在活体水平上进一步验证NEDD4在NSCLC继发厄洛替尼耐药中的作用.结果 HCC827/ER细胞的耐药指数为(118.23 ±23.77);HCC827/ER细胞NEDD4mRNA和蛋白以及PI3K/AKT信号通路活化水平均高于HCC827细胞;HCC827/ER细胞成功转染siNEDD4后,转染组的PI3K/AKT信号通路活化水平降低,且厄洛替尼IC50值明显低于对照组(P＜0.05).裸鼠成瘤实验中转染组肿瘤对厄洛替尼的敏感性明显增加,与阴性对照组比较,药物处理组肿瘤生长受到明显的抑制.结论 NEDD4通过激活PI3 K/AKT信号通路促进NSCLC继发厄洛替尼耐药.     

ABT-737逆转EGFR T790M突变肺腺癌细胞EGFR-TKIs耐药的机制研究

目的通过细胞和在体研究探讨ABT-737联合吉非替尼对EGFR T790M突变肺腺癌细胞EGFR-TKIs耐药的逆转机制。方法利用MTT和FCM法检测ABT-737联合吉非替尼对RPC-9细胞的增殖和凋亡的影响,以RT-PCR检测细胞内Bim、Bak、Caspase-3 mRNA表达水平。以皮下异位移植法建立EGFR T790M突变肺腺癌裸鼠模型,对各组瘤体组织进行组织病理学检查、基因测序法检测、Real-time PCR和免疫组织化学法分析Bim、Bak、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平。结果 ABT-737联合吉非替尼对RPC-9细胞有生长抑制作用和凋亡作用,且在ABT-737浓度4μmol/L范围内呈浓度依赖性,最大抑制率为(54.113±2.986)%,最大凋亡率为(55.042±3.151)%,差异均有统计学意义(P0.05);Bim、Bak及Caspase-3 mRNA表达水平随着ABT-737浓度的升高而增加(P0.05)。各组瘤体组织病理均为腺癌;ABT-737联合吉非替尼灌胃组裸鼠瘤体体积较其他组小(P0.05),Bim、Bak、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平较其他组显著增高(P0.05)。结论 ABT-737能增强吉非替尼促细胞凋亡作用,使耐药细胞重新发生凋亡。     

表皮生长因子受体信号通路在人子宫内膜癌移植瘤孕激素耐药机制中的作用

目的建立人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型,探讨表皮生长因子受体(EGFR)下游信号通路在子宫内膜癌孕激素耐药机制中的作用。方法分别利用人子宫内膜癌孕激素敏感型Ishikawa细胞株和孕激素不敏感型Ishikawa-pLWERNL细胞株制备裸鼠皮下移植瘤模型(每组18只);成瘤后,分别将接种Ishikawa细胞株和接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠各自分成3组(每组6只),分别给予甲羟孕酮(MPA组)、吉非替尼(吉非替尼组)、生理盐水(对照组)。疗程结束后称取各组肿瘤湿重,采用Western blotting法检测肿瘤组织中EGFR、孕激素受体B(PR-B)、ERK1/2、p-ERK1/2、AKT及p-AKT蛋白的表达。结果在接种Ishikawa细胞株的裸鼠中,MPA组、吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,分别减轻43.0%和31.5%,差异有统计学意义(P均<0.05)。在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠中,吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,减轻35.7%,差异有统计学意义(P<0.05);而MPA组移植瘤湿重与对照组相比,减轻2.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。接种I...     

NF-κB亚单位p50/p65激活促进肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药

目的探究NF-κB经典通路激活与人肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药的内在联系。方法选择肺腺癌HCC827和H1650 亲代细胞株,吉非替尼连续处理60 d,检测细胞株生长情况和各细胞株595nm吸光度,确定各细胞株细胞存活率和H1650亲代 细胞被诱导成H1650耐药细胞株。Western blot检测各细胞株P-IκBα、NF-κB P-p50和P-p65表达量,Image J灰度仪计算出胞浆 和胞核P-p50和P-p65与内参蛋白灰度比值,比较吉非替尼和吉非替尼加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）联合用药状态下,各 细胞株细胞存活率和P-IκB、P-p50和P-p65的表达。结果在无吉非替尼和吉非替尼加PDTC药物干预下,H1650耐药细胞PIκBα 表达增加,胞浆和胞核P-p50和P-p65表达,H1650耐药细胞株>H1650亲本细胞株>吉非替尼敏感HCC827细胞株（P<0.05, P<0.01）;单独使用吉非替尼干预,H1650 耐药细胞株细胞抑制率较H1650 亲本细胞株和HCC827 细胞株降低（P<0.05,P< 0.01）,H1650耐药细胞株P-p50和P-p65表达较其他两类细胞株升高（P<0.05）;与无吉非替尼干预比较,H1650亲代和耐药细胞 P-p50和P-p65均有显著降低（P<0.05,P<0.01）;吉非替尼联合PDTC干预,显示H1650亲代和耐药细胞存活率、胞浆和胞核Pp50 和P-p65表达均较吉非替尼组降低（P<0.01,P<0.01）。结论NF-κB经典传导通路激活是H1650亲代细胞残存和转化为吉 非替尼耐药细胞的主要因素之一,吉非替尼联合PDTC用药可抑制P-IκBα生成和P-p50、P-p65的激活,从而降低H1650残存细 胞生存率和耐药细胞的产生。     

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究

目的建立吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,并初步探讨其生物学特性及其耐药机制。方法采用逐步增加吉非替尼剂量法诱导人肺腺癌细胞A549形成吉非替尼耐药的细胞株A549/GR;CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50)及绘制细胞生长曲线,并计算耐药指数;显微镜下观察吉非替尼作用前后A549、A549/GR细胞形态学的改变;直接测序法检测EGFR基因在酪氨酸激酶区的基因突变;q RT-PCR法检测EGFR基因在m RNA水平表达的改变。结果 CCK-8法测得A549/GR细胞的耐药指数为6.00,显示成功建立了吉非替尼耐药的细胞模型,其倍增时间较亲代细胞缩短;形态学观察显示A549/GR细胞极性消失,有变长梭形的趋势;A549/GR细胞系EGFR基因酪氨酸激酶区未发现基因突变;q RT-PCR法显示A549/GR细胞EGFR基因在m RNA水平较亲代细胞轻度上调。结论成功建立吉非替尼耐药人肺腺癌A549/GR细胞模型,A549/GR细胞耐药性的产生与EGFR基因18-21外显子区域突变无关。     

表皮生长因子受体信号通路在人子宫内膜癌移植瘤孕激素耐药机制中的作用

目的 建立人子宫内膜癌皮下移植瘤孕激素耐药模型,探讨表皮生长因子受体（EGFR）下游信号通路在子宫内膜癌孕激素耐药机制中的作用。方法 分别利用人子宫内膜癌孕激素敏感型Ishikawa细胞株和孕激素不敏感型Ishikawa-pLWERNL细胞株制备裸鼠皮下移植瘤模型（每组18只）;成瘤后,分别将接种Ishikawa细胞株和接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠各自分成3组（每组6只）,分别给予甲羟孕酮（MPA组）、吉非替尼（吉非替尼组）、生理盐水（对照组）。疗程结束后称取各组肿瘤湿重,采用Western blotting法检测肿瘤组织中EGFR、孕激素受体B（PR-B）、ERK1/2、p-ERK1/2、AKT及p-AKT蛋白的表达。结果 在接种Ishikawa细胞株的裸鼠中,MPA组、吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,分别减轻43.0%和31.5%,差异有统计学意义（P均<0.05）。在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠中,吉非替尼组移植瘤湿重与对照组相比,减轻35.7%,差异有统计学意义（P<0.05）;而MPA组移植瘤湿重与对照组相比,减轻2.9%,差异无统计学意义（P>0.05）。接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤EGFR蛋白表达明显高于接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤（P<0.05）,而PR-B蛋白表达则明显低于接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤（P=0.000）。接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中,MPA组PR-B蛋白表达明显低于对照组（P<0.01）,而吉非替尼组与对照组的差异无统计学意义（P>0.05）;在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤中,各组PR-B蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。在接种Ishikawa细胞株的裸鼠移植瘤中,吉非替尼组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达均低于对照组和MPA组,差异有统计学意义（P<0.05）;而在接种Ishikawa-pLWERNL细胞株的裸鼠移植瘤中,吉非替尼组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达低于对照组,MPA组p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 在接种孕激素不敏感型Ishikawa-pLWERNL细胞株产生的移植瘤中,过表达的EGFR可下调PR-B蛋白表达,而对MPA不敏感;EGFR受体酪氨酸激酶拮抗剂吉非替尼可有效抑制p-ERK1/2和p-AKT的表达,尤其对接种Ishikawa-pLWERNL细胞株产生的移植瘤效果更显著。     

自噬对PC9/GR细胞吉非替尼敏感性及PD-L1影响的体外研究

目的 探讨在体外影响自噬对吉非替尼耐药肺腺癌细胞PC9/GR药物敏感性及程序性死亡配体-1(PD-L1)的影响.方法 实时荧光定量PCR及Western blot法检测吉非替尼敏感细胞株PC9及吉非替尼耐药细胞株PC9/GR自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1及PD-L1表达水平;CCK-8实验检测PC9和PC9/GR细胞对吉非替尼敏感性以及抑制PC9/GR自噬后各组细胞增殖情况;Western blot法检测调控PC9/GR自噬后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62及PD-L1的表达.结果 PC9/GR细胞中自噬及PD-L1表达高于PC9细胞,CCK-8实验显示PC9/GR细胞对吉非替尼IC50.高于PC9细胞,抑制自噬后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性部分恢复(P＜0.05).Western blot显示在PC9/GR细胞中诱导自噬PD-L1表达增加,抑制自噬PD-L1表达减少,且随自噬抑制剂处理的时间及浓度的改变而变化(P＜0.05).结论 体外实验结果提示,抑制自噬可能增强肺腺癌耐药细胞对吉非替尼的敏感性,提示PD-L1可能被自噬调控,PD-L1可能参与体外抑制自噬逆转吉非替尼耐药的过程.     

肺积汤对Lewis肺癌裸鼠移植瘤新生血管的影响

目的观察肺积汤对Lewis肺癌移植瘤新生血管的影响,并探讨其机制。方法 BALB/c雄性裸鼠30只,复苏转染绿色荧光的裸鼠Lewis肺癌细胞株,接种于裸鼠左侧腋下,制备裸鼠Lewis肺癌模型,随机数字表法分为生理盐水组、肺积汤组和贝伐单抗组,每组10只。生理盐水组给予0.9%生理盐水0.4mL/只,灌胃,1天1次;肺积汤组给予肺积汤混悬液(生药含量1g/mL)22.2mg·kg~(-1),调整至0.4mL/只,灌胃,1天1次;贝伐单抗组给予贝伐单抗15mg·kg~(-1),调整至0.2mL/只,腹腔注射,1周2次,持续用药21天后处死裸鼠,收集血清、皮下瘤。HE染色观察皮下瘤血管情况,免疫组化法检测皮下瘤微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)表达量;ELISA法测定血清VEGF-A水平。结果与生理盐水组比较,肺积汤组及贝伐单抗组瘤重减轻[(6.15±1.49)g、(4.32±0.77)g比(7.92±1.09)g,P0.05,P0.01],瘤体积缩小[(3.73±1.06)cm~3、(2.36±1.99)cm~3比(4.97±1.68)cm~3,P0.05,P0.01];与生理盐水组、贝伐单抗组比较,肺积汤组裸鼠未出现明显恶病质表现。肺积汤组及贝伐单抗组裸鼠皮下瘤细胞变性坏死较少,散在红细胞少。免疫组化结果显示,与生理盐水组比较,肺积汤组及贝伐单抗组MVD减少[(18.39±1.21)、(17.40±0.86)比(27.40±10.12),P均0.05],瘤组织和血清VEGF-A表达量降低[皮下瘤组织VEGF-A:(3.35±1.15)、(3.22±1.10)比(6.98±1.74),P均0.01;血清VEGF-A:(115.38±9.15)pg/mL、(106.21±3.15)pg/mL比(130.63±4.51)pg/mL,P0.05,P0.01],肺积汤组与贝伐单抗组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论肺积汤能抑制皮下瘤生长及转移,延缓恶病质发生,其作用机制可能与下调VEGF-A表达,抑制肿瘤血管新生有关。     

洛伐他汀克服吉非替尼耐药与整合素β1、Survivin的相关性分析

目的 研究洛伐他汀克服吉非替尼耐药与整合素β1、Survivin的相关性,并探讨其可能机制.方法 将吉非替尼耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株PC9分为4组:无药对照组(RPMI 1640培养液培养)、吉非替尼组(1 μmol/L吉非替尼)、洛伐他汀组(5μmol/L洛伐他汀)和吉非替尼与洛伐他汀联合组(1μmol/L吉非替尼+5 μmol/L洛伐他汀).各组细胞分别用相应药物处理后,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,PCR法检测细胞中整合素β1、Survivin mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测整合素β1、Survivin蛋白的表达水平.结果 与无药对照组、洛伐他汀组及吉非替尼组相比,洛伐他汀与吉非替尼联合组对吉非替尼耐药PC9细胞增殖的抑制作用增强(P＜0.01),细胞中整合素β31、Survivin mRNA及蛋白的表达水平降低(P＜0.01).结论 洛伐他汀联合吉非替尼克服吉非替尼耐药是通过阻断整合素β31-p-Akt-Survivin信号通路来实现的,有望成为克服吉非替尼耐药的一种有效策略.     

苦参对耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD细胞上皮间质转化及吉非替尼药物敏感性的影响

目的探讨苦参对耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD细胞上皮间质转化及吉非替尼药物敏感性的影响。方法选取对细胞无毒性作用的苦参浓度,采用体外苦参作用于耐吉非替尼人肺腺癌PC9/ZD细胞;分为对照组、吉非替尼组、苦参联合吉非替尼组。分别通过MTT法、Transwell实验检测各组人肺腺癌PC9/ZD细胞增殖及侵袭能力,Western blot实验检测EMT相关蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 MTT法检测结果显示,苦参联合吉非替尼组人肺腺癌PC9/ZD细胞增殖抑制率(74.59±3.21)%,明显高于吉非替尼组(33.46±0.84)%(P0.05);Western blot实验结果显示,在苦参作用下,吉非替尼诱导的人肺腺癌PC9/ZD细胞波形蛋白及N钙黏蛋白表达下调,E钙黏附分子表达上调;Transwell实验检测结果显示,苦参联合吉非替尼组人肺腺癌PC9/ZD细胞侵袭率(48.59±7.26)%,较吉非替尼组(64.23±8.04)%和对照组(91.03±11.02)%明显降低(P均0.05);流式细胞术检测结果显示,对照组人肺腺癌PC9/ZD细胞凋亡率(31.14±5.26)%,吉非替尼组(56.48±8.77)%,苦参联合吉非替尼组(76.25±10.28)%,三组间人肺腺癌PC9/ZD细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论苦参可逆转人肺腺癌PC9/ZD细胞上皮间质转化,增加对吉非替尼药物敏感性。     

三磷酸肌醇和PTEN基因表达在槲皮素抑制裸鼠肝癌增长中的作用

目的探讨三磷酸肌醇（IP3）和PTEN基因表达变化在槲皮素（quercetin）治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方法以裸鼠移植人肝癌为对照组．槲皮素治疗组腹腔注入槲皮素50mg／（kg·d）,对照组腹腔注入含0．04％DMSO的RPMll640培养基0．05mL／g,3周后观察肝癌增长情况,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织IP3含量,RT-PCR分析癌组织PTENmRNA表达,Westernblotting分析肝癌组织PTEN蛋白表达。结果治疗组肝癌体积和重量均显著低于对照组[体积（15．8±10．1）mm^3vs（52．3±26．5）mm^3,重量（44．8±10．4）mgvs（91．3±31．4）mg],PTENmRNA表达显著高于对照组[RI（灰度与面积之积的相对强度）0．81±0．24US0．36±0．09]（P〈0．01）,PTEN蛋白表达显著高于对照组[RI（灰度与面积之积的相对强度）3．14±0．13vs 1．08±0．15]。结论槲皮素能减少IP3生成,上调肝癌组织PTEN基因表达．抑制裸鼠移植人肝癌增长。     

5型磷酸二酯酶抑制剂对大鼠不稳定膀胱的作用及其机制

目的 探讨5型磷酸二酯酶抑制剂对不稳定膀胱的作用及可能途径.方法 成年自发性高血压模型SD雄性大鼠24只,随机数字表法分为每日灌胃组、间断灌胃组和空白组,每组8只,每日灌胃组：每日伐地那非(10mg·kg-1·d-1)灌胃;间断灌胃组：每隔3 d伐地那非(10 mg·kg-1·d-1)灌胃;空白组：每日生理盐水灌胃.另以8只成年雄性SD大鼠为对照组,行每日生理盐水灌胃.2周后4组分别行膀胱尿动力学检查.各取4组大鼠膀胱逼尿肌分为2份,用于观察预收缩后硝普钠、Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠膀胱逼尿肌舒张作用的影响及用酶联免疫法测定组织中环磷酸鸟苷(cGMP)含量.结果 空白组膀胱排尿间隔时间及膀胱容量均小于对照组[(409±36)s比(568±60)s;(284±25) μl 比 (395±42)μl,均P<0.01]、储尿期膀胱收缩次数大于对照组[(2.03±0.49) 次/min比(1.07±0.30)次/min,P<0.01];间断及每日灌胃组上述指标[(486±53)s 和 (564±44)s;(337±37)μl 和(392±30) μl;(1.82±0.32 )次/min和 (0.52±0.23) 次/min]较空白组明显改善(P<0.05);且每日灌胃组作用更为显著(P<0.01).间断及每日灌胃组与空白组比较,膀胱逼尿肌对硝普钠敏感性较强[最大舒张率：(50.6±2.1)% 和(67.9±4.1)%比(25.3±5.0)%,P<0.01],对Y-27632的敏感性较弱[(35.8±2.5)% 和(20.2±2.3)%比(71.6±2.8)%,P<0.01],组织cGMP含量较高[(20.6±4.1) fmol/mg和(29.4±4.3) fmol/mg比(12.9±2.1) fmol/mg,P<0.01];且每日灌胃组更为明显(P<0.01).结论 高血压模型大鼠膀胱逼尿肌存在不稳定收缩,5型磷酸二酯酶抑制剂能有效治疗不稳定膀胱,且持续每日干预效果更佳.5型磷酸二酯酶抑制剂改善膀胱逼尿肌不稳定收缩可能与cGMP介导的蛋白激酶G-RhoA/Rho激酶途径有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects and the possible mechanistic pathway of phosphodiesterase type 5 (PDE5) inhibitors on rats with overactive bladder. Methods A total of 24 adult male spontaneously hypertensive rats (SHRs) were randomly divided into 3 groups: daily lavage group, discontinuous lavage group and blank group (n=8 each). Daily vardenafil (10 mg·kg-1·d-1), discontinuous vardenafil (10 mg·kg-1·d-1) and daily normal saline were administered respectively to 3 groups by lavage. And 8 adult male SD rats were included into the control group. Bladder urodynamic examinations were conducted in each group 2 weeks later. Then bladder detrusor muscle strips isolated from each group were further divided into two parts. One part was first pre-contracted and then the relaxant effects of sodium nitroprusside and Y-27632 were observed. For another part, enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure cyclic guanosine monophosphate (cGMP). Results As compared with the control group, the values of bladder intercontraction interval (ICI) and bladder capacity (BC) were significantly lower [(409±36)s vs (568±60)s,(284±25) μl vs (395±42)μl,P<0.01] while the bladder nonvoiding contraction (NVC) was significantly higher in the blank group[(2.03±0.49) number/min vs(1.07±0.30)number /min,P<0.01]. Compared with the blank group, the values of ICI and BC were elevated. NVC decreased obviously in the discontinues and daily lavage groups [(486±53)s and (564±44) s;(337±37)μl and (392±30) μl;(1.82±0.32 )number/min and (0.52±0.23) number/min,P<0.05]. The effects were more significant in the daily lavage group (P<0.01). The maximal relaxant effect of sodium nitroprusside was obviously enhanced in the discontinues and daily lavage groups [(50.6±2.1)% and (67.9±4.1)% vs(25.3±5.0)%,P<0.01]. However the sensitivity of Y-27632 decreased significantly [(35.8±2.5)% and (20.2±2.3)% vs (71.6±2.8)%,P<0.01], while the level of cGMP was significantly higher in the bladder detrusor muscle [(20.6±4.1) fmol/mg and (29.4±4.3) fmol/mg vs (12.9±2.1) fmol/mg,P<0.01]. The effects of the daily lavage group were more pronounced (P<0.01). Conclusion The phenomenon of bladder overactivity is observed in the SHRs. The PDE5 inhibitors are effective in treating overactive bladder. And the effect of daily supplement is much better. In addition, the mechanism may operate through the cGMP-dependent protein kinase G-RhoA/Rho kinase signaling pathway.     

放射性125I粒子对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤VEGF表达的影响

目的 探讨放射性125I粒子对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,将24只小鼠随机分为对照组和观察组,每组12只.观察组小鼠植入125I粒子,对照组小鼠植入空白粒子.检测裸鼠移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率.采用免疫组织化学法检测移植瘤组织内VEGF蛋白表达.采用PCR法检测移植瘤组织内VEGF mRNA表达.结果 观察组小鼠移植瘤体积及瘤重[(0.658±0.213) g]均明显小于对照组[(1.807±0.625) g],组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组小鼠平均抑瘤率为(68.2±5.3)%;观察组移植瘤中VEGF蛋白表达及VEGF mRNA表达分别为(22.6±5.9)、(98.7±8.2),均明显低于对照组的(58.5±6.4)、(138.7±5.2),组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 放射性125I粒子植入可显著抑制肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长,抑制VEGF表达可能是其主要作用机制.     

温阳化瘀方辅治脾肾亏虚血瘀型慢性肾脏病3期临床观察

目的观察慢性肾脏病一体化西药治疗及慢病随访管理基础上,加以温阳化瘀方治疗脾肾亏虚血瘀型慢性肾脏病3期的临床疗效。方法62例脾肾亏虚血瘀型慢性肾脏病3期患者按随机数字表法分为中西医治疗组和西药治疗组,各31例,两组均予以肾脏病一体化西药治疗及慢病随访管理,中西医治疗组在此基础上加用温阳化瘀方,疗程8周。比较两组患者治疗前后客观指标血红蛋白、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮、肾小球滤过率、尿总蛋白/尿肌酐及主观指标中医证候积分、SF-36生活质量评分。结果客观指标比较:两组患者治疗后各项指标均有改善,中西医治疗组较西药治疗组血清白蛋白[(44.05±3.25)g/L比(41.65±3.75)g/L,P<0.05]、血肌酐[(128.68±25.46)μmol/L比(143.55±25.10)μmol/L,P<0.05]、肾小球滤过率[(51.83±12.04)mL/min比(42.95±9.58)mL/min,P<0.05]、尿总蛋白/尿肌酐[(686.65±457.10)mg/g比(971.81±619.41)mg/g,P<0.05]均明显改善;主观指标:与治疗前比较,中西医治疗组[(13.42±4.23)分比(21.84±4.37)分,P<0.05]、西药治疗组[(19.23±3.90)分比(21.61±4.29)分,P<0.05]治疗后中医证候总积分均显著下降,中西医治疗组较西药治疗组改善更明显[(13.42±4.23)分比(19.23±3.90)分,P<0.05];与治疗前比较,中西医治疗组[(627.95±104.10)分比(487.78±125.18)分,P<0.05]、西药治疗组[(557.94±92.71)分比(507.08±100.68)分,P<0.05]治疗后SF-36生活质量总评分均明显上升,中西医治疗组较西药治疗组改善更明显[(627.95±104.10)分比(557.94±92.71)分,P<0.05];62例慢性肾脏病3期患者中医证候总积分与SF-36生活质量总评分负相关(P<0.05)。结论西药治疗联合慢病随访管理基础上辅以温阳化瘀方,可以更好地减少尿蛋白、提高血清白蛋白,延缓肾功能进展,改善症状提高患者生活质量。     

Tenascin-C在人原发性肝细胞癌浸润、转移和血管生成中的作用

目的研究Tenascin-C在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨Tenascin-C与HCC浸润、转移和血管生成的关系。方法采用免疫组织化学方法检测54例HCC、32例肝硬化、17例正常肝组织中Tenascin-C的表达情况以及微血管密度(MVD);采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Tenascin-C mRNA,并结合临床病理指标进行分析。结果 Tenascin-C在HCC、肝硬化和正常肝脏组织中的阳性例数分别为34、6和0,其差异具有统计学意义(χ2=14.06,P<0.01);Tenascin-C在HCC组织内的表达强度明显高于肝硬化组织[(162.15±9.77)vs.(149.24±8.25),t=2.192,P<0.05]。HCC组织Tenascin-C mRNA的表达强度明显高于肝硬化组织[(0.593±0.110)vs.(0.138±0.089),t=2.894,P<0.05]。有包膜浸润的HCC组织中Tenascin-C表达量明显高于无浸润者(t=2.248,P<0.05),Edmondson-Steiner病理分级中HCC属Ⅲ～Ⅳ级的Tenascin-C含量明显高于Ⅰ～Ⅱ级者(t=2.698,P<0.05),HCC有转移的Te-nascin-C含量明显高于无转移者(t=2.785,P<0.01)。HCC组织中Tenascin-C表达与微血管密度(MVD)呈正相关(r=0.68,P<0.05)。获随访的46例(85.2%)HCC患者在随访期间(3～30个月,平均11.5个月),Tenascin-C阴性表达的患者中位生存时间长于Tenascin-C阳性表达的患者[(22.01±6.95)月vs.(15.08±7.06)月,P<0.05,log-rank test]。结论 Tenascin-C对HCC的浸润、转移和血管生成起着重要作用。Tenascin-C和MVD可以作为预测HCC浸润、转移的生物学指标。     

高强度聚焦超声联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷自杀基因治疗对VX2荷瘤兔免疫力的影响

目的探讨高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIUF)联合单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)治疗对VX2荷瘤兔的肿瘤免疫耐受和特异性抗肿瘤免疫的影响。方法将40只实验兔按随机数字表法分为对照组、肿瘤组、HIFU组和联合治疗组,每组10只,其中HIFU组给予HIFU单独治疗,联合组给予HIFU和HSV-tk/GCV联合治疗。于治疗后第13天流式细胞术检测各组兔外周血CD4+CD25+Treg(Treg)细胞的数量变化情况,ELISA法检测外周血血浆IL-10,TGF-β的浓度,MTT法检测兔脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的体外杀伤活性。结果肿瘤组外周血Treg细胞数量[(8.30±0.69)%]、IL-10水平[(67.82±4.52)pg/ml]和TGF-β水平[(6.55±0.45)μg/ml]相对于对照组[(5.30±0.45)%、(54.58±3.53)pg/ml、(5.51±0.27)μg/ml]均显著升高(P<0.01);HIFU组Treg细胞数量[(7.00±0.56)%]、IL-10水平[(60.32±4.70)pg/ml]、TGF-β水平[(6.22±0.19)μg/ml]明显低于肿瘤组(P<0.01,P<0.05);联合治疗组Treg细胞数量[(6.40±0.72)%]和TGF-β水平[(5.86±0.31)μg/ml]低于HIFU组(P<0.05),而IL-10水平[(58.79±4.42)pg/ml]变化则无统计学意义(P>0.05)。杀伤实验显示HIFU组和联合治疗组脾淋巴细胞对VX2肿瘤细胞的杀伤活性分别为(31.62±3.09)%、(29.48±2.68)%,明显高于对照组[(13.94±2.45)%]和肿瘤组[(12.00±2.96)%](P<0.01),但联合治疗组和HIFU组的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HIFU联合HSV-tk/GCV治疗后,宿主肿瘤免疫耐受情况得到改善,特异性抗肿瘤免疫力增强。     

COX-2抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠CD4+CD25+调节T细胞的影响

目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠调节T细胞(regulatory T,Treg)的影响。 方法 昆明种小鼠随机分成正常组及肝癌组,每组各20只。肝癌小鼠和正常小鼠于背部皮下注射肝癌H22荷瘤小鼠腹水稀释液或生理盐水0.2 mL一次。于次日开始,每组各取10只采用塞来昔布30 mg/(kg·d)灌胃;肝癌组另外10只予以相同容积的生理盐水灌胃,作为肝癌对照组。灌胃均为1次/d,共24 d。正常组另外10只不做任何干预,作为健康对照组。给药24 d后处死全部小鼠,完整取出肿瘤后称取瘤重,HE染色检测是否成瘤;采用流式细胞学技术测定小鼠外周血中Treg细胞数量变化;免疫组织化学方法检测肝癌组织中叉头样/翼状螺旋转录因子-3(Foxp3)及COX-2的表达情况。 结果 塞来昔布干预后小鼠瘤重低于肝癌对照组[(0.82±0.30)g vs.(1.41±0.63)g,P<0.05]。HE染色证实所有肿瘤小鼠均已成瘤。肝癌对照组小鼠外周血中Treg占CD4+T细胞的比例高于健康对照组[(4.26±0.89)% vs.(3.01±0.65)%,P<0.05];经塞来昔布作用后,其Treg占CD4+T细胞的比例下降[(3.04±0.74)% vs.(4.26±0.89)%,P<0.05]。正常小鼠经塞来昔布作用后,其外周血Treg与健康对照组相比无明显变化。塞来昔布干预后肝癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中Foxp3蛋白阳性细胞低于肝癌对照组[(8.87±3.72)% vs.(30.78±9.26)%,P<0.05],肿瘤组织中COX-2表达水平亦下调[IOD值(2.90±1.030)vs.(6.63±2.279),P<0.01]。 结论 肝癌小鼠外周血中Treg比例增高;COX-2抑制剂能明显降低其外周血及肿瘤浸润淋巴细胞中Treg的比例。     

抑制高迁移率组蛋白1对大鼠急性脊髓损伤后炎性反应的影响

目的探讨抑制高迁移率组蛋白1(HMGB1)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)炎性反应的影响。方法选择健康雄性Wister大鼠32只,随机分为正常组、假手术组、模型组、甘草酸(Gly)组,每组8只。正常组大鼠不予任何刺激,假手术组大鼠只咬除T10椎板,不损伤脊髓,模型组和甘草酸组大鼠采用改良Allen’s法制备T10不完全性急性脊髓损伤模型,甘草酸组给予200mg/kg甘草酸灌胃处理,每天1次,连用3天。术后3天取各组大鼠T10段脊髓,应用ELISA法检测脊髓组织HMGB1、核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平,qRT-PCR法检测脊髓组织HMGB1、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达量。结果ELISA结果显示,脊髓损伤后,模型组大鼠脊髓组织HMGB1、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平较正常组明显升高[(3139.33±68.89)pg/mL比(1977.42±19.08)pg/mL、(2420.16±30.45)pg/mL比(1390.88±15.32)pg/mL;(244.61±5.49)pg/mL比(103.35±2.20)pg/mL、(271.91±3.24)pg/mL比(138.90±3.34)pg/mL、(109.89±3.33)pg/mL比(47.44±1.94)pg/mL,P均<0.01];甘草酸组大鼠脊髓组织HMGB1、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平较模型组明显降低[(2566.91±23.75)pg/mL比(3139.33±68.89)pg/mL、(1728.55±24.27)pg/mL比(2420.16±30.45)pg/mL、(177.50±4.86)pg/mL比(244.61±5.49)pg/mL、(190.77±1.95)pg/mL比(271.91±3.24)pg/mL、(66.38±3.62)pg/mL比(109.89±3.33)pg/mL,P均<0.01]。RT-qPCR结果表明,模型组大鼠脊髓组织HMGB1、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA水平较正常组明显升高[(1.25±0.08)比(0.57±0.02)、(1.66±0.04)比(0.76±0.02)、(1.26±0.06)比(0.53±0.03)、(1.73±0.08)比(0.94±0.07)、(1.82±0.07)比(1.01±0.06),P均<0.01];甘草酸组大鼠脊髓组织HMGB1、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA水平较模型组明显降低[(0.79±0.03)比(1.25±0.08)、(1.14±0.04)比(1.66±0.04)、(0.75±0.03)比(1.26±0.06)、(1.37±0.04)比(1.73±0.08)、(1.31±0.04)比(1.82±0.07),P均<0.01]。结论 HMGB1至少部分参与介导ASCI炎性反应,并与HMGB1依赖的NF-κB信号通路密切相关,甘草酸可能通过抑制HMGB1/NF-κB通路减轻大鼠急性脊髓损伤后的炎性反应。     

雷公藤甲素通过调控Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对糖尿病肾病模型小鼠足细胞的作用研究

目的观察雷公藤甲素治疗糖尿病肾病(DN)模型小鼠的疗效,并探讨其通过Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对DN足细胞的作用机制。方法6只9周龄db/m和18只9周龄db/db雄性小鼠,按db/m正常对照组(等量0.9%生理盐水)、db/db DN对照组(等量0.9%生理盐水)、替米沙坦治疗组(5mg·kg^-1·d^-1)、雷公藤甲素组(50μg·kg^-1·d^-1)分组给药,治疗8周。记录各组小鼠一般情况、24h尿白蛋白定量、体质量、肾脏指数和血生化指标,光镜观察肾小球病变情况,免疫组化计算足细胞数量,Western blot检测肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin以及肾脏组织TLR4和NF-κB蛋白定量表达。结果与DN对照组比较,雷公藤甲素组小鼠治疗后24h尿蛋白定量[(98.28±11.10)mg/24h比(239.89±44.26)mg/24h]、血清肌酐[(38.82±3.66)μmol/L比(45.32±7.63)μmol/L]、总胆固醇[(3.05±0.54)mmol/L比(4.00±0.67)mmol/L]及三酰甘油[(1.23±0.15)mmol/L比(2.09±0.48)mmol/L]均明显下降(P均<0.01),血清白蛋白水平上升[(39.21±4.33)g/L比(25.46±1.54)g/L,P<0.01],肾小球肥大和足细胞损伤减轻[(95.50±5.01)个/肾小球比(58.78±2.86)个/肾小球,P<0.05],Nephrin[(2.05±0.44)比(1.15±0.22)]、Podocin[(1.32±0.25)比(0.72±0.20)]蛋白表达量上升(P均<0.01),TLR4[(0.37±0.04)比(0.61±0.04)]和NF-κB[(0.41±0.05)比(0.76±0.06)]蛋白表达量下降(P均<0.01)。结论雷公藤甲素可能通过抑制TLR/NF-κB信号通路相关因子表达,减轻糖尿病肾病模型小鼠足细胞损伤,减低蛋白尿,保护肾功能,起到治疗糖尿病肾病的作用。     

靶向livin的小分子干扰RNA联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的影响

目的 利用RNA干扰技术阻断livin基因的表达,观察其联合表阿霉素对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的作用.方法 体外化学合成靶向livin的小分子干扰RNA(siRNA),在脂质体(lipofectamineTM2000)的介导下转染人乳腺癌细胞ZR-75-30.荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后ZR-75-30细胞livin基因表达的变化,流式细胞术检测转染靶向livin的iRNA联合表阿霉素作用的ZR-75-30细胞的凋亡率.结果 靶向livin的siRNA可以有效特异地抑制ZR-75-30细胞livin基因的表达,在mRNA水平上其表达抑制率约为53.66%;在蛋白质水平其表达抑制率约为58.32%,转染靶向livin的siRNA 36h后,靶向livin的siRNA联合表阿霉素可以诱导(15.18±0.05)%的细胞凋亡.结论 靶向livin的siRNA能有效、特异地阻断livin基因的表达,阻断livin基因表达联合表阿霉素可促进ZR-75-30细胞的凋亡.