菟丝子含药血清对TNF-α诱导凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

[目的]观察菟丝子含药血清对TNF-α诱导人凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,以期从蜕膜细胞凋亡的角度探讨菟丝子安胎的机理.[方法]体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测对照组、模型组(TNF-α)、治疗组(TNF-α+菟丝子含药血清)凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.[结果]与对照组比较,模型组细胞促凋亡蛋白Bax的表达明显增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,均有显著性差异(P＜0.05);与模型组比较,治疗组促凋亡蛋白Bax的表达明显降低,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达明显增加,均有显著性差异(P＜0.05).[结论]菟丝子含药血清可降低异常凋亡蜕膜细胞Bax水平,升高Bcl-2水平,从而可抑制早期蜕膜细胞的异常凋亡,起到保胎作用.     

桂昆风湿合剂含药血清对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的研究桂昆风湿合剂含药血清对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 40只SD大鼠随机分为桂昆风湿合剂低、中、高剂量组和空白组,每组10只。空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药后心脏采血,分离血清,56℃灭菌,制备桂昆风湿合剂低、中、高剂量组含药血清。采用组织块提取法和酶消化法体外纯化FLSs,分别加入不同浓度的桂昆风湿合剂含药血清培养24 h,采用CCK8对FLSs的增殖能力进行检测,采用TUNEL法检测桂昆风湿合剂对FLSs凋亡能力的影响,采用Western blot法检测FLSs凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的表达,采用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果桂昆风湿合剂含药血清对FLSs的细胞活性抑制呈浓度依赖的抑制效应(P0.05)。桂昆风湿合剂含药血清能够明显诱导FLSs细胞凋亡,并使FLSs促凋亡蛋白Bax和Cleaved-caspase-3表达升高(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。JAK2、STAT3通路蛋白p-JAK2、p-STAT3表达降低(P0.05)。结论桂昆风湿合剂含药血清可以降低FLSs增殖能力并诱导其凋亡,可能与其降低JAK2/STAT3通路的激活,进而影响FLSs的凋亡途径有关。     

牛黄参含药血清调控Bax、Bcl-2表达诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的实验研究

目的观察牛黄参胶囊含药血清对人肝癌细胞HepG-2的Bax、Bcl-2的调控作用。方法建立并分为空白对照组,环磷酰胺组和牛黄参胶囊5%、10%和20%含药血清组。采用实时定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测HepG-2细胞Bax、Bcl-2的表达;Western blotting检测Bcl-2蛋白的表达水平。结果牛黄参胶囊20%含药血清能在基因和蛋白水平明显上调Bax表达(P0.01),明显抑制Bcl-2的表达(P0.01),并具有明显的剂量依赖性。结论牛黄参胶囊含药血清能明显上调Bax表达,同时下调Bcl-2表达,可能是其诱导肝细胞凋亡的机制之一。     

芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探究芒果苷对脂多糖诱导小鼠成骨细胞凋亡的影响及可能机制.方法 将小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和LPS+芒果苷组,分别加入PBS缓冲液、脂多糖(LPS)、LPS+芒果苷.采用MTT法检测不同处理因素下各组成骨细胞的细胞存活率;qRT-PCR法检测各组细胞炎症因子TNF-α及细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3基因mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS组MC3T3-E1细胞存活率明显降低,TNF-α、Bax和Caspase-3的mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显下降;而与LPS组相比,LPS+芒果苷组MC3T3-E1细胞存活率明显提高,TNF-α、Bax、Caspase-3 mRNA表达明显下降,Bcl-2 mRNA基因表达明显升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 芒果苷可改善LPS导致的成骨细胞凋亡,其作用机制可能与芒果苷抑制LPS诱导的TNF-α形成及调节细胞内Bax、Bcl-2、Caspase-3产生有关.     

灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的 观察灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子 （PDGF）诱导的活化大鼠肝星状细胞 （HSC-T6）凋亡的作用,并观察其对凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制。方法 首先制备含药血清:SD大鼠随机分为3组,分别用生理盐水 （A组,10 mL/kg）,复方鳖甲软肝片药液 （B组,1.5 g/kg）,灵芪蠲肝胶囊药液 （C组,4.25 g/kg）灌胃7 d,每日1次。经腹主动脉采血,静置、离心、灭活、过滤,取得含药血清。以PDGF 10 ng/mL刺激活化HSC-T6。将各组含药血清按200 mL/L分别作用于HSC-T6。0、12、24、48 h后采用流式细胞技术检测各组HSC-T6凋亡情况以及Bcl-2、Bax的表达。结果 B、C组含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,细胞凋亡率较A组升高,差异有统计学意义 （P<0.05）,而B、C组间的差异无统计学意义（P>0.05）。各组组内不同时间点比较,除A组外,B、C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义,细胞凋亡率随时间的延长出现明显上升 （P<0.05）。含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,B组、C组Bcl-2的表达较A组明显下降,Bax的表达出现明显上升,差异均有统计学意义 （P<0.05）,而B组与C组间差异均无统计学意义 （P>0.05）。除A组外,B组和C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义 （P<0.05）,Bcl-2蛋白的表达在0 h最高,随时间的延长表现为下降趋势 （P<0.05）,Bax蛋白的表达随着时间的延长,整体表现为上调趋势 （P<0.05）。结论 灵芪蠲肝胶囊可以诱导活化的HSC-T6凋亡,其机制可能为影响Bcl-2/Bax表达失衡,从而发挥其抗纤维化作用。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

骨碎补总黄酮对骨质疏松大鼠骨组织中硬化蛋白表达的影响及其作用机制

目的：探讨骨碎补总黄酮对骨质疏松大鼠骨组织中骨硬化蛋白（SOST）表达的影响,阐明骨碎补总黄酮抗骨质疏松的作用机制。方法：将40只8月龄雌性大鼠分为正常对照组（每天灌胃生理盐水）、骨质疏松模型组（90 mg·kg^-1·d^-1维甲酸灌胃给药,持续14 d）、阳性药组（维甲酸灌胃14 d,同时以0.1 mg·kg^-1·d^-1皮下注射阿仑膦酸钠30 d）和骨碎补总黄酮组（维甲酸灌胃14 d,同时以58 mg·kg^-1·d^-1骨碎补总黄酮灌胃给药30 d）,每组10只。采集各组大鼠静脉血,检测血清中钙、磷和碱性磷酸酶（ALP）水平,肝和肾功能指标,包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（Crea）和尿素氮（BUN）;取大鼠一侧股骨,采用HE染色观察骨组织病理形态表现;采用qRT-PCR法检测各组大鼠骨组织中SOST mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠骨组织中SOST蛋白表达水平。结果：与骨质疏松模型组比较,阳性药组大鼠血清中钙和磷水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,而骨碎补总黄酮组大鼠血清中钙水平明显升高（P<0.05）;与阳性药组比较,骨碎补总黄酮组大鼠血清中钙、磷和ALP水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。与正常对照组比较,骨质疏松模型组、阳性药组和骨碎补总黄酮组大鼠血清中Crea水平明显降低（P<0.01）;与骨质疏松模型组和阳性药组比较,骨碎补总黄酮组大鼠血清中Crea水平明显降低（P<0.01）;各组大鼠血清中ALT、AST和BUN水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。光镜下观察,骨质疏松模型组大鼠骨组织骨小梁稀疏、变薄和断裂;与骨质疏松模型组比较,阳性药组和骨碎补总黄酮组大鼠骨小梁明显变厚、断裂减少。与骨质疏松模型组比较,阳性药组和骨碎补总黄酮组大鼠骨组织中SOST mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）;阳性药组大鼠骨组织中SOST蛋白表达水平较正常对照组和骨质疏松模型组均明显降低（P<0.01）,骨碎补总黄酮组大鼠SOST蛋白表达水平虽然较正常对照组和骨质疏松模型组低,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：骨碎补总黄酮拮抗骨质疏松症的作用机制可能是通过抑制骨细胞合成SOST进而促进骨形成。     

海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的探讨含高剂量反药组合的海藻玉壶汤中海藻不同品种与甘草加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法选取Wistar大鼠144只,雌雄各半,随机分为空白组、模型组、阳性药优甲乐组(优甲乐组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤全方组(羊栖菜全方组)、含海蒿子的海藻玉壶汤全方组(海蒿子全方组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤去甘草组(羊栖菜去甘草组)、含海蒿子的海藻玉壶汤去甘草组(海蒿子去甘草组)、海灌玉壶汤去海藻组(全方去海藻组)、海藻玉壶汤去海藻甘草组(全方去海藻甘草组),共计9组。造模期间,除空白组外,其余各组大鼠灌服丙基硫氧嘧啶(PTU)10 mg/kg,每日1次,共给造模药14 d。造模后给予治疗药物,周期为28 d,其中,空白组与模型组给予等量蒸馏水灌胃,阳性药组灌服优甲乐,给药剂量为20μg/kg,每日1次,其余各给药组给予相应药液灌胃,大鼠每日给药1次,给药剂量为海蒿子/羊栖菜去甘草组12.6 g/kg,全方去海藻组13.5 g/kg,海蒿子/羊栖菜全方组18.0 g/kg,全方去海藻甘草组8.1 g/kg。在给药期间,为了稳定模型,除空白组外,每隔1 d,其余各组灌服PTU,剂量同前。给药结束后计算各组大鼠甲状腺系数,观察甲状腺组织病理形态,用RT-PCR法检测甲状腺组织中Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果与空白组比较,各组大鼠甲状腺系数明显升高(P<0.01);与模型组比较除优甲乐组外其余各给药组甲状腺系数明显降低(P<0.01)。甲状腺组织病理形态观察显示模型组与优甲乐组较空白组变化明显,甲状腺组织小叶排列紊乱,滤泡大小不一,滤泡上皮细胞弥漫性增生和肥大,其余各给药组有纠正作用,其中全方(海蒿子/羊栖菜)组组织病理形态最接近空白组。与空白组比较,模型组Bax mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较海藻玉壶汤全方及加减应用各组Bax mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。各组Bcl-2 mRNA表达无差异。与空白组比较,模型组Bax/Bcl-2降低(P<0.05),与模型组比较,海藻玉壶汤全方及加减应用各组数值均升高(P<0.05,P<0.01)。结论含高剂量反药组合的海藻玉壶汤中不同品种海藻与甘草加减应用,对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺系数及甲状腺组织形态有纠正作用;其作用机制可能与其升高Bax/Bcl-2从而促进甲状腺细胞凋亡相关。     

昆仙胶囊对狼疮鼠外周血IL-10、TNF-α表达的影响

目的：观察昆仙胶囊对大肠杆菌脂多糖（LPS）诱导的狼疮样模型小鼠外周血中白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,探讨昆仙胶囊治疗系统性红斑狼疮（SLE）的可能机制。方法：选用60只纯系昆明小鼠随机分为5组（空白组、模型组、泼尼松组、昆仙胶囊组、联合用药组）,每组12只。除空白对照组外,其余4组均腹部皮下注射LPS给药造模。泼尼松组给予泼尼松10 mg/kg.d-1,昆仙胶囊组给予昆仙胶囊10 g/kg.d-1,联合用药组给予泼尼松5 mg/kg.d-1、昆仙胶囊5 g/kg.d-1。空白组、模型组给予生理盐水0.5mL/d灌胃,每日上午定时灌胃给药。连续灌胃3周后,各组小鼠均经眼球后静脉采血,分别采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测狼疮样小鼠外周血中IL-10、TNF-α表达。结果：模型组IL-10、TNF-α水平均较空白对照组升高（P〈0.05）,说明造模成功;3个治疗组血清中IL-10、TNF-α水平较模型对照组降低（P〈0.05）,差异有显著性;昆仙胶囊组IL-10、TNF-α水平与泼尼松组比较,差异无显著性（P〉0.05）,联合用药组IL-10、TNF-α水平均较泼尼松组、昆仙胶囊组降低（P〈0.05）,差异有显著性。结论：昆仙胶囊能有效抑制狼疮样小鼠血清中IL-10、TNF-α的分泌,与激素联用效果更佳并能减小激素用量。     

青蒿琥酯联合胰岛素对伴1型糖尿病牙周病大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响

目的：探究青蒿琥酯（ART）联合胰岛素（INS）对伴1型糖尿病牙周病大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响,并初步探索其机制。方法：50只雄性SD大鼠随机分为5组：正常对照组（NC组）、伴糖尿病牙周病组（DM+PD组）、伴糖尿病牙周病ART干预组（ART组）、伴糖尿病牙周病INS干预组（INS组）、伴糖尿病牙周病ART联合INS干预组（ART+INS组）,每组10只;建模成功后每日给药1次,用药4周过后过量麻醉处死,测量各组大鼠空腹血糖值（FBG）;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平;微计算机断层扫描技术（Micro-CT）检测牙槽骨吸收情况;苏木精—伊红（HE）染色及免疫组织化学（IHC）法观察胰腺组织病理学改变及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白在胰岛的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹（western blotting）法检测胰腺Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果：与NC组比较,DM+PD组FBG明显升高（P<0.05）;血清TNF-α...     

藤梨根含药血清对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 研究藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将9只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为藤梨根含药血清高、低剂量组和对照组,每组3只,含药血清组分别以12.5、6.25 g/(kg·d)的藤梨根灌胃,对照组予生理盐水灌胃,3 d后取腹主动脉血制备含药血清及对照组血清,3 组血清分别干预体外培养的人肺癌A549细胞24 h,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂测定藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用,应用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹法检测藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)、B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响.结果 CCK-8法检测结果示,藤梨根含药血清对人肺癌A549 细胞有增殖抑制作用.与对照组比较,含药血清组增殖抑制率明显增高(P<0.01).藤梨根含药血清对A549细胞有诱导细胞凋亡的作用,与对照组比较,低、高剂量组凋亡率增高(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,藤梨根含药血清作用人肺癌A549细胞24 h后,肺癌细胞EGFR和Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 藤梨根含药血清可抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调EGFR和Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达相关.     

重建中气抗癌汤含药血清抑制胃癌SGC7901细胞作用及机制研究

目的探讨重建中气抗癌汤含药血清对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响及机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组,重建中气抗癌汤低、中、高剂量(1.55、3.1、6.2 g/kg)组及5-氟尿嘧啶(5-FU)组制备含药血清。含药血清作用SGC7901细胞后,采用流式细胞术观察细胞凋亡率,梯度聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3) mRNA活性;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。结果与对照组比较,经加味重建中气抗癌汤各浓度组处理后,各实验组SGC7901细胞的凋亡率显著高于对照组;重建中气抗癌汤处理后的促凋亡基因Caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA及蛋白表达均降低(P0.05)。结论重建中气抗癌汤含药血清能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase-3活性、上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

四逆散对雷公藤多苷所致急性肝损伤的影响

目的研究四逆散对雷公藤多苷所致急性肝损伤的影响。方法将40只昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量四逆散组、中剂量四逆散组和高剂量四逆散组,分别以相应剂量药物灌胃7 d,再以雷公藤多苷灌胃造模。观察各组的小鼠肝组织Bcl-2和Bax蛋白含量、Caspase-3的活性以及TNF-αmRNA的表达水平。结果模型组肝组织Bcl-2较正常对照组降低,Bax、Caspase-3、TNF-αmRNA较正常对照组升高。高剂量四逆散组Bcl-2较模型组升高,Bax、Caspase-3、TNF-αmRNA较模型组降低。低剂量和中剂量四逆散组较模型组相比,各项指标变化差异均无统计学意义。结论四逆散有对抗雷公藤多苷所引起急性肝细胞凋亡的作用。     

Mechanism of Hewei Jiangni Capsule(和胃降逆胶囊)Regulating Proliferation and Apoptosis of Human Gastric Cancer AGS Cells Through PI3K/AKT Signaling Pathway

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况.结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义.在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低.各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P＜0.05),且呈现出浓度相关性.结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡.     

健脾益气方剂含药血清对胃癌细胞生长及血管新生的影响

目的:研究健脾益气方剂含药血清对胃癌细胞生长及血管新生的影响。方法:选择SD大鼠,分别给予健脾益气药液及生理盐水灌胃后取主动脉血,制备健脾益气方剂含药血清及空白血清;培养胃癌SGC-7901细胞,分为10%含药血清组、10%空白血清组及10%胎牛血清组,处理24 h测定细胞增殖活力、凋亡指数以及增殖基因、凋亡基因、血管新生基因的表达量。结果:10%含药血清组的细胞增殖活力值以及细胞中EZH2、UHRF1、CyclinA、CyclinB1、CDK1、c-IAP1、XIAP、VEGF、VEGFR2、HIF-1α、COX2的mRNA表达量明显低于10%空白血清组及10%胎牛血清组,凋亡指数以及细胞中Caspase-3、PDCD5的mRNA表达量明显高于10%空白血清组及10%胎牛血清组。结论:健脾益气方剂含药血清对胃癌细胞生长及血管新生均具有抑制作用。     

骨碎补总黄酮对人工关节磨损微粒引起单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的 探讨骨碎补总黄酮对聚乙烯微粒引起单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响.方法 采集20例健康人体外周血,分离单核细胞,随机分组培养.A组（对照组）：仅单核细胞;B组：单核细胞＋聚乙烯微粒;C组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋帕米磷酸钠（10 mg/L）;D组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（5 mg/L）;E组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（10 mg/L）;F组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（20 mg/L）.培养48 h后,检测细胞上清液中TNF-α的含量.结果 TNF-α含量B组高于A组（P〈0.01）;C、D、E、F组分别低于B组（P〈0.01）;C组与D、E、F组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）;D组和E组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,E组和F组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,F组低于D组（P〈0.01）,随着药物浓度的增加,D、E、F组有逐渐减少趋势.结论在体外聚乙烯微粒可以刺激人外周血单核细胞过量分泌TNF-α.在体外骨碎补总黄酮和帕米磷酸钠均可有效抑制人外周血单核细胞过量分泌TNF-α.在一定剂量范围内,在体外骨碎补总黄酮和帕米磷酸钠抑制人外周血单核细胞过量分泌TNF-α的效果相似.骨碎补总黄酮能有效抑制由磨损微粒介导的TNF-α的高表达,有望成为将来防治人工关节无菌性松动的一种很有潜力的药物.     

槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡抑制作用研究

目的 探讨槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡的抑制作用。方法 采用钛颗粒处理小鼠MC3T3-E1细胞系构建细胞凋亡模型，应用槲皮素进行干预并设置对照，噻唑蓝法[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，MTT法]法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）检测白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表达，免疫荧光技术检测C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）、B细胞淋巴瘤因子2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达，实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）检测CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结果 钛颗粒抑制成骨细胞增殖活性，并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示，钛颗粒诱导成骨细胞凋亡。槲皮素预培养能有效缓解钛颗粒对成骨细胞增殖活性的抑制，减少其凋亡。ELISA检测结果显示，槲皮素能减少IL-1β和TNF-α表达。免疫荧光技术显示槲皮素参与调控CHOP蛋白和Bcl-2蛋白的表达，RT-PCR检测结果显示，槲皮素参与调控CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结论 槲皮素能抑制钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡，其作用机制可能与内质网应激启动的凋亡途径抑制，调控CHOP、Bcl-2蛋白表达的信号通路有关。     

心痛舒含药血清对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的 研究心痛舒含药血清对乳鼠缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响,探讨其对心肌细胞H/R保护的作用机制.方法 建立H/R心肌细胞模型,乳鼠心肌细胞分为4组:正常血清对照组、缺氧/复氧(H/R)组、AG490组、心痛舒含药血清组.采用罗丹明B染色法观察心肌细胞形态、A0/EB双荧光染色法观察心肌细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 与正常血清对照组比较,H/R组Bcl-2的mRNA表达减少,而Bax mRNA表达增多,差异有统计学意义(P＜0.01);与H/R组比较,AG 490组和心痛舒含药血清组Bcl-2的mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,差异有统计学意义(P＜0.01);与AG 490组比较,心痛舒含药血清组Bcl-2的mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 心痛舒能保护乳鼠心肌细胞,其作用机制与下调促凋亡基因Bax,上调抑制凋亡基因Bcl-2,升高Bcl-2/Bax比值有关.     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

柴芩平胃胶囊对反流性胃炎胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响

[目的]观察柴芩平胃胶囊（CQPC）对反流性胃炎模型大鼠胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响.[方法]Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,CQPC高、中、低剂量组（剂量分别为16.66、8.33、4.17g/kg）,小柴胡冲剂组（10g/kg）;除假手术组外,均采用B-Ⅱ式胃部分切除（胃空肠吻合）术复制大鼠反流性残胃炎模型,各组按设计剂量灌胃给药,连续4周;分别采用ELISA、原位杂交、免疫组化方法观察CQPC对胃粘膜细胞凋亡及调控基因p53 mRNA、Bax和Bcl-2表达的影响.[结果]模型组结果显示胆汁反流可引起模型大鼠胃粘膜细胞凋亡增加,野生型p53 mRNA、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与假手术组比较具有显著性差异（均P＜0.05或P＜0.01）;高、中、低剂量CQPC均可减少胆汁反流引起的细胞凋亡,减少野生型P53 mRNA、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达（均P＜0.05或P＜0.01）.[结论]柴芩平胃胶囊治疗反流性胃炎的作用机制,可能与减少胃粘膜细胞凋亡,调节各种凋亡调控基因的表达有关.