人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2.1通道的表达

目的 Kir2.1通道是控制骨髓源性巨噬细胞增殖、活化和凋亡的重要离子通道之一,并且还参与细胞分化。本研究观察Kir2.1通道mRNA及蛋白在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达。方法 采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性健康志愿者的外周血中分离单核细胞,经5d培养后分化为巨噬细胞。在建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上,采用RT-PCR,蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究Kir2.1通道的表达。结果 将巨噬细胞同30mg/L氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)于37℃孵育60h后,细胞体积增大,并有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,细胞内的总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)的含量分别从(54.79±28.304)mg/g、(47.968±26.787)mg/g和(6.822±3.437)mg/g增加至(229.775±57.453)mg/g、(96.241±24.003)mg/g和(133.535±36.292)mg/g,CE/TC从(14.437±6.781)%提高到[(57.946±3.507)%(n=7,P<0.05)]。但是,Kir2.1通道mRNA的扩增量在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间无显著差异[(59.074±10.566)%vs(46.98±12.527)%,n=5,P＞0.05];同样,Kir2.1通道蛋白在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间亦无显著差异[(60.527±18.621)%vs(50.243±11.583)%,n=6,P＞0.05]。结论 人单核细胞源性巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育60h后可分化为泡沫细胞,但Kir2.1通道的表达无明显改变。     

双氯芬酸对人巨噬细胞钾通道Kv1.3、Kir2.1表达的抑制作用及其对膜电位和泡沫细胞形成的影响(英文)

目的分研究双氯芬酸对人巨噬细胞电压依赖性钾通道Kv1.3、内向整流钾通道Kir2.1表达的影响及意义。方法以健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞为对象,采用Real-time RT-PCR及Western blot技术研究双氯芬酸对Kv1.3和Kir2.1表达的影响;电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化,并用酶荧光化学法检测摄取氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)的巨噬细胞内胆固醇酯(CE)的构成比率。结果双氯芬酸(1.5和15μmol/L)抑制巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达。同对照组相比,Kv1.3mRNA下降分别超过80%和90%(P<0.05),Kir2.1 mRNA下降分别超过20%和30%(P>0.05);两种钾通道蛋白水平的下降均分别超过10%和60%,且存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。同时,双氯芬酸可剂量依赖性减弱巨噬细胞表面的荧光强度,使膜电位分别下降约28%和54%(P<0.05)。巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞体积明显增大,且有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,CE/TC的百分比超过50%。1.5和15μmol/L双氯芬酸分别使摄取OxLDL的巨噬细胞内CE的百分比显著减少到(23.624±3.34)%和(13.601±2.916)%,但缺乏明显的量效关系(P>0.05)。结论双氯芬酸显著下调人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达,降低细胞膜电位,并抑制泡沫细胞形成。     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中MaxiK通道α-亚单位的表达

目的研究人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中MaxiK通道α-亚单位的表达.方法采用密度梯度离心法从男性健康志愿者外周血中分离单核细胞,经培养后分化为巨噬细胞,并通过加氧化型低密度脂蛋白(OxLDL),建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型,采用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究MaxiK 通道α-亚单位的表达.结果巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,并且CE/TC从(14.437±6.781)%提高到(57.946±3.507)%.同时,MaxiK通道α-亚单位表达被下调,但同巨噬细胞相比差异无统计学意义(P>0.05).结论人单核细胞源性巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后可分化为泡沫细胞,但MaxiK 通道α-亚单位的表达无明显改变.     

苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及PPAR-γ,caveolin-1表达的影响

目的:观察苦参碱对ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇脂和PPAR-γ,小凹蛋白-1表达的影响.方法:用荧光分光光度法测定胆固醇浓度;采用TBARS法检测细胞内脂质过氧化产物;用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;用荧光RT-PCR和Western Blot检测PPARγ,caveolin-1的表达.结果:单核细胞经PMA及oxLDL共同孵育后,细胞内形成大量脂滴,胆固醇酯(CE)和细胞内脂质过氧化产物(MDA)含量由(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L升至(64.8±6.8) mg/L,(8.50±1.23) nmol/L (P＜0.05),泡沫细胞由(4.7±2.2)%升至(77.8±7.0)% (P＜0.05),而PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达由(4.4±0.8),(0.5±0.09),(0.6±0.09)降至(1.6±0.4),(0.33±0.09),(0.33±0.09)(P＜0.05),苦参碱低、中、高干预组细胞内积聚的CE和MDA含量分别为 (29.7±4.9) mg/L,(1.92±0.46) nmol/L,(5.8±1.3) mg/L,(0.6±0.08) nmol/L,(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L;泡沫细胞为(46.2±5.8)%,(16.3±3.4)%,(4.8±1.5)%,PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达为(6.4±2.2),(0.6±0.08),(0.5±0.09),(7.4±2.2),(0.6±0.08),(0.6±0.07),(8.6±2.7),(0.6±0.06),(0.7±0.06),与ox-LDL PMA组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:苦参碱减少ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇聚集,增加泡沫细胞内PPAR-γ,小凹蛋白-1的表达.     

三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和LXRα mRNA表达的影响

目的 观察三七总皂苷(Panat notoginseng saponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达及脂质沉积的影响.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48 h.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值.采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达情况.结果 模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低(P<0.05).PNS高、中剂量组中ABCA1及LXRα mRNA的表达均显著高于模型组(P<0.01).结论 PNS可以上调ABCA1和LXRα mRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积.     

载脂蛋白A-I对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞黏附分子-1和三磷酸腺苷结合盒转运子1表达的影响

目的 探讨载脂蛋白A-I(apoA-I)对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)表达的影响.方法 以佛波酯(PMA)及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1),使其分化为负脂的泡沫细胞,然后用apoA-I(10 mg/L)或ABCA1抗体(10 mg/L)孵育泡沫细胞24 h.采用免疫荧光法检测巨噬细胞及经apoA-I及ABCA1抗体干预前后泡沫细胞MCP-1、VCAM-1及ABCA1的表达,并行半定量分析.结果 ①经ox-LDL50 mg/L干预后,与巨噬细胞相比,泡沫细胞内MCP-1、VCAM-1及ABCA1表达均明显增强.②与未干预组相比,经apoA-I 10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1及VCAM-1表达显著减少(P值均<0.05),而ABCA1表达明显增加(P值均<0.05);经ABCAl抗体10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1的表达显著增加(P值均<0.05),VCAM-1表达有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 apoA-I可能通过增加泡沫细胞ABCA1和降低MCP-1及VCAM-1蛋白的表达发挥其抗动脉粥样硬化和抗炎作用,ABCA1通道可能在降低泡沫细胞内MCP-1表达方面发挥一定作用.     

硫化氢上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法氧化低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞诱导泡沫化,H2S供体硫氢化钠处理细胞,测定胆固醇流出率,高效液相色谱测定细胞内游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)和总胆固醇(TC)浓度。实时定量PCR和蛋白印迹法检测泡沫细胞中ABCA1mRNA和蛋白表达。结果与泡沫细胞组相比,外源性H2S以时间和浓度依赖的方式增加泡沫细胞胆固醇流出(P<0.05),降低细胞中TC、FC和CE及CE/TC水平(P<0.05),上调细胞中ABCA1表达。结论外源性H2S上调泡沫细胞中ABCA1表达,促进胆固醇流出。     

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 通过研究脂联素对细胞内胆固醇的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制.方法 以人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1细胞株)来源的泡沫细胞模型为研究对象,用不同浓度的脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)进行体外干预.采用油红O观察泡沫细胞形成,用胆固醇氧化酶法检测细胞内胆固醇含量的变化,用荧光显微镜观察巨噬细胞对Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-Ox-LDL)的摄取率.结果 脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)干预对巨噬细胞内总胆固醇(TC)无显著影响,却能促进胆固醇酯(CE)转化为游离胆固醇(FC),CE/TC比值明显降低(P<0.05);同时观察到脂联素(10 mg/L)干预后可抑制巨噬细胞对Dil-Ox-LDL的摄取.结论 脂联素能减少巨噬细胞对Ox-LDL的摄取和促进巨噬细胞内胆固醇酯的水解,这可能是脂联素抑制胆固醇沉着从而发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2．1通道的表达

OBJECTIVE: Detected in non-transformed bone marrow-derived macrophages (BMDM) and identified as one of the key channels in modulating macrophage proliferation, activation and apoptosis, Kir2.1 channel is also characterized to play a crucial role in cell differentiation. The purpose of this study was to investigate the expression of Kir2.1 channel mRNA and protein during human monocyte-derived macrophage differentiation into foam cells. METHODS: Human peripheral blood monocytes were isolated from healthy male volunteers by density gradient centrifugation and then by adherence method. The macrophages identified as a homogeneous population of adherent cells were obtained after 5 days of culture. Expression of Kir2.1 channel during human macrophage differentiation into foam cells was investigated by RT-PCR, Western blotting and immunocytochemistry, respectively. RESULTS: After incubation of the macrophages with 30 mg/L OxLDL at 37 degrees C for 60 h, the cells were obviously enlarged in size and numerous red lipid granules observed under optical microscope. The cellular contents of the total cholesterol (TC), free cholesterol (FC) and cholesterol ester (CE) were markedly increased from 54.79+/-28.304 mg/g, 47.968+/-26.787 mg/g and 6.822+/-3.437 mg/g to 229.775+/-57.453 mg/g, 96.241+/-24.003 mg/g and 133.535+/-36.292 mg/g, respectively; the CE/TC ratio rose from (14.437+/-6.781)% to (57.946+/-3.507)% (n=7, P<0.05), suggesting the phenotype of foam cells. However, there was no significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel mRNA between the macrophages and foam cells [(59.074+/-10.566)% vs (46.98+/-12.527)%, n=5, P>0.05], nor was there significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel protein between them [(60.527+/-18.621)% vs (50.243+/-11.583)%, n=6, P>0.05]. CONCLUSION: Incubation of human monocyte-derived macrophages with 30 mg/L OxLDL for 60 h induces the differentiation of the cells into foam cells, but the expression of Kir2.1 channel does not change obviously.     

氧化性低密度脂蛋白诱导浓度和时间对肝癌HepG2细胞胆固醇积累的影响

目的 探讨氧化性低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)促进肝癌HepG2细胞中胆固醇蓄积的最适浓度和最适作用时间。方法 将肝癌HepG2细胞接种于含10%的胎牛血清和1%双抗(青霉素、链霉素)的高糖DMEM培养基中,置于5%浓度的CO₂培养箱中培养,每3天进行一次细胞传代,取对数增长期的细胞用于实验研究。实验分为5组,空白对照组和ox-LDL组(75 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L)。每组9个样,分3个小组,每个小组3个样,3个小组分别培养24 h、48 h和72 h后测定细胞内胆固醇的积累并用油红O染色法定性观察。应用统计学软件SPSS Statistics 17.0进行t检验分析,数据以均数±标准差表示,对胆固醇定量检测结果进行统计分析,当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果 与空白对照组比较,经过ox-LDL不同浓度和不同时间诱导后,总胆固醇含量(total cholesterol,TC)、游离胆固醇含量(free cholesterol,FC)及胆固醇酯与总胆固醇比值(the ratio of cholesterol ester and total cholesterol,CE/TC)均有一定程度的升高。尤以50 mg/L ox-LDL诱导48 h时[空白对照组：TC (98.21±2.85) mmol/L、FC (56.25±0.55)mmol/L、CE/TC 42.64±1.50; ox-LDL组：TC (146.7±3.59)mmol/L、FC (79.9±0.55) mmol/L、CE/TC 49.9±3.49]变化最明显。与空白对照组比较,ox-LDL组胞浆内有不同程度红色脂滴存在,且发现ox-LDL 50 mg/L作用48 h时,因含有过多脂滴而形成了红色聚集的脂团,而未加ox-LDL的空白对照组细胞内无明显脂滴颗粒。结论 ox-LDL不同诱导浓度和不同诱导时间对肝癌HepG2细胞内胆固醇(TC 、FC 、CE/TC)积累都有促进作用,而ox-LDL对肝癌HepG2细胞内胆固醇积累的影响最适浓度和时间为50 mg/L诱导48 h。     

吉非贝齐对人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1表达的差别调节作用及其对膜电位的影响

目的:探讨人巨噬细胞发育过程中Kv1.3、Kir2.1通道的表达和吉非贝齐的调节作用,观察其对膜电位的影响,为动脉粥样硬化（AS）相关性疾病治疗提供电生理学依据。方法：健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞随机分为对照5 d组（C 5d）、对照7.5 d组（C 7.5d）和吉非贝齐组（G）,吉非贝齐的终浓度为400 μmol•L^-1;采用Real time RT-PCR及Western blotting技术检测Kv1.3和Kir2.1通道的表达,电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化。结果：与C 5d组比较,C 7.5d组Kv1.3 mRNA/蛋白水平从（1.064±0.275）/（0.227±0.018）升高至（3.067±0.824）/（0.409±0.022）（P<0.05）,但Kir2.1 mRNA/蛋白水平却从（1.024±0.166）/（0.204±0.018）降低至（0.399±0.133）/（0.042±0.008）（P<0.05）;与C 7.5d组比较,吉非贝齐组Kv1.3 mRNA/蛋白水平下降至（1.137±0.067）/（0.143±0.023）（P<0.01）,而Kir2.1 mRNA/蛋白水平却升高至（1.35±0.087）/（0.202±0.033）（P<0.01）;吉非贝齐显著消弱C 5d和C 7.5d组巨噬细胞表面的荧光强度,使其膜电位从（1.000±0.026）分别下降至（0.833±0.046）和（0.481±0.053）（P<0.05）。结论：吉非贝齐差别调节人单核细胞源性巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1通道的表达,并降低巨噬细胞膜电位。     

NG701通过减少CD36 mRNA表达抑制泡沫细胞形成

目的：观察NG701对泡沫细胞形成及CD36 mRNA表达的影响。方法：利用大鼠腹腔提取的巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白共培养得到巨噬细胞源性泡沫细胞，加入不同浓度的NG701，观察泡沫细胞内胆固醇含量的变化，并利用RT-PCR法对CD36 mRNA表达情况进行检测。结果：NG701能够显著减少泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯的含量，降低CE/TC的值。并剂量依赖性的降低CD36 mRNA表达。结论：NG701能通过减少CD36表达抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成。     

小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

目的:研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用. 方法:用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间. 清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞,然后给予75 mg/L ox-LDL处理24 h. Western blot法检测清道夫受体AI和小凹蛋白的表达. 高效液相色谱法检测细胞内胆固醇的含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况. 结果:经75 mg/L ox-LDL处理巨噬细胞不同时间,ox-LDL呈时间依赖性促进清道夫受体AI的表达,而呈时间依赖性抑制小凹蛋白的表达. 用清道夫受体AI反义寡核苷酸抑制清道夫受体AI的表达,小凹蛋白的表达明显增加. 该组细胞内胆固醇含量为(119±7) mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P＜0.01),细胞内脂滴亦明显减少. P38MAPK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达,而增加小凹蛋白的表达. SB202190处理组细胞内胆固醇含量为(173±14) mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P＜0.01),细胞内脂滴亦明显减少. 结论:小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的 探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对THP-1源性巨噬细胞转化的影响.方法 体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组(n=6):对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、ox-LDL组(100μg/mLox-LDL)和高糖/ox-LDL(G-ox-LDL)组(30 mmol/L葡萄糖+100 μg/mL ox-LDL).应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质.结果 ox-LDL组和G-ox-LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50%.对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50%.结论 ox-LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞.提示ox-LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件.