小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

目的:研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用. 方法:用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间. 清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞,然后给予75 mg/L ox-LDL处理24 h. Western blot法检测清道夫受体AI和小凹蛋白的表达. 高效液相色谱法检测细胞内胆固醇的含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况. 结果:经75 mg/L ox-LDL处理巨噬细胞不同时间,ox-LDL呈时间依赖性促进清道夫受体AI的表达,而呈时间依赖性抑制小凹蛋白的表达. 用清道夫受体AI反义寡核苷酸抑制清道夫受体AI的表达,小凹蛋白的表达明显增加. 该组细胞内胆固醇含量为(119±7) mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P＜0.01),细胞内脂滴亦明显减少. P38MAPK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达,而增加小凹蛋白的表达. SB202190处理组细胞内胆固醇含量为(173±14) mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P＜0.01),细胞内脂滴亦明显减少. 结论:小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.     

丹参提取物对脑外伤模型大鼠脑神经元SIRT1-FoxO1-自噬通路的影响

目的研究丹参提取物(SME)对脑外伤大鼠神经元沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)-叉头框蛋白O1(FoxO1)-自噬通路的影响。方法采用改良Feeney法构建大鼠脑外伤模型,将78只SD大鼠按照随机数字表法分成假手术组、模型组、SME低、中、高剂量组和抑制剂组,每组13只。假手术组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水2mL,SME低、中、高剂量组大鼠分别按0.75、1.50、3.00mg/kg给予SME,抑制剂组予SME中剂量组剂量给药同时按照5mg/kg注射SIRT1抑制剂(EX-527)。通过尼氏染色观察大鼠右侧脑组织神经元损伤情况;免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定SIRT1和FoxO1的细胞阳性率、转录(mRNA)水平和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组SIRT1和FoxO1的阳性细胞比例、mRNA和蛋白表达量均显著升高[(12.29±2.42)%比(4.36±1.21)%,(13.15±1.67)%比(3.31±1.50)%,(0.87±0.06)比(0.62±0.05),(0.89±0.03)比(0.69±0.04),(0.72±0.04)比(0.43±0.04),(0.76±0.08)比(0.31±0.09),P<0.05];与模型组比较,抑制剂组SIRT1阳性细胞比例、mRNA和蛋白表达量均显著降低[(6.88±2.12)%比(12.29±2.42)%,(0.71±0.09)比(0.87±0.06),(0.54±0.08)比(0.72±0.04),P<0.05],SME低、中剂量两组SIRT1蛋白水平升高[(0.98±0.05)、(1.12±0.08)比(0.72±0.04),P<0.05]及SME高剂量组SIRT1、FoxO1阳性细胞比例和mRNA和蛋白表达量均显著升高[(19.04±1.81)%比(12.29±2.42)%,(18.09±1.34)%比(13.15±1.67)%,(1.21±0.10)比(0.87±0.06),(1.19±0.03)比(0.89±0.03),(1.15±0.13)比(0.72±0.04),(0.95±0.09)比(0.76±0.08),P<0.05];与抑制剂组比较,SME中、高剂量两组FoxO1阳性细胞比例升高[(14.63±2.22)%、(18.09±1.34)%比(9.85±1.31)%,P<0.05],SME低、中、高剂量三组SIRT1阳性细胞比例、SIRT1、FoxO1的mRNA和SIRT1蛋白水平都显著升高[(12.52±2.01)%、(14.82±2.11)%、(19.04±1.81)%比(6.88±2.12)%,(0.86±0.08)、(0.92±0.05)、(1.21±0.10)比(0.71±0.09),(0.89±0.06)、(0.98±0.07)、(1.19±0.03)比(0.82±0.05),(0.98±0.05)、(1.12±0.08)、(1.15±0.13)比(0.54±0.08),P<0.05];与SME低剂量组比较,SME中剂量组FoxO1 mRNA和SIRT1蛋白表达量[(0.98±0.07)比(0.89±0.06),(1.12±0.08)比(0.98±0.05),P<0.05]及SME高剂量组SIRT1阳性细胞比例、SIRT1和FoxO1的mRNA和蛋白表达量均显著升高[(19.04±1.81)%比(12.52±2.01)%,(1.21±0.10)比(0.86±0.08),(1.19±0.03)比(0.89±0.06),(1.15±0.13)比(0.98±0.05),(0.95±0.09)比(0.79±0.07),P<0.05];与SME中剂量组比较,SME高剂量组SIRT1和FoxO1 mRNA表达显著升高[(1.21±0.10)比(0.92±0.05),(1.19±0.03)比(0.98±0.07),P<0.05]。结论SME能够明显促进脑外伤模型大鼠脑神经元SIRT1表达,增强SIRT1的去乙酰化活性,正向调节SIRT1-FoxO1-自噬通路发挥神经保护作用。     

载脂蛋白A-I对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞黏附分子-1和三磷酸腺苷结合盒转运子1表达的影响

目的 探讨载脂蛋白A-I(apoA-I)对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)表达的影响.方法 以佛波酯(PMA)及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1),使其分化为负脂的泡沫细胞,然后用apoA-I(10 mg/L)或ABCA1抗体(10 mg/L)孵育泡沫细胞24 h.采用免疫荧光法检测巨噬细胞及经apoA-I及ABCA1抗体干预前后泡沫细胞MCP-1、VCAM-1及ABCA1的表达,并行半定量分析.结果 ①经ox-LDL50 mg/L干预后,与巨噬细胞相比,泡沫细胞内MCP-1、VCAM-1及ABCA1表达均明显增强.②与未干预组相比,经apoA-I 10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1及VCAM-1表达显著减少(P值均<0.05),而ABCA1表达明显增加(P值均<0.05);经ABCAl抗体10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1的表达显著增加(P值均<0.05),VCAM-1表达有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 apoA-I可能通过增加泡沫细胞ABCA1和降低MCP-1及VCAM-1蛋白的表达发挥其抗动脉粥样硬化和抗炎作用,ABCA1通道可能在降低泡沫细胞内MCP-1表达方面发挥一定作用.     

阻断Kv1.3和Kir2.1抑制人巨噬细胞源性泡沫细胞分化

目的:研究泡沫细胞分化过程中离子通道Kv1.3和Kir2.1的表达及作用。方法:用30mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育巨噬细胞60h建立泡沫细胞模型。采用免疫细胞化学、RT-PCR和Western印迹检测人单核细胞源性巨噬细胞和泡沫细胞上Kv1.3和Kir2.1的表达。观察Kv1.3和Kir2.1特异性阻断剂rMargatoxin和BaCl2对巨噬细胞胆固醇代谢的影响。结果:ox-LDL(30mg/L)孵育巨噬细胞60h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,CE/TC从(14.4±6.8)%提高到(57.9±3.5)%(P<0.05);但Kv1.3和Kir2.1的表达水平在巨噬细胞组和泡沫细胞组无明显区别(P>0.05)。Kv1.3和Kir2.1分别被rMargatoxin(0.1,10nmol/L)和BaCl2(75,125μmol/L)阻断后,细胞内TC和CE水平显著降低,CE/TC低于50%(P<0.05)。结论:Kv1.3和Kir2.1对泡沫细胞的分化均起关键作用,特异性阻断后能够抑制人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化。     

白藜芦醇对抗氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞损伤及其机制

目的探讨白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度(10μmol/L、50μmol/L)白藜芦醇保护组,通过检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)水平、丙二醛(MDA)含量评价内皮细胞损伤程度。RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)RNA和蛋白表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞活力、SOD水平降低[(0.33±0.01)比(0.45±0.010),(12.8±0.31)U/m L比(15.5±0.150U/m L,P0.05],MDA含量增加[(2.10±0.51)nmol/mgprot比(1.05±0.06)nmol/mgprot,P0.05],MCP-1、ICAM-1 RNA表达明显升高(1.56±0.06比0.67±0.09,3.62±0.32比1.35±0.21,P0.05);与ox-LDL组相比,白藜芦醇(10、50μmol/L)保护组细胞活力升高(0.38±0.02、0.39±0.02比0.33±0.01,P0.05)、SOD水平升高[(14.4±0.61)U/m L、(14.8±0.57)U/m L比(12.8±0.31)U/m L,P0.05],MDA含量减少[(1.41±0.15)nmol/mgprot、(1.37±0.05)nmol/mgprot比(2.10±0.51)nmol/mgprot,P0.05],MCP-1、ICAM-1 RNA和蛋白表达明显降低(1.03±0.05、0.92±0.08比1.56±0.06,1.88±0.25、1.67±0.16比3.62±0.32,P0.05)。结论白藜芦醇对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

短期强化胰岛素治疗对初诊2型糖尿病患者下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的观察短期强化胰岛素治疗对初诊2型糖尿病(T2DM)患者血糖、血脂及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能的影响。方法对廊坊市中医院2012年1~12月收治的40例空腹血糖≥11.1 mmol/L的初发T2DM患者进行短期胰岛素泵强化治疗2周,比较其治疗前后血糖、血脂变化和高敏C反应蛋白水平,胰岛素分泌指数和胰岛素抵抗指数,治疗前后8:00、16:00、24:00患者的血浆皮质醇、促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果 1治疗后,高敏C反应蛋白、空腹血糖、餐后2 h血糖、胰岛素抵抗指数、糖化血红蛋白较治疗前下降[(1.24±0.05)mg/L比(2.74±0.35)mg/L,(6.5±1.5)mmol/L比(12.3±1.6)mmol/L,(8.1±1.9)mmol/L比(15.6±3.4)mmol/L,(1.95±0.08)比(3.65±0.05),(7.3±1.6)%比(9.3±2.2)%,P<0.05];胰岛素分泌指数较治疗前显著增高[(41±6)比(17±3),P<0.05]。2治疗后,总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇均较治疗前下降[(4.5±1.0)mmol/L比(5.7±0.9)mmol/L,(1.5±0.7)mmol/L比(2.5±1.8)mmol/L,(2.0±1.0)mmol/L比(3.6±0.9)mmol/L,P<0.05];高密度脂蛋白胆固醇较治疗前明显增高[(1.2±0.3)mmol/L比(1.0±0.3)mmol/L,P<0.05]。3治疗后,皮质醇各时点(8:00、16:00、24:00)较治疗前均显著降低[(505±87)nmol/L比(605±34)nmol/L,(174±46)nmol/L比(292±58)nmol/L,(42±6)nmol/L比(95±18)nmol/L,P<0.05];ACTH各时点与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。4全部病例随访12个月,1年后最终转归:18例予以口服降糖药,22例患者仅予生活方式干预。结论初诊T2DM疗效评价除需要监测血糖、血脂水平外,HPA轴功能的监测也可以作为评价T2DM血糖控制的指标,早期的胰岛素强化干预治疗是T2DM的重要治疗方案,具有普遍临床意义。     

PPAR-γ配体对Jurkat T淋巴瘤细胞NOS活性的影响

目的 探讨在人类Jurkat系T肿瘤细胞内,不同浓度的过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)配体对一氧化氮合酶(NOS)活性的影响及意叉.方法 Jurkat系T淋巴肿瘤细胞随机分为对照组和1,5,10,15,20 μmol/L罗格列酮实验组,对照组不加药物,每组设5个重复,培养12 h后用一氧化氮合酶测定试剂盒检测细胞裂解液中NOS活性,RT-PCR法检测T肿瘤细胞PPAR-γmRNA表达情况.结果 PPAR-γmRNA逆转录产物的含量随着用药浓度的增大而依次升高,各实验组用药12 h后的NOS活性均显著高于对照组NOS的活性[(0.415±0.075)U/mL vs(O.552±0.056)U/mL,(0.402±0.08)U/mL vs(0.643±0.036)U/mL,(0.429±0.046)U/mL vs(0.716±0.026)U/mL,(0.443±0.026)U/mL vs(0.749±0.038)U/mL,(0.431±0.04)U/mL vs(0.861±0.013)U/mL,P<0.05],且PPAR-γmRNA逆转录产物的含量与NOS活性呈正相关(r=0.918,P<0.05).结论 在Jurkat系T肿瘤细胞内,PPAR-γ活化剂能够以浓度依赖的形式增加NOS活性,PPAR-γ可能通过NOS途径来发挥相应的抗瘤作用.     

血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导THP-1单核细胞表达单核细胞趋化蛋白-1 mRNA

目的:探讨血红素氧化酶(HO)-1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1单核细胞上单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 m RNA表达的影响。方法:不同浓度(0、25、50、100、200 mg/L)ox-LDL,作用不同时间(0、12、18、24、48 h),刺激THP-1单核细胞;实时荧光定量(RT)-PCR检测MCP-1 m RNA表达。用锌原卟啉和钴原卟啉(Co PP)IX(均为10μmol/L)干预THP-1单核细胞12 h后,再用ox-LDL(100 mg/L)刺激24 h;RT-PCR分别检测MCP-1和HO-1 m RNA表达。结果:ox-LDL呈浓度-时间依赖性上调MCP-1 m RNA表达(P<0.01)。与对照组比,Co PP IX组HO-1 m RNA表达明显升高(P<0.01);与100mg/L ox-LDL组比,Co PP IX组MCP-1 m RNA表达明显下降(P<0.01)。结论:ox-LDL可上调THP-1单核细胞MCP-1的表达;诱导HO-1高表达可抑制ox-LDL诱导的THP-1源单核细胞MCP-1 m RNA表达。     

黄芪多糖对 RAW264.7泡沫细胞胆固醇含量及 ABCAl 表达的影响

目的：：以 RAW264.7泡沫细胞为研究对象,探讨黄芪多糖对胆固醇酯含量和 ABCAl 表达的影响。方法：将 RAW264.7巨噬细胞诱导分化成泡沫细胞,用不同浓度黄芪多糖对其干预24 h,酶法测定胆固醇酯含量,RT-PCR 法检测泡沫细胞内 ABCA1的 mRNA 表达。结果：对照组、10、20、50、100 mg/L 的黄芪多糖(APS)作用于泡沫细胞24 h 后,巨噬细胞内胆固醇酯含量分别为(45.15±3.57、37.67±2.26、34.59±3.51、28.57±10.34、15.92±3.86)nmol/mg。除10 mg/L 组外,其余各 APS 组与对照组比较,差异具有统计学意义(P <0.01)。采用 RT-PCR 方法检测 ABCA1的 mRNA 表达,ABCA1与β-actin OD 比值之比分别为0.41±0.03、0.59±0.03、0.64±0.08、0.77±0.11、0.95±0.07。根据其比值大小可判断各组 ABCA1的相对表达水平。各 APS 组与对照组比较,差异具有统计学意义(P <0.01)。结论：黄芪多糖可能通过上调 ABCAI 的基因表达而降低泡沫细胞内胆固醇脂含量。     

氧化型低密度脂蛋白对骨髓源性平滑肌样细胞小凹蛋白1表达的抑制作用及其与清道夫受体A的关系

目的 建立骨髓间质干细胞(BMSC)分化的平滑肌细胞模型,探讨平滑肌源性泡沫细胞小凹蛋白1表达及其与清道夫受体A的关系.方法 采用贴壁法从SD大鼠骨髓中分离BMSC,并诱导BMSC分化,80mg/L ox-LDL处理BMSC分化的平滑肌细胞72 h.蛋白免疫印记法检测细胞清道夫受体SR-A、胆固醇逆转运蛋白ABCA1和小凹蛋白Caveolin-1的表达变化.结果 BMSC-SMC能大量蓄积胆固醇酯,形成泡沫细胞.经80 mg/L ox-LDL处理72 h后.BMSC-SMC中SR-A表达明显增加,ABCA1和caveolin-1显著减少.结论 在ox-LDL作用下,骨髓细胞干细胞分化的平滑肌细胞能大量蓄积胆固醇酯,形成泡沫细胞,这一机制可能与细胞清道夫受体SR-A表达上调以及胆固醇逆转运蛋白ABCA1和小凹蛋白Caveolin-1表达下调相关.     

脂肪肝患者血清C3、C5、ASP、BF的表达及其与脂质代谢紊乱的相关性研究

目的 探讨脂肪肝(FLD)患者血清补体3(C3)、补体5(C5)、酰化刺激蛋白(ASP)、体脂肪重(BF)的表达及其与脂质代谢紊乱的相关性.方法 选择2011年1月至2013年1月期间70例FLD患者作为FLD组,选择同期60例单纯高脂血症患者为单纯高脂血症组,选择同期60例健康者为正常组.检测各组受检者的C3、C5、ASP和BF水平.结果 FLD组患者的C3、C5、ASP、BF指标数值均大于单纯高脂血症组和正常组,差异均有统计学意义[(2.03±0.22)g/L vs(1.78±0.20)g/L vs(1.11±0.18)g/L,(90.28±5.92)mg/L vs(70.26±5.21)mg/L vs(58.52±4.26)mg/L,(50.26±3.27)nmol/L vs(40.29±3.02)nmol/L vs(30.79±2.27)nmol/L,(0.48±0.08)g/L vs(0.32±0.06)g/L vs(0.22±0.04)g/L,P<0.05];单纯高脂血症组C3、C5、ASP、BF指标数值均大于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);随着FLD严重程度的增加,C3、C5、ASP、BF指标数值呈增加趋势;FLD转氨酶升高组患者C3、C5、ASP、BF指标数值高于FLD转氨酶正常组,差异均有统计学意义[(2.26±0.62)g/L vs(1.85±0.38)g/L,(95.38±5.62)mg/L vs(84.32±5.26)mg/L,(57.18±6.69)nmol/L vs(44.02±6.62)nmol/L,(0.60±0.09)g/L vs(0.45±0.07)g/L,P<0.05];FLD患者C3、C5、ASP、BF等指标之间均呈正相关(P<0.05).结论 C3、C5、ASP、BF等指标与FLD及单纯高脂血症的发病密切相关,且与脂质代谢紊乱发病有关,C3、C5、ASP、BF等指标是FLD发病及进展的重要影响因素,检测C3、C5、ASP、BF等指标对预测FLD及脂质代谢紊乱的发病及进展具有一定的临床价值.     

SIRT1激动剂通过降低ACAT1表达抑制平滑肌泡沫细胞形成

目的 探讨沉默信息调节因子1 (silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相关的分子机制.方法 用组织贴块法体外培养原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC诱导泡沫细胞形成.检测SIRT1在ox-LDL刺激不同时间(24、48、72 h)的表达变化.SIRT1的活性调控分别应用SIRT1激动剂(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制剂(nicotinamide,Nic,100 μmoL/L)进行干预.干预24 h后采用Western blot检测VSMC过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(A-cholesterol acyhransferase 1,ACAT1)的蛋白表达,干预48 h后采用油红O染色检测细胞内脂质沉积和泡沫细胞形成情况.应用PPARγ激动剂(Rosiglitazone,RSG,50 μmol/L)和抑制剂(GW9662,10 μmol/L)调控PPARγ的表达,Western blot检测VSMC中ACAT1的表达.结果 ①ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中,SIRT1蛋白表达在48 h降低约47％ (P ＜0.01);油红O染色显示,SRT可以抑制VSMC泡沫细胞形成,而Nic可逆转SRT的抑制作用;②ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中ACAT1的表达显著增加[(2.77±0.70),P＜0.01],SIRT1激动剂SRT可显著抑制ACAT1的表达[(0.90±0.27),P＜0.01],而SIRT1抑制剂Nic可阻断这一作用,升高ACAT1的表达[(2.25±0.37),P＜0.05];③ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中PPARγ的表达减少[(0.73±0.12),P＜0.05],SIRT1激动剂SRT可上调VSMC中PPARγ的表达[(0.98±0.16),P＜0.05],SIRT1抑制剂Nic抑制PPARγ的表达[(0.47 ±0.13),P＜0.01];④PPARγγ激动剂RSG可抑制ACAT1的表达[(0.73±0.09),P＜0.01],而PPARγ抑制剂GW9662则上调ACAT1表达[(1.68±0.09),P＜0.01].结论 SIRT1通过上调VSMC中PPARγ表达而抑制ACAT1表达,从而抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫样变.     

白藜芦醇通过诱导自噬改善高脂饮食的小鼠非酒精性脂肪肝

目的探讨自噬在白藜芦醇(Res)改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠中的作用。方法采用高脂饮食8周建立小鼠NAFLD模型。造模成功后,模型组予高脂饲料+生理盐水10m L/kg灌胃,观察组予高脂饲料+Res100mg/kg灌胃,1天1次,连续2周。正常对照组始终予基础饲料。检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、空腹血糖(FBG)水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。Western blot检测自噬相关蛋白p62及通路蛋白磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸激酶(AKt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组、观察组血清TG、TC、ALT、AST水平及HOMA-IR均显著升高(P0.05);与模型组比较,观察组上述指标均显著降低[(1.86±0.18)mmol/L比(4.55±0.28)mmol/L,(5.36±0.31)mmol/L比(8.79±0.35)mmol/L,(55.62±4.35)U/L比(154.18±8.33)U/L,(86.54±5.26)U/L比(297.47±8.96)U/L,(1.64±0.22)比(2.26±0.23),P0.05]。与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织中p62、PI3K、磷酸化(p)-Akt、p-m TOR水平均显著升高;与模型组比较,观察组上述指标均显著降低[(1.04±0.07)比(1.45±0.08),(0.96±0.07)比(1.52±0.06),(0.94±0.08)比(1.64±0.08),(0.59±0.02)比(1.12±0.04),P0.05]。结论 Res可能通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而促进自噬,最终发挥改善NAFLD小鼠脂代谢、IR和肝功能的作用。     

VEGF及CD147在单核细胞来源的泡沫细胞中表达动力学的研究

目的:研究CD147,VEGF在单核细胞来源的泡沫细胞中的表达动力学的,探讨CD147,VEGF与动脉粥样硬化的关系.方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导,建立人单核细胞系(U937细胞)分化的泡沫细胞模型,通过油红O特殊染色的形态学鉴定.将U937细胞在不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL,0,25,50,100,200 mg/L)条件下培养48 h;在100 mg/L ox-LDL条件下,在培养的不同时间点(0,6,12,24,48 h)分别收集泡沫细胞和培养上清,采用流式细胞术检测细胞膜表面CD147,ELISA检测培养上清中VEGF的表达和RT-PCR检测mRNA表达水平.结果:CD147及VEGF表达出现最高峰时的ox-LDL浓度分别为25 mg/L和50mg/L;与100mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用6,48 h后,CD147,VEGF表达分别出现最高峰;VEGF mRNA水平出现最高峰时,ox-LDL作用浓度及时间分别为200 mg/L,48 h.CD147mRNA水平出现最高峰时ox-LDL作用浓度及时间分别为25 mg/L,6 h,此后,mRNA水平不变.结论:VEGF及CD147在单核细胞来源的泡沫细胞表达均升高;CD147表达上调早于VEGF,低浓度ox-LDL促进CD147表达,高浓度促进VEGF的表达;U937泡沫细胞中VEGF的mRNA水平与ox-LDL的作用浓度及时间成正相关,泡沫细胞中CD147的mRNA与ox-LDL的作用浓度及时间无关.     

高密度脂蛋白和低密度脂蛋白对HepG2细胞SR-BI表达的影响

目的观察高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对HepG2细胞B类I型清道夫受体(SR-BI)表达及胆固醇含量的影响。方法用HDL、LDL及ox-LDL处理HepG2细胞,采用RT-PCR、Western印迹检测细胞SR-BI的表达;采用油红O染色及高效液相色谱法(HPLC)观察细胞内脂质的含量。结果HDL、LDL及ox-LDL处理HepG2细胞后,与对照组比较,各脂蛋白处理组细胞SR-BI mRNA及蛋白表达上调,油红O染色发现HDL、LDL及ox-LDL处理组细胞内脂滴含量明显增加;HPLC检测提示,与对照组细胞内总胆固醇含量(43.18±7.80 mg/g蛋白)比较,ox-LDL处理组(113.01±15.90 mg/g蛋白)、LDL处理组(171.13±20.01 mg/g蛋白)及HDL处理组(220.39±28.00 mg/g蛋白)细胞内总胆固醇含量增加,其中HDL处理组变化最明显。结论HDL、LDL及ox-LDL三种脂蛋白可上调HepG2细胞SR-BI的表达,增加细胞内胆固醇的蓄积。     

不同剂量的阿托伐他汀对ACS患者ox-LDL的影响

目的探讨不同剂量的阿托伐他汀对急性冠脉综合症(ACS)患者血浆氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法以120例经临床症状和/或冠脉造影确定为ACS的患者为研究对象,根据阿托伐他汀剂量的不同随机分为阿托伐他汀常规剂量组(20 mg/d,60例)和阿托伐他汀大剂量组(40 mg/d,60例),分别于入院24 h内及服药后1周、2周测定两组患者的ox-LDL及hs-CRP水平,并进行比较。结果治疗前、治疗后1周、治疗后2周两组的ox-LDL水平分别为[常规剂量组:(0.62±0.12)mg/L,(0.47±0.14)mg/L,(0.33±0.13)mg/L;大剂量组:(0.63±0.15)mg/L,(0.41±0.11)mg/L,(0.21±0.15)mg/L];两组的hs-CRP水平为[常规组:(17.62±1.90)mg/L,(8.81±2.6)mg/L,(6.22±0.87)mg/L;大剂量组:(17.81±2.42)mg/L,(7.24±3.82)mg/L,(3.88±0.81)mg/L]。治疗前两组的ox-LDL及hs-CRP差异无统计学意义(P>0.05),治疗后1周、2周二者的水平较治疗前均明显下降(P<0.01),但是大剂量组下降水平较常规治疗组更显著(P<0.05)。结论大剂量的阿托伐他汀能更有效降低ACS患者的ox-LDL及hs-CRP的水平。     

可溶性环氧化合物水解酶抑制剂对脂肪细胞脂质代谢及分泌功能的影响

目的 观察可溶性环氧化合物水解酶抑制剂(tAUCB)对脂肪细胞摄取与降解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及分泌功能的影响.方法 分别用1、10、50和100μmol/L tAUCB干预已刺激分化成熟的脂肪细胞24 h,0 μmol/L tAUCB干预作为空白对照组,分别在加人tAUCB前1 h加入过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂(GW9662)5μmol/L.采用125Ⅰ放射配基法测定脂肪细胞对ox-LDL的摄取与降解;实时定量-PCR和Western印迹分别测定脂肪细胞PPARγ和CD36mRNA及蛋白的表达;ELISA检测脂肪细胞培养液中脂联素(ADP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 tAUCB呈剂量依赖性地促进ox-LDL的摄取与降解,tAUCB(10、50、100 μmol/L)干预,其摄取ox-LDL分别为(35.6±1.1)ng/mg、(39.8±1.6)ng/mg、(42.6±1.4)ng/mg;降解量为(2879±54)ng/mg、(3082±56)ng/mg、(3226±68)ng/mg,显著高于空白对照组[(28.9±1.2)ng/mg、(2791±54),ng/mg均P＜0.05];加入GW9662后,其ox-LDL摄取量分别下降为(30.6±1.3)ng/mg、(31.1±1.7)ng/mg、(32.1±1.8)ng/mg.降解量下降为(2788±53)ng/mg,(2824±70)ng/mg,(2874±70)ng/mg,与单独加入相应浓度tAUCB组相比差异有统计学意义(P＜0.05).tAUCB呈剂量依赖性地增加脂肪细胞CD36和PPARγmRNA及蛋白的表达,并且降低脂肪细胞分泌TNF-α,增加抗炎因子ADP的浓度,而GW9662明显抑制tAUCB的上述作用.结论 tAUCB可通过上调PPARγ促进脂肪细胞CD36的表达,从而增加细胞对ox-LDL的摄取与降解,同时可能通过上调PPARγ的表达而调节ADP,TNF-α等脂肪炎症因子的分泌.

Abstract：

Objective To observe the effects of soluble epoxide hydrolase inhibitors-tAUCB on the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes. Methods 3T3-L1 preadipocytes were induced into differentiation and maturation. After a 24-hour starvation, the cells were stimulated with 1O0 ng/ml LPS and then tAUCB at various concentrations(0-100 μmol/L)were added for 24 h, or preincubated with the PPARγ (peroxisome proliferators activated receptor gamma) antagonist GW9662 (5 μmol/L). And the 0 μ mol/LtAUCB-treated group was taken as the blank control group. Then the uptake and degradation of ox-LDL in cells were measured by radioligand assay. The mRNA expressions of PPARγ and CD36 were detected by real-time PCR ( polymerase chain reaction). And the intracellular levels of protein expression of PPARγand CD36 were detected by Western blot. While ADP and TNF-α in supernatant were detected by ELISA. Results tAUCB could dose-dependently increase the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes. When stimulated with 10, 50, 1O0 μmol/L tAUCB, the uptake levels of ox-LDL were (35. 6 ±1.1 ) ng/mg, (39. 8 ± 1.6) ng/mg, (42. 6 ± 1.4) ng/mg cell protein and the degradation levels of ox-LDL (2879 ±54)ng/mg, (3082 ± 56)ng/mg, (3226 ± 68 )ng/mg cell protein. And they were significantly higher than those of the control group ( 28.9 ± 1.2) ng/mg、 (2791 ± 54) ng/mg respectively ( all P ＜ 0.05 ).However, after preincubation of GW9662, the uptake of ox-LDL were decreased to (30.6 ± 1.3) ng/mg,(31. 1 ± 1.7)ng/mg, (32. 1 ± 1.8 ) ng/mg cell protein whereas the degradation of ox-LDL decreased to (2788 ± 53 ) ng/mg, ( 2824 ± 70 ) ng/mg, ( 2874 ± 70) ng/mg cell protein. And the difference was statistically significant when it was compared with the corresponding tAUCB-treated group. With the rising concentration of tAUCB, tAUCB could dose-dependently increase the mRNA and protein expression of CD36 and PPARγ. tAUCB could dose-dependently decrease the levels of TNF-α and increase the levels of ADP in adipocytes. GW9662 could significantly inhibit those effects of tAUCB and reduce the uptake and degradation of ox-LDL and the expression of PPARγand CD36 in adipocytes. Conclusion tAUCB can upregulate the PPARγ expression in adipocytes and promote the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes via PPARγ-CD36 pathway. Meanwhile, the levels of ADP and TNF-α may be mediated through the activation of PPARγ.     

手足口病信号转导和激活转录因子3表达研究

目的探讨手足口病(HFMD)发病机制,阐明细胞因子白介素6及其信号转导和激活转录因子3的表达。方法抽取59例手足口病患儿和30例正常小儿外周血,离心提取上清液和制备外周血单核细胞,用酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western blot方法分别检测血清中的细胞因子和外周血单核细胞中信号转导和激活转录因子3蛋白(STAT3)的表达。结果手足口病患儿外周血细胞因子(IL-6、IL-10、IL-17)较正常儿童升高,分别是[(40.0±6.2),(54.0±8.5),(33.0±4.4) pg/L)和(17.0±5.5),(23.0±3.4),(19.0±4.2)pg/L],两者比较,差异有统计学意义(P 0.05);而外周血单核细胞中信号转导和激活转录因子3蛋白分别是(126.60±2.67)和(125.90±3.70),两者比较差异无统计学意义(P0.05);磷酸化的信号转导和激活转录因子3蛋白较正常儿童升高,分别是(72.31±2.46)和(0.00±0.00),两者比较,差异有统计学意义(P 0.05)。结论手足口病患儿存在炎症细胞因子及其信号转导通路的激活,进一步阐明了其发病机制。     

NF-κB对冠心病患者外周血单核细胞LOX-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）对冠心病患者外周血单核细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）mRNA表达的影响。方法分离收集冠心病患者外周血单核细胞,分为3组:对照组在不含血清的RPMI-1640中孵育24h;ox-LDL组在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL（40μg/ml）孵育24h;PDTC（NF-κB抑制剂）组:先加PDTC(10^-5mol/L)培育1h之后加ox-LDL（40μg/ml）继续孵育24h,之后收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的基因LOX-l,并采用ELISA法测定上清液中sLOX-1蛋白浓度。结果与对照组比较,ox-LDL组单核细胞LOX-1 mRNA表达增加（0.304±0.047vs0.813±0.131,P<0.05）,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量（ng/ml）增加（7.277±1.979 vs 16.517±2.064,P<0.05）;PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达及细胞上清液中sLOX-1蛋白含量均增高（分别为0.502±0.140和11.997±1.757,P<0.05）。与ox-LDL组相比,PDTC组单核细胞LOX-1 mRNA表达减少,细胞上清液中sLOX-1蛋白含量显著减少（P<0.05）。结论 ox-LDL可诱导人单核细胞LOX-1表达增加,NF-κB也参与了ox-LDL对LOX-1表达并有促进作用。