输血对受者血液基因型的影响

目的探讨输血后不同时间、不同输血量供者STRs基因型对受者STRs基因型的影响。方法采集3例患者输血前以及输血后4h、8h、12h的血液和供者血液，EDTA抗凝，用Chelex-100法提取DNA，选D1S549、D18S865、D3S1754、D12S391、D12S375、D6S477等6个STRs基因座进行PCR扩增，扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳，银染显色分型。结果6个STRs基因座的检测结果显示受者输血前及输血后12h内STRs基因型一致。结论输血量不大于1200ml的受者输血后12h内STRs基因型未受供者血液STRs基因型的影响。     

１０例孕妇血浆中胎儿游离ＤＮＡ-ＳＴＲ位点检测分析

目的:探索短串连重复序列(STR)多位点检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性.方法:改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取10例孕中期孕妇血浆中总游离DNA,进行D3S1358、D13S317、CSFlPO、D12S391、D6S477、VWA 6个STR位点扩增,并以孕妇与胎儿羊水细胞基因组DNA为对照,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析胎儿游离DNA提取效果及检测效率.结果:10例孕中期孕妇血浆样本共检测位点60个,检出有结果位点44个,除去母体与胎儿DNA基因型完全一致的14个位点,剩余的30个位点中,18个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率30%.检出率最高的位点是D13S317和D12S391.结论:STR多位点的扩增可以检测得出胎儿特异性DNA序列,有望应用于无创伤性产前遗传性疾病的诊断和法医学亲子鉴定中.     

异基因外周血干细胞移植供受者嵌合体形成的动态检测

目的：建立荧光标记的多重扩增短串联重复序列（STR）结合毛细管电泳定量检测异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）供受者嵌合体的方法，并探讨嵌合体形成与免疫耐受及临床预后的关系。方法：采用PE9700扩增仪扩增15个STR位点：D8S1179、D21S11、D7S820、D3S1358、CSFIPO、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VwA、TPOX、D18S51、D5s818、FGA位点和1个性别位点Amelogenin，应用3130XL型DNA测序仪对35例异基因外周血干细胞移植患者上述位点进行基因型分析，并比较供受者移植前后的基因型，确定嵌合体的形成类型，以作为异基因造血干细胞移植中的植活证据，同时用无关个体的DNA混合实验进行可行性和准确性研究。结果：（1）其中32例在15个STR位点中均至少有两个可以区分供受者的有信息位点（有3例无移植前受者标本），35例患者均在移植后1个月时STR位点及性别位点转为供者型，形成了完全供者嵌合体（CC），且HLA单倍体相合的15例患者也达到了100％的供者植入，并在随访过程中持久不变。（2）扩增产物中供受者DNA含量的百分比同扩增前混合样本的比例呈显著直线相关（P〈0．01），最小检出DNA百分比为5％。结论：（1）用基因分析仪对STR位点进行基因型检测具有快速、无污染和自动化高、可定量及灵敏度高等优点，用于检测allo—PBSCT植活状态是可靠的。（2）诱导免疫耐受的方法可以成功地诱导CC的形成。     

多重荧光标记STR-PCR技术在骨髓移植后植入状态监测中的应用

目的建立骨髓移植后植入状态监测的多重荧光标记短串联重复序列聚合酶链反应（STR-PCR）检测方法,为骨髓移植病人移植疗效评价及干预治疗提供可靠依据。方法于移植前、移植后7 d～3个月不同时间采集3例供受者静脉及骨髓血样,提取DNA作为模版,用多重荧光标记STR-PCR方法检测其基因型。结果2例供受者HLA-A、B、DRB1等6个等位基因完全相合病人骨髓移植后分别于第35天和3个月转为完全供者型,1例HLA半相合母子移植病人持续未植入,移植后第7、28天STR-PCR分析为受者基因型。结论荧光标记STR-PCR技术是骨髓移植后植入状态监测的有效方法,对移植效果有预测作用。     

血液辐照预防输血相关性移植物抗宿主病的发生

目的探讨目前辐照血液的临床应用情况,比较在免疫功能低下人群输入照射及未照射血制品后输血相关移植物抗宿主病（TA-GVHD）发生率。方法采用回顾性分析方法,对2008年6月～2011年11月我院血液科收治住院的放化疗免疫功能低下患者400例进行临床观察,照射组200例病例中所有血制品均需经应用137csγ射线辐照处理,总剂量2 000 cGy,剂量率为200 cGy/min。另外200例患者使用的血制品未经辐射处理（未照射组）,统计辐照rbcs的主要临床应用,观察高风险两组患者输血后ta-gvhd的发生率。结果未照射组200例免疫功能低下患者中,发现4例患有TA-GVHD,发生率为2.0%;照射组200例免疫功能低下患者中无一例发生TA-GVHD。结论137cs辐照红细胞,既能有效地抑制淋巴细胞活化增殖,其他细胞成分的损伤也较小。在免疫功能低下人群输注含淋巴细胞血制品时应去除和灭活淋巴细胞,照射可减少TA-GVHD的发生率。     

辐照血临床应用的研究

目的：观察输注γ射线辐照血预防输血相关性移植物抗宿主病（TA-GVHD）以及输血后不良反应的发生及输血效果。方法：输血前对血制品用GWGP型钴-60远距离治疗机对准照射区的中心平面进行照射,照射剂量25 Gy。选择90例血液病患者输入辐照血作为辐照血组,同时选择90例常规输血的血液病患者作为对照组。结果：输注辐照成分血后血红蛋白（Hb）、红细胞计数（RBC）、血小板计数（PLT）均明显升高,与输注前比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。辐照血组输注后40 d未发生皮疹、腹泻、肝功损害。随访率为100%。全组病例按计划完成,完成率为100%。结论：γ射线辐照血可有效预防TA-GVHD的发生,可以达到与输注未经照射的等量血液成分同样的疗效。     

广西毛南族群体15个短串联重复序列的遗传学研究

目的:为了解中国广西毛南族15个短串联重复序列(STR) (D2S1338、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、CSF1PO、TPOX、TH01、vWA、FGA)的遗传多态性.方法:随机抽取广西环江县三代以上均为毛南族健康的143例无关个体的静脉血2 ml,用枸橼酸钠抗凝备用,用Chelex100法提取DNA,用AmpFISTR(R) Identifiler TMPCR Amplification kit对样本DNA的15个STR基因座进行荧光标记复合扩增,再ABI Prism(R) 3100型遗传分析仪对扩增产物进行检测,然后用GeneScan Analysis3.7和Genetyper3.7软件对检测结果进行扫描分析,得到每个位点的等位基因,最后用直接计数方法计算15个STR基因座的遗传多态性参数.结果:15个STR位点共检出130个等位基因,390个基因型,其基因频率分布在0.003 5～0.538 5之间;平均杂合度为0.769 7,个体识别力除TPOX位点外均大于0.8,累积个体识别力大于0.999 999 999 9,累积非父排除率大于0.999 999 18.结论:广西毛南族15个STR位点除TPOX位点外均具有高度遗传多态性,是群体遗传学研究和法医学鉴定的可选位点.     

造血干细胞移植期间辐照成分血输注的疗效观察

目的：观察输注γ射线辐照成分血预防输血相关移植物抗宿主病(TA-GVHD)及输血效果。方法：观察HSCT术后60例患者输注经γ射线辐照的红细胞悬液共236U(2U／次)、新鲜机采法浓缩血小板共120个治疗量(10U／治疗量)，比较输血前后的外周血血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)和血小板计数(PLT)，观察输注后1个月患者有无皮肤、骨髓、肝肠等系统器官受损表现。结果：辐照成分血输注后24h，患者外周血Hb、RBC、PLT均明显升高，有显著性差异，所有患者均未出现TA-GVHD相关的脏器受损表现。结论：γ射线辐照成分血可以有效预防TA-GVHD，并达到升高血红蛋白含量，增加机体携氧能力；提高血小板计数．有效预防出血的目的。     

CTLA-4基因CT60位点基因多态性与小儿急性淋巴细胞白血病相关性

目的探讨CTLA-4基因CT60位点多态性与小儿B系急性淋巴细胞白血病(ALL)的关系。方法选取86例B系ALL病儿和112例正常对照者,分别留取外周血标本,提取基因组DNA,聚合酶链式反应及产物直接测序方法检测CT60位点基因型,比较两组以及病例组不同性别、不同临床危险度病儿基因型频率及等位基因频率的差异。结果病例组CT60位点AA和AG基因型频率显著低于对照组(χ2=6.365,P<0.05),A等位基因频率亦明显低于对照组(χ2=6.761,P<0.05);CT60位点基因型及等位基因频率分布与B系ALL病儿性别及临床危险度无关(P>0.05)。结论 CTLA-4基因CT60位点基因多态性与小儿B系ALL易感性存在相关性。     

针对胃癌多基因变异特性鉴定肿瘤易感基因

目的 :针对胃癌发生、发展过程中多基因变异的特性 ,鉴定几类与肿瘤相关的基因在胃癌中的改变 ,进一步探讨其与肿瘤易感性的关系。方法 :选择c met原癌基因、错配修复基因hMLH1、E cadherin基因以及HLA Ⅱ类区的 (DQA1、DR2、DR3、DR4、DR7、DR9) 6个基因位点 ,采用PCR系列技术对 32例肠型胃癌标本和 4个胃癌细胞系进行检测以确定上述基因在肠型胃癌中的变异情况。结果 :在c met基因第 17、18和 19外显子未检测到点突变。对错配修复基因hMLH1的D3S12 98和D3S15 6 1两个位点进行微卫星不稳定性 (microsatelliteinstability ,MSI)和杂和性缺失 (lossofheterozygosity ,LOH)检测 ,其中在D3S12 98位点检测到 6例MSI,2例LOH ,D3S15 6 1位点有2例检测到MSI。在E cadherin基因附近选择两个微卫星位点D16S30 83和D16S30 95进行MSI和LDH检测 ,D16S30 83位点有 4例检测到MSI ,2例有LOH ,D16S30 95位点未检测到MSI和LOH。HLA Ⅱ类基因区 6个基因位点基因型在个体中存在着明显多态性 ,PCR SSCP结果显示DR4基因位点有较高频率的变异 (9/ 2 0 ) ,明显高于其它几个基因位点。结论 :c met原癌基因在胃癌中的变化方式不是以点突变为主 ,hMLH1、E cadherin基因在肠型胃癌中有明显改变 ,HLA Ⅱ类基因区DR4基因的变异可能与