EphB6在小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的初步研究

目的探讨EphB6在小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC)成骨分化中的作用及其可能机制。方法将BMSC通过双相接种法接种于脱钙骨基质,分为4组:成骨诱导5、14 d(A、B组),普通培养5、14 d(C、D组),茜素红染色检测钙结节,定量检测各组碱性磷酸酶活性,Runx2、Osterix和EphB6的mRNA表达,采用游离态配体ephrinB1-Fc激活EphB6并重复检测上述指标。结果 ALP活性、Runx2和Osterix在A、B组增高,且B组检测到最高的ALP活性[(7.32±2.02)金氏单位/100 ml]、Runx2(3.442 6±0.258 5)倍和Osterix(2.482 3±0.329 2)倍。EphB6的表达水平在A、B组降低,且在B组最低(0.754 3±0.023 5)倍。以ephrinB1-Fc激活EphB6后,茜素红染色显示钙结节明显减少,ALP活性显著下降(P<0.05),在高浓度配体作用后ALP活性[(12.20±1.30)金氏单位/100 ml]较低浓度配体[(15.40±1.03)金氏单位/100 ml]有进一步下降(P=0.008)。配体作用后,BMSC成骨分化中Runx2和Osterix的表达显著下降。结论 EphB6通过调控Runx2和Osterix抑制BMSC成骨分化。     

白杨黄素通过调控氧化应激反应保护脂多糖介导的炎症环境中人牙周膜干细胞成骨分化能力

目的探讨白杨黄素对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(P.g LPS)介导的炎症环境中人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化能力的影响。方法原代培养hPDLSCs,采用流式细胞术鉴定后取第4代细胞进行实验。采用四唑盐(MTT)试验检测不同浓度P.g LPS(1、10、100、1000ng/mL)及白杨黄素(0.1、0.4、1.6、6.25、25、50、100μmol/L)对hPDLSCs增殖能力的影响;P.g LPS与成骨诱导剂共培养24、48、72和96h后,活性氧(ROS)试剂盒检测hPDLSCs的ROS含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测hPDLSCs锰超氧化物歧化酶(MnSOD),铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达;P.g LPS与成骨诱导剂共培养3、7、14天后,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测hPDLSCs的ALP活性,RT-PCR法检测Runt相关转录因子2(RUNX2),锌指结构转录因子(OSX),ALP和骨钙素(OCN)mRNA表达;25μmol/L白杨黄素作用hPDLSCs后,通过ROS试剂盒检测hPDLSCs的ROS含量,实时PCR法检测抗氧化因子MnSOD、Cu/ZnSOD、CAT及成骨分化基因RUNX2、OSX、OCN和ALP mRNA表达。结果 MTT结果显示,与对照组比较,1000ng/mL P.g LPS作用hPDLSCs 72、96h,细胞增殖活性受到显著抑制[72h:(0.51±0.03)比(0.75±0.01);96h:(0.62±0.06)比(0.98±0.02),P均0.05];25μmol/L的白杨黄素对hPDLSCs细胞活力无抑制效应[(99.83±1.02)%比(100.00±1.02)%,P0.05];与成骨诱导液组比较,P.g LPS显著增加hPDLSCs的ROS含量[72h:(14.80±0.97)ng/mL比(2.97±2.31)ng/mL;96h:(17.30±1.34)ng/mL比(3.17±1.06)ng/mL,P均0.05],显著降低抗氧化因子MnSOD mRNA[72h:(1.54±0.13)比(1.06±0.38);96h:(0.95±0.05)比(1.18±0.04)]、Cu/ZnSOD mRNA[72h:(1.01±0.15)比(2.69±0.23);96h:(0.89±0.24)比(2.84±0.29),P均0.05]和CAT mRNA[72h:(1.25±0.08)比(2.54±0.15);96h:(1.12±0.09)比(2.64±0.28),P均0.05]表达水平,降低成骨分化基因表达[RUNX2 mRNA:(1.42±0.13)比(1.97±0.16);OSX mRNA:(1.97±0.16)比(2.68±0.19);OCN mRNA:(1.23±0.11)比(2.56±0.17);ALP活性:(0.94±0.11)比(1.25±0.14);P均0.05];与P.g LPS+成骨诱导液组比较,白杨黄素显著改善Pg LPS介导hPDLSCs的氧化状态[ROS:(6.21±1.06)ng/mL比(17.98±1.25)ng/mL;MnSOD mRNA:(1.68±0.14)比(1.47±0.55);Cu/ZnSOD mRNA:(1.97±0.23)比(1.47±0.06);CAT mRNA:(2.42±0.34)比(1.87±0.11)]及增强其成骨分化能力[RUNX2 mRNA:(1.96±0.28)比(1.57±0.23);OSX mRNA:(2.16±0.31)比(1.64±0.17),P均0.05]。结论白杨黄素可能对P.g LPS介导的炎症环境中人牙周膜干细胞的成骨分化能力具有促进作用。     

Effect of EphB6 on osteogenic differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells

目的 探讨EphB6在小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC)成骨分化中的作用及其可能机制.方法 将BMSC通过双相接种法接种于脱钙骨基质,分为4组:成骨诱导5、14 d(A、B组),普通培养5、14 d(C、D组),茜素红染色检测钙结节,定量检测各组碱性磷酸酶活性,Runx2、Osterix和EphB6的mRNA表达,采用游离态配体ephrinB1-Fc激活EphB6并重复检测上述指标.结果 ALP活性、Runx2和Osterix在A、B组增高,且B组检测到最高的ALP活性[(7.32±2.02)金氏单位/100 ml]、Runx2( 3.442 6±0.2585)倍和Osterix(2.4823±0.329 2)倍.EphB6的表达水平在A、B组降低,且在B组最低(0.754 3±0.023 5)倍.以ephrinB1-Fc激活EphB6后,茜素红染色显示钙结节明显减少,ALP活性显著下降(P＜0.05),在高浓度配体作用后ALP活性[(12.20±1.30)金氏单位/100 ml]较低浓度配体[(15.40±1.03)金氏单位/100ml]有进一步下降(P＝0.008).配体作用后,BMSC成骨分化中Runx2和Osterix 的表达显著下降.结论 EphB6通过调控Runx2和Osterix抑制 BMSC成骨分化.     

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7 d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐(PNPP)偶氮法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,21 d后行茜素红染色(ARS)观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测Runx相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高(P 0.05或P 0.01)。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、 OCN、OPN表达有关。     

柚皮苷促进牙周韧带干细胞增殖和分化的研究

目的探讨不同浓度柚皮苷对牙周韧带干细胞增殖和分化的影响。方法分别在含有0.14 mg/mL(低浓度组)和1.4 mg/mL(高浓度组)柚皮苷的细胞培养基上对牙周韧带干细胞进行培养,并与不含柚皮苷的细胞培养基(空白对照组)培养情况进行对比。在培养1 d、4 d、7 d后对牙周韧带干细胞的增殖情况进行测定,在培养7 d、14 d后对牙周韧带干细胞的碱性磷酸酶活性及成骨相关基因[成骨特异性转录因子(Runx2)、骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)]的表达进行测定。结果高浓度(1.4 mg/mL)的柚皮苷对牙周韧带干细胞的增殖具有促进作用(P0.05),对牙周韧带干细胞的成骨向分化也具有一定的促进作用,能够显著提高成骨相关基因(ColⅠ、ALP、OCN、Runx2)的表达。结论柚皮苷在一定的浓度和时间下,能促进牙周韧带干细胞的增殖与成骨向分化。     

过表达NICD通过下调基因JunB的表达抑制BMP9

目的：研究Notch信号通路在骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用及其机制。方法：将细胞分为5组：空白组（Blank,n=3）,BMP9处理组（BMP9,n=3）,空白质粒对照组（BMP9+Control,n=3）,过表达Notch1胞内段质粒（Notch1 intracellular domain,NICD）处理组（BMP9+NICD,n=3）,DAPT处理组（BMP+DAPT,n=3）。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和钙盐染色分别验证过表达NICD对成骨分化早晚期情况的影响。进一步采用定量逆转录PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-RCR）和Western blot检测基因NICD、Hey1及成骨相关基因Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8、OPN、Runx2、OCN、JunB的表达。结果：早期ALP活性及染色结果显示,NICD组较Control组能显著抑制C3H10T1/2细胞成骨分化过程中ALP的形成[5 d：（33 167.66±2 018.45） vs. （146 451.00±14 889.67）,P=0.000;7 d：（58 981.33±4 724.70） vs. （89 588.66±5 928.32）,P=0.000],γ-分泌酶抑制剂（N-[N-（3,5-difluorophen-acetyl）-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT）完全抑制Notch通路时得到相同的结果[5 d：（44 812.66±4 174.94） vs. （146 451.00±14 889.67）,P=0.000;7 d：（64 622.93±4 724.70） vs. （89 588.66±5 928.32）,P=0.000]。茜素红S染色结果显示,NCID抑制钙盐结节的形成,而DAPT阻断Notch通路明显促进钙盐结节形成。qRT-PCR结果表明,NCID组中NICD及靶基因Hey1的表达较Control组明显增加[（3.90±0.02） vs. （0.35±0.01）,P=0.000;（19.79±0.01） vs. （11.80±0.02）,P=0.000],Western blot得到相同结果[（1.32±0.01） vs. （0.19±0.01）,P=0.000],且NICD明显抑制成骨分化相关基因JunB、Runx2、OCN、OPN等的表达[（0.10±0.01） vs. （0.53±0.01）,P=0.000;（0.18±0.01） vs. （0.30±0.02）,P=0.000;（0.36±0.01） vs. （0.62±0.02）,P=0.000;（0.07±0.01） vs. （0.48±0.01）,P=0.000],而转录因子Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8的表达不受影响[（0.74±0.02） vs. （0.73±0.03）,P=0.000;（0.63±0.01） vs. （0.58±0.04）,P=0.000],DAPT阻断Notch通路后上述相关基因的表达明显增加。结论：本实验结果首次证明,NICD激活Notch通路对BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的抑制作用可能是通过抑制JunB基因发挥作用,而非调控BMP9/Smad（bonemorphogenetic protein 9/drosophila mothers against decapentaplegic）信号通路。     

miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究

背景 微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用.目的 探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制.方法 体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(miR-control、miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor),以过表达或敲低细胞miR-129-5p水平.成骨诱导分化培养细胞后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色观察钙结节形成情况,以检测细胞成骨分化水平.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot法检测成骨分化基因Runx2和OCN的mRNA及蛋白表达水平.生物信息学方法预测miR-129-5p靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证.结果 转染慢病毒载体的MC3T3-E1细胞进行成骨诱导分化后,与miR-control组相比,转染miR-129-5p mimic的MC3T3-E1细胞7 d后碱性磷酸酶染色增强,成骨早期标志物Runx2表达增加,14 d后成骨晚期标志物OCN表达升高,21 d后茜素红染色显示钙化结节较大且量多(P<0.05).而转染miR-129-5p inhibitor慢病毒的MC3T3-E1细胞与miR-control组相比,碱性磷酸酶活性低,钙结节较小且少,成骨标志物Runx2和OCN表达下降(P<0.05).通过Targetscan网站(生物信息分析)预测miR-129-5p的靶基因为BMP通路负向调控蛋白Smad6;双荧光素酶报告实验验证Smad6为靶基因,过表达miR-129-5p后Smad6蛋白表达水平下调.结论 miR-129-5p通过靶向抑制Smad6的表达对MC3T3-E1细胞成骨分化产生促进作用.     

高糖环境下FGF-21对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 研究高糖环境下成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）骨向分化的作用及其机制。方法 取健康成人骨髓,分离培养hBMSCs,成骨、成脂诱导分化后,茜素红、油红O染色鉴定,流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD105、CD90、 CD73和CD44水平。将hBMSCs分为对照组〔以葡萄糖（Glu）浓度5.5 mmol/L模拟正常生理状态糖浓度〕,Glu A、B、C高糖浓度梯度组（Glu 16.5、25、40 mmol/ L）,FGF-21干预组(Glu 5.5 mmol/ L+ FGF-21),高糖环境FGF-21干预组(Glu B+FGF-21)和Glu B+FGF-21干预+细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 信号转导阻断剂（包括PD98059、SP600125、SB203580）组。成骨诱导第14天,检测碱性磷酸酶（ALP）活性;成骨诱导第21天,以RT-PCR检测骨向分化的相关因子ALP、骨钙素（OCN）、Runx2的mRNA水平,以Western blot检测MAPK通路中细胞外信号调节激酶(ERK1/ 2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)蛋白磷酸化水平。结果 ①分离培养得到的hBMSCs成骨、成脂诱导后茜红素、油红O染色阳性,hBMSCs被成功地诱导向成骨细胞（OB）和脂肪细胞分化。流式细胞仪鉴定为hBMSCs。②与对照组相比,高糖组的骨向分化标志物ALP、OCN、Runx2的mRNA水平明显增加,MAPK通路中ERK、P38、JNK磷酸化水平表达增加。③与Glu B组相比,Glu B+FGF-21组的ALP、OCN、Runx2的mRNA水平降低,ERK、P38和JNK的磷酸化水平降低。④与Glu B+FGF-21组相比,Glu B+FGF-21+MAPK信号转导阻断剂组的ALP、Runx2的mRNA水平进一步降低,且相应的ERK、JNK和P38及其磷酸化水平进一步降低。结论 高糖能促进hBMSCs的骨向分化。高糖环境下FGF-21具有抑制hBMSCs的成骨分化或矿化作用。     

Sirt1促进炎症牙周膜干细胞成骨分化的机制

目的 探讨去乙酰化酶1(Sirt1)对炎症牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的作用，并研究其可能的分子机制。方法 分离、培养正常及炎症PDLSCs,观察Sirt1在两种细胞中的表达；将炎症PDLSCs进行成骨诱导，同时使用Sirt1激动剂白芦藜醇上调炎症PDLSCs中的Sirt1,观察炎症PDLSCs的成骨分化情况，Western blot检测Runx2、乙酰化NF-κB、乙酰化FoxO1和FoxO1的表达。结果 炎症PDLSCs中Sirt1的表达较正常PDLSCs减少(P<0.01);白芦藜醇可上调炎症PDLSCs中Sirt1的表达；与成骨诱导组比较，成骨诱导+白芦藜醇组炎症PDLSCs中BSP(t=14.045,P<0.01)、Runx2(t=3.349,P<0.01)、OCN(t=7.218,P<0.01)和Osx (t=4.544,P<0.01)mRNA的表达增加，ALP染色增强(P<0.01);炎症PDLSCs成骨诱导后FoxO1(t=8.737,P<0.01)和Runx2(t=6.152,P<0.01)的表达增强；使用白芦藜...     

茯苓三萜成分RP-HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的 利用RP-HPLC-ELSD技术建立不同菌株茯苓三萜的指纹图谱,为评价不同菌株培育茯苓药材的质量品质提供理论依据,以期规范培育茯苓的菌株,提高茯苓资源品质。方法 色谱柱为Kromasil 100-5 C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为0.2%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）,采用梯度洗脱法;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30 ℃;蒸发光检测条件：雾化温度为40 ℃,压力为350 kPa,gain值为7;进样量为20 μL。结果 建立的指纹图谱中有18个共有峰,且方法学考察符合规定的标准。结论 该方法简便快速、准确可靠,可作为评价不同菌株茯苓药材质量的有效手段。     

大炭角菌子实体化学成分的研究

目的 研究大炭角菌Xylaria euglossa 子实体的化学成分。方法 通过硅胶、Sephadex LH-20柱色谱分离化合物,运用氢谱、碳谱、二维核磁共振（¹H-¹HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY）、高分辨质谱等光谱学方法鉴定化合物结构。结果 分离得到10个化合物,分别鉴定为炭角菌酮（1）、3, 9-二羟基-3-甲基-6, 8-二甲氧基-二氢蒽酮（2）、1-羟基-6, 8-二甲氧基-3-甲基蒽醌（3）、炭角菌内酰胺（4）、neoechinulin A（5）、5α, 8α-过氧麦角甾-6, 22-二烯-3β-醇（6）、麦角甾-4, 6, 8(14), 22-四烯-3-酮（7）、22E-麦角甾-7, 22-二烯-3β, 5α, 6β-三醇（8）、棕榈酸（9）、(2S, 2′R, 3S, 4R)-2-(2′-羟基-十八碳酰胺) 二十二碳烷-1, 3, 4-三醇（10）。结论 所有化合物均为大炭角菌中首次分离得到。其中化合物1和4为新化合物。     

干蟾皮中蟾毒内酯类成分的提取工艺研究

目的 探讨干蟾皮中蟾毒内酯类成分的最佳提取工艺。方法 通过正交试验法考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间、提取次数对干蟾皮中蟾毒内酯类成分提取效果的影响,并以酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的总量—总毒基量为考察指标,采用超高效高压液相色谱-紫外检测器检测。结果 最佳提取工艺为以10倍量80%乙醇提取2次,每次2 h。结论 所优选出的提取工艺方法可行、稳定、合理。     

岗梅根的化学成分研究

目的 研究岗梅Ilex asprella根的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱等方法进行分离和纯化,并结合其理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。结果 确定了12个化合物的结构,分别为乌索-12-烯-3β, 28-二醇, 3-乙酸酯（1）、β-谷甾醇（2）、赪酮甾醇（3）、28-nor-19βH, 20αH-ursa-12, 17-dien-3-ol（4）、randialic acid B（5）、19-去氢乌苏酸（6）、熊果酸（7）、坡模酸（8）、3-O-β-D-木糖基-3β-O-28-缺失-12, 17(18)-二烯乌苏烷（9）、β-胡萝卜苷（10）、冬青苷B（11）、赪酮甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（12）。结论 化合物9为新化合物,命名为岗梅苷H。化合物1、2、4、7、8、10为首次从该植物中分离得到。     

毛冬青叶的化学成分研究

目的 研究毛冬青Ilex pubescens叶的化学成分。方法 采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及半制备高效液相色谱法进行分离纯化,并通过理化性质与光谱分析法鉴定化合物的结构。结果 从毛冬青叶70%乙醇提取物中分离鉴定了16个化合物,分别为大豆苷元（1）、染料木苷（2）、山柰酚-3-O-β-龙胆二糖苷（3）、山柰酚-3-O-β-刺槐双糖苷（4）、山柰酚-3-O-β-半乳糖苷（5）、槲皮素-3-O-β-龙胆二糖苷（6）、3β, 19α-二羟基齐墩果-12-烯-24, 28-二酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）、毛冬青皂苷A₁（8）、毛冬青素A（9）、2-羟甲基-3-咖啡酰氧-1-丁烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（10）、2-咖啡酰甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（11）、3, 4-O-二咖啡酰基奎宁酸（12）、3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸（13）、1, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸（14）、4, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸（15）、2-苯乙基-O-α-L-阿拉伯糖基 (1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（16）。结论 化合物1～6、12～16为首次从该植物中分离得到。     

伞花木茎化学成分研究

目的 研究伞花木Eurycorymbus cavaleriei茎的化学成分。方法 采用硅胶、大孔树脂、RP-C₁₈、MCI凝胶、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等手段对伞花木茎中的化学成分进行分离纯化,并通过波谱方法鉴定其结构。结果 从伞花木茎中分离得到9个化合物,分别为 (?)-lyoniresinol 3a-O-β-D-glucopyranoside（1）、(?)-异落叶松脂醇3a-O-β-D-葡萄糖苷（2）、5′-demethyl aquillochin（3）、(?)-丁香酯素（4）、水杨酸甲酯（5）、水杨酸乙酯（6）、β-谷甾醇（7）、香草醛（8）和3-oxotirucalla-7, 24-dien-21-oic acid（9）。结论 化合物1、2、4～9均为首次从该属植物中分离得到。     

黄秋葵正丁醇部位化学成分的研究

目的 对黄秋葵Abelmoschus esculentusl正丁醇部位的化学成分进行研究。方法 利用Sephadex LH-20、MCI、ODS和硅胶色谱柱分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果 分离得到了12个化合物，分别鉴定为尿嘧啶(1)、尿嘧啶核苷(2)、尿嘧啶脱氧核苷(3)、腺嘌呤(4)、腺嘌呤核苷(5)、3′-脱氧腺苷(6)、鸟嘌呤核苷(7)、鸟嘌呤脱氧核苷(8)、苯丙氨酸(9)、酪氨酸(10)、亮氨酸(11)、异亮氨酸(12)。结论 化合物1～8均为首次从黄秋葵中分离得到。     

宁夏枸杞醋酸乙酯部位化学成分研究

目的 研究宁夏枸杞Lycium barbarum的化学成分。方法 采用大孔吸附树脂AB-8、硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱等进行分离和纯化,根据理化性质及光谱数据鉴定化合物的结构。结果 从宁夏枸杞70%乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到14个化合物,根据其波谱数据鉴定了其中11个化合物的结构,分别为邻苯二甲酸二甲酯（1）、邻苯二甲酸二丁酯（2）、β-谷甾醇（3）、烟酰胺（4）、东莨菪素（5）、5-羟甲基糠醛（6）、反式松柏醇（7）、槲皮素（8）、N-反式阿魏酸酪酰胺（9）、4-O-(对甲氧基肉桂酰基)-β-D-葡萄糖苷（10）和东莨菪苷（11）。结论 化合物1、2、4、6、7、9和10为首次从宁夏枸杞中分离得到,也是首次从该属植物中分离得到。     

LC-MS/MS测定白及止血海绵中白及葡甘聚糖的含量

目的 建立LC-MS/MS方法测定白及止血海绵中白及葡甘聚糖含量。方法 采用Waters X BridgeTM Amide(2.1mm×100mm,3.5μm);流动相为乙腈∶5mmol/L醋酸铵(内含0.1%甲酸水溶液)=60∶40;流速为0.3mL/min;柱温35℃;进样量10μL。结果 D-甘露糖线性范围为50.0~5 000.0ng/mL(r=0.999 5),方法学考察表明日内和日间精密度、最低检测限和定量限均符合相关标准,加样回收率为98.4%(n=5),RSD=1.03%。结论 本法操作简单,选择性好,灵敏度高,适用于白及止血海绵中的白及葡甘聚糖的定量分析。     

全基因组关联研究中NanoDrop检测D260/D230值在DNA质检中的意义

目的 探讨NanoDrop检测D260/D230值对全基因组关联研究(GWAS)中DNA标本质检的意义.方法 收集1 494例强直性脊柱炎(AS)患者的血液DNA样本,分别用NanoDrop和PicoGreen检测样本浓度.第一阶段,对24例NanoDrop和PicoGreen浓度＞50 ng/μL的DNA样本行Omni中华8芯片检测,比较16例芯片成功样本与8例失败样本的D260/D280值及D260/D230值.第二阶段,选取1 122例NanoDrop和PicoGreen检测浓度均大于50 ng/μL DNA样本行管家基因GAPDH的PCR检测,并对PCR反应成功的样本行Omni中华8芯片检测.采用Mann-Whitney U检验比较PCR反应成功与失败DNA样本的D260/D230值,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价D260/D230值对PCR结果的鉴别效率.结果 第一阶段中,芯片成功与失败样本的D260/D280值差异无统计学意义(P=0.444),而D260/D230值差异有统计学意义(Z=-3.920,P＜0.001);第二阶段中,PCR成功的DNA样本基因分型检测成功率为100％,PCR成功与失败组的D260/D230值比较差异有统计学意义(Z=-5.983,P＜0.01).D260/D230值预测PCR结果的曲线下面积(AUC)为0.727;最佳诊断点的D260/D230值为0.89;特异度为0.95时的D260/D230值为2.305.结论 在进行GWAS时,浓度及D260/I2s0值均较好而D260/D230值较低的DNA样本可能含有较多杂质,需联用PCR检测以确保样本质量;D260/D230值≥2.305时,样本纯度满足GWAS芯片检测的要求,可省略PCR检测.