嵌合抗原受体T细胞治疗恶性实体瘤新进展

患者自身T细胞经过嵌合抗原受体（CAR）基因修饰后，不再受主要组织相容性复合物限制，因而可实现对肿瘤靶标高效应答。目前CAR-T细胞治疗已在部分血液系统恶性肿瘤中显示出了较好的疗效，但在实体瘤中的疗效却差强人意，其主要原因包括实体瘤缺乏特异性强的抗原靶标、经过基因工程改造后的T细胞归巢能力不确定以及抑制性肿瘤免疫微环境。临床试验中，研究较多的实体瘤CAR-T细胞治疗靶点有双唾液酸神经节苷脂（GD2）、紧密连接蛋白18亚型2（CLDN18.2）、间皮素、B7同源性3（B7H3）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖（GPC）3、表皮生长因子受体变异体（EGFRv）Ⅲ等。CAR-T细胞与溶瘤病毒、酪氨酸激酶抑制剂、程序性死亡蛋白-1单抗等联合治疗可增加其疗效。本文总结了针对CAR-T细胞治疗实体瘤的优化策略，如通过基因编辑增强其活性；添加相应元件的调控使CAR-T细胞的激活更加安全可控；增强CAR-T细胞的持久性等。通过综述CAR-T细胞治疗实体瘤的最新研究进展，以期为实体瘤的临床治疗提供新思路。     

荧光定量PCR检测c⁃Met CAR病毒感染T细胞的效率

目的：通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c?Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法：应用基因重组技术构建c?Met CAR（GFP）逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c?Met CAR病毒与c?Met CAR（GFP）病毒,感染T细胞制备c?Met CAR?T细胞与c?Met CAR?T（GFP）细胞。Western blot检测c?Met CAR和c?Met CAR（GFP）在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果：构建c?Met CAR（GFP）质粒,荧光显微镜可观察到c?Met CAR（GFP）质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c?Met CAR和c?Met CAR（GFP）病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c?Met CAR与c?Met CAR（GFP）的感染效率分别为（52.1 ± 1.7）%、（55.9 ± 2.3）%。流式细胞术检测c?Met CAR（GFP）病毒感染效率为（50.7 ± 3.6）%,两种检测方法比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测 CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR?T细胞的临床应用具有实用价值。     

CAR-T新型联用策略治疗实体瘤研究进展

近年来，嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-cell，CAR-T）疗法在血液肿瘤的治疗中取得了突破性进展，但是在实体瘤的治疗中仍然存在着诸多问题，例如CAR-T细胞渗透性差，易发生T细胞耗竭现象、脱靶效应等，故实体瘤的CAR-T疗法需要提出新的治疗策略来提升治疗效果。与单一CAR-T治疗方式相比，CAR-T联合其他肿瘤治疗手段已经在临床前及临床研究中展现出优异疗效。本篇综述总结了CAR-T联用不同肿瘤治疗方法：抗体药物、溶瘤病毒、肿瘤疫苗、纳米药物应对实体瘤治疗的研究进展，以期为开发新的CAR-T联用策略治疗实体瘤提供理论依据和新思路。     

2021年淋巴瘤临床研究进展：细胞治疗,谁与争锋?

近年来,肿瘤治疗走向新时代,从靶向及放化疗走向细胞治疗、免疫治疗时代。而2021年是中国嵌合抗原受体T细胞疗法(chimeric antigen receptor T?cell therapy,CAR?T)细胞治疗的元年,有2个产品被国家药品监督管理局(National Medical Products Administration,NMPA)批准应用于临床。2021年,淋巴瘤的临床研究重点仍聚焦于CAR?T细胞治疗,本文拟对2021年发表的重磅文章进行综述。     

人锌转运体8嵌合抗原受体表达载体的构建与初步应用

目的：构建人锌转运体8（zinc transporter 8,ZnT8）嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）的慢病毒表达载体,为研究抗原特异性调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）自身免疫中的调节作用提供实验基础。方法：通过分子克隆及基因重组技术构建PLVX?EGFP?ZnT8 scfv慢病毒表达载体质粒,并制备ZnT8 scfv?CAR慢病毒;利用ZnT8 scfv?CAR慢病毒感染Tregs,流式细胞术检测绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表达确定慢病毒感染效率;细胞计数评估Tregs细胞增殖能力;流式细胞术检测增殖细胞中CD4、CD25、Foxp3和Helios的表达。结果：酶切鉴定和基因测序结果显示PLVX?EGFP?ZnT8 scfv慢病毒表达载体构建成功;质粒共转染293T细胞后制备浓缩慢病毒滴度为2.4×108 TU/μL;ZnT8 scfv?CAR慢病毒转染Tregs后GFP表达率为43.2% ± 4.1%;体外培养14 d后ZnT8特异性Tregs增殖（634.3 ± 92.5）倍,且高表达Foxp3（60.4% ± 3.5%）和Helios（64.3% ± 4.8%）。结论：成功构建了包含CAR结构的PLVX?EGFP?ZnT8 scfv慢病毒载体并包被ZnT8 scfv?CAR慢病毒;慢病毒转染后的CAR?Tregs体外扩增14 d仍能够维持ZnT8?CAR结构表达;CAR?Tregs为一群CD4+CD25+细胞且高表达Foxp3和Helios。     

不同CD8+T细胞分化状态对CAR-T实体肿瘤疗效影响的研究进展

T淋巴细胞分化是一个表型和功能不断改变的渐进过程。T细胞不同分化亚群的抗病毒特征已被较为清晰地揭示,然而在抗肿瘤过程中,这些T细胞亚群的作用和功能研究远不够深入,人们对哪些T细胞亚群能在体内有效地杀伤实体肿瘤知之甚少。2017年美国FDA准入了两款抗CD19 嵌合型抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor modified T cells,CAR-T）产品上市,为难治性淋巴瘤患者带来了希望。而相较之下,CAR-T在实体肿瘤中的临床应用则相对滞后。近年来深入的T细胞分化研究显示,不同阶段的CD8+T细胞体内外抗肿瘤效应存在较大差异,幼稚CD8+T细胞在沿着干细胞样记忆型T细胞向终末效应型T细胞分化的系列进程中会逐渐丧失自我更新、增殖存活、再活化能力,但细胞毒作用却显著增强。这种CD8+T细胞分化中呈现的效应功能与细胞自我更新、增殖和存活能力的负相关关系,可能是导致CAR T在体外杀伤效能无法准确反映体内抗实体瘤疗效的重要原因。本文就CD8+T细胞各分化阶段的特征,以体外靶向杀伤能力评估临床CD8+CAR-T抗实体瘤疗效的局限性,以及针对这一临床问题可能的解决方案进行了综述。     

嵌合抗原受体修饰T细胞治疗恶性肿瘤的研究进展

嵌合抗原受体(CAR)是一种重组的抗原受体,同时具有结合抗原及激活T细胞的功能。转入CAR的T细胞肿瘤细胞的杀伤不依赖于主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受态,因此CAR-T细胞免疫治疗比传统的T细胞治疗有更多的优势。基于一系列不同肿瘤表面抗原设计重组的CAR-T胞在体内外显示了明显的抗肿瘤效应,尤其是靶向CD19的CAR-T细胞已经在B细胞恶性肿瘤的临床患者中取得了良的疗效。随着CAR技术的不断优化,CAR-T细胞在肿瘤的细胞免疫治疗中必将发挥更重要的作用。     

CAR-T细胞免疫疗法的研究进展

 嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T）免疫治疗可以精准靶向癌细胞,在肿瘤（尤其是淋巴瘤）的临床治疗上表现出良好的效果,是近年来受到广泛关注的一种肿瘤免疫治疗方法。目前CAR-T在淋巴瘤中的应用趋于成熟,但在实体瘤中由于肿瘤微环境等因素导致CAR-T疗法应用受限。本文概述了当前CAR-T免疫疗法面临的挑战及相关机制研究,如靶向肿瘤的特异性、安全性以及CAR-T的持久性等,同时聚焦针对这些挑战对CAR-T的CAR结构设计进行优化的研究进展。     

CAR-T细胞免疫治疗实体瘤的研究进展

近年来过继性细胞免疫疗法因效果显著而得到广泛认可，尤其是CD19特异嵌合抗原受体（CAR）的自体T细胞治疗恶性血液瘤取得成功。本文总结实体肿瘤存在肿瘤免疫微环境、靶点不均一以及免疫抑制性受体等原因导致CAR-T无法有效治疗，提出改进CAR-T细胞以提高T细胞浸润、共表达细胞因子与酶以及修饰相关受体等方式提高CAR-T抗实体肿瘤活性，为后续CAR-T细胞治疗实体肿瘤研究奠定理论基础。     

脂质纳米粒-mRNA递送系统及其在嵌合抗原受体T细胞治疗中的应用

尽管嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗在血液系统恶性肿瘤患者中取得了显著的临床疗效，但需要进一步优化。脂质纳米粒（LNP）-信使核糖核酸（mRNA）递送系统作为一种非病毒性基因载体运用于CAR-T细胞治疗研究中，一方面通过LNP将密封蛋白-6 mRNA靶向递送至抗原提呈细胞，从而实现抗原提呈细胞辅助性增强密封蛋白-6靶向的CAR-T细胞的功能，以进一步诱导对实体瘤的清除；另一方面，通过LNP将成纤维细胞激活蛋白（FAP）CARmRNA靶向递送至T细胞，实现体内FAP靶向的CAR-T细胞的制备，以通过阻断心脏纤维化过程达到治疗急性心肌损伤的目的。在CAR-T细胞研究和治疗中，LNP-mRNA递送系统具有不与细胞基因组整合、价格便宜、毒副作用小及可修饰等优点，亦存在蛋白瞬时表达导致调控细胞功能的持久性不足及制备等方面的技术局限性。本文综述了LNP-mRNA递送系统及其在CAR-T细胞治疗中的应用研究。     

嵌合抗原受体修饰T细胞在实体肿瘤治疗中的应用

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)是一种人工修饰的T细胞表面受体,它可以模拟天然的T细胞受体(T cell receptor,TCR)的功能.使用转基因技术可以在T细胞表面稳定表达CAR.CAR修饰T细胞(CAR-T细胞)利用抗体的肿瘤特异性识别能力,靶向发挥T细胞的效应功能.目前CAR-T细胞在临床治疗白血病、淋巴瘤、黑素瘤等恶性肿瘤中取得了令人鼓舞的效果.但由于实体肿瘤的某些特点,CAR-T细胞在临床治疗实体肿瘤的实践中存在部分障碍.随着研究的深入,三代CAR-T细胞、双重特异性CAR-T细胞等的应用将为CAR-T细胞临床治疗实体肿瘤开拓道路.本文就近年来CAR-T细胞在实体肿瘤中的应用作一综述.     

嵌合抗原受体T细胞治疗血液系统恶性肿瘤研究进展

嵌合抗原受体（CAR）T细胞是血液系统恶性肿瘤的有效治疗方法,其发展经历了针对B细胞性白血病和淋巴瘤的CD19靶向的CAR-T细胞治疗、针对多发性骨髓瘤的B细胞成熟抗原（BCMA）靶向的CAR-T细胞治疗,近年已经开发出针对T细胞性血液系统恶性肿瘤的CD7靶向的CAR-T细胞治疗。另外,与其他血液系统恶性肿瘤相比,针对髓细胞性恶性肿瘤的CAR-T细胞治疗具有更多阻碍,相关研究也更多样化。为获得在临床上更有效和低毒性的CAR-T细胞,国内外学者开发了多靶点CAR-T细胞、通用型CAR-T细胞,以及从多能干细胞经过基因工程方法获得CAR-T细胞、CAR-自然杀伤细胞、CAR-诱导多能干细胞来源的巨噬细胞。我国学者从新型CAR-T细胞的研发到CAR-T细胞治疗临床研究体系的建立均开展了一系列研究。本文介绍CAR-T细胞治疗在B细胞性、T细胞性、髓细胞性血液系统恶性肿瘤等最新临床研究进展,也展望了多靶点、通用型和诱导多能干细胞来源的新型CAR相关细胞治疗的未来发展方向。     

维布妥昔单抗及靶向CD30的嵌合抗原受体T细胞在淋巴瘤治疗中的研究进展

CD30是一种细胞表面抗原,在正常活化的淋巴细胞上低表达,但是在多种淋巴瘤细胞上高表达,因此成为淋巴瘤治疗的靶抗原之一。抗体结合药物维布妥昔单抗（brentuximab vedotin, BV）与CD30结合后能快速内化进入肿瘤细胞内部诱导凋亡,在临床应用中疗效显著。此外,靶向CD30 嵌合抗原受体T细胞治疗(chimeric antigen receptor-modified T cell, CAR-T)在临床研究中安全、有效、耐受性好,为复发/难治淋巴瘤患者带来希望。本文就维布妥昔单抗及靶向CD30 CAR-T细胞在淋巴瘤治疗中的研究进展进行综述。     

多发性骨髓瘤的CAR-T治疗研究进展

多发性骨髓瘤（MM）是发生于浆细胞的恶性肿瘤，单克隆浆细胞在骨髓中异常增殖并产生M蛋白。尽管蛋白酶体抑制剂、单克隆抗体、免疫调节剂等药物的应用显著延长了MM患者的生存期，但MM仍无法治愈。嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞可以特异性靶向并杀死带有特定抗原的MM细胞，但脱靶效应和耐药性的产生使MM存在复发难治的风险。双靶点CAR-T可以增大抗原的覆盖率，提高抗肿瘤能力，减少抗原逃逸，为MM的治疗提供了新思路。本文对现阶段CAR-T治疗多发性骨髓瘤的研究进展做一述评，旨在为临床提供一定的参考     

CAR-T抗肿瘤研究的现状及展望

嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)是一种安全有效的肿瘤治疗策略。在多种血液肿瘤的临床试验中,CAR-T细胞疗法取得重大突破,在实体瘤的临床试验中也崭露头角。但在获得显著疗效的同时,CAR-T也存在脱靶效应、细胞因子风暴、插入突变、对实体肿瘤疗效有限等问题。现就CAR-T技术的最新进展及该领域有待解决的问题进行综述,为CAR-T疗法的进一步研究和临床应用提供参考。