LncRNA GM15886在高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织的表达规律及生物信息学分析

[摘 要] 目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）GM15886在高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）肺组织中表达水平的变化,并运用生物信息学分析,预测其在BPD模型中的作用机制。方法：在已建立BPD模型小鼠肺组织lncRNA基因芯片中选取并验证GM15886,应用lncRNATargets、Multi Experiment Matrix和Ensemble数据库预测其靶基因;将64只新出生C57BL／6J小鼠随机分为高氧组和空气组,每组各32只;高氧组新生小鼠置于95％高氧环境下,空气组暴露于空气环境下,分别选取生后第0天、3、5、7天处死小鼠取肺组织,HE染色评价肺组织病理变化;采用qPCR检测GM15886、HIPK1 mRNA表达水平;免疫组化检测HIPK1表达情况。结果：lncRNATargets预测GM15886碱基序列能够和HIPK1第二个外显子碱基序列完全结合。qPCR示高氧组第3、5、7天GM15886表达量升高,分别为1.91±0.28、2.12±0.38、2.35±0.43,与第0天相比,差异均具有统计学意义（P均＜0.05）;HIPK1在第3、5、7天相对表达量分别为1.16±0.33、0.92±0.31、3.12±0.46,第7天表达量高于第0、3、5天（P均＜0.05）;HIPK1免疫组化表现与RNA表达的结果相对应。结论：随着高氧暴露时间的延长,肺组织GM15886表达量增加;生信分析和上述实验表明GM15886可能靶向HIPK1参与BPD的发病机制。     

高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化

目的:分析长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)在高氧诱导支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasi,BPD)小鼠模型肺中表达谱的变化?方法:构建高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠模型,利用lncRNA芯片技术检测正常小鼠肺及BPD小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化,经过对原始数据进行预处理,筛选出差异表达的lncRNA?结果:与对照组相比,模型组差异表达的lncRNA(差异倍数≥2倍且P < 0.05)共1 769条,其中882条上调,887条下调;5倍以上上调的共140条,下调的共71条;10倍以上上调的共28条,下调的有2条?结论:高氧诱导BPD发生时,肺组织中lncRNA的表达谱发生了显著变化;这些差异表达的lncRNA,可能参与了BPD发生?发展过程?     

重组人β防御素-2基因对支气管肺发育不良新生鼠肺泡及肺血管发育的影响

目的研究重组人β防御素-2（humanβdefensin-2,hBD2）对高氧诱导支气管肺发育不良（BPD）新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和hBD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型,hBD2组于第4天气管穿刺注入1×107/ml含有hBD2编码基因的重组腺病毒25滋l,空载体组注入等量空载体腺病毒。于第7、14天采集肺组织标本,qPCR检测肺组织hBD2mRNA表达;比较各组大鼠肺组织形态学变化,测定肺泡辐射状计数（RAC）和平均内衬间隔（MLI）;免疫组化测定肺组织血管内皮生长因子（VEGF）表达,ELISA法测定肺组织炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。结果梯度稀释法测定病毒滴度为1×109/ml,用稀释液稀释100倍得到1×107/ml。在大鼠出生后第7、14天,与hBD2组比较,空气组、高氧组、空载体组大鼠hBD2mRNA表达水平均明显为低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;第7、14天,高氧组和空载体组大鼠的RAC、MLI、AOD值、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平与空气组、hBD2组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HE染色及免疫组化染色结果显示高氧暴露后大鼠肺泡及肺血管发育受阻,hBD2组大鼠肺泡和肺血管发育改善。结论hBD2基因治疗可促进高氧诱导BPD新生鼠的肺泡及肺血管发育,并减轻肺部炎症。     

高氧肺损伤新生大鼠肺组织中SPOCK2基因表达的研究

目的：探讨 SPOCK2 基因在高氧肺损伤新生儿支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）大鼠模型中的表达意义。方法：利用高氧肺损伤诱导 BPD 动物模型,将新生 SD 大鼠随机分成空气对照组、高氧模型组。HE 染色观察肺组织病理改变,qPCR 法检测肺组织中 SPOCK2 mRNA 的表达水平,免疫组化法测定肺 SPOCK2 蛋白的表达。同时在体外利用高氧刺激 A549 人肺上皮细胞,qPCR 法检测细胞 SPOCK2 mRNA 的表达水平。结果：成功构建 BPD 新生大鼠模型。HE 染色显示高氧模型组肺组织均产生类似 BPD 的病理损伤,并且生后10、14 d高氧模型组大鼠肺组织辐射状肺泡计数（pulmonary radical alveolar counts,RAC）值较空气对照组显著减少,差异有统计学意义（P < 0.05）。免疫组化显示空气对照组 大鼠肺组织中SPOCK2 蛋白表达量高于高氧模型组,生后10、14 d空气对照组肺组织SPOCK2 蛋白表达呈阳性。qPCR结果示空气对照组大鼠肺组织中SPOCK2 mRNA 表达量随时间递增,于生后18 d时表达量最高,生后24 d时仍处于高值（P < 0.05）,成年时下降;与空气对照组比较,高氧模型组大鼠肺组织中SPOCK2 mRNA 表达量降低,生后10、14 d时两组差异有统计学意义（P < 0.05）。高氧模型组 A549细胞SPOCK2 mRNA 表达量高于空气对照组（P < 0.05）,且有先上升后下降的趋势。结论：SPOCK2 基因可能参与肺发育过程,并可能在高氧刺激时对肺组织起保护作用。     

肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良中的作用

目的:了解肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良(BPD)中的作用;方法:64只早产昆明小鼠随机均分为空气组和高氧组,空气组置于室内,高氧组置于密闭的氧浓度＞90％的氧舱中复制BPD动物模型;分别于造模后第1、3、7及14天取小鼠肺组织,分别采用苏木精-伊红染色观察小鼠肺组织病理改变鉴定造模是否成功,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测P311基因mRNA表达水平.结果:早产小鼠肺组织发育不成熟,高氧组随着吸氧时间的延长,小鼠表现反应迟钝、体重增长缓慢、毛发发涩无光泽、鼻尖发绀、呼吸急促,肉眼见肺组织表面有散在甚至弥漫的淤血点、小血管扩张充血,第3天镜下见肺泡腔内有炎性细胞浸润,第7天肺泡腔增大、肺间质增生,第14天肺泡腔内间质增生、少数肺泡融合、肺泡数量减少、肺泡结构简单化,说明BPD模型造模成功;第3天时2组P311基因mRNA表达量最高,随后下降;高氧组P311基因mRNA表达水平均高于同一时点空气组(P＜0.05).结论:长时间吸入高浓度氧成功构建支气管肺发育不良的动物模型,P311基因可能是影响肺损伤修复的调控因子.     

长链非编码RNA NANCI⁃NKX2.1信号通路在BPD新生小鼠肺组织中作用的研究

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）NANCI?NKX2.1信号通路在新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）形成过程中的作用。方法：将32只C57BL/6J新生小鼠随机分为实验组、阴性对照组、生理盐水对照组和空白对照组,每组8只。实验组于生后第2天经鼻腔吸入含lncRNA NANCI干扰序列的腺病毒 Ad?lnc NANCI shRNA的生理盐水1 μL,阴性对照组将含无关序列发卡结构病毒质粒Ad?GFP NC的生理盐水1 μL导入肺内,生理盐水对照组将生理盐水1 μL导入肺内,空白对照组除未予鼻腔吸入以外其他控制因素与上3组相同;于出生后7 d处死各组小鼠并采集肺组织。采用HE染色法察看小鼠肺组织病理变化,采用RT?qPCR检测NANCI表达量,RT?qPCR及Western blot技术分别检测NKX2.1、SPC、AQP5 mRNA和蛋白表达水平。结果：实验组肺组织病理示新隔形成减少,肺泡腔扩大、部分融合,肺泡数目较少,RAC值下降（P ＜0.05）;肺组织NANCI表达量下降（P ＜0.05）;NKX2.1、SPC及AQP5 mRNA和蛋白的表达量亦下降（P ＜0.05）。结论：NANCI?NKX2.1信号通路在BPD新生小鼠中可能起重要作用。     

促红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型TGF－β1表达的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对新型支气管肺发育不良（BPD）早产鼠模型肺组织病理变化及转化生长因子－β1（TGF－β1）表达的影响。方法40只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖（ LPS）或磷酸盐缓冲液（ PBS）,孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6 h内分为5组：PBS＋空气组、PBS＋高氧组、LPS＋高氧组、PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组。 PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组于高氧暴露6 h后开始第1次背部皮下注射rhEPO 1200 IU／kg,隔天1次,共7次。分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察肺组织病理变化及辐射状肺泡计数（RAC）,采用ELISA 法检测肺泡灌洗液（BALF）及肺组织TGF－β1的表达量。结果与PBS＋空气组比较,经高氧干预后其病理损伤加重、RAC降低、BALF及肺组织TGF－β1表达量升高（P＜0.01）,并且以LPS＋高氧组更显著（P＜0.05,P＜0.01）,上述指标在高氧暴露后第14天与第7和（或）第1天差异有统计学意义（P＜0.05）;rhEPO干预后与相应对照组比较上述指标得到相应改善（P＜0.05, P＜0.01）;BALF中TGF－β1水平与RAC呈高度负相关,与肺组织TGF－β1水平呈高度正相关（ P＜0.05或P＜0.01）。结论 rhEPO可能通过参与调解TGF－β1相关通路,改善BPD模型大鼠肺组织损伤,从而对BPD起到一定的干预和治疗作用。     

支气管肺发育不良模型新生鼠肺组织中miR15b 及 miR16的表达

目的：探讨miR15b及miR16在高氧诱导支气管肺发育不良（ BDP）新生大鼠中的表达。方法60只新生大鼠随机分为高氧组和空气组,每组30只,分别置于高氧（氧浓度≥90％）和空气中持续喂养;于生后第1、4、7天取材,HE染色光镜下观察大鼠肺组织形态结构变化,并采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色方法分别检测大鼠肺组织中miR15b、miR16和VEGF蛋白表达水平。结果随着高氧暴露时间延长,高氧组新生鼠逐渐表现出肺组织发育不良、肺泡结构简单化、肺泡数目减少和肺微血管发育受阻等病理改变。高氧暴露第7天,高氧组miR15b及miR16的相对表达量明显高于空气组,高氧组VEGF表达量明显低于空气组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 miR15b、miR16的表达量与VEGF的表达量呈负相关。结论 miR15b及miR16通过调控VEGF的表达在BPD的形成过程中发挥重要作用。     

脂氧素A4调控转化生长因子-β1干预小鼠支气管肺发育不良的机制研究

探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)对新生小鼠高氧诱导所致的支气管发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护作用及可能机制?方法:利用高氧损伤诱导BPD动物模型,将新生C57BL/6J小鼠随机分成:空气对照组?模型组?LXA4干预组?转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)中和抗体(1D11)干预组,记录仔鼠体重和生存情况,HE染色观察出生后肺组织病理改变,qPCR法检测肺纤维化指标及转化生长因子-βⅠ型受体(transforming growth factor-β receptor 1,TGF-βR1)和转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-β receptor 2,TGF-βR2)的表达水平?结果:①模型组新生小鼠较空气对照组体重减低且活力差?②肺组织大体标本观察:与空气对照组相比,各组小鼠肺体积减小,色泽暗淡?与空气对照组(d13)相比,LXA4干预组和1D11干预组小鼠肺外观与之相仿?③HE染色:除空气对照组外,各组肺组织均产生类似BPD的病理损伤?较模型组(d13)相比,LXA4干预组与1D11干预组的肺泡结构趋于正常化?④qPCR:与空气对照组相比,各组肺纤维化指标:纤维连接蛋白?平滑肌肌动蛋白-α?弹性蛋白?肌腱蛋白C?组织金属蛋白抑制剂-1及TGF-βR1?TGF-βR2的表达量均增加(P < 0.05)?与空气对照组相比,各组基质金属蛋白酶1相对表达量减少(P < 0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组基质金属蛋白酶1表达量上调(P < 0.05),且LXA4干预组上调更为显著(P < 0.05)?与空气组对照比较,模型组?LXA4干预组和1D11干预组Ⅰ型胶原表达量增高(P < 0.05);其中与模型组相比,LXA4干预组和1D11干预组Ⅰ型胶原表达减少(P < 0.05)?结论:LXA4可能是通过抑制TGF-β1信号通路下调肺纤维化相关因子,实现对高氧诱导BPD的保护作用?     

重组人Elafin对慢性高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良中炎性因子及NF-κB信号通路的影响

目的：探讨重组人Elafin对慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）中炎性因子和核因子-κB p65（nuclear factor-κB,NF-κB）蛋白的影响。方法：将30只C57BL/6J新生24 h内小鼠随机分成空气组、高氧+L/R组及高氧+Elafin组（n=10）。高氧+L/R 组、高氧+Elafin组暴露于85%氧气中。21 d时进行基础肺功能测定,采用HE染色观察小鼠肺组织形态学改变,RT-PCR检测肺组织炎症因子的表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达情况。结果：与空气组[（7.85±0.24） g]比较,高氧+L/R组小鼠体质量[（5.33±0.63） g]显著下降（P=0.000）,肺发育受阻;TNF-α mRNA、IL-1β mRNA （P=0.000） 和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达增加,抗炎因子IL-4、IL-13 mRNA（P=0.000）表达降低。与高氧+L/R组比较,高氧+Elafin组小鼠体质量升高（P=0.014）,肺泡形态趋于正常;TNF-α（P=0.011）、IL-1β（P=0.000） mRNA和NF-κB p65蛋白（P=0.001）表达降低,IL-4（P=0.047）、IL-13（P=0.000） mRNA表达增加。结论：Elafin能有效减轻高氧诱导的小鼠肺损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB活化及炎症因子释放密切相关。     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

E2F1基因在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达及意义

 目的 通过检测E2F1基因在高氧致早产儿慢性肺疾病（CLD）新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达,初步探讨E2F1基因在CLD肺间质纤维化发生发展过程中的生物学作用。方法 足月新生SD大鼠于生后12小时内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14、21天随机处死后动物,无菌条件下采集肺组织,进行肺成纤维细胞的原代培养,免疫组化、Western blot法检测E2F1蛋白表达;Real-time PCR法检测E2F1mRNA含量。结果 生后3d空气组和高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达分别为（蛋白：0.251±0.054 VS 0.249±0.074;mRNA：0.0664±0.0034 VS 0.0668±0.0037 P>0.05）, 无统计学差异。生后7d时高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达较空气组增加,差异有统计学意义（蛋白：0.248±0.041 VS 0.278±0.034;mRNA：0.0659±0.0031 VS 0.0728±0.0047 P<0.05）;14d、21d时增加明显（蛋白： 0.243±0.077 VS 0.328±0.057, 0.241±0.038 VS 0.377±0.063;mRNA：0.241±0.038 VS 0.377±0.063, 0.0655±0.0038 VS 0.0750±0.0041 P<0.01）。结论 E2F1异常高表达参与了高氧致CLD鼠肺成纤维细胞过度增殖的病理过程,在肺间质纤维化的发生发展过程中发挥重要作用。     

依达拉奉对高氧损伤小鼠肺组织中白介素-4、干扰素-γ、转化生长因子-β1的影响

目的  探讨依达拉奉对新生小鼠高氧肺损伤的治疗作用,为临床防治新生儿高氧肺损伤提供理论依据。方法  将新生小鼠随机分为空气+生理盐水组、空气＋依达拉奉组、高氧+生理盐水组、高氧+依达拉奉组,于实验第3、7、10、14和21天取材,测定肺组织中白介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）、肺组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的变化。结果  随着吸氧时间的延长,高氧组IL-4、IFN-γ含量均高于空气组且比例失衡,TGF-β1表达越多并肺组织结构紊乱;依达拉奉治疗组IFN-γ含量显著增高,IL-4含量明显降低,IFN-γ/IL-4比值更接近正常组,TGF-β1表达降低,肺组织结构较高氧组好转。结论  高氧可导致新生小鼠急性肺损伤;依达拉奉可调节IFN-γ、IL-4的含量及比例,降低TGF-β1的表达,发挥对高氧肺损伤的防治作用。

     

支气管肺发育不良新生鼠肺组织甲状腺转录因子及波形蛋白的表达意义

目的观察高氧暴露新生鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)标记[甲状腺转录因子,(TTF-1)]及成纤维细胞标记[波形蛋白,(Vimentin)]的表达规律,探讨支气管肺发育不良(BPD)发病机制。方法新生小鼠随机分为:对照组及BPD组,高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型,观察肺组织病理变化,于实验后3、7、14、21 d应用免疫荧光双标及荧光定量PCR技术检测TTF-1及Vimentin蛋白、mRNA的表达情况。结果与对照组比较,BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现肺泡发育障碍、胶原沉积明显;AECⅡ标记TTF-1表达逐渐减弱,成纤维细胞标记Vimentin表达逐渐增强,14、21 d时两者可见明显的共表达;BPD组21 d TTF-1mRNA表达较同时间对照组下调(P<0.05),而Vimentin mRNA表达较同时间对照组上调(P<0.05)。结论高氧致AECⅡ向成纤维细胞转化可能是BPD纤维化的重要机制。     

慢病毒介导TGF-β1 siRNA对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响

目的：探讨以慢病毒介导的小分子干扰RNA技术（siRNA）沉默转化生长因子β1（TGF-β1）基因对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响.方法：将100只新生昆明小鼠随机分为高氧组、干扰组、阴性干扰组、空气组4组,每组动物25只.分别构建含TGF-β1短发卡RNA（shRNA）及阴性对照序列的PRNAT-u6.2载体,慢病毒包装.于小鼠出生后3d时将两类慢病毒载体以鼻腔吸入法分别导入干扰组和阴性干扰组小鼠肺内.出生后4～14d时将高氧组、干扰组、阴性干扰组小鼠置于含600mL/LO2的氧箱内饲养.空气组仅置空气下饲养.出生后4,7,14,21,28d时分别随机杀取各组5只动物并取左上肺制作石蜡切片,进行组织形态学变化观察,测定放射状肺泡计数（RAC）和肺泡平均截距（MLI）.右肺组织以RT-PCR,Western Blot法分别检测TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平.结果：经测序和双酶切鉴定,表达TGF-β1 shRNA的慢病毒载体构建成功;干扰组肺组织TGF-β1 mRNA水平在小鼠出生后4d即明显低于其他3组（P〈0.05）;出生后7,14,21,28d时干扰组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均低于高氧组和阴性干扰组,但高于空气组（P均〈0.05）.出生后7,14,21,28d干扰组MLI低于高氧组和阴性干扰组而高于空气组（P均〈0.05）.RAC高于高氧组和阴性干扰组而低于空气组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）.高氧组与阴性干扰组在各时间点上述各项指标的差异无统计学意义.结论：慢病毒载体介导的TGF-β1小分子干扰RNA对高体积分数氧吸入所致新生小鼠肺损伤具有保护作用.     

转录调控因子Nkx2.1和lncRNA NANCI在支气管肺发育不良中的表达及意义

目的分析转录调控因子甲状腺特异增强子结合蛋白(Nkx2.1)与长链非编码RNA(lnc RNA)NANCI在高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)小鼠模型肺中的表达情况。方法通过高氧诱导构建模型,利用Western blot与Real-time PCR技术检测Nkx2.1蛋白与lnc RNA NANCI在正常小鼠肺及支气管肺发育不良小鼠肺组织中表达变化,统计分析二者之间的关系。结果高氧21 d,成功构建BPD小鼠模型,与对照组相比,实验组Nkx2.1蛋白与lnc RNA NANCI表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05),且Nkx2.1蛋白与lnc RNA NANCI二者正相关(R2=0.251 6,P0.05)。结论转录调控因子Nkx2.1与lnc RNA NANCI参与了支气管肺发育不良发生、发展过程。     

维生素D对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的肺保护作用

目的探讨维生素D对支气管肺发育不良的保护作用及其作用机制。方法应用高氧诱导的支气管肺发育不良新生小鼠 模型,将36只幼鼠出生后立即给予实验处理,依据不同处理随机分为4组：空气+维生素D组,空气+生理盐水组,高氧+维生素D 组,高氧+生理盐水组。将各组实验鼠称重后处死,同时抽取心室内血液,采用ELISA方法测定血清维生素D水平。分离肺组织 病理切片制作和组织细胞形态学检查取不同处理组小鼠的肺组织,光镜下观察并分析肺终末呼吸单位的组织形态;用图像分析 软件对辐射状肺泡计数、肺泡次级间隔体积密度,比较不同处理组的肺终末呼吸单位损伤参数;取不同处理组实验小鼠的肺组 织,提取总蛋白,采用Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）和VEGF-R2水平。结果空气+生理盐水组和空气+维生素 D组的体质量增长速率大于高氧+生理盐水组;空气+生理盐水组和空气+维生素D组的肺组织重量大于高氧+生理盐水组（P< 0.05）。辐射状肺泡计数,高氧+生理盐水组的RAC降低（P<0.001）,而高氧+维生素D（1250 倍）组的辐射状肺泡计数升高（P< 0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍）组的辐射状肺泡计数比高氧+维生素D（1250倍）组升高（P>0.01）。与高氧+ 生理盐水组相比,高氧+维生素D（1250倍）组的次级突起计数显著升高（P<0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍） 组的次级突起比高氧+维生素D（1250 倍）组升高（P>0.01）。高氧+生理盐水组的VEGFR2 表达量低于空气+生理盐水组（P< 0.05）,空气+维生素D组的VEGFR2表达量低于空气+生理盐水组（P<0.01）;高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于 高氧+生理盐水组（P<0.001）和高氧+维生素D（125倍）组（P<0.001）,高氧+维生素D（125倍）组的表达量也高于高氧+生理盐水 组（P<0.05）。但是,高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于高氧+生理盐水组与HE染色、辐射状肺泡计数以及次级 突起计数的趋势相反。结论新生小鼠在支气管肺发育不良状态下增加维生素D可增加肺组织重量,为肺成熟提供物质基础, 高浓度维生素D更有助于对肺的保护作用,有助于肺血管的生长。     

重组人红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察重组人红细胞生成素(rhEPO)对新型支气管肺发育不良(BPD)早产鼠模型肺组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响.方法 60只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖(LPS)或磷酸盐缓冲液(PBS),孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6h内分为5组:PBS+空气组、PBS+高氧组、LPS+高氧组、PBS+高氧+rhE-PO组、LPS+高氧+rhEPO组.rhEPO(1 200 IU/kg)干预组于高氧暴露6h后开始第1次背部皮下注射,隔天1次,共7次.分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察各组生存率、体质量、肺质量并计算肺质量/体质量比值,观察肺组织病理变化,采用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录PCR(RT-PCR)法检测肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平.结果 与PBS+空气组比较,经高氧干预后早产鼠生存率降低、体质量减轻、肺质量增加,病理损伤加重,肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平降低,并且以LPS+高氧组更明显(P＜0.05),肺质量/体质量比值增加(P＞0.05);rhEPO干预后上述指标得到相应改善(P＜0.05).结论 rhEPO可能通过参与调解VEGF相关通路,对BPD模型早产鼠起到一定的干预和治疗作用,提高了生存率.     

高氧吸入后新生鼠肺组织一氧化氮及氧自由基的动态变化

目的探讨持续吸入高氧后新生大鼠肺组织病理和一氧化氮(NO)及氧自由基的动态变化规律。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸入(90±5)%的高氧和空气,于1、3、7、14、21d,动态观察其肺组织病理学改变以及NO、MDA含量和SOD活性。结果肺形态学:吸高氧3d时炎性细胞渗出,7d时肺间隔增宽,终末气腔明显扩张,小肺泡数量减少,14和21d间质增生、肺泡化降低越来越明显;NO水平:在7、14和21d,高氧组水平高于空气组,数值分别为(99.38±7.80)vs(88.78±8.00),P<0.05;(128.18±33.78)vs(93.30±16.73),P<0.05;(170.66±34.00)vs(106.37±25.11),P<0.01;MDA含量:高氧组在3、7和14d高于空气组,数值分别为(28.10±2.03)vs(22.11±1.25),P<0.05;(30.82±4.17)vs(19.91±2.17),P<0.01;(26.27±3.78)vs(22.56±2.35),P<0.05;SOD的活性,在吸高氧7、14和21d时高于空气组(213.87±18.58)vs(185.55±18.79),P<0.05;(219.81±4.17)vs(19.91±2.71),P<0.01;(251.09±15.10)vs(194.56±8.12),P<0.01。结论持续吸入高氧可致新生大鼠发生与人类BPD类似的病理改变;肺组织的自由基损伤,可能在疾病发生、发展过程中起重要作用。     

肝素对高氧致支气管肺发育不良新生鼠血清及肺组织中性粒细胞诱捕网的影响

目的探讨肝素对支气管肺发育不良（BPD）新生鼠血清及肺组织中性粒细胞诱捕网（NETs）的影响。方法将新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、肝素组、对照组,每组12只。空气组置于空气中,其他3组置于氧浓度为90%的高氧箱7d建立BPD模型。肝素组于造模开始后,每天腹腔注射低剂量肝素（250U/kg）至造模结束;对照组每天腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分别在出生后第7、14天,每组各取6只麻醉并采集血液标本及肺组织标本,采用PicoGreen荧光染色法检测血清游离DNA（cf-DNA/NETs）水平,共聚焦显微成像观察肺组织NETs,HE染色观察肺组织形态学并测定肺泡辐射状计数（RAC）和平均内衬间隔（MLI）。结果出生后第7、14天,高氧组、对照组新生鼠血清游离DNA水平较空气组明显升高（均P＜0.05）,肝素组较高氧组明显降低（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察,高氧组、对照组肺组织组蛋白、髓过氧化物酶荧光信号范围增加,NETs表达增加;肝素组荧光信号范围减少。与空气组比较,高氧组、对照组新生鼠RAC明显减少,MLI明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与高氧组比较,肝素组RAC明显增加,MLI明显减少,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论高氧致BPD新生鼠血清及肺组织中存在大量NETs,肝素可抑制NETs产生,并改善高氧引起的肺发育受阻。