姜黄素对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的保护作用

目的 研究姜黄素对高氧暴露致新生鼠支气管肺发育不良的影响,探讨其作用机制.方法 给予出生6 h内的SD大鼠持续60%氧暴露14d建立肺损伤模型.通氧的同时予姜黄索100 ms/(kg·d)灌胃.观察肺组织病理学改变,进行辐射状肺泡计数(RAC),末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡.免疫组化和Western blot法检测肺组织活化半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.结果 与空气对照组相比,随着氧暴露时间的延长,高氧组的大鼠出现肺发育停滞的典型病理表现:肺泡增大、结构简化,肺泡隔增厚.RAC明显减少,肺组织细胞凋亡明显增加,免疫组化和Western blot法均显示肺组织活化Caspase-3表达明显升高.姜黄素能改善损伤的肺病理结构,并在干预14d后使RAC显著增多,肺组织凋亡细胞显著减少,干预4d后肺组织活化Caspase-3显著降低.结论 姜黄素可减轻高氧暴露所致的BPD,可能是通过抗凋亡机制实现其保护作用.     

维生素D对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的肺保护作用

目的探讨维生素D对支气管肺发育不良的保护作用及其作用机制。方法应用高氧诱导的支气管肺发育不良新生小鼠 模型,将36只幼鼠出生后立即给予实验处理,依据不同处理随机分为4组：空气+维生素D组,空气+生理盐水组,高氧+维生素D 组,高氧+生理盐水组。将各组实验鼠称重后处死,同时抽取心室内血液,采用ELISA方法测定血清维生素D水平。分离肺组织 病理切片制作和组织细胞形态学检查取不同处理组小鼠的肺组织,光镜下观察并分析肺终末呼吸单位的组织形态;用图像分析 软件对辐射状肺泡计数、肺泡次级间隔体积密度,比较不同处理组的肺终末呼吸单位损伤参数;取不同处理组实验小鼠的肺组 织,提取总蛋白,采用Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）和VEGF-R2水平。结果空气+生理盐水组和空气+维生素 D组的体质量增长速率大于高氧+生理盐水组;空气+生理盐水组和空气+维生素D组的肺组织重量大于高氧+生理盐水组（P< 0.05）。辐射状肺泡计数,高氧+生理盐水组的RAC降低（P<0.001）,而高氧+维生素D（1250 倍）组的辐射状肺泡计数升高（P< 0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍）组的辐射状肺泡计数比高氧+维生素D（1250倍）组升高（P>0.01）。与高氧+ 生理盐水组相比,高氧+维生素D（1250倍）组的次级突起计数显著升高（P<0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍） 组的次级突起比高氧+维生素D（1250 倍）组升高（P>0.01）。高氧+生理盐水组的VEGFR2 表达量低于空气+生理盐水组（P< 0.05）,空气+维生素D组的VEGFR2表达量低于空气+生理盐水组（P<0.01）;高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于 高氧+生理盐水组（P<0.001）和高氧+维生素D（125倍）组（P<0.001）,高氧+维生素D（125倍）组的表达量也高于高氧+生理盐水 组（P<0.05）。但是,高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于高氧+生理盐水组与HE染色、辐射状肺泡计数以及次级 突起计数的趋势相反。结论新生小鼠在支气管肺发育不良状态下增加维生素D可增加肺组织重量,为肺成熟提供物质基础, 高浓度维生素D更有助于对肺的保护作用,有助于肺血管的生长。     

支气管肺发育不良新生鼠的肺部改变

目的 观察支气管肺发育不良(BPD)新生大鼠的肺部表现。 方法 将30只3日龄雄性Wistar大鼠随机均分为2组,高氧组置于氧箱(FiO₂ 60%),对照组置于空气(FiO₂ 21%)。分别于实验的第7、14、21 d取肺组织,观察组织病理、超微结构和胶原含量变化。 结果 高氧组大鼠的肺泡结构消失、肺泡间隔增厚、肺泡融合,肺Ⅰ型胶原蛋白表达增加,面积显著加大(P<0.001),板层小体、微绒毛等超微结构减少。 结论 较高浓度氧持续吸入可致新生鼠肺部产生类似人类支气管肺发育不良的组织学改变。     

高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化

目的:分析长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)在高氧诱导支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasi,BPD)小鼠模型肺中表达谱的变化?方法:构建高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠模型,利用lncRNA芯片技术检测正常小鼠肺及BPD小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化,经过对原始数据进行预处理,筛选出差异表达的lncRNA?结果:与对照组相比,模型组差异表达的lncRNA(差异倍数≥2倍且P < 0.05)共1 769条,其中882条上调,887条下调;5倍以上上调的共140条,下调的共71条;10倍以上上调的共28条,下调的有2条?结论:高氧诱导BPD发生时,肺组织中lncRNA的表达谱发生了显著变化;这些差异表达的lncRNA,可能参与了BPD发生?发展过程?     

支气管肺发育不良新生鼠肺组织甲状腺转录因子及波形蛋白的表达意义

目的观察高氧暴露新生鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)标记[甲状腺转录因子,(TTF-1)]及成纤维细胞标记[波形蛋白,(Vimentin)]的表达规律,探讨支气管肺发育不良(BPD)发病机制。方法新生小鼠随机分为:对照组及BPD组,高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型,观察肺组织病理变化,于实验后3、7、14、21 d应用免疫荧光双标及荧光定量PCR技术检测TTF-1及Vimentin蛋白、mRNA的表达情况。结果与对照组比较,BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现肺泡发育障碍、胶原沉积明显;AECⅡ标记TTF-1表达逐渐减弱,成纤维细胞标记Vimentin表达逐渐增强,14、21 d时两者可见明显的共表达;BPD组21 d TTF-1mRNA表达较同时间对照组下调(P<0.05),而Vimentin mRNA表达较同时间对照组上调(P<0.05)。结论高氧致AECⅡ向成纤维细胞转化可能是BPD纤维化的重要机制。     

咖啡因对高氧所致新生大鼠支气管肺发育不良保护机制的研究

目的探究咖啡因改善高氧所致的大鼠支气管肺发育不良(BPD)的作用机制。方法将出生后4 d的大鼠48只随机均分为空气对照组、咖啡因组、高氧模型组、高氧模型+咖啡因组四组。将后两组大鼠置于65%的环境中构建高氧致BPD模型。咖啡因干预组第1日给予咖啡因负荷量20 mg/kg腹腔注射,24 h后每日给予5 mg/kg维持量腹腔注射,非咖啡因干预组则每日等量的生理盐水(NS)腹腔注射。四组大鼠在生后第14、21天分别取出6只,用于检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及TNF-α、IL-6 mRNA表达情况,苏木素-伊红(HE)染色法计数肺组织形态变化情况。结果高氧组大鼠较非高氧组大鼠(对照组、咖啡因组)的肺组织肺泡细胞数目明显减少,细胞体积增大,随着时间推移,以上肺泡损伤逐渐加重。高氧组大鼠的肺组织MDA、TNF-α、IL-6 mRNA较非高氧组大鼠明显升高,而SOD活性明显降低(P<0.05)。高氧+咖啡因组大鼠肺泡细胞数较高氧组明显增多、SOD活性升高,MDA、TNF-α、IL-6 mRNA明显低于高氧组大鼠(P<0.05)。结论咖啡因通过抑制高氧所致的肺泡炎症...     

支气管肺发育不良模型新生鼠肺组织中miR15b 及 miR16的表达

目的：探讨miR15b及miR16在高氧诱导支气管肺发育不良（ BDP）新生大鼠中的表达。方法60只新生大鼠随机分为高氧组和空气组,每组30只,分别置于高氧（氧浓度≥90％）和空气中持续喂养;于生后第1、4、7天取材,HE染色光镜下观察大鼠肺组织形态结构变化,并采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色方法分别检测大鼠肺组织中miR15b、miR16和VEGF蛋白表达水平。结果随着高氧暴露时间延长,高氧组新生鼠逐渐表现出肺组织发育不良、肺泡结构简单化、肺泡数目减少和肺微血管发育受阻等病理改变。高氧暴露第7天,高氧组miR15b及miR16的相对表达量明显高于空气组,高氧组VEGF表达量明显低于空气组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 miR15b、miR16的表达量与VEGF的表达量呈负相关。结论 miR15b及miR16通过调控VEGF的表达在BPD的形成过程中发挥重要作用。     

LncRNA GM15886在高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织的表达规律及生物信息学分析

[摘 要] 目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）GM15886在高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）肺组织中表达水平的变化,并运用生物信息学分析,预测其在BPD模型中的作用机制。方法：在已建立BPD模型小鼠肺组织lncRNA基因芯片中选取并验证GM15886,应用lncRNATargets、Multi Experiment Matrix和Ensemble数据库预测其靶基因;将64只新出生C57BL／6J小鼠随机分为高氧组和空气组,每组各32只;高氧组新生小鼠置于95％高氧环境下,空气组暴露于空气环境下,分别选取生后第0天、3、5、7天处死小鼠取肺组织,HE染色评价肺组织病理变化;采用qPCR检测GM15886、HIPK1 mRNA表达水平;免疫组化检测HIPK1表达情况。结果：lncRNATargets预测GM15886碱基序列能够和HIPK1第二个外显子碱基序列完全结合。qPCR示高氧组第3、5、7天GM15886表达量升高,分别为1.91±0.28、2.12±0.38、2.35±0.43,与第0天相比,差异均具有统计学意义（P均＜0.05）;HIPK1在第3、5、7天相对表达量分别为1.16±0.33、0.92±0.31、3.12±0.46,第7天表达量高于第0、3、5天（P均＜0.05）;HIPK1免疫组化表现与RNA表达的结果相对应。结论：随着高氧暴露时间的延长,肺组织GM15886表达量增加;生信分析和上述实验表明GM15886可能靶向HIPK1参与BPD的发病机制。     

高氧致新生鼠肺结构及VEGF的变化及相关分析

目的探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织结构,血管密度及VEGF蛋白的表达变化及相关性。方法新生Sprague-Dawley大鼠72只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧组吸入95%高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用HE染色和免疫组化法观察新生大鼠3d、7d、14d肺组织形态改变并作肺泡辐射状记数(Radial alveolar countsRAC),检测Ⅷ因子及VEGF蛋白表达。结果对照组大鼠生后随着肺发育,肺泡化逐渐完善,RAC计数、VEGF蛋白及Ⅷ因子表达逐渐增加。高氧组随着吸氧时间延长RAC计数、肺组织VEGF蛋白及Ⅷ因子表达均出现降低,并出现肺泡化阻滞,VEGF与Ⅷ因子始终具有相关性。结论 VEGF促进新生大鼠肺发育,新生大鼠高氧可抑制VEGF及Ⅷ因子在鼠肺内的表达,致肺泡化阻滞,出现类似早产儿支气管肺发育不良的肺组织形态学特征,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤机制中起重要作用。     

转化生长因子-β1在中浓度氧致新生鼠支气管肺发育不良模型中的作用

目的：探讨中浓度氧（60%O2）暴露对新生小鼠发育的影响及损伤,并观察转化生长因子-β1（TGF-β1）在新生鼠慢性肺部疾病支气管肺发育不良（BPD）肺损伤中的作用。方法：30只新生雌性KM小鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只。对照组置于空气中（FiO20.21）;实验组置于封闭氧箱中（FiO20.6）,制备中浓度氧致新生雌性小鼠BPD模型,记录吸氧后2 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠体重,应用HE染色观察不同时间点HE染色肺组织病理改变,免疫组化技术观察TGF-β1蛋白表达水平。结果：实验组小鼠体重吸氧7 d后明显降低,HE染色下正常肺泡结构消失、肺泡融合、肺泡间隔增厚。高氧暴露72 h后,TGF-β1的表达升高,随着吸氧时间的增长TGF-β1的表达逐渐升高。结论：持续较高浓度吸氧可致新生雌性小鼠生长障碍和肺泡化阻滞,出现类似人类支气管肺发育不良的肺部改变。TGF-β1在肺纤维化的发生和持续过程中均发挥重要作用。     

高氧吸入后新生鼠肺组织一氧化氮及氧自由基的动态变化

目的探讨持续吸入高氧后新生大鼠肺组织病理和一氧化氮(NO)及氧自由基的动态变化规律。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸入(90±5)%的高氧和空气,于1、3、7、14、21d,动态观察其肺组织病理学改变以及NO、MDA含量和SOD活性。结果肺形态学:吸高氧3d时炎性细胞渗出,7d时肺间隔增宽,终末气腔明显扩张,小肺泡数量减少,14和21d间质增生、肺泡化降低越来越明显;NO水平:在7、14和21d,高氧组水平高于空气组,数值分别为(99.38±7.80)vs(88.78±8.00),P<0.05;(128.18±33.78)vs(93.30±16.73),P<0.05;(170.66±34.00)vs(106.37±25.11),P<0.01;MDA含量:高氧组在3、7和14d高于空气组,数值分别为(28.10±2.03)vs(22.11±1.25),P<0.05;(30.82±4.17)vs(19.91±2.17),P<0.01;(26.27±3.78)vs(22.56±2.35),P<0.05;SOD的活性,在吸高氧7、14和21d时高于空气组(213.87±18.58)vs(185.55±18.79),P<0.05;(219.81±4.17)vs(19.91±2.71),P<0.01;(251.09±15.10)vs(194.56±8.12),P<0.01。结论持续吸入高氧可致新生大鼠发生与人类BPD类似的病理改变;肺组织的自由基损伤,可能在疾病发生、发展过程中起重要作用。     

高氧对新生鼠视网膜血管的影响

目的观察高氧对新生鼠视网膜血管的影响。方法新生Wistar大白鼠40只,建立高氧诱导的新生鼠模型,心脏墨汁灌注进行视网膜形态学观察,并进行视网膜主干血管直径测量、视网膜周边血管复盖率测定及视网膜新生血管计数。结果视网膜主干血管直径高氧组明显小于空气对照组（P〈0.01）;视网膜周边血管复盖率和视网膜新生血管数量高氧组明显高于空气对照组（P〈0．01）。结论高氧诱导视网膜血管的改变可能是早产儿视网膜病变的病因之一。     

Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响

目的：探讨Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular trap,NET）形成的影响及可能的调控机制。方法：采用50 ng/mL Wnt5a刺激人中性粒细胞3 h,以1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS作为阳性对照,采用免疫荧光技术观察NET的形成,Sytox Green荧光法对胞外DNA进行定量,采用流式细胞术检测细胞产生的活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Western blot分析信号分子磷脂酰肌醇三激酶（phosphoinositide 3?kinase,PI3K）/Akt和丝裂原活化蛋白激酶1/2（mitogen?activated protein kinase1/2,MEK1/2）、细胞外信号调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2）表达水平的变化。结果：Wnt5a刺激人中性粒细胞后,可观察到NET的形成和胞外DNA数量的增加（P < 0.05）,ROS水平较刺激前明显增高（P < 0.05）,Western blot检测显示,PI3K/Akt和MEK1/2、RK1/2磷酸化水平增高（P < 0.05）。结论：Wnt5a可能通过PI3K/Akt、MEK1/2、ERK1/2磷酸化,调控ROS生成,进而促进人中性粒细胞形成NET。     

重组人β防御素-2基因对支气管肺发育不良新生鼠肺泡及肺血管发育的影响

目的研究重组人β防御素-2（humanβdefensin-2,hBD2）对高氧诱导支气管肺发育不良（BPD）新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和hBD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型,hBD2组于第4天气管穿刺注入1×107/ml含有hBD2编码基因的重组腺病毒25滋l,空载体组注入等量空载体腺病毒。于第7、14天采集肺组织标本,qPCR检测肺组织hBD2mRNA表达;比较各组大鼠肺组织形态学变化,测定肺泡辐射状计数（RAC）和平均内衬间隔（MLI）;免疫组化测定肺组织血管内皮生长因子（VEGF）表达,ELISA法测定肺组织炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。结果梯度稀释法测定病毒滴度为1×109/ml,用稀释液稀释100倍得到1×107/ml。在大鼠出生后第7、14天,与hBD2组比较,空气组、高氧组、空载体组大鼠hBD2mRNA表达水平均明显为低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;第7、14天,高氧组和空载体组大鼠的RAC、MLI、AOD值、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平与空气组、hBD2组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HE染色及免疫组化染色结果显示高氧暴露后大鼠肺泡及肺血管发育受阻,hBD2组大鼠肺泡和肺血管发育改善。结论hBD2基因治疗可促进高氧诱导BPD新生鼠的肺泡及肺血管发育,并减轻肺部炎症。     

中性粒细胞胞外诱捕网捕杀病原体的作用

中性粒细胞是人体先天免疫系统的重要效应细胞,具有细胞内与细胞外杀灭病原体的途径.活化中性粒细胞能形成胞外诱捕网(NETs)构成细胞外杀灭途径.NETs由染色质与颗粒(源性)蛋白质构成.NETs对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌,以及真菌有捕获与杀灭作用,对利什曼原虫、牛艾美耳球虫等寄生虫也有捕获与杀灭作用.     

基于中性粒细胞外诱捕网探讨硫化氢对脓毒症心肌病的影响及作用机制

目的：基于中性粒细胞外诱捕网探讨硫化氢(H₂S)对脓毒症心肌病的影响及作用机制。方法：采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症心肌病模型,将48只SPF级CLP大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组(模型组)、H₂S给药(NaHS,内源性H₂S供体)组、H₂S抑制剂(PAG,内源性抑制H₂S剂)组。造模完成后,给药组大鼠通过腹腔注射给药,模型组和假手术组大鼠予以注射等剂量的生理盐水,24h后检测各组大鼠H₂S水平,心肌酶指标及病理改变、心肌炎症因子水平、中性粒细胞外诱捕网形成相关因子GSDMD、MPO、CitH3。结果：与假手术组相比,模型组大鼠H₂S水平明显降低,心肌损伤更显著,予以腹腔注射硫氢化钠后,相较于模型组,H₂S给药组大鼠血清H₂S水平增加,且中性粒细胞外诱捕网相关蛋白GSDMD、MPO、CitH3表达减少,炎症因子水平降低,以上改变可被H₂S抑制剂逆转。结论：外...     

支气管肺发育不良新生兔肺组织中转化生长因子β1的表达

目的:探讨高浓度氧并机械通气致新生兔支气管肺发育不良(BPD)中肺组织转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA及蛋白表达的变化.方法:120只新生兔随机分为4组,每组30只.A组给予高吸气峰压(2.45 kPa)机械通气,B组给予中吸气峰压(1.77 kPa)机械通气,C组给予低吸气峰压(0.98 kPa)机械通气,机械通气中均吸入高浓度氧(体积分数90%).A、B、C组各分为3个亚组,每个亚组10只,通气时间分别为1 h、3 h、6 h,正常对照组(D组)不做任何处理.通气结束,颈动脉放血处死动物.分别应用RT-PCR及免疫组织化学方法测定肺组织TGF-β1 mRNA 及蛋白的表达.结果:高浓度氧并机械通气处理后,TGF-β1蛋白表达3 h增加,6 h达高峰,肺组织TGF-β1 mRNA 1 h增加,3 h达高峰, A组增加较B组、C组明显,均高于D组(P<0.05).结论:高浓度氧并机械通气诱发的BPD中存在TGF-β1的过度表达,其机制可能与抑制肺泡的发育成熟有关.     

不同浓度氧暴露不同时间对新生鼠肺组织一氧化氮生成的影响

目的研究新生鼠暴露于不同浓度氧不同时间肺组织一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的变化.方法四组新生鼠分别暴露于>95%O2、60%O2、40%O2和正常空气(21%O2)中,取暴露12、24、48和72h的肺组织,硝酸还原酶法检测肺组织匀浆中NO含量,免疫组化研究eNOS和iNOS的表达,并采用MIG2000图像分析测量系统进行半定量分析.结果各时相点新生鼠肺组织NO含量、eNOS和iNOS表达与吸氧浓度呈显著正相关(P<0.01),3个高氧组和正常空气对照组NO含量、eNOS和iNOS的表达在部分或全部时相点有显著差异(P<0.05,P<0.01).结论新生鼠暴露于不同浓度氧不同时间对肺组织NO含量、eNOS和iNOS表达均有影响,过量的内源性NO可能与高氧肺损伤有关.     

中性粒细胞数在高氧肺损伤早产鼠肺泡内的变化

目的：探讨早产鼠吸入高浓度氧所致肺损伤时肺泡内中性粒细胞（PMN）数量的变化。方法：生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数〉900 mL/L,两组分别于实验进行24 h、3、5、10、14 d取肺组织观察病理变化,肺泡灌洗获取肺泡灌洗液（BALF）,离心,取沉淀做PMN计数。结果：①空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d起可见小血管扩张、充血,肺泡及间隔内有炎性细胞浸润,肺泡腔内有红细胞渗出;随着吸氧时间延长,肺间隔增厚,大量PMN浸润,肺发育受阻,肺泡简化。②从第3天起,高氧组BALF中PMN增多,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：PMN参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症细胞。