白屈菜对体外人食管癌细胞的作用

本文以形态观察、分裂指数、生长曲线,集落形成为观察指标,研究了中药白屈菜对体外人食管癌细胞(Eca—109)的作用。结果表明,白屈菜对食管癌细胞具有较强杀伤作用。其0.1、0.2mg/ml作用两天的抑制率分别为55%和61%:而同浓度的4—Fu的抑制率分别为51%和68%。白屈菜在1～2mg/ml作用两天时对109细胞的有丝分裂有显著抑制作用;并使109细胞完全丧失再繁殖能力,其对食管癌细胞的杀伤作用随药物浓度的增大和作用时间的延长而增强。     

金荞麦根体外培养人肿瘤细胞的抗癌研究

利用直接杀伤细胞法，集落培养抑制法及DNA前体物质参入法研究金荞麦根对体外培养的多种人癌细胞的抗癌作用。结果：此药在1g·L^-1时对多种人癌细胞的杀伤率均超过一个对数杀灭，浓度降低至0.125g·L^-1的杀伤率仍接近一个对数杀灭达74.3％～92.1％，金荞麦根中的提取物具有明显抗癌作用，其浓度为0．1，0.05g·L^-1对多种癌细胞的集落抑制率达100％，浓度为0．0125g·L^-1时抑制率达75．1%～89.2％，再用^3H-TdR标记法观察发现，金E能明显抑制癌细胞内的核酸代谢，其抑制作用与同浓度的阳性对照氟尿嘧啶近似。     

肝力注射液逆转人肝癌细胞获得性多药耐药的体外研究

目的研究肝力注射液体外逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。方法MTT法检测肝力注射液对人肝癌BEL-7402/5-Fu耐药细胞株的增殖抑制率及对5-Fu获得性多药耐药的逆转指数,倒置显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞内阿霉素荧光强度。结果人肝癌BEL-7402/5-Fu细胞株对临床常用化疗药物显示出不同程度的交叉抗药性,肝力注射液(以苦参碱计)在0.230、0.115、0.058mg/mL3个质量浓度对人肝癌BEL-7402耐药细胞株72h的增殖抑制率分别为(9.25±2.38)%、(8.46±1.90)%、(4.23±2.05)%,对5-Fu的逆转指数分别为5.50、3.83、2.25,肝力注射液在0.230mg/mL质量浓度预处理细胞2h能提高细胞内阿霉素的量约38.61%。结论肝力注射液在体外具有逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。     

聚桂醇对人肝癌HepG2细胞增殖及迁移影响的体外研究

目的体外探讨聚桂醇对人肝癌HepG2细胞的生长、迁移影响及血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控。方法应用MTS比色法观察不同浓度的聚桂醇对人肝癌细胞系细胞的生长抑制作用,并观察细胞在各时间点的抑制率;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力的变化;用细胞划痕实验观察对肝癌细胞迁移的影响;Western blot检测VEGF蛋白的表达变化。结果聚桂醇以剂量依赖的方式抑制HepG2细胞生长,0、20、40、60及80μg/ml聚桂醇对肝癌细胞的生长抑制率分别为0、26.78%、35.37%、51.52%和67.15%(P<0.05);聚桂醇能抑制肝癌细胞的克隆形成、迁移及VEGF蛋白表达,且抑制VEGF蛋白表达跟作用时间呈正相关。结论聚桂醇能抑制肝癌细胞增殖及迁移,影响VEGF蛋白表达。     

双脱水二乙酰卫矛醇对人肝癌细胞生长影响的研究

目的 探讨双脱水二乙酰卫矛醇(1,2：5,6-Dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)对肝癌细胞生长的影响。方法 在培养的人肝癌细胞SMMC-7721中,加入DADAG分别作用1、2、3、4d,用MTT法检测细胞生长情况。结果 加入浓度为16．7μg／ml的DADAG作用肝癌细胞1、2、3、4d后,肝癌细胞的生长抑制率分别为23、8％、35．7％、33．1％和50、8％。镜下可见细胞形态变圆、固缩等现象。表明细胞生长受到抑制。结论 DADAG在体外具有明显的抑制肝癌细胞生长的作用。     

E1B缺陷腺病毒dl1520联合化疗药物DDP体外对鼻咽癌细胞杀伤及诱导凋亡作用

目的探讨E1B-55KDa缺陷腺病毒dl1520与DDP联合体外对鼻咽癌细胞的杀伤及诱导凋亡作用。方法采用MTT法体外测定细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果MOI(感染复数)=0.032、0.16、0.8、4、20、100时dl1520对CNE-2细胞的生长抑制率分别为2.78%、7.41%、10.19%、24.07%、45.37%、67.59%,而dl1520+DDP的抑制率分别为29.63%、32.41%、40.74%、52.78%、66.67%、74.07%,P<0.01;1.5μg/mlDDP24h诱导CNE-2细胞凋亡的比例为1.7%,dl1520在MOI=0.1、1、10、100时诱导的凋亡比例分别为1.2%、1.3%、14.1%、2.7%,而当dl1520与DDP联合后诱导的凋亡比例分别为1.8%、3%、18%、3.2%。结论dl1520与DDP联合可显著增强DDP对CNE-2细胞的杀伤及诱导细胞凋亡作用。     

双脱水二乙酰卫矛醇对3种肝癌细胞生长的影响

目的:探讨双脱水二乙酰卫矛醇(DADAG)对3种人肝癌细胞生长的影响.方法:在培养的人肝癌细胞HLE、BEL-7404和SMMC-7721中,加入DADAG作用1、2、3、4 d后,用MTT法检测细胞生长情况.结果:DADAG对不同肝癌细胞其半数抑制浓度(IC50)不同,HLE为5.39 mg/L;BEL-7404为7.49 mg/L;SMMC-7721为14.30 mg/L.加入浓度为8.0 mg/L的DADAG作用4 d后,HLE的生长抑制率分别为31.48%、16.05%、34.86%和48.20%;BEL-7404的生长抑制率分别为26.32%、25.88%、17.86%和29.40%;而加入浓度为16.7 mg/L的DADAG作用4 d后,SMMC-7721的生长抑制率分别为23.81%、36.62%、33.15%和50.83%.镜下可见药物作用后细胞形态变圆、固缩等现象.结论:DADAG在体外具有明显的抑制肝癌细胞生长的作用.     

复方半枝莲胶囊体外抗肿瘤作用的实验研究

目的观察复方半枝莲胶囊体外抗肿瘤作用。方法采用活细胞计数法、MTT法、集落形成试验观察其对人肝癌细胞、人宫颈癌Hala细胞及人胃癌细胞的体外抑瘤作用。结果复方半枝莲胶囊对上述三种人癌细胞的生长增殖曲线具有明显的抑制作用；对三种人癌细胞降解MTT半数抑瘤浓度（IC50）分别为1．05mg／mL、0．75mg／mL、1．08mg／mL对三种人癌细胞的集落形成有明显的抑制作用，最大抑制率分别为45．16%、68．42%、45．31％。结论复方半枝莲胶囊体外具有明显的抗肿瘤活性。     

不同浓度DMSO对胃癌细胞生长的影响

目的研究不同浓度二甲基亚砜(DMSO)对胃癌细胞生长的影响.方法将0.05%～2.0%的DMSO加入胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,3H-TdR掺入试验测定对细胞DNA合成的影响,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期.结果 0.05%～0.1%的DMSO对胃癌细胞SGC-7901存活率、DNA合成无明显影响,0.2%～2.0%的DMSO作用胃癌细胞后,细胞存活率下降、DNA合成受抑制,G0/G1期细胞比例增高,S期、G2/M期比例下降.结论 DMSO浓度>0.2%时能明显抑制胃癌细胞生长,浓度<0.1%对细胞生长无明显影响.     

苦参碱联合化疗药物对人肺癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨苦参碱对SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞系的抗增殖作用以及不同浓度苦参碱与化疗药物联合应用时的协同效应。方法：应用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测不同浓度苦参碱以及苦参碱与化疗药物联合应用对SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞生长的抑制作用,波长定于570nm,测定光密度（A值）并计算其抑制率。结果：不同浓度的苦参碱在体外对人肺腺癌细胞均有抑制作用,其抑制率与浓度呈正相关。0.1倍血药峰值浓度（peak plasma concentration,PPC）及1倍PPC的苦参碱分别与化疗药物（1倍PPC）联用,体外对人肺腺癌细胞的抑制率均显著高于单用化疗药物。结论：苦参碱在体外对SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞有直接的抑制作用,该药与化疗药物联合应用有协同抗肿瘤效应。     

Expression of TN4 gene and its role in human hepatocarcinogenesis from Qidong, a liver cancer risk area

Background We investigated the expression and role of TN4 in the oncogenesis of human hepatocellular carcinoma (HCC) from Qidong which is a HCC risk area.Methods The expression of TN4 in HCC was observed using immunohistochemical staining (IHC). TN4 levels were manipulated in human liver cancer cell SMMC7721, using pcDNA3.1 eukaryotic expression constructs designed to express the complete TN4 cDNA. The biological changes of the cells were observed before and after transfection of TN4 and the change of gene expression was analysed by atlas cDNA expression array. Results Among 100 pairs of samples of HCC, TN4 down-regulation expression and up-regulation expression positive rate were 81% (81/100), 19% (19/100), respectively (P&lt;0.01). TN4 protein was mainly localized in cytoplasm and membrane. The positive rate of TN4 were 10% (3/30), 100% (70/70) in lymph node metastasis and no lymph node metastasis, respectively (P&lt;0.01).　The growth rates of the derivative SMMC7721-TN4 cell lines were decreased in comparasion with that of normal SMMC7721 cells and pcDNA- SMMC7721. Some gene expression was changed before and after transfection of TN4. At 30 days of post-implantation of SMMC7721-TN4, SMMC7721-pcDNA3, SMMC7721 group produced tumors of (301.9±143.4) mm3, (2418.7±362.8) mm3, (2317.4±587.8) mm3, respectively, (P&lt;0.01). Tumor inhibiting rate was 82.4% in TN4 transfection group. Sections of tumors were observed for their degree of tissue necrosis and there was higher degree of necrosis in tumors of the TN4-SMMC7721 cell group than those of the SMMC7721, SMMC7721-pcDNA groups.Conclusions TN4 may play an important role in the oncogenesis of human HCC, especially in Qidong, the HCC risk area and TN4 could be a candidate tumor suppressor gene for HCC.     

聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响

目的:研究聚焦超声对肝癌细胞SMMC7721增殖能力的影响,初步探讨产生该影响的机制.方法:以剂量为0.8MHz20W 5s的聚焦超声(该剂量照射过的SMMC7721细胞可保持70%的存活率)照射处于对数生长期的SMMC7721细胞,用免疫组化法及原位杂交法观察SMMC7721生化及基因表达的变化.结果:聚焦超声抑制SMMC7721细胞VEGF和PCNA蛋白的表达(P＜0.05)以及VEGF和PCNA mRAN的表达(P＜0.05).结论:用聚焦超声照射后存活的SMMC7721细胞增殖能力减弱,其机制可能是通过抑制VEGF和PCNA mRNA的表达,使VEGF和PCNA蛋白表达减少来实现.     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

甘氨脱氧胆酸钠对人肝癌细胞端粒酶活性及其hTERTmRNA表达的影响

目的探讨甘氨脱氧胆酸钠（glycodeoxycholic acid,GDCA）对肝癌SMMC7721细胞端粒酶活性以及hTERTmRNA表达影响。方法采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性;应用RT-PCR检测hTERTmRNA的表达。结果GDCA作用肝癌SMMC7721细胞后,端粒酶活性与hTERTmRNA表达均降低,GDCA200、400μmol／L处理组与对照组端粒酶活性（A450nmOD值）分别为（0．140±0．04）、（0．077±0．01）、（0．2484-0．05）,差异有统计学意义（P〈0．05）,抑制率为43．5％和69．0％。hTERTmRNA表达明显降低,相对表达率分别为1．33、0．59、1．89。结论甘氨脱氧胆酸钠抑制肝癌SMMC7721细胞端粒酶活性,且下调hTERTmRNA的表达。     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL     

B7基因转染联合LAK细胞治疗肝癌的体外研究

目的：探讨体外诱导的LAK细胞对B₇基因转染的肝癌细胞的杀伤作用。方法：构建含人B_7-1基因cDNA的真核表达载体pRCCMV-B_7-1,脂质体介导转染法将pRCCMV-B_7-1转入人肝癌细胞系SMMC7721,G418筛选转染肝癌细胞（B₇⁺SMMC7721）。RT-PCR、流式细胞仪鉴定目的基因表达。MTT比色试验体外检测LAK细胞对B_7-1转染肝癌细胞的杀伤活性。结果：B₇⁺SMMC7721细胞稳定表达B₇基因。LAK细胞对B₇⁺SMMC7721细胞的杀伤活性明显高于野生型SMMC7721者,结果有统计学意义。结论：B₇基因体外转染人肝癌细胞后可表达有活性的B₇分子,LAK细胞对表达B_7-1的肿瘤呈现增强的杀伤作用。     

沉默CRAF基因表达对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的：探讨肝癌细胞中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（CRAF）高表达对肝细胞癌（HCC）侵袭和转移的影响,并阐明其机制。方法：以CRAF高表达的SMMC-7721细胞作为研究对象,采用shRNA技术下调CRAF表达。将SMMC7721细胞分为对照组和沉默组（shCRAF#1转染组和shCRAF#2转染组）。细胞划痕法观察各组SMMC7721细胞创口愈合指数,Transwell实验检测各组SMMC-7721细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组SMMC7721细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平。结果：细胞划痕实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的创口愈合指数明显降低（P<0.05）。Transwell实验,与对照组比较,沉默组SMMC7721细胞的穿膜细胞数降低（P<0.05）。Western blotting法检测,沉默组细胞中MMP-2和MMP-9表达水平明显低于对照组（P<0.05）。结论：下调CRAF可以通过抑制MMP-2和MMP-9表达抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和迁移。     

NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721增殖的影响

目的研究NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的影响。方法常规培养SMMC7721细胞,采用SN50（36μmol/L）阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内p65蛋白水平,MTT比色法检测细胞生长增殖,计算肿瘤细胞生长抑制率,PI染色、流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,观察NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721细胞周期及凋亡的影响。结果肝细胞癌SMMC7721细胞核内存在较高水平的p65蛋白。经SN50阻断后,MTT测定显示细胞的增殖受到明显抑制,并随时间的延长而愈渐明显,24、48、72h后细胞增殖抑制率分别为22.77%、33.33%和38.89%,与阻断前相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测发现实验组G1期细胞比例高于对照组差异有统计学意义（69.5% vs 56.5%,P〈0.05）,S期细胞比例明显降低,与阻断前相比差异有统计学意义（11.1% vs 28.6%,P〈0.05）,而细胞凋亡率在实验组为38.3%,对照组仅为23.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论NF-κB信号通路阻断诱导细胞周期于G1期停滞和细胞凋亡,从而抑制了SMMC7721细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与了肝细胞癌的生长增殖与发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给肝细胞癌带来新的治疗选择。     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性