uPA及其抗uPA抗体和其他因素对U937细胞uPAR的影响

目的"观察uPA、抗uPA抗体等因素对U937细胞表达uPAR的影响. 方法"以受体放射配基结合分析法(RBA)测定U937细胞的uPAR,并用uPA、抗uPA抗体、PMA、TNF-α、IFN-γ和放线菌素D刺激培养细胞.结果"PMA、TNF-α、IFN-γ都能使细胞表达uPAR增多,放线菌素D具有抑制作用.抗uPA抗体使PMA非刺激或刺激细胞的uPAR数减少,刺激细胞的粘附贴壁性能下降.外源性uPA能增强PMA的刺激作用. 结论"提示单核巨噬细胞或肿瘤细胞可能通过uPAR表达变化及与uPA间相互作用,调节纤溶活性及粘附性,使之表现出不同的浸润或转移特性.     

凝血酶对U937细胞uPAR mRNA表达的影响

目的 研究凝血酶通过凝血酶受体（ＴＲ）对细胞ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ表达的影响。方法 在凝血酶、灭活凝血酶、和抗ＴＲ小肽多抗等作用下,以ＲＴ－ＰＣＲ法测定培养Ｕ９３７细胞ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的表达量。结果 凝血酶增强ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ表达呈现凝血酶剂艇时间的依赖性。其作用机制与凝血酶和细胞膜上ＴＲ间的结合、以及凝血酶的蛋白水解活性有关。高浓度凝血酶或中等浓度凝血酶在延长作用时间长,对Ｕ９３７细胞ｕＰＡＲｍ     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,对原癌基因c-fos和bc l-2蛋白质以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用。方法以细胞计数法,流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。在凝血酶及葛根素作用24 h后,用W estern印迹法检测c-fos和bc l-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TR mRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值(细胞计数凝血酶组8.64×104/m l±0.12×104/m l,对照组4.20×104/m l±0.11×104/m l,P<0.05),且凝血酶浓度在0.1~1.0 U/L之间呈剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bc l-2蛋白的表达(葛根素浓度为1.5×10-3mol/L时,抑制率分别为42.6%±5.2%、58.2%±7.9%、44.5%±7.5%和39.6%±6.4%,均P<0.05);高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TR mRNA上调(抑制率为17.6%±1.7%,P<0.05)。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bc l-2蛋白有关,并部分与其抑制TR mRNA表达有关。     

反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,探讨反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 .方法 :通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ,用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体ODNs 抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ,用Western -Blot检测反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 .结果 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 0 5 ) ,明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 .结论 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,其抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 ,特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达来完成 .     

放射配基结合分析法对不同细胞uPAR表达的比较研究

目的测定和比较不同正常细胞及人类肿瘤细胞膜上尿型纤溶酶原活化素受体(uPAR)的表达,了解肿瘤细胞表达uPAR的基本性质.方法建立并应用受体放射配基结合分析法(receptor-radio-ligandbindingassay,RBA)测定细胞膜上的uPAR.结果成纤维细胞经不同处理,U937细胞以PMA处理不同时间,测定uPAR的结果无论表达量或平衡解离常数(Kd)的变化均与文献一致.对正常细胞和肿瘤细胞株共10种测定膜上uPAR,结果肺癌、肝癌等5种人类肿瘤细胞比人成纤维细胞、牛内皮细胞等正常组织细胞的表达数明显多.结论本研究进一步证明了uPAR表达增强是多种恶性肿瘤细胞的一种特点.     

灯盏花素与反义凝血酶受体基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的为探讨灯盏花素（breviscapine，Bre）与反义凝血酶受体寡核苷酸（ atisense thrombin receptor oligo - deoxy- nucleotides, Antisense TR ODNs）对凝血酶（Thrombin，Ⅱa）诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制．方法选用贴块法培养的第4-6代Sprague-Dawley（SD）大鼠胸主动脉中层平滑肌细胞，     

γ干扰素对低密度脂蛋白免疫复合物诱导U937细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:探讨γ干扰素(IFN-γ)对低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)诱导U937细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响.方法:采用不同浓度的LDL-IC诱导不同浓度的IFN-γ预处理的U937细胞,通过RT-PCR分析MMP-1 mRNA表达水平的变化.结果:正常U937细胞MMP-1表达量低.LDL-IC可增强U937细胞MMP-1mRNA的表达,而单独IFN-γ处理对MMP-1表达无影响;LDL-IC对经IFN-γ预处理的U937细胞作用效果较未经处理的更强(P<0.01),并具剂量效应.结论:IFN-γ可增加LDL-IC诱导的U937细胞MMP-1表达,加速动脉粥样硬化的发生、发展.     

苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞增殖能力的影响

目的:观察凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓分离EPCs,培养7 d后收集贴壁细胞并加入不同浓度凝血酶(10-2,10-1,1,10,100 U/mL)干预一定时间(6,12,24,48 h)。CCK-8试剂盒检测EPCs增殖。实时定量PCR检测凝血酶刺激以及NF-κB抑制剂预处理以后EPCs的VEGF mRNA表达变化,ELISA法检测其分泌量变化。结果:凝血酶干预组的细胞增殖数均高于对照组,10 U/mL凝血酶作用24 h对内皮祖细胞数量影响最为显著(P<0.05)。与对照组相比,凝血酶刺激后VEGFmRNA表达及分泌量均增高,使用NF-κB抑制剂预处理后可以抑制凝血酶的这种作用。结论:凝血酶可以通过NF-κKB途径上调VEGF的表达,促进EPCs增殖。     

PKD3上调HEK293中uPAR的表达及机制

目的 研究蛋白激酶D 3(PKD3)对人胚肾上皮细胞系HEK293细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)表达水平的影响及其机制,以阐明PKD3调控uPAR表达的重要作用.方法 首先在HEK293细胞中过表达PKD3,并以佛波酯(PMA)刺激24 h,而后采用实时定量PCR扩增PKD3、uPAR cDNA,并使用2-△△Ct方法比较其相对表达量的变化.然后在HEK293细胞中转染β-连环蛋白野生型质粒,并以PMA刺激1 h,用免疫沉淀法检测PKD3与β-连环蛋白之间的相互作用.结果 在转染的HEK293细胞中PKD3过表达,而且过表达PKD3可明显上调PMA诱导的uPAR mRNA表达水平.同时在PMA刺激作用下,可明显增强HEK293细胞中PKD3与β-连环蛋白之间的相互作用.结论 PKD3可能通过与β-连环蛋白的相互作用上调uPAR表达.