灯盏细辛注射液和灯盏花素在临床应用与化学成分上的对比研究

目的通过对灯盏细辛两种主要制剂的分析,探讨灯盏细辛在心脑血管疾病等方面的物质基础.方法采用文献分析和HPLC分析方法. 结果灯盏细辛注射液与灯盏花素有相同的临床用途和截然不同的化学成分;提出了可用于中药疗效物质基础研究的"临床-化学"新研究模式. 结论咖啡酰衍生物和灯盏花素都是灯盏细辛治疗心脑血管疾病和眼科疾病的有效成分.     

灯盏细辛活性部位对神经细胞α7尼古丁受体表达的影响

目的：研究灯盏细辛活性部位对SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体（nAChR）亚单位在蛋白质水平的表达以及对抗β-淀粉样蛋白的毒性作用。方法：灯盏细辛经乙醇提取、乙酸乙酯及正丁醇萃取、再以反相硅胶柱分离等方式得到极性部位,选取一定浓度的灯盏细辛提取物处理神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）后,用Western blotting方法测定α7 nAChR蛋白水平的变化;再将能明显上调α7 nAChR蛋白水平的灯盏细辛提取物预处理SH-SY5Y细胞后,加入Aβ25-35处理,用比色法测定MTT还原率,观察灯盏细辛活性部位对细胞毒性的影响。结果：灯盏细辛醇提乙酸乙酯及正丁醇部位、以及该部位经反相硅胶柱分离的低极性部位均能显著上调α7 nAChR蛋白水平,并减弱β-淀粉样蛋白引起的细胞损伤。结论：灯盏细辛活性部位具有一定的神经保护作用,其机制之一可能与上调α7 nAChR有关。     

灯盏细辛药材的薄层色谱鉴别

目的建立灯盏细辛的薄层色谱鉴别方法。方法采用适当的方法提取灯盏细辛中的4种有效成分即3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、野黄岑苷、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸和咖啡酸,鉴别时采用薄层色谱进行。结果在供试品溶液的薄层色谱图上出现与对照药材溶液、对照品溶液色谱相应位置上相同颜色的斑点。结论薄层色谱操作简便、专属性强,可用于灯盏细辛药材的定性鉴别。     

金银花中酚酸类和黄酮类成分的黄嘌呤氧化酶抑制活性

建立基于紫外分光光度原理的微孔板筛选方法,用于金银花药材中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选,并进行抑制活性测定。通过对筛选条件优化,建立了可靠的筛选模型,并对从金银花中分离得到的20个单体化合物进行了筛选,发现8个酚酸类成分和4个黄酮类成分具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,其中3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、槲皮素和木犀草素有很好的活性,其IC₅₀分别为8.36,6.46和2.08 μmol/L。筛选结果表明,金银花中黄酮苷元的活性优于黄酮苷,双咖啡酰奎宁酸的活性明显优于单咖啡酰奎宁酸类成分,双咖啡酰奎宁酸甲酯的活性明显优于双咖啡酰奎宁酸,且双咖啡酰奎宁酸的5位取代对化合物的活性贡献最大。     

刺五加总黄酮对原代培养大鼠神经细胞损伤模型的保护作用

目的:探讨刺五加总黄酮对大鼠神经细胞脑缺血样损伤模型的保护作用及其机制。方法:采用组织培养法,以原代大鼠大脑皮层神经细胞为材料,制备缺氧损伤、一氧化氮损伤模型,检测刺五加总黄酮的抗缺血作用。结果:形态学检查发现刺五加总黄酮对2种脑缺血样损伤模型中的大鼠神经细胞具有明显保护作用,结晶紫染色也提示刺五加总黄酮可显著提高损伤模型中神经细胞的存活数。结论:刺五加总黄酮对上述大鼠神经细胞缺血损伤均有显著的保护作用。     

灯盏乙素抗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用及对p38 MAPK表达的影响

目的：探讨灯盏乙素抗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用及对p38 MAPK表达的影响及机制。方法45只健康新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺血缺氧组、灯盏乙素组（25 mg/kg）。分别于用药后第24小时、3天、7天每组处死大鼠各5只，取脑组织切片。采用TUNEL染色检测神经细胞凋亡；采用免疫组织化学染色检测p38 MAPK的表达高峰、表达变化趋势。结果缺氧缺血后海马CA1区神经细胞凋亡，p38 MAPK表达增加；灯盏乙素组神经细胞凋亡及p38 MAPK表达均减少（与同一时间点缺氧缺血组比较差异有统计学意义P<0.05）。结论灯盏乙素可能是通过抑制p38 MAPK信号通路而减少神经细胞凋亡，从而发挥脑保护作用。     

胚脑组织提取液神经营养活性成分的分析

目的通过对胚脑组织的分离纯化，分析不同组份中的神经营养物质对神经细胞的营养作用。方法：采用超滤器超滤，透析袋透析以及SephadexS-200凝胶层析方法将胚胎脑组织提取液分离纯化。得到9种不同分子量组分的脑活性因子（BCF），分别加入原代培养的新生SD大鼠大脑皮层神经细胞悬液中，培养24h和15d后以MTT微量快速自动比色法检测细胞活性。结果发现培养24h后，有5种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用，与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）；培养15d后，有4种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用，与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）。结论胚脑组织提取液可促进培养的大脑皮层神经元的成活、成熟和分化。不同的组分蛋白对神经元的作用不一样。     

三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

目的：研究三七总皂苷（PNS）对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,经不同浓度的PNS预处理后,建立氧糖剥夺（OGD）模型,2小时后复氧复糖,模拟再灌注模型。通过MTT比较神经元的存活情况,并测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的活性变化,以及Bcl-2蛋白表达的变化。结果：OGD作用120分钟后细胞活性明显下降,细胞内SOD活性下降,MDA含量升高。PNS 25、50mg/L能明显提高细胞的存活率,SOD活性回升,MDA含量趋向正常,Bcl-2蛋白含量增加。结论：PNS对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用,其保护作用可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提高Bcl-2蛋白表达有关。     

bFGF、NGF对高温影响神经细胞存活的保护作用

目的：研究高温对原代培养神经细胞存活的影响以及bFGF和NGF对高温处理后神经细胞存活的保护作用。方法：应用神经细胞原代培养、MTT、NSE-ELISA测定技术。结果：①高温处理后神经细胞活性明显降低;②外源性bFGF、NGF均不同程度地增加了神经细胞活性,其抗体均不同程度地使神经细胞活性降低,但二者联合应用神经细胞活性增加不明显;③NSE-ELISA检测结果与MTT检测结果一致,但特异性和敏感性更高。结论：外源性bFGF和NGF对高温处理后神经细胞存活具有保护作用。     

灯盏花素注射液质量评价

灯盏花素注射液为灯盏花全草中提取的黄酮类活性成分的制剂,其主要成分为灯盏花乙素(scutellarin),即野黄芩苷,主要用于治疗脑动脉硬化、脑血管栓塞、脑血管病后瘫痪、失语等症及心血管疾病等.……     

Treatment of scrapie pathogen 263K with tetracycline partially abolishes protease-resistant activity in vitro and reduces infectivity in vivo

Objective To study the possible effect of tetracycline on protease-resistant activity in vitro and infectivity in vivo of a scrapie strain 263K. Methods Scrapie pathogens were incubated with tetracycline at different concentrations for various periods of time and protease-resistant PrP signals were evaluated with proteinase K-treatment and Western blots. The preparations treated with tetracycline were intracerebrally inoculated into golden hamsters and typical TSE manifestations were noted. PrP^5c in brain tissues of the infected animals was detected by PrP specific Western blot assays. Results Protease-resistant PrP was significantly reduced in or removed from the preparations treated with tetracycline in a dose-dependant manner. Compared with the control group after incubated for 53.75±0.50 days, the preparations treated with 5 mmol/L and 20 mmol/L tetracycline prolonged the incubation time of 61.5±1.73 and 59.5±0.58 days （P〈0.05）. Conclusion Treatment of scrapie pathogen 263K with tetracycline reduces or removes its protease-resistant activity in vitro.     

不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：观察不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,探讨组方的最佳配比.方法：采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）建立PC12细胞氧糖剥夺损伤（oxygen glucose deprivation,OGD）模型,将细胞分为空白组、模型组、阳性组（尼莫地平）、辛芍药物不同配比组（灯盏细辛与赤芍质量比分别为5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5）,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和一氧化氮（N0）含量.结果：与正常组比较,模型组的细胞存活率和SOD活性显著降低（P＜0.01）,细胞LDH释放量、MDA和NO水平显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,辛芍2∶3配比组显著提升细胞存活率（P＜0.05）,同时辛芍3∶2和2∶3配比组均显著降低细胞LDH释放量以及MDA和NO水平（P＜0.05）,提高SOD活性（P＜0.05）.结论：辛芍2∶3配比对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用较好.     

浙江香茶菜属植物抗肿瘤活性成分的比较研究及药效物质的快速发现

[目的]比较香茶菜属植物体外抗肿瘤成分及作用的差异,初步阐明其抗肿瘤药效物质。[方法]制备香茶菜属植物地上和地下部分乙酸乙酯提取物,以薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)分析研究香茶菜属植物及其不同入药部位的成分差异;MTT法研究不同样品对人源乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用,筛选出具有体外抗肿瘤活性的香茶菜属植物种类及入药部位;以有效乙酸乙酯提取物与还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)共同孵育,超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)分析孵育前后成分的变化,推测其可能的抗肿瘤药效物质的化学结构类别。[结果]TLC分析显示,浙江香茶菜属不同种植物地上与地下部分之间化学成分存在差异,其中香茶菜[Isodon amethystoides(Bentham)H.Hara]、大萼香茶菜[Isodon macrocalyx(Miquel)Kud觝]与本属其他植物对比成分明显不同;对MCF-7细胞抑制作用最好的是大萼香茶菜的地上部分,半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)为8.29μg·m L-1;UPLC分析显示,该样品中存在能够与GSH结合的成分,可能为迈克尔受体分子型二萜类成分。[结论]浙江产大萼香茶菜的地上部分具有较强抗肿瘤作用,初步确定其抗肿瘤药效物质为迈克尔受体分子型二萜类成分。     

VEGF对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用及其机制

目的 观察缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞的影响,探讨外源性血管内皮细胞生长因子（VEGF）对大鼠星形胶质细胞缺氧的保护作用及其可能的机制。方法 体外原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定（胶质原纤维酸性蛋白GFAP阳性）。星形胶质细胞分别经不同时间的缺氧处理、缺氧处理前加入不同浓度（10～100ng／ml）VEGF处理以及同时加入VEGF受体Flk一1阻断剂SU1498处理后,应用光镜、细胞计数、MTT法、TUNEL标记及免疫组化技术检测星形胶质细胞形态、细胞增殖活性和凋亡、VEGF和Flk-1的表达改变。结果 纯化培养1周的细胞,经鉴定其星形胶质细胞纯度达98％;8～12h缺氧可明显诱导星形胶质细胞活化,表现为细胞胞体变大、胞突变粗、GFAP表达升高,细胞增殖活性降低、凋亡指数增加、VEGF和Flk-1表达增加;缺氧处理前20～24h加入50ng／ml VEGF可使细胞活力明显增强,细胞凋亡指数明显降低,细胞缺氧损伤明显改善;而700ng／ml SU1498可明显阻断或抑制VEGF对星型胶质细胞的缺氧保护作用。结论 缺氧可诱导大鼠星形胶质细胞反应性活化,外源性VEGF可能通过VEGF受体Flk-1发挥对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用。     

板蓝根乙酸乙酯部位抗病毒活性组分及相关化学成分研究

目的?研究板蓝根乙酸乙酯部位的抗病毒活性组分及相关成分。方法?利用溶剂法及色谱法提取分离板蓝根乙酸乙酯部位各化学组分,MTT法体外筛选各组分抗单纯疱疹病毒1（HSV-1）活性,利用UPLC-Q-TOF-MS检测乙酸乙酯部位及各组分的化学成分,运用Markview软件及Excel软件进行各组分差异性成分分析,根据统计结果得到抗病毒相关的化学成分。结果?按照化学成分的相似性,利用色谱法将板蓝根乙酸乙酯部位分为16个组分,其中8个组分具有明显抗病毒活性。UPLC-Q-TOF-MS检测到乙酸乙酯部位中的49个化学成分,并明确了它们的化学结构,在各化学组分的分析检测及差异性分析中,发现了生物碱类、有机酸和氨基酸衍生物共12个化学成分与抗病毒活性相关。结论?板蓝根乙酸乙酯部位以生物碱、有机酸、核苷、黄酮、蒽醌及氨基酸类成分为主,其中生物碱、有机酸和氨基酸衍生物与抗病毒活性密切相关。      

灯盏细辛联合氯吡格雷治疗不稳定型心绞痛疗效及其对血液学指标的影响

目的观察灯盏细辛联合氯吡格雷治疗不稳定型心绞痛的临床疗效及其对患者血液流变学指标的影响。方法将2011年9月至2013年9月收治的不稳定型心绞痛患者68例按随机分配的原则分为治疗组35例,对照组33例。对照组予以常规治疗,治疗组在对照组基础上加用硫酸氯吡格雷片、灯盏细辛注射液。3个月后观察两组心绞痛发作情况、心电图心肌缺血情况和血液流变学指标变化情况。结果治疗后观察组心绞痛缓解总有效率为94．2％（33／35）,对照组为72．7％（24／33）,两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。两组问静态心电图心肌缺血性改变情况比较差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗后两组患者血浆粘度及血沉指标均有所改善（P〈0．01）,但治疗组还能够改善纤维蛋白原、红细胞聚集指数、血小板聚集率;两组间比较,治疗组能够更明显地改善血流变学指标（P〈0．05）。结论灯盏细辛注射液联合氯吡格雷片治疗不稳定型心绞痛可减少心绞痛发作,改善微循环灌注,改善血流变学指标。     

观察补气通络汤合灯盏细辛注射液治疗脑梗塞的临床效果

目的：探讨补气通络汤与灯盏细辛注射液治疗脑梗塞的效果。方法方便选取该院2013年8月—2015年8月收治的60例脑梗塞患者作为研究对象。所有患者均接受灯盏细辛注射液治疗，同时观察组增加补气通络汤治疗。对比两组临床疗效。结果两组患者治愈率、有效率对比差异无统计学意义(P>0.05)；观察组患者无效率明显优于对照组(P<0.05)，治疗总有效率(90.0%)明显较对照组(70.0%)优良(P<0.05)。观察组生活质量综合评分(80.8±2.7)分高于对照组(65.5±2.4)分(P<0.05)。结论补气通络汤与灯盏细辛注射液治疗脑梗塞效果显著，能提升脑梗塞综合治疗效果，值得推广。     

人胚胎组织低分子活性肽协同中药有效成份的抗白血病效应的研究

目的 :研究比较几种胚胎组织中低分子抗癌活性肽协同中药有效成份抑制白血病细胞增殖的作用。方法 :采用噻唑蓝法 (MTT) ,测定四种人胚胎活性肽协同三种中药多糖作用于P388白血病培养细胞的抑癌率。结果 :不同的人胚胎组织低分子活性肽对P388白血病细胞具有不同的抑制作用 ,其中胎脑肽抑癌率为 74 16 % ,胎肝肽为 71 81% ,胎脾肽为 46 96 % ,胎盘肽为 45 49%。人胎肝、胎盘活性肽与中药有效成份的协同作用 ,可显著提高人胎肝、胎盘的抗白血病作用 ,与单纯提取物比较 ,抑制作用显著增强 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,尤其小檗胺与胎盘肽协同抗白血病作用突出 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。但是胎脾肽与三种中药均无协同作用。结论 :来自不同组织的人胚胎低分子活性肽对P388白血病细胞有不同的抑制作用 ,人胎肝、胎盘肽协同中药有效成份可提高人胚胎活性肽的抗白血病生物活性 ,增强抗癌效应 ,这一研究结果对恶性肿瘤的生物治疗有一定的意义     

EGCG对前列腺癌细胞端粒酶的抑制作用及可能的机制

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞端粒酶的抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性以及荧光定量PCR法检测人端粒酶逆转录酶mRNA的表达。结果:与对照组相比,EGCG处理组可使存活率明显降低,并随药物剂量的增加呈下降趋势(P<0.01);TRAP-PCR银染法显示,EGCG能明显抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶的活性,并呈剂量依赖性(P<0.05);荧光定量PCR法显示,被EGCG作用的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶逆转录酶mRNA的表达呈下降趋势,并呈剂量依赖性。结论:EGCG可能通过抑制癌细胞的端粒酶的活性来抑制前列腺癌细胞的生长,对癌细胞端粒酶的抑制作用可能是通过抑制端粒酶的关键调节酶-端粒酶逆转录酶来实现的。     

IL-12与IL-18在体外培养系统中诱导肿瘤特异性CTL杀伤活性的比较

目的：分别应用重组人白细胞介素12（rhIL-12）及重组人白细胞介素18（rhIL-18）在体外培养系统(CCs)中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),比较IL-18与IL-12诱导的肿瘤特异性CTL的杀伤活性，探索IL-18的抗肿瘤作用机制。方法：采用Stem Sep^TM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及DCs细胞，流式细胞仪分析细胞表型，¹²⁵I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果：在CCs中、在肿瘤抗原存在的条件下，rhIL-18和rhIL-12均能诱导产生针对U251、MCF7特异性CTL，其作用能力与rhIL-18和rhIL-12的浓度呈剂量依赖关系，但rhIL-18诱导肿瘤特异性CTL的作用明显高于rhIL-12（P<0.01）；rhIL-18和rhIL-12在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用，两者联合应用诱导肿瘤特异性CTL的能力明显高于单独应用rhIL-18和rhIL-12（P<0.01）。结论：rhIL-18和rhIL-12在CCs中均能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应，rhIL-18诱导的肿瘤特异性CTL的能力明显高于rhIL-12，两者在诱导肿瘤特异性CTL过程中具有协同作用。