长链非编码RNA LINC01106在胶质瘤组织中低表达并抑制细胞增殖与侵袭

目的：分析长链非编码RNA LINC01106在胶质瘤组织以及细胞中的表达水平,探索LINC01106抑制胶质瘤细胞增殖与侵袭能力的潜在作用机制。方法：通过肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析LINC01106在胶质瘤中的表达;采用实时荧光定量 PCR（qRT?PCR）法检测胶质瘤细胞系中LINC01106的表达水平。通过转染LINC01106小干扰RNA或者过表达质粒抑制或增高胶质瘤细胞U87中LINC01106的表达水平后,采用 CCK?8实验以及EdU实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。通过生物信息学以及体外细胞实验对LINC01106潜在的分子机制进行分析。结果：分析TCGA数据库发现LINC01106在胶质瘤肿瘤组织的表达显著降低,同时qRT?PCR结果显示,LINC01106在胶质瘤细胞系（LN229、LN308、U87以及U251）中的表达均显著低于正常对照细胞HEB;体外细胞实验表明,在U87细胞中抑制LINC01106的表达可以显著提高细胞的增殖与侵袭能力,而过表达LINC01106的效果相反。通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验发现LINC01106能够结合miR?3167并抑制其表达,而miR?3167可能靶向CBFA2T3,这可能是LINC01106 胶质瘤进展的潜在机制。结论：LINC01106在胶质瘤组织中低表达,抑制LINC01106可促进胶质瘤细胞的增殖与侵袭能力,LINC01106可能通过与CBFA2T3竞争性结合miR?3167在胶质瘤中发挥其抑癌基因的作用。     

miR-106a对胶质瘤增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA（miR）-106a对人胶质瘤细胞中腺瘤样息肉（APC）基因的靶向调控作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集2020年1月至2021年12月浙江省立同德医院减压切除的10例胶质瘤组织和10例对照组织。采用实时荧光定量PCR法检测miR-106a在胶质瘤组织和对照脑组织中、在胶质瘤LN229、U251和U87等细胞系中的表达水平并作比较。使用miR-106a抑制物转染LN229和U251细胞,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过TOP/FOP荧光素酶实验检测荧光素酶活性,采用Western blot法检测Wnt通路相关蛋白和核内β-连环蛋白（β-catenin）的表达。采用qRT-PCR和Western blot法检测APC的mRNA和蛋白表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-106a和APC的靶向关系。通过表型拯救实验检测miR-106a靶向APC对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-106a在胶质瘤组织和细胞系中高表达。抑制miR-106a表达降低胶质瘤细胞的增殖水平,提高胶质瘤细胞的凋亡水平,并抑制了Wnt/...     

长链非编码RNA FAS-AS1对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA FAS-AS1在胶质瘤细胞中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法 使用qRT-PCR分别检测临床标本、胶质瘤细胞系中FAS-AS1表达丰度.采用FAS-AS1质粒转染人脑胶质瘤细胞系U251、SF126细胞,qRT-PCR检测转染效率,通过MTT形成实验及克隆实验检测FAS-AS1对细胞增殖能力的影响;通过Transwell实验检测FAS-AS1对细胞迁移影响;通过基质胶构建生物膜结合Transwell实验检测FAS-AS1对胶质瘤细胞侵袭的影响.结果 胶质瘤组织及人脑胶质瘤细胞系中FAS-AS1的表达下调;FAS-AS1质粒转染成功构建过表达FAS-AS1胶质瘤细胞模型,FAS-AS1过表达抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭.结论 FAS-AS1在胶质瘤中表达下调并能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭.     

沉默lncRNA RNF185-AS1通过靶向miR-637/HMGA1抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)RNF185-AS1调控微小RNA-637(miR-637)对胶质瘤细胞增殖、侵袭的作用机制。方法 通过GEPIA数据库在线分析胶质瘤组织和癌旁组织中RNF185-AS1的表达水平。qRT-PCR检测胶质瘤细胞系(SNB-19、LN382、U87MG、U251)和脑星型胶质正常细胞HEB中RNF185-AS1的表达水平。以U251细胞为研究对象,分别转染sh-Con对照质粒(sh-Con组)和sh-RNF185-AS1质粒(sh-RNF185-AS1组)。qRT-PCR验证RNF185-AS1的沉默效率。MTT实验和Transwell侵袭实验检测沉默RNF185-AS1后U251细胞增殖活力和侵袭情况。qRT-PCR与双荧光素酶报告基因实验检测RNF185-AS1和miR-637的靶向关系。qRT-PCR和Western blot检测高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的表达。结果 胶质瘤组织中RNF185-AS1的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。胶质瘤细胞系中RNF185-AS1的表达水平明显高于脑星型胶质正常细胞(P<...     

长链非编码RNA LINC01116靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤进程

目的 观察脑胶质瘤细胞中长链非编码RNA LINC01116表达变化及shRNA转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,同时探究LINC01116可能参与的调节方式。方法 取神经胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172细胞及正常星形胶质细胞(NHA),采用Real TimePCR法检测LINC01116表达。随后胶质瘤细胞分别加入或不加入sh-RNA转染,CCK-8实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测LINC01116可能的调节方式,并采用双荧光素酶报告基因验证RNALINC01116与has-miR-4693-3P的调控作用。结果 LINC01116在胶质瘤细胞中高表达,其抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和胶质瘤侵袭。CCK8实验显示,sh-LINC01116处理的胶质瘤细胞存活率显著低于未转染的(P＜0.05)。细胞划痕实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.01)。Transwell实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞穿膜细胞数明显低于对照组(P＜0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示LINC01116k可靶向调控has-miR-4693-3P。结论 胶质瘤多种细胞中LINC01116表达升高,shRNA转染能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力,同时LINC01116可靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤的进程。     

LINC00598靶向调控miR-381-3p影响宫颈癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00598通过调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响宫颈癌细胞生物学行为的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa、HCC94和人正常宫颈上皮细胞H8中LINC00598的表达。选取LINC00598表达最高的细胞系,分别转染无意义阴性对照序列(对照组)和LINC00598小分子干扰RNA(siRNA组)。qRT-PCR检测宫颈癌细胞中LINC00598表达。MTT法和Transwell侵袭实验分别检测宫颈癌细胞增殖情况和侵袭情况。DIANA数据库预测LINC00598的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00598与靶基因的调控关系。qRT-PCR和Western blot法检测LINC00598对靶基因表达的影响。结果 宫颈癌细胞系中LINC00598表达显著高于人正常宫颈上皮细胞H8(P<0.05),LINC00598表达最高的细胞系是HeLa(P<0.01)。对照组和siRNA组LINC00598表达分别为1.05±0.19和0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05)和侵袭(P<0.01)。LINC00598可靶向结合miR-381-3p(P<0.01)。与对照组比较,沉默LINC00598表达可显著促进miR-381-3p的表达(P<0.01),抑制成纤维细胞生长因子7(fibroblast growth factor 7,FGF7)基因的表达(P<0.01)。结论 LINC00598在宫颈癌细胞系中高表达,沉默LINC00598表达能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能是靶向上调miR-381-3p表达实现的。     

敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后,研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 本研究采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况.并在此基础上构建了ATB表达载体shRNA ATB 质粒,利用其转染人胶质瘤U87细胞株,获取低表达ATB的U87细胞.应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响;应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响;应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 qRT-PCR结果显示,与正常人脑胶质细胞HEB相比,人脑胶质瘤细胞系U87中ATB 表达明显上调(P<0.01);与shRNA对照组相比,转染了shRNA-ATB实验组能显著减少ATB 水平(P<0.01);细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较shRNA对照组明显降低(P<0.01);MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率明显低于shRNA对照组(P<0.01).此外,Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01).结论 靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭,表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点.     

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的：观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：运用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中 miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;qRT-PCR检测miR- 26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的 影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人 神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影 响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加, miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以 直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降 低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相 比肿瘤的质量和体积都变小。结论：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增 加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。     

MiR-586对胶质瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-586在非肿瘤脑组织（NBT）及胶质母细胞瘤组织中的表达。同时检测miR-586在人正常星形胶质细胞（NHA）及4株胶质瘤细胞株（U87、U251、T98、LN229）中的表达。在胶质瘤细胞株中通过转染miR-586 inhibitor下调miR-586的表达后,采用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测胶质瘤细胞周期阶段。结果 miR-586在胶质母细胞瘤组织中表达显著比非肿瘤脑组织中高（P<0.001）;在胶质瘤细胞系中,U87中的表达显著升高（P<0.01）。CCK-8实验结果显示:U87细胞转染miR-586 inhibitor后细胞增殖能力显著下降（P<0.01）。此外,miR-586 inhibitor转染U87后诱导细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.01）。结论 miR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,抑制miR-586的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。     

胶质瘤中LINC01152的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA LINC01152在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 应用LncSpA V2.0和GEPIA数据库分析LINC01152在胶质瘤中的表达；qRT-PCR检测10例正常脑组织、40例胶质瘤组织和5株胶质瘤细胞系中LINC01152 mRNA的表达。使用DAVID数据库对LINC01152共表达基因进行GO和KEGG富集分析，预测其功能。通过AnnoLnc2、TargetScan、LinkedOmics和miRDB数据库预测并筛选LINC01152相关miRNA和靶基因，构建ceRNA调控网络。利用小干扰RNA在胶质瘤细胞系下调LINC01152表达，通过CCK-8法测试、划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验、流式细胞术、Western blot等检测LINC01152对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等功能的影响。结果 数据库分析显示，与其他肿瘤类型相比，LINC01152在胶质母细胞瘤(GBM)和低级别胶质瘤(LGG)中高表达，且高于正常脑组织。qRT-PCR结果显示LINC01152 mRNA在胶质瘤组织中的表达显著高于...     

长链非编码RNA LINC01106通过STAT3通路调控结直肠癌细胞增殖及凋亡

目的 探讨LINC01106在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及凋亡能力的影响。方法 分析公共数据库结直肠癌患者的肿瘤组织及正常组织LINC01106表达水平及其对患者预后的影响;构建LINC01106敲减及过表达结直肠癌细胞株;采用CCK-8实验检测LINC01106敲减及过表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞凋亡水平的影响;免疫印迹检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞p-STAT3、STAT3、Bcl-2蛋白表达的影响;建立裸鼠移植 瘤模型观察LINC01106表达水平对结直肠肿瘤体内生长的影响,随机分为2组,9只/组。对照组：接种SW480细胞,敲减组：接种LINC01106敲减的SW480细胞。结果 TCGA数据库分析结果显示结直肠癌肿瘤组织LINC01106的表达水平明显高于正常组织,且LINC01106的表达水平与结直肠癌患者预后相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;敲减LINC01106可以明显抑制SW480结直肠癌细胞增殖,促进凋亡（P<0.05）,过表达LINC01106可以明显促进SW480结直肠癌细胞增殖;敲减LINC01106可以抑制p-STAT3和Bcl-2蛋白表达水平;下调LINC01106可以抑制裸鼠移植瘤体内生长。结论 LINC01106在结直肠癌患者肿瘤组织中表达显著上调,且与患者预后相关。INC01106可以通过STAT3/Bcl-2信号调控SW480结直肠癌细胞增殖及凋亡;LINC01106有望成为结直肠癌诊断及预后评估的潜在标志物。     

miR-638通过靶向调控Notch 4促进神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的 研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch 4的靶向调控关系;构建Notch 4真核表达重组质粒(pCMV-Notch 4 cDNA)过表达U251细胞中的Notch 4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变.结果 miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch 4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,提升Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01).结论 miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力.     

miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3'非翻译区(3'UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3'UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。     

CXCL12-CXCR4轴促进胶质母细胞瘤前神经间质转化

［摘要］目的: 探讨CXC趋化因子配体12-CXC趋化因子受体4(CXC chemokine ligand 12 CXC chemokine receptor 4,CXCL12-CXCR4)轴对脑胶质母细胞瘤前神经间质转化的作用。方法: 分析TCGA GBM基因数据库中CXCR4 mRNA在不同胶质瘤分子分型肿瘤组织中的水平差异及其对肿瘤患者生存率的影响;人胶质瘤LN428、U87MG细胞经不同浓度CXCL12 (0、20、40、60、80、100 ng/mL)及20 μmol/L普乐沙福(选择性CXCR4拮抗剂)预处理48 h,免疫印迹实验检测细胞内OLIG2、E-钙黏蛋白、YKL-40、N钙-黏蛋白和波形蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,CCK8法和克隆形成实验检测肿瘤细胞增殖能力。结果： TCGA GBM数据库分析结果显示,与健康者相比,胶质瘤患者CXCR4 mRNA表达显著增高,且与患者生存率呈负相关;间质型胶质母细胞瘤组织标本中CXCR4 mRNA水平显著高于前神经型胶质母细胞瘤(P均＜0.05)。与对照组相比,CXCL12组细胞间质型相关蛋白YKL-40、N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平显著升高,而前神经型相关蛋白OLIG2、E-钙黏蛋白表达水平显著降低,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著增强(P均＜0.05);给予普乐沙福处理后,与CXCL12组相比,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著降低,且间质型相关指标蛋白表达显著降低,前神经型相关指标蛋白表达显著升高(P均＜0.05)。结论： CXCL12-CXCR4轴具有促进胶质母细胞瘤前神经间质转化,及迁移和侵袭、增殖的作用。     

慢病毒介导的miR-27a下调对U87胶质瘤细胞的影响

目的:探讨下调miR-27a对U87胶质瘤细胞的影响?方法:分别用慢病毒干扰质粒miRZip-27a anti-miR-27a microRNA construct或慢病毒空质粒pGreenPuro Scramble Hairpin Control-Construct与慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒命名为Lt-I和Lt-NC?然后分别用慢病毒Lt-I和Lt-NC感染U87胶质瘤细胞,通过流式细胞仪筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞?通过定量PCR法分别检测稳定感染的U87细胞和未感染的空白U87细胞miR-27a,CCK-8法检测胶质瘤细胞增殖情况,Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭能力?结果:相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调?细胞增殖减缓?侵袭能力降低,而感染Lt-NC组(阴性对照组)则未见此改变?结论:miR-27a的下调能有效抑制U87胶质瘤细胞的增殖,降低U87胶质瘤细胞的侵袭能力?     

EGFR信号通路调控人胶质瘤U87细胞侵袭转移的分子机制

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路与人胶质瘤细胞(U87细胞)增殖和侵袭转移的关系及调控分子机制。方法表皮生长因子(EGF,100ng/mL)、EGFR抑制剂———AG1478(10μmol/L)单独和联合处理U87细胞,采用MTT法和Transwell小室体外侵袭实验检测U87细胞增殖和体外侵袭能力;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9的表达水平;Western blot法检测磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化AKT(P-AKT)蛋白表达。结果 EGF(100ng/mL)增加P-EGFR和P-AKT蛋白表达,使加药后24h和48h的细胞生长率分别提高了19.25%、22.32%(P<0.05),使12h过膜细胞数由(27±4)个上升到(126±3)个(P<0.05),促进U87细胞的MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);AG1478(10μmol/L)可以阻断EGF增加P-EGFR和P-AKT蛋白表达的作用(P<0.05),并具有时间依赖性(P<0.05),减弱U87细胞体外侵袭能力(P<0.05),抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。结论 EGFR-PI3K/AKT信号通路参与调节U87细胞增殖和侵袭转移过程,其机制可能是EGFR-PI3K/AKT信号通路活化后,导致MMP-2和MMP-9蛋白的表达增加,对细胞外基质的破坏增强。     

低表达miR-27a对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调miR-27a表达后对U87胶质瘤细胞的影响。方法 常规培养U87细胞系,分别用慢病毒干扰质粒miR-27a-3p、miR-27a-5p转染U87细胞（Lt-I）,同时设立无义序列转染组（Lt-NC组）和空白对照组。通过嘌呤霉素处理后筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞。采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后miR-27a-3p、miR-27a-5p在U87细胞系中的表达水平,划痕实验、Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力,Western blot法分析转染后的侵袭和凋亡的变化,流式细胞术分析转染前后细胞凋亡的变化,磁共振成像（MRI）和裸鼠皮下胶质瘤模型分析裸鼠肿瘤的形态、直径等特征及随时间的变化规律。结果 相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调,同时迁移、侵袭能力降低,而感染Lt-NC组（阴性对照组）则未见此改变。Western blot法检测结果显示,低表达miR-27a细胞侵袭能力降低,同时也促进细胞凋亡。流式细胞术结果显示,敲减miR-27a后,细胞凋亡率增高。磁共振成像（MRI）和裸鼠皮下胶质瘤模型显示,实验组裸鼠肿瘤的生长明显受到抑制。结论 敲减miR-27a可抑制人脑胶质瘤细胞系U87细胞的迁移、侵袭,促进其凋亡,同时抑制其成瘤能力,这可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

MicroRNA-34a inhibits human brain glioma cell growth by down-regulation of notch1

The effects of microRNA-34a (miR-34a)-regulated Notch1 gene on the proliferation and apoptosis of the human glioma cell line U87 were investigated in this study. The U87 cells were divided into miR-34a mimics, negative control, mock transfection and blank control groups in terms of different treatments. In miR-34a mimics group, human U87 glioma cells were transfected with miR-34a mimics by using lipofectamine 2000. The cells transfected with nonsense microRNA were set up as negative control group. Those treated with lipofectamine 2000 only were designated to the mock tranfection group. In the blank control group, the cells were cultured routinely and no treatment was given. The expression of miR-34a and Notch1 was detected by using real-time RT-PCR. Western blotting was employed to monitor the change in Notch1 protein. Cell proliferation and apoptosis were measured by CCK-8 and flow cytometry. The results showed that the proliferative ability of U87 cells was significantly reduced and the apoptotic cells increased in miR-34a mimics group relative to control groups. The expression of miR-34a was significantly up-regulated in mimics group as compared with control groups (P<0.05). Furthermore, Notch1 protein levels were significantly decreased in miR-34a mimics group when compared with control groups (P<0.05), but the mRNA expression of Notch1 showed no significant difference among these groups. It was concluded that miR-34a may suppress the proliferation and induce apoptosis of U87 cells by decreasing the expression of target gene Notch1, suggesting that miR-34a may become a promising gene therapeutic target for brain glioma.