Calu-3细胞内琥珀酸脱氢酶活性及表达的双重染色法研究

目的:利用Calu-3细胞探讨肿瘤细胞琥珀酸脱氢酶活性及表达双重染色技术。方法:体外培养Calu-3细胞,将细胞爬片分为三部分,第一部分采用氯化硝基四唑氮蓝法对细胞进行琥珀酸脱氢酶活性染色,并分别孵育40 min、1 h和2 h。第二部分进行该酶的免疫组织化学染色。第三部分进行琥珀酸脱氢酶的组织化学和免疫组织化学的双重染色。在光学显微镜下观察并比较琥珀酸脱氢酶活性及表达染色结果的差异。结果:(1)相比于孵育40 min和1h的细胞,孵育2 h的细胞则反应更加充分,蓝紫色双甲臜颗粒明显增多。(2)免疫组织化学染色的细胞内出现黄棕色DAB颗粒。(3)在活性和表达双重染色中,孵育1h时蓝紫色双甲臜颗粒和DAB黄棕色颗粒较其他孵育时间的更加明显。结论:在Calu-3细胞中,琥珀酸脱氢酶活性染色时孵育2h效果较好,而在活性和表达双重染色中,孵育1h时染色效果最好。     

培养心肌细胞钙矛盾损伤琥珀酸脱氢酶及细胞表面积的定量分析研究

原代培养5天的乳大鼠心肌细胞,用无钙及不含血清的培养基孵育60分钟,在细胞内钙耗竭后加入氯化钙(使钙浓度达2.5mM/ml)造成细胞钙矛盾损伤。实验完毕,按细胞化学染色方法显示各组心肌细胞的线粒体标志酶——琥珀酸脱氢酶。用MPV-3型显微分光光度计测量细胞的琥珀酸脱氢酶染色灰度(它代表了该酶活性的强度)和细胞表面积。结果显示,缺钙孵育时,心肌细胞琥珀酸脱氢酶活性(平均灰度为666.58)及细胞表面积(平均为1743.23)分别与对照组(平均灰度668.12,平均表面积为1789.19)相比(P>0.05),差异无显著性;补钙孵育60分钟后,心肌细胞的琥珀酸脱氢酶活性降低(平均灰度为498.92),细胞极度孪缩,表面积显著减少(平均为1449.14),和对照组和无钙组相比(P<0.01),差异有高度显著性。实验表明钙矛盾损伤中,细胞有极度孪缩和线粒体琥珀酸脱氢酶的损伤变化。     

实验性急性缺氧时肺毛细血管变化的定量检测

对实验性缺氧４、８、１２ｈ大鼠的肺组织切片行常规和显示琥珀酸脱氢酶活性的Ｎｉｔｒｏ ＢＴ染色后，经图像分析仪定量毛细血管腔、内皮细胞的大小和色值数值。结果显示：缺氧组动物毛细血管腔和内皮细胞的大小随缺氧时间的延长而增大，琥珀酸脱氢酶的活性随缺氧时间的延长而减小。     

制作肾冰冻切片时琥珀酸脱氢酶的显色

琥珀酸脱氢酶能使琥珀酸钠脱Ｈ+ ,而使孵育液中的四氮盐接受此Ｈ+ 后还原成有色的二甲月赞〔1〕。恒冷箱切片机 ,是组织化学研究室和组织学实验室的重要常规设备〔2〕。也是酶组化最常用的重要技术。由于其操作简便、迅速 ,近年来已被越来越广泛地应用。下面就冰冻切片用于琥珀酸脱氢酶显示报告如下。1　实验部分1 1　仪器　ＬＥＩＣＡＣＭ 180 0型恒冷箱切片机。1 2　方法及取材　成年大白鼠 1只 ,体重 2 0 0ｇ ,不计雌雄。10 %水合氯醛麻醉后迅速剖腹取出肾脏 ,修成110 5ｃｍ3 的小块 ,立即投入液氮罐中骤冷 ,10秒后取出 ,置于冰冻切片机…     

用石蜡切片方法显示琥珀酸脱氢酶

迄今为止,国内外用组织化学方法显示琥珀酸脱氢酶(SDH)均采用新鲜冰冻切片,或短时间冷固定再行冰冻切片,这涉及一些氧化酶遇热及有机溶剂会全部失活。国外为进行一些新鲜冰冻切片的组织化学工作,早在1938年由 Linderstrom—Lang 和Morgensen 用干冰和机械冰箱办法维持一个恒冷条件的工作箱以进行切片,后来,又有不少人经过多次改良成为当今国内外用的恒冷箱切片装置。国内,在1958年由张作干教授改建了我国第一台恒冷切片设备,从而开始了国内脱氢酶组织化学的工作。     

内耳琥珀酸脱氢酶组织化学方法探讨

由于技术原因，开展对内耳的微细结构研究，尤其是内耳的组织化学方面，一直难以获得满意的结果。显示琥珀酸脱氢酶，习惯用冰冻切片和明胶封片的方法，虽然可以定位，但保存二甲月替反应颗粒，时间短，分瓣力差，作者以采用常规石蜡包埋切片方法，从技术上加以改进。对显...     

用国产透明纸(赛璐玢)做酶组织化学的半透膜技术

1967年,在酶组织化学中,McMillan最早引用半透膜技术用以显示乳酸脱氢酶,而后为MeijerLojda等改进用以显示水解酶。Meijer证实,用新鲜肝组织切片在孵育液内孵育,在孵育后一分钟内,约有10～70％的酸性磷酸酶漏失于孵育液内。这种漏失的百分率因组织而异。该作者还证明这种漏失不因用明胶、葡聚糖或PVP(聚乙烯吡咯烷酮)而加以阻止;而且一些大分子物质对某些酶活性还有抑制作用。为了避免酶的漏失,他们建立了半透膜技术,其特点为:①使用新鲜组织的恒冷箱切片,不需固定,以避免因固定所造成的酶及酶活性的丢失;②使用半透膜夹于凝胶状孵育基质和组织切片之间。对于半透膜的要求是:只允许分子量小的底物和偶联剂通过,而分子量较大的细胞内的酶分子(包括可溶性酶分子)却不会经半透膜扩散到孵育基质内,以防在孵育过程中酶的漏失。此技术的最大优点是,可以显示细胞内全部酶活性,因此,在酶组织化学中被广泛应用,但国内尚未见报道。     

颈髓损伤胫骨前肌形态与酶组织化学变化

目的 探讨颈椎骨折合并颈髓损伤胫骨前肌急性失神经支配时肌纤维形态与酶组织化学变化。方法 颈椎骨折合并颈髓损伤病人和对照组胫骨前肌标本做冰冻切片，HE、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和三磷酸腺苷(ATP)酶染色，计算机图像分析系统测量肌纤维形态与酶染色光密度。结果 琥珀酸脱氢酶和乳酸脱氢酶将胫骨前肌分为三型，三磷酸腺苷酶将肌纤维分为两型；急性颈髓损伤早期肌纤维形态、琥珀酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性无变化，三磷酸腺苷酶活性增高。结论 骨骼肌纤维急性去神经支配时，三磷酸腺苷酶活性增高，检测该酶活性可提供诊断依据。     

缺血心肌切片琥珀酸脱氢酶组织化学染色的光密度定量研究

用分光光度计对缺血心肌切片琥珀酸脱氢酶组织化学反应强度进行光密度定量观察。结果显示，缺血１５ｍｉｎ后，酶活性即明显降低，提高了单纯形态学诊断的敏感性。     

离体肺组织切片的制备和孵育

目的建立一种简便有效的离体肺组织切片孵育方法.方法利用肺组织精细切片技术制备肺组织切片,以0.5 mL Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液作为孵育液,在37 ℃培养箱内分别孵育1、2、3、4 h,测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色、乳酸脱氢酶(LDH)释放率和三磷酸腺苷(ATP)含量,以反映肺组织活性.结果肺片在37 ℃培养箱内孵育1、2、3、4 h后MTT比色、LDH释放率和ATP含量均无统计学差异(P>0.05).结论应用0.5 mL Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液作为孵育液、在37 ℃培养箱对肺片进行孵育时组织活性没有明显变化,可作为一种简便有效的孵育方法用于离体肺片研究.     

离体肺组织切片的制备和孵育

目的建立一种简便有效的离体肺组织切片孵育方法。方法利用肺组织精细切片技术制备肺组织切片 ,以 0 .5mLKrebs Henseleit(K H)缓冲液作为孵育液 ,在 37℃培养箱内分别孵育 1、2、3、4h ,测定肺片的四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色、乳酸脱氢酶 (LDH)释放率和三磷酸腺苷 (ATP)含量 ,以反映肺组织活性。结果肺片在 37℃培养箱内孵育 1、2、3、4h后MTT比色、LDH释放率和ATP含量均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论应用 0 .5mLKrebs Henseleit(K H)缓冲液作为孵育液、在 37℃培养箱对肺片进行孵育时组织活性没有明显变化 ,可作为一种简便有效的孵育方法用于离体肺片研究     

脊髓型颈椎病的骨骼肌形态和酶组织化学变化

目的 探讨脊髓型颈椎病上运动神经元损伤时受累骨骼肌形态与酶组织化学变化。方法 脊髓型颈椎病病人和对照组均取胫骨前肌标本做冰冻切片，ＨＥ，琥珀酸脱氢酶，乳酸脱氢酶和三磷酸腺苷酶染色，对肌纤维做纤维分型，用计算机图像分析系统测量肌纤维形态及酶染色光密度。     

豚鼠腹腔神经节小强荧光(SIF)细胞的组织化学和超微结构研究

为了阐明交感神经节成团分布型小强荧光(SIF)细胞的性质, 对豚鼠腹腔神经节SIF细胞的组织化学性质及形态学特点进行了分析。 采用乙醛酸诱发儿茶酚胺(CA)荧光和酶活性在同一张组织切片上连续显示的方法,对SIF细胞内的主要细胞器标志酶和代谢标志酶活性进行了显示。结果发现,这些细胞内含有较强的镁离子激活的腺苷三磷酸酶(Mg__~(2 )ATP_(asc))、琥珀酸脱氢酶(SDH)和酸性     

微波照射后大鼠肝脏组织化学的变化

本文采用10只雄性大鼠,分两组,6只实验,4只对照。微波照射睾丸使温度升高至39.5℃——41.5℃,三天后取材。冰冻切片。对肝脏酶活性的组织化学进行观察。糖原明显下降,葡萄糖-6-磷酸酶活性增强,琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性稍减弱。文章对上述几种组化指标变化机理进行了探讨。     

试管悬浮孵育法检测人精子LDH—X活性

将显示精子代谢关键酶乳酸脱氢酶由传统涂片孵育改进为度管悬浮孵育，测定１０例不孕症门诊患者精子的ＬＤＨ－Ｘ，并与涂片孵育法进行自身对照。结果显示试管悬浮孵育法的酶活性积分值明显高于涂片孵育法，且背景清晰，极少见因酶扩散而形成的甲替沉淀。     

琥珀酸脱氢酶检测方法的改进

琥珀酸脱氢酶检测方法的改进闫丽华，李月玲刘冬娟（中国医科大学附属口腔医院解剖组胚教研室沈阳１１０００１）（沈阳基础医学院第二电镜室沈阳１１０００１）关键词琥珀酸脱氢酶，骨组织作为标志酶在组化反应中常用琥珀酸脱氢酶来反映三羧酸循环的情况。在研究骨质和骨...     

微波凝固肝癌细胞活性的酶组织化学检测

目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值。方法用10W、1.5～2min(85～95℃)和5W、1.5～2min(55～65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况。结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变。酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(Ρ<0.01)。结论HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果。     

人工组织神经移植物桥接狗缺损坐骨神经后腓肠肌内琥珀酸脱氢酶表达含量的变化

目的：了解人工骨组织神经移植植物辅加神经再生索桥接狗坐骨神经缺损后相应腓肠肌形态与酶的变化。方法:人工组织神经桥接修复狗的坐骨神经30mm缺损为实验组，自体神经桥接或神经缺损的为对照组I或II.术后6个月时取腓肠肌，按Nitro-BT法显示琥珀酸脱氢酶光镜标本。图像分析仪分析琥珀酸脱氢酶（SDH）染色后灰度值及腓肠肌截面积。结果：实验组腓肠肌SDH的灰度值及截面积均与对照组II有明显差别，而与对照组I无明显差别。结论：人工组织神经修复缺损神经后，重新支配靶器官，使腓肠肌萎缩明显减弱，琥珀酸脱氢酶活性的下降也明显减轻。     

试管悬浮孵育法检测人精子LDH－X活性

将显示精子代谢关键酶乳酸脱氢酶Ｘ（ＬＤＨ－Ｘ）由传统涂片孵育改进为试管悬浮孵育，测定１０例不孕症门诊患者精子的ＬＤＨ－Ｘ，并与涂片孵育法进行自身对照。结果显示试管悬浮孵育法的酶活性积分值明显高于涂片孵育法（Ｐ＜０．０１），且背景清晰，极少见因酶扩散而形成的甲沉淀。     

显示几种脱氢酶组织化学方法的探讨

本文通过酶组织化学方法比较,对大鼠各组织中LDH,SDH及GPDH的显色情况进行了观察。结果表明,置冰箱内保存24小时各组织器官中酶活性强度与取材后立即冰冻切片的效果基本一致。孵育液中加入PVP和DMSO后不仅能增加切片背景的清晰度,而且可以防止酶的扩散。为开展脱氢酶组化研究提供了一条方便的途径。