应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF—β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-βl免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

不同剂量rhBMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及其OPG表达

目的 研究不同浓度rhBMP-2在不同时间对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及牵引区新骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达.方法 在48只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-21.5 mg和rhBMP-2 3 mg胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,稳定期第1、3、7、14天,分别处死各组动物,取牵引区新生骨痂行OPG免疫组化染色.结果 下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.在同一时间内,应用rhBMP-2组较对照组有显著性差异(P<0.05),且rhBMP-23 mg剂量组较rhBMP-2 1.5 mg剂量组有显著性差异(P<0.05).结论 动物实验表明,rhBMP-2能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成并具有浓度依赖性.     

内源性成骨因子在兔硬脑膜再生骨中的表达

目的：用外源性重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导兔结论：硬脑膜再生骨，研究内源性成骨因子骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和转化生长因子-βl（TGF-β1）的表达。方法：在诱导区加入rhBMP-2，应用免疫组化方法检测硬脑膜内源性BMP-2和TGF-β1不同天数的表达。结果：术后早期聚集的大量间充质细胞即出现表达BMP-2和TGF-β1，且随着间充质细胞分化为前软骨细胞并不断成熟，两因子的表达水平迅速提高。BMP-2在术后11 d表达最活跃，之后开始下降，而TGF-β1表达高峰出现在术后17 d。结论：外源性rhBMP-2在诱导颅骨再生过程中，能增强内源性BMP-2及TGF-β1在硬脑膜的表达，且BMP-2表达高峰早于TGF-β1。     

下颌骨牵引成骨过程中转化生长因子表达

目的通过建立兔下颌骨牵引成骨实验动物模型,研究下颌骨牵引成骨过程中TGF-β1表达及意义。方法选用新西兰白兔30只,随机选取6只动物作空白对照组,24只动物右侧下颌骨植入外置式颌骨牵引器。经7d延迟期后,按1mm/d速率延长下颌骨7d,固定期8周。在延迟期第7天,牵引期第2、4、7天,固定期第1、3、6、8周分别处死3只动物,采用免疫组化、RT-PCR方法,检测TGF-β1表达变化。结果TGF-β1表达贯穿下颌骨牵引成骨全过程,下颌骨牵引成骨过程中不同时相多种组织细胞参与表达TGF-β1。TGF-β1 mRNA及其蛋白表达在牵引早期达到高峰,此后逐渐减弱。结论TGF-β1在下颌骨牵引成骨血运重建及新骨生成过程中发挥重要作用。TGF-β1可能与传导机械牵引力刺激的细胞信号传导有关,从而启动血运重建和新骨生成机制。     

兔下颌牵引成骨区应用rhBMP-2对BMP-7表达的影响

目的:研究不同剂量外源性rh BMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨BMP-7表达的影响。方法:选取成年日本大耳白兔45只,雌雄不限,适应性饲养1周,随机分为对照组、实验1组和实验2组,每组各15只。在兔下颌骨磨牙前行截骨术,分别将空白胶原载体、rhBMP-2胶原复合物1.5 mg和rh BMP-2胶原复合物3 mg植入其下颌骨切开处。观察稳定期的第1、3、7、14、28 d的兔的新骨生成,并用免疫组织化学染色法观察BMP-7的表达。结果:成骨细胞(OB)和骨髓基质细胞(SC)的细胞质免疫组织化学法BMP-7阳性表达呈棕色或棕褐色颗粒状着色,结果显示BMP-7的表达与rh BMP-2有剂量依赖性。在同一稳定期内实验组兔成骨细胞和骨髓基质细胞与对照组有显著性差异(P<0.05),且实验2组与实验1组也有显著性差异(P<0.05),在同一剂量下,稳定期1 d BMP-7表达达到高峰,主要集中在间充质细胞的细胞质中,随着稳定期的延长其表达逐渐下降,但稳定期3 d和7 d BMP-7仍为强阳性表达,稳定期14 d进一步减弱,到稳定期28 d表达的很少,达到正常水平。结论:BMP-7在兔牵引成骨过程的不同稳定期的成骨细胞和骨髓基质细胞有不同的表达,说明其对牵引成骨的新骨形成有一定的调节作用。     

骨保护素在兔下颌牵张后新骨组织中的表达

目的 研究骨保护素（osteoprotegerin,OPG）在不同时期下颌骨牵张成骨过程中表达水平的变化,探讨其可能发挥的作用.方法在30只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,分别于牵张完成后的第1,3,7,14,28天处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及OPG免疫组化染色.结果下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.其中以牵引结束的第1,7天的表达最强,以后逐渐下降,第28天仅有微弱表达.结论OPG可能在牵引成骨过程中特别是调控组织细胞应力信号传递的早期发挥重要作用.     

PRF 对下颌骨牵引成骨区骨保护素表达的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对牵引成骨（DO）区骨保护素（OPG）表达的影响。方法 将25 只大耳白兔随机分5 组，分别行双侧下颌骨皮质骨切开术，一侧下颌骨牵引间隙放置PRF 膜，作为实验组，对侧作为对照组，分别于牵引稳定期1、3、7、14 和28 d 各处死一组动物，将下颌骨DO 区骨块制成脱钙石蜡切片，进行苏木精- 伊红染色及OPG 免疫组织化学染色，细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂OPG 表达情况。结果 下颌骨牵引处形成新生骨，免疫组织化学OPG 染色主要表达在成骨细胞的胞浆中。实验组与对照组在稳定期1、3、7、14 和28 d 的OPG 阳性表达细胞数比较，差异有统计学意义（P <0.05）。结论 PRF 能促进兔下颌骨DO 区新骨的生成，OPG 可能在DO 过程的早期调控组织细胞应力信号传递，发挥成骨作用。     

重组人骨形成蛋白-2促进兔下颌牵张成骨的实验研究

目的：研究重组人骨形成蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）对兔下颌牵张成骨的作用。方法：建立兔下颌双侧牵张成骨动物模型．于下颌右侧骨断端间植入含有rhBMP-2的可吸收胶原海绵（absorbable collagen sponge，ACS），左侧单纯应用ACS作为对照。分别于固定期第3、5周末处死动物。取标本行X线及组织学观察。结果：应用rhBMP-2侧新骨形成的速度以及骨小梁的密度均高于对照。结论：局部应用rhBMP-2能够提高牵张区新骨形成的速度和质量．对下颌牵张成骨具有促进作用。     

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ, Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 对β转化生长因子（TGF-β）增强人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2)诱成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究。方法 BALB/c小鼠110只随机分为2组，每组55只，设立rhBMP-2/TGF-β为实验组，rh-BMP-2为对照组，分别于3-21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的Ⅰ，Ⅱ型胶原进行检测；对ALP活性进行定量分析。观察2组在诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达情况。结果 Ⅱ型胶原的出现是和成软骨，软骨细胞的出现相伴随的，但是，肥大，变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原，作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原，ALP在软骨形成期即有表达，但是随着成骨细胞的出现，骨组织的形成Ⅰ型胶原仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。实验组CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 TGF-β增强了rhBMP-2诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达。     

局部应用血管内皮生长因子对兔下颌牵张成骨的作用

[目的]研究局部应用外源性血管内皮生长因子对兔下颌牵张成骨的作用.[方法]将16只大耳白兔随机分为A、B两组,每组8只.在兔双侧下颌骨前部行骨切开术后用牵张器延长双侧下颌骨7mm.从牵张开始第1天在A组动物牵张区每日注射VEGF 100ng,每日2次,连续7 d.注射生理盐水的B组动物用作对照.在牵张结束后第2、4、6、8周分别处死A、B两组各2只动物,取双侧牵张区新生骨痂进行组织学检查.在牵张结束后不同时期(第1天、第2、4、6、8周),分别拍摄下颌骨X线片,观察下颌骨延长情况及其牵张区骨密度变化.[结果]放射学和组织学分析结果显示,注射VEGF的A组动物牵张间隙内新骨形成的速度及数量和B组动物相比无明显差异.[结论]外源性导入血管内皮生长因子可能没有促进兔下颌牵张成骨的作用.     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

骨形成蛋白-2在上颌骨快速牵引骨愈合中的作用

目的探索上颌骨经缝牵引中(当弹性牵引力大于800g)加入重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对新骨形成的影响。方法将36只健康杂种犬随机分为5个组,即对照组、400g组、600g组、800g组及800g+rhBMP-2组(联合组)。术后1～8周处死动物,行X线检测及免疫组织化学染色检测。结果各牵引组上颌骨成功前徙,以600g组效果明显[(25.3±5.2)mm]。800g组在2周内牵引速度快,4周后明显减慢[(12.1±2.3)mm],但在注射rhBMP-2后得以改善[(24.2±3.4)mm]。BMP-2、BMP-4、BMP-7阳性染色主要定位于成骨细胞细胞质中,BMP-7在注射rhBMP-2后光密度值明显增强。CT检测各牵引组腭骨水平板骨密度值明显减低,以800g组最为显著[(317.8±185.5)HU],而在注射rhBMP-2后骨密度值明显增强[(1 158.0±93.0)HU]。结论骨缝牵引前移上颌骨能在微创早期延长骨长度;rhBMP-2可以有效促进骨形成并在调节rhBMP-7活性方面起到一定作用。     

转化生长因子-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在牵张成骨中表达的研究

目的利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴,初步观察成骨过程中转化生长因子TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7的变化规律并揭示其作用。进一步探讨牵张成骨的分子生物学机制,为使用TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7在临床治疗中加快牵张成骨的新骨形成速度提供一定的理论基础和实验资料。方法24只成年雄性大耳白兔随机分成6组,每组4只。非手术组做为空白对照组,其余用自制的垂直牵张器按2次/天,0.5 mm/次,的速度牵张兔牙槽骨,分别于牵张后1天组、1、2、4周组、6周后处死动物取材。标本进行大体观察、X线、组织学观察和免疫组织化学的检测、通过细胞图像分析仪测定阳性面积,利用Spss14.0统计软件采用方差分析统计各组TGF-β、Smad2/3和Smad7的阳性表达。结果TGF-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在兔下颌牵张成骨过程中,不同时期具有不同的表达,提示它们对牵张成骨新骨形成起到一定的作用。结论对兔下颌骨进行牵张成骨过程中,TGF-β以及下游信号蛋白Smad2/3和Smad7参与促进了牵张区新骨的形成。     

转化生长因子β1在下颌压缩成骨过程中的表达研究

目的研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在下颌压缩成骨过程中的表达及意义。方法(1)山羊8只,单侧实验,口外进路,下颌角区保留骨松质连续性的颊舌侧骨皮质切开术,采用特制压缩器械,每3天加力1次,每次压缩0.5mm;(2)分别在压缩结束后0、7、14、28d处死2只动物,切取压缩区骨组织脱钙处理、切片,免疫组化观察TGF-β1在下颌压缩成骨过程中的表达强度。结果(1)颌骨长度被成功缩短;(2)TGF-β1在下颌压缩成骨过程中呈与时间相关的波形表达,主要定位于成纤维细胞、成软骨细胞和成骨细胞的胞浆中,其中以压缩结束第7天的表达最强,第14天逐渐下降,28d时仅有微弱表达。结论压缩成骨的过程中,机械压缩力刺激,可使局部压缩区TGF-β1持续较高表达;持续较高表达的TGF-β1还可能参与促进压缩区新骨的形成。     

富含血小板血浆和rhBMP-2复合物诱导兔下颌骨再生的实验

【目的】研究自体富含血小板血浆（PRP）和人重组骨形成蛋白（rhBMP-2）对下颌骨组织形成的促进作用。【方法】成年新西兰白兔45只，随机分为3组，每组15只，选择右侧下颌骨为实验侧、左侧下颌骨为对照侧。A组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和PRP，B组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和rhBMP-2，C组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵、PRP和rhBMP-2，各组左侧下颌骨缺损区只放置明胶海绵。分别于术后2、4、8周各取5只兔子进行放射性核素^99mTc-MDP骨显像、x线片和组织学切片检查。【结果】A组动物右侧放射性核素计数在术后2、4周时明显高于左侧（P〈0．05）：B组动物右侧放射性核素计数在第4周时高于左侧（P〈0．05），而在第2、8周时低于左侧（P〈0．05）；C组动物右侧放射性核素计数在第2、4周时均高于左侧（P〈0．05），在第8周时两侧没有明显差别（P〉0．05）。【结论】PRP单独或与rhBMP-2复合均能促进下颌骨组织的增长。     

牵张成骨术延长狗下颌骨的实验研究

（1）目的 应用牵张成骨技术延长狗下颌骨动物模型,了解下颌骨牵张成骨过程及下颌骨牵张成骨新骨生成规律。（2）方法 8只成年狗,按不同的牵张期和固定期分为4组,每组2只,于下颌第一磨牙后区,行下颌骨体部骨切开术,安置骨支持式口腔外部牵张器,潜伏期固定7d后牵引,每天延长1mm,分2次进行,分别于第3,10,20和20天停止牵张,并固定,分别于牵张期开始,结束及固定期结束摄取X线片,固定期结束时处死动物,取牵张区新骨行组织学检查。（3）结果 4组动物下颌骨分别成功延长了3,10,20和20mm,X线片及组织学检查可见骨样组织、编织骨和板层骨形成,过渡及改建过程,并有软骨内骨化现象。（4）结论 下颌骨牵张成骨术其牵开区可得到良好的骨生成,新骨以膜内成骨为主。软骨内成骨为辅。     

富含血小板血浆和rhBMP-2复合物诱导兔下颌骨再生的实验

 【目的】研究自体富含血小板血浆（PRP）和人重组骨形成蛋白（rhBMP-2）对下颌骨组织形成的促进作用。【方法】成年新西兰白兔45只，随机分为3组，每组15只，选择右侧下颌骨为实验侧、左侧下颌骨为对照侧。A组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和PRP，B组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和rhBMP-2，C组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵、PRP和rhBMP-2，各组左侧下颌骨缺损区只放置明胶海绵。分别于术后2、4、8周各取5只兔子进行放射性核素^99mTc-MDP骨显像、x线片和组织学切片检查。【结果】A组动物右侧放射性核素计数在术后2、4周时明显高于左侧（P〈0．05）：B组动物右侧放射性核素计数在第4周时高于左侧（P〈0．05），而在第2、8周时低于左侧（P〈0．05）；C组动物右侧放射性核素计数在第2、4周时均高于左侧（P〈0．05），在第8周时两侧没有明显差别（P〉0．05）。【结论】PRP单独或与rhBMP-2复合均能促进下颌骨组织的增长。     

骨复生对激素性家兔股骨头坏死血清中骨形态发生蛋白-2及转化生长因子-β影响的实验研究

目的探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β(TGF-β)在激素性股骨头坏死发生及骨重建中的作用和骨复生治疗激素性股骨头坏死的机制。方法40只家兔造模后分为骨复生组、马氏骨片组、造模组及空白对照组,应用骨复生治疗四周后,采血测定血清中BMP-2及TGF-β水平。结果骨复生组、马氏骨片组和造模组BMP-2及TGF-β水平明显低于空白组(P<0.01),骨复生组和马氏骨片组的BMP-2及TGF-β水平明显高于造模组水平(P<0.01)。结论BMP-2与TGF-β的升高可促进骨坏死的修复,同时说明骨复生可能通过提高BMP-2与TGF-β水平来治疗激素性股骨头坏死。     

TGF-β1和VEGF在牙周膜牵引成骨术中的表达

目的观察经牙周膜牵引成骨术快速移动犬牙齿的牙周组织内细胞因子TGF-β1和VEGF的表达及变化,探讨TGF-β1和VEGF在牙周膜牵引成骨术中的作用,为其后的系列研究和临床应用提供依据。方法选用8只广州本地杂种犬,分别牵引下颌左右两侧第一前磨牙向后移动,A组为对照组,常规滑动法100g牵引;B、C、D纽为实验组,采用牙周膜牵引成骨术,B组的牵引速率为0．25mm／d;C组的牵引速率为0．5mm／d;D组的牵引速率为1mm／d。结果TGF-β1主要表达于成骨细胞与成纤维细胞,VEGF主要表达于血管内皮细胞与成骨细胞。在牵引术后,TGF-β1和VEGF的表达增加,2周时达到高峰;C组的分泌水平最高;固定4周时,各组之间的分泌水平没有明显的区别。结论牵引固定2周时,TGF-β1和VEGF因子大量表达于移动牙的近远中牙周间隙,其中c组最活跃,至固定4周时,两种细胞因子的表达与对照组无差别。     

下颌骨节段缺失弹性牵引成骨动物模型制作

目的：探索使用钛镍合金牵引器弹性加载自动牵引成骨重建节段性缺失下颌骨的动物建模方法。方法：分别选用8只成年杂种犬和12只成年新西兰兔为实验动物，手术截除犬一侧下颌骨体部3cm骨段、兔一侧下颌支1．5cm骨段，不同方法安放自制钛镍记忆合金牵引器，术后定期观察，至3月时处死取材，观察缺损修复情况。结果：在钛镍合金牵引器的弹性加载张力作用下，采用保留一侧骨膜附着完全骨切开形成的传送骨段可自行移动完成牵引成骨，初步修复了实验动物下颌骨节段性缺损。结论：弹性加载自动牵引成骨是一种具有广阔应用前景的新技术，杂种犬及纯种兔可为这种技术的深入研究提供理想的动物模型。