桔梗总皂苷治疗大鼠佐剂性关节炎的作用及其对GRP78/XBP1/CHOP信号通路的影响

目的 探讨桔梗总皂苷(CKS)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的作用及部分机制研究.方法 60只SD大鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、CKS低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)及阳性药来氟米特组(2 mg/kg).采用弗氏完全佐剂注射左后足趾皮内建立AA大鼠模型,观察各组大鼠足肿胀度、多发性关节炎指数并进行组织病理学检查;ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素 1β(IL-1β)的水平;Real-time PCR 和 Western blot 法检测各组大鼠滑膜组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X盒结合蛋白1 (XBP1)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、TNF-α mRNA和蛋白表达的情况.结果 CKS(100,200 mg/kg)可显著抑制大鼠继发性足肿胀并减轻其膝关节的病理变化;可将大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P< 0. 05);同时可以下调GRP78、XBP1、CHOP、 TNF-α mRNA和蛋白的表达(P<0.05).结论 CKS对AA大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能是与抑制内质网应激 GRP78/XBP1/CHOP信号通路,从而抑制滑膜细胞分泌和表达的TNF-a有关.     

The expression of endoplasmic reticulum stress in recovery of CCl4 induced liver fibrosis in rat

目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化.结果 与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05).与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05).结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系.     

大鼠肝纤维化进程中内质网应激相关蛋白的动态变化研究

目的探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05)。与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05)。结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系。     

β-细辛醚减少美多芭在PD模型大鼠中的使用剂量

【目的】观察石菖蒲挥发油主要有效成分β-细辛醚联合小剂量美多芭对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导帕金森病(PD)模型大鼠的疗效是否与常规剂量美多芭疗效相当及联合用药对单胺类神经递质和多巴胺(DA)合成酶的影响。【方法】将70只大鼠随机分为7组,即假手术组、模型组、美多芭组(剂量为75 mg/kg)、β-细辛醚组(剂量为15 mg/kg)、β-细辛醚+美多芭组(15 mg/kg+75 mg/kg)、β-细辛醚+1/2美多芭组(15 mg/kg+37.5 mg/kg)、β-细辛醚+1/4美多芭组(15 mg/kg+18.75 mg/kg),每组10只。除假手术组外,其他组别大鼠均给予立体注射6-OHDA复制PD模型。成功造模后,每天分2次灌胃给药,给药30 d。测定大鼠行为学改变,高效液相色谱(HPLC)法测定纹状体、血清内单胺类神经递质,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清、中脑内多巴脱羧酶(DDC)含量及肝肾功能,流式细胞术测定中脑内酪氨酸羟化酶(TH)的表达率,苏木素—伊红(HE)染色观察肝肾组织。【结果】β-细辛醚+1/2美多芭组与美多芭组在旷场实验、转棒实验、步态实验等行为学方面无明显差异(P0.05),联合用药可提高DA等神经递质及TH相关酶含量,降低血清内DDC的含量,同时可减轻肝肾功能损害。【结论】β-细辛醚能够减少美多芭在6-OHDA诱导的PD模型大鼠中的治疗使用剂量,可能是通过提高脑组织内TH含量,抑制血清内DDC的含量来增加脑组织内单胺类神经递质的含量。     

TTF1-NP通过活化内质网应激CHOP通路抑制大鼠原发性肝癌生长作用

[目的]探讨TTF1-NP对大鼠原发性肝癌生长的抑制作用及其机制.[方法]采用二乙基亚硝胺(DEN)间断给药法建立大鼠肝癌模型,行HE染色观察TTF1-NP干预后大鼠肝脏的形态学变化;利用Western Blot技术检测TTF1-NP干预后大鼠内质网应激(ERS)CHOP通路主要调控蛋白的表达情况.[结果]TTF1-NP对大鼠原发性肝癌的生长有抑制作用,随着TTF1-NP质量浓度的升高,GRP78,eIF2α,IRE1表达逐渐增加,而CHOP仅在高剂量组表达增加.[结论]TTF1-NP可通过活化ERS的CHOP通路抑制DEN诱发的大鼠原发性肝癌的生长.     

内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响

目的 探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响.方法 制备搪尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT) C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子( GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达.分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5 μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8 μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达.结果 糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P ＜0.001).经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P＜0.05).结论 糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高.体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufml的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程.     

氧化苦参碱对高果糖喂养诱导大鼠脂肪肝和肝脏内质网应激的干预作用

目的 观察氧化苦参碱干预对高果糖饮食诱导大鼠肝脏脂质沉积的影响,并观察高果糖喂养对大鼠肝内内质网应激(ERS)的影响及氧化苦参碱的干预作用.方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、高果糖组和氧化苦参碱组,喂养16周后处死大鼠并测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)水平,计算HOMA指数,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝脏TG含量,采用油红O染色观察肝脏组织的病理改变;测定ERS标志物内质网伴侣分子78(GRP78)、CHOP mRNA表达以及蛋白磷酸化胰腺内质网激酶(p-PERK)、磷酸化山梨醇要求激酶1(p-IRE1)和活化转录因子6(ATF-6)蛋白表达.结果 与对照组比较,高果糖组的FBG、FINS、HOMA指数、血ALT、血AST及肝TG均显著增高(P均＜0.01),同时肝组织油红O染色显示高果糖组大鼠肝细胞已有明显脂滴沉积;与高果糖组比较,氧化苦参碱干预组的上述指标均显著降低(P均＜0.01),油红O染色显示肝组织内脂质沉积亦显著减轻;与对照组比较,高果糖组大鼠的肝内GRP78、CHOP表达显著增加,p-PERK、p-IRE1和ATF-6的蛋白表达亦显著增加(P均＜0.01),而氧化苦参碱组上述ERS标志物的基因和蛋白表达均显著低于高果糖组(P均＜0.01).结论 长期高果糖喂养引起大鼠胰岛素抵抗、肝脏脂质沉积及肝细胞损伤,并伴有肝细胞内ERS,氧化苦参碱治疗可改善高果糖饮食诱导的脂肪肝和肝细胞损伤,其机制可能与氧化苦参碱改善肝脏ERS有关     

通络保肾复方对糖尿病大鼠肾脏内质网应激指标P-IRE1α、GRP78的影响

目的探讨通络保肾复方及其拆方对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠高血糖肾损伤内质网应激反应(ERS)启动因子P-IRE1α和分子伴侣GRP78的影响。方法将雄性SD大鼠随机分成正常组和造模组。造模组大鼠采用腹腔注射STZ方法建立糖尿病大鼠模型。造模成功后将造模组大鼠随机分成模型对照组、缬沙坦组(8.93 mg/kg)、通络保肾复方组(19.43 g/kg)、通络保肾补虚组(6.92 g/kg)、通络保肾解毒组(12.5 g/kg)。观察各组大鼠日常活动的一般情况;应用免疫组化法及IPP软件半定量分析6周和16周各组大鼠p-IRE1α及GRP78的蛋白表达。结果普通光镜下可见P-IRE1α、GRP78主要位于造模组大鼠肾脏近段、远端肾小管细胞及肾小球细胞的胞浆内;IPP免疫组化半定量法显示:6周和16周模型组与正常组大鼠相比较P-IRE1α、GRP78的蛋白表达增加(P0.05);与模型组大鼠相比,6周和16周缬沙坦组、通络保肾复方组、通络保肾补虚组、通络保肾解毒组P-IRE1α、GRP78的蛋白表达减少(P0.05),各治疗组之间无差别(P0.05)。结论糖尿病高血糖诱导肾损伤大鼠模型中存在内质网应激反应的激活;通络保肾复方及其拆方均可能通过抑制内质网应激而发挥肾脏保护作用;同时可推测糖尿病高血糖肾损伤的中医学核心病机是本虚标实。     

补气开窍法对APP/PS1双转基因小鼠认知能力和β-淀粉样肽42的影响

【目的】探讨补气开窍法对APP/PS1双转基因小鼠认知能力和β-淀粉样肽42(Aβ42)的影响及其自噬机制。【方法】将56只APP/PS1双转基因小鼠随机分为4组,雌雄各半,每组14只,即模型组、人参总皂苷组(剂量为75 mg/kg)、石菖蒲挥发油组(剂量为15 mg/kg)、补气开窍方组(剂量为石菖蒲挥发油15 mg/kg+人参总皂苷75 mg/kg)。另设正常组,C57BL/6品系的正常小鼠14只,雌雄各半。各组灌胃给药,模型组和正常组用等体积的蒸馏水代替,给药30 d。末次给药结束1 h后,先将各组小鼠进行行为学检测(水迷宫实验,避暗实验和跳台实验),再麻醉各组小鼠,其中4只灌注固定后的全脑用于免疫组织化学法检测Aβ42,其余小鼠在冰上迅速取出海马用于检测Aβ42,流式细胞术检测磷酸化的哺乳动物雷帕霉素蛋白(p-m TOR)和自噬相关基因(Beclin-1)。【结果】与正常组比较,模型组水迷宫实验的潜伏期显著延长(P0.01),避暗实验和跳台实验的潜伏期显著缩短(P0.01),Aβ42含量和Beclin-1表达显著增加(P0.01),p-m TOR表达显著减少(P0.01);与模型组、人参总皂苷组、石菖蒲挥发油组比较,补气开窍方组的水迷宫实验的潜伏期显著缩短(P0.05),避暗实验和跳台实验的潜伏期显著延长(P0.05),水迷宫实验、避暗实验和跳台实验的错误次数显著减少(P0.05),Aβ42含量显著减少(P0.05),此外,与模型组比较,补气开窍方组的p-m TOR表达显著增加(P0.05),Beclin-1表达显著减少(P0.05)。【结论】人参总皂苷联合石菖蒲挥发油具有改善APP/PS1双转基因模型小鼠的认知能力,减少Aβ42表达和调节自噬作用,且优于单独使用人参总皂苷组或石菖蒲挥发油组。     

橄榄苦苷抑制丙烯醛诱导的HBE细胞内质网应激的机制研究

目的：探讨橄榄苦苷（oleuropein,OP）和丙烯醛（acrolein,ACR）对人支气管上皮样细胞（human bronchial epithelial cells,HBE）内质网应激（endouplasmic reticulum stress,ERS）相关的增殖与凋亡影响的可能机制。方法： OP与ACR联合处理HBE细胞,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法和流式细胞检测细胞凋亡,Western blot检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA 表达;雄性Sprague-Dawley大鼠经ACR腹腔注射和(或)橄榄叶提取物（olive leaf extract,OLE）灌胃处理,取大鼠肺组织,Western blot法检测ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,Real-time PCR法检测GRP78和CHOP mRNA 表达。结果：体外实验证实ACR可以抑制HBE细胞的增殖,诱导其凋亡;联合OP处理后,ACR抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用明显受到抑制;同时,ACR上调HBE细胞中ERS相关蛋白GRP78和CHOP的表达,联合OP可抑制GRP78和CHOP的表达;在mRNA水平上,ACR单独处理上调了ERS相关分子GRP78和CHOP 的mRNA表达水平,而联合OP处理,GRP78和CHOP的mRNA水平未见明显变化;Sprague-Dawley大鼠体内实验结果与体外细胞实验基本一致。结论：ACR抑制HBE细胞增殖,促发ERS,进而诱导HBE细胞凋亡。在蛋白质翻译水平上,OP可以通过抑制ERS途径,拮抗ACR诱导的细胞凋亡效应。     

黄连对2型糖尿病大鼠胰腺脂毒性及内质网应激相关蛋白表达的影响

【目的】观察中药黄连对高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠胰腺脂毒性的调控作用及探讨相关内质网应激的作用机制。【方法】从100只Wistar大鼠中随机选取20只作为正常组给予普通饲料喂养,其余80只大鼠采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)注射方法建立2型糖尿病模型。将成模后的60只大鼠随机分为模型组、黄连组、二甲双胍组,每组各20只。黄连组、二甲双胍组大鼠分别对应灌胃给药5周,同期正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水。5周后取血,分别测定大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)水平,采用免疫组织化学法检测胰腺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)的表达。【结果】与正常组比较,模型组的FBG、TG、TC、LDL-C、NEFA水平明显升高(P0.05),HDL-C水平明显下降(P0.05),GRP78、CHOP、ATF4蛋白表达水平均明显升高;与模型组比较,黄连组和二甲双胍组FBG、TG、TC、LDL-C、NEFA水平明显下降(P0.05),HDL-C水平明显升高(P0.05),GRP78、CHOP、ATF4蛋白表达水平均显著降低。【结论】中药黄连能够降低2型糖尿病大鼠的血糖和血脂,有效改善大鼠糖脂代谢紊乱,减轻胰腺脂毒性程度,降低内质网应激GRP78、CHOP、ATF4蛋白的表达。     

芹菜素对妊娠期糖尿病大鼠内质网应激CHOP信号通路的影响

目的探讨芹菜素(AP)对妊娠糖尿病(GDM)大鼠胰腺组织内质网应激增强子结合(C/EBP)同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法将受孕后的育龄雌性SD大鼠随机分为正常妊娠组(Normal组)、模型组(GDM组)、AP低(0.23 g/kg)、中(0.46 g/kg)、高(0.92 g/kg)剂量组、胰岛素阳性组(20 U/kg),每组10只。除Normal组外,其余各组均在受孕当日经腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 45 mg/kg建立GDM模型;各组均在妊娠第5天开始给药,AP各剂量组灌胃给予相应剂量AP,胰岛素阳性组经皮下注射相应剂量胰岛素,Normal组和GDM组灌胃给予相应剂量生理盐水,各组均连续给药2周,每天1次。各组大鼠末次给药12 h后,用试剂盒检测空腹血糖(FBG)含量及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用苏木精-伊红染色(HE)观察胰腺组织形态学改变; TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺组织内质网应激CHOP通路相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)相对表达水平。结果与Normal组相比,GDM组大鼠FBG含量、HOMA-IR、胰岛细胞凋亡率及胰腺组织损伤、胰腺组织GRP78、caspase-12及CHOP蛋白表达均升高(P0.05);与GDM组相比,AP低、中、高剂量组及阳性组FBG含量、HOMA-IR、胰岛细胞凋亡率及胰腺组织损伤、胰腺组织GRP78、caspase-12及CHOP蛋白表达均降低(P0.05),且AP各剂量组上述指标呈剂量依赖性降低;与AP高剂量组相比,阳性组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论 AP可抑制GDM大鼠胰腺组织GRP78/CHOP/caspase-12信号通路蛋白表达,降低胰腺组织ERS,改善GDM大鼠胰腺组织损伤和胰岛细胞凋亡。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的：从内质网应激（ERS）的角度探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(RSG)对2型糖尿病(T2DM)大鼠局灶性脑缺血损伤的作用,并阐明其机制。方法：72只雄性SD大鼠通过高脂高糖饮食4周、尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)25.0 mg/kg制备T2DM大鼠模型,将制模成功的糖尿病大鼠随机分为假手术组、对照组、RSG组、RSG+GW9662组,每组18只。各组经给药预处理后,均通过线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。假手术组手术步骤同上,但不插入线栓。大鼠于脑缺血后24 h处死,对各组大鼠进行神经行为学评分,采用HE染色观察脑组织的病理形态,免疫组织化学法和Western blotting法测定葡萄糖调节蛋白78（GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的表达,RT-PCR法检测GRP78 mRNA和CHOP mRNA的表达。结果：与对照组比较,RSG组大鼠脑缺血后的神经功能缺损明显改善,差异有统计学意义(P<0.01);而RSG+GW9662组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,RSG组GRP78表达明显增加(P<0.01);CHOP表达降低(P<0.01);RSG+GW9662组GRP78表达无明显降低(P>0.05);CHOP的表达略增高(P>0.05)。结论：PPAR-γ激动剂RSG对T2DM大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用,其机制可能与上调GRP78的表达和拮抗CHOP的表达有关。     

麦门冬汤对肺纤维化大鼠肺功能及内质网应激作用的影响

目的探讨麦门冬汤改善博来霉素所致肺纤维化模型大鼠肺功能及内质网应激(ERS)作用的相关机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、麦门冬汤1组(麦门冬与大枣质量比4∶1)、麦门冬汤2组(麦门冬与大枣质量比20∶1),经气管插管雾化注射博来霉素建立肺纤维化大鼠模型。造模后第14天每日早晚2次灌胃麦门冬汤,连续给药20 d。观察大鼠一般情况,通过HE和Masson染色观察肺组织的病理变化,检测大鼠用力肺活量(FVC)、0.4秒率(FEV0.4/FVC)、质量FVC、吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re)、肺顺应性(Cydn),并用Western blot和免疫组织化学染色分析肺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况。结果与正常组相比,模型组FVC降低、0.4秒率升高、质量FVC下降、Cydn降低;与模型组相比,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组FVC升高、0.4秒率降低,麦门冬汤2组质量FVC回升,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组Cydn升高。病理可见模型组大鼠的肺组织实变区内慢性炎性细胞浸润,大量胶原沉积,高表达的GRP78和CHOP蛋白主要定位于空泡化的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡs)。麦门冬汤2组大鼠炎症缓解,胶原沉积减少,肺组织中GRP78和CHOP蛋白的表达均减少。结论麦门冬汤能够明显改善大鼠肺功能,减少肺间质胶原沉积,可能与调节纤维化肺组织实变区内AECⅡs的GRP78和CHOP蛋白表达,缓解ERS压力,恢复AECⅡs的正常功能有关。     

内质网应激在对比剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)在对比剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护作用。方法:将不同浓度(50,100,150mgI/ml)碘普罗胺分别加入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中孵育1h;10mmol/L NAC预处理细胞1h后,加入100mgI/ml碘普罗胺共孵育1h。Hoechst-33342染色法检测肾小管上皮细胞凋亡率;荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western印迹法检测细胞内内质网功能调节蛋白GRP78、内质网源性转录因子CHOP表达水平。结果:对比剂呈浓度依赖性诱导NRK-52E细胞凋亡,且呈浓度依赖性诱导NRK-52E细胞内ROS生成及GRP78、CHOP蛋白表达上调(P<0.05);经NAC预处理后,细胞内ROS生成及细胞凋亡率明显下降(P<0.05),且GRP78、CHOP蛋白表达下调(P<0.05)。结论:碘普罗胺能诱导肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与细胞内ROS生成增加,诱发ERS,上调GRP78、CHOP蛋白表达有关。抗氧化剂NAC通过降低NRK-52E细胞内ROS介导的ERS,减少肾小管上皮细胞凋亡。     

ERS信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用研究

目的 探讨内质网应激(ERS)信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用.方法 选择无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠24只,实验分为对照组、模型组、ERS抑制剂组,每组8只.除对照组外,其余两组卵清清蛋白(OVA)+氢氧化铝制备哮喘模型,从第21天起ERS抑制剂组每次激发前30 min灌胃0.35 mg/g 4-苯基丁酸(4-PBA),对照组和模型组灌胃等体积生理盐水.对肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织形态情况;马松染色检测肺组织胶原沉积情况;过碘酸雪夫(PAS)染色检测肺组织杯状上皮细胞增生情况;Western blot检测肺组织中肌醇需求酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、ERS相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况.结果 相较于对照组,模型组肺血管周围聚集大量炎症细胞、肺泡间隔增厚、结构破坏、平滑肌增厚,胶原纤维沉积明显增加,杯状细胞数量明显增多;ERS抑制剂组相较于模型组炎症细胞数量减少、肺泡间隔有所增加,但结构破坏仍严重,胶原纤维沉积、杯状细胞数量均降低.与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均升高(P<0.05);与模型组比较,ERS抑制剂组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均降低(P<0.05).结论 抑制ERS信号通路可以抑制炎性反应和气道重塑,缓解气道黏液高分泌情况,实现对哮喘小鼠的保护.     

ERS信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用研究

目的 探讨内质网应激(ERS)信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用.方法 选择无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠24只,实验分为对照组、模型组、ERS抑制剂组,每组8只.除对照组外,其余两组卵清清蛋白(OVA)+氢氧化铝制备哮喘模型,从第21天起ERS抑制剂组每次激发前30 min灌胃0.35 mg/g 4-苯基丁酸(4-PBA),对照组和模型组灌胃等体积生理盐水.对肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织形态情况;马松染色检测肺组织胶原沉积情况;过碘酸雪夫(PAS)染色检测肺组织杯状上皮细胞增生情况;Western blot检测肺组织中肌醇需求酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、ERS相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况.结果 相较于对照组,模型组肺血管周围聚集大量炎症细胞、肺泡间隔增厚、结构破坏、平滑肌增厚,胶原纤维沉积明显增加,杯状细胞数量明显增多;ERS抑制剂组相较于模型组炎症细胞数量减少、肺泡间隔有所增加,但结构破坏仍严重,胶原纤维沉积、杯状细胞数量均降低.与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均升高(P<0.05);与模型组比较,ERS抑制剂组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均降低(P<0.05).结论 抑制ERS信号通路可以抑制炎性反应和气道重塑,缓解气道黏液高分泌情况,实现对哮喘小鼠的保护.     

冬凌草甲素对小鼠溃疡性结肠炎内质网应激的作用研究

目的 探讨冬凌草甲素对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的结肠上皮组织内质网应激(ERS)的影响.方法 利用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型组,设置冬凌草甲素及柳氮磺胺吡啶干预组;测定疾病活动指数(DAI),对结肠组织速行病理形态学评分(HPS),RT-qPCR检测结肠上皮组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子EBP同源蛋白(CHOP)、激活性转录因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇酶1α (IRE1α)mRNA表达变化.结果 与健康小鼠相比,模型组结肠上皮组织中TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、ATF6、CHOP、PERK及IRE1α mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,冬凌草甲素干预组DAI与HPS均明显下降(P＜0.05,P＜0.01),疗效与柳氮磺胺吡啶干预组相当(P＞0.05,P＜0.01),除IER1α mRNA外,TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、CHOP、ATF6及PERK mRNA表达水平均明显下调(P＜0.05,P＜0.01).结论 冬凌草甲素能减轻DSS诱导小鼠结肠炎症,其机制可能与其调节结肠上皮组织ERS有关.     

中药复方缓压乐对应激性高血压大鼠内质网应激IRE1信号通路的影响

目的 探讨中药复方缓压乐(HYL)对应激性高血压(Stress induced hypertension, SIH)大鼠血管组织内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)肌醇需求因子1 (Inositol-requiring enzyme 1,IRE1)信号通路的影响。方法 取30只Wistar大鼠随机分为模型组，高、中、低剂量药物干预组和阳性对照组，每组6只，另取6只为正常组(不建模)。除正常组以外的大鼠进行间断足底电、噪声刺激12周，建立SIH模型；在造模期间，模型组大鼠每天用蒸馏水灌胃，药物干预组大鼠每天灌胃不同剂量的HYL,阳性对照组大鼠每天灌胃依普利酮溶液。造模期间检测各组大鼠尾动脉收缩压和舒张压；用RT-qPCR检测大鼠胸主动脉组织ace、at1r基因的mRNA表达水平；用IHC法对胸主动脉组织X盒结合蛋白1(X-box binding protein-1,XBP1)的表达进行定位和定量；用Western blot检测血管组织总受磷蛋白(phospholamban, PLB)、p-PLB、p-IRE1及XBP1相对表达水平。结果 (1)...     

促红细胞生成素对高氧脑损伤新生大鼠CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

[目的]探讨促红细胞生成素(EPO)对高氧脑损伤新生大鼠CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响.[方法]取足月新生Wistar大鼠随机分为正常对照组(FiO_2为21%)、高氧组(FiO_2高于85%)和高氧+EPO组(FiO_2高于85%).将正常对照组新生大鼠置于室内空气中饲养,高氧组和高氧+EPO组大鼠置于FiO_2高于85%的室内玻璃箱中饲养.实验第1 d起,高氧+EPO组大鼠每日腹腔注射给予EPO(800 U/kg),实验第1,3,7,14 d时测定各组大鼠脑组织湿/干质量(W/D)比值,采用蛋白免疫印记法检测脑组织中CHOP,GRP78蛋白表达水平.[结果]高氧组新生大鼠第1,3,7,14 d时的脑组织W/D值较正常对照组显著升高(P<0.05),高氧下暴露时间越长,W/D值升高越显著;高氧+EPO组新生大鼠脑组织含水量较高氧组显著降低(P<0.05).高氧组第1,3,7,14 d时的CHOP和GRP78蛋白表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05),高氧+EPO组CHOP,GRP78蛋白表达水平较高氧组显著降低(P<0.05).[结论] EPO可缓解高氧引起的新生大鼠脑水肿,对高氧脑损伤具有神经保护作用,其机制认为可能与下调CHOP和GRP78蛋白表达有关系.