多重PCR检测技术在耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌基因型中的应用

目的利用多重PCR技术检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)基因型。方法收集2015年1月—2018年1月某院住院患者各种临床标本(痰液、血液、尿液、腹腔引流液等)中分离得到的CRKP共132株,采用Vitek-2 Compact全自动微生物鉴定仪对分离菌株进行体外药物敏感试验;利用拉丝试验筛选高粘液阳性菌株;利用改良Hodge实验对碳青霉烯酶表型进行检测;利用多重PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因型:kpc、imp、vim、ndm、sme、ges、gim、oxa-48;常见毒力基因rmpA、magA、fimH、mrkD、kpn、entB、ybtS、iutA、aerobactin。结果 132株CRKP对头孢类抗生素耐药率较高,氨苄西林、氨曲南次之,对多粘菌素B、四环素、氯霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感;改良Hodge试验阳性118株,阳性率89.39%;132株CRKP中,20株(15.15%)为黏液丝检测阳性。所有CRKP中毒力基因携带情况中,mrkD基因型比例最高,其次为fimH,未检测到magA毒力基因;132株CRKP中,130株检测到kmc基因,2株检测到imp基因,均未检测到ndm、vim、sme、ges、gim、oxa-48毒力基因。结论某院分离得到的CRKP主要毒力基因为mrkD、fimH,耐药基因主要为kpc。     

无菌体液分离的肺炎克雷伯菌耐药及毒力因子研究

目的 分析无菌体液分离的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae isolated from sterile body fluids, SBF-KP)的分布、耐药性及毒力因子的携带情况。方法 收集从无菌体液分离的83株肺炎克雷伯菌,MALDI-TOF质谱仪进行菌株鉴定,Vitek-2compact系统进行药敏试验,黏液丝试验检测菌株高黏液表型,对菌株荚膜型及毒力基因进行PCR扩增和基因测序。结果 无菌体液中,脓液中的肺炎克雷伯菌的检出率最高,其次是腹腔积液,分别为47.0%(39/83)和21.7%(18/83);SBF-KP对复方新诺明、氨曲南、环丙沙星、头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、左旋氧氟沙星耐药率较高,大于20%,对替加环素、阿米卡星、碳青霉烯类药物仍有较高活性;SBF-KP荚膜型以K1、K2型为主,阳性率分别为39.8%(33/83)和13.3%(11/83);SBF-KP高黏液型阳性率为57.9%(48/83),高黏液型菌株中K1、K2型分别占45.8%(22/48)和18.8%(9/48);entB、fimH、uge、wabG、ureA、ycf毒力基因检出率最高,均大于98.0%;脓液与其他无菌体液分离的肺炎克雷伯菌在高黏液表型、rmpA、aerobactin、kfuB检出率方面比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SBF-KP对临床常用药物呈不同程度耐药,对阿米卡星、替加环素、碳青霉烯类药物有较好的药物敏感度;且SBF-KP菌株携带多种毒力因子,荚膜型以K1型、K2型为主,提示临床应进一步加强耐药监测,结合药敏合理选用抗生素,以提高疗效及减少高毒力和高耐药菌株的传播和流行。     

高黏液表型肺炎克雷伯菌的临床分布特征及毒力分析

目的分析医院临床分离的肺炎克雷伯菌的临床分布特征及毒力基因,为临床治疗及医院感染防控提供参考依据。方法收集2022年1至12月宁波市医疗中心李惠利医院临床分离的96株对常规抗菌药物全敏感肺炎克雷伯菌,分析菌株的临床特征并检测其毒力基因。结果96株全敏感肺炎克雷伯菌中,K1、K2、K57为主要荚膜血清型,ST23为主要流行的多位点序列分型表型,其次为ST25、ST86型;高黏液表型肺炎克雷伯菌的铁载体基因ybtS、菌毛定值与黏附基因ycfM以及pLVPK-like毒力质粒pagO基因的携带率均为100.00%,常见的毒力基因如荚膜多糖生成调节基因（rmpA）,铁载体基因（irp-1、fyuA、irp-2、aerobactin、repA）,菌毛定值与黏附基因（mrkD）,脂多糖形成相关基因（wabG）及pLVPK-like毒力质粒相关基因（rmpA2、iroB、icuA、terB、sills）的携带率均高于非高黏液表型肺炎克雷伯菌,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;另外,分离出33株pLVPK-like毒力质粒阳性肺炎克雷伯菌。结论宁波市医疗中心李惠利医院高黏液表型全敏感肺炎克雷伯菌的毒力基因携带率较高,毒力质粒传播较为严重,提示宁波地区亟需关注医院感染防控,谨防全敏感肺炎克雷伯菌同时获得毒力质粒和耐药质粒成为“超级细菌”,给临床治疗带来严峻挑战。     

老年人肺炎克雷伯菌分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况.方法 测定临床分离的40株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶基因.结果 40株肺炎克雷伯菌呈现多重耐药,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb和aac(6')-Ⅱ的阳性率分别为12.5%、75.0%、7.5%和10.0%.携带2种或2种以上基因的菌株有10株(25.0%).结论 临床分离的肺炎克雷伯菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带较高.     

消毒剂-磺胺耐药基因的检测

目的检测临床分离的革兰阴性杆菌菌株Ⅰ类整合子消毒剂-磺胺耐药(qacE△1-sul1)基因的携带情况。方法采用聚合酶链反应技术,对311株革兰阴性杆菌临床分离菌株(分别为大肠埃希菌96株,肺炎克雷伯菌肺炎亚种71株,铜绿假单胞菌64株,鲍氏不动杆菌61株,阴沟肠杆菌19株)进行qacE△1-sul1基因的检测。结果 311株革兰阴性杆菌中180株qacE△1-sul1基因阳性,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肺炎亚种、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌qacE△1-sul1基因阳性率分别为69.8%、53.5%、37.5%、75.4%、26.3%。大肠埃希菌和鲍氏不动杆菌qacE△1-sul1基因阳性率高于肺炎克雷伯菌肺炎亚种、铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌,差异有显著意义(q=3.019～6.129,P<0.05)。结论临床分离菌株qacE△1-sul1基因高携带率可能是目前医院感染的高发因素之一,临床应重视消毒剂的合理使用,并定期了解医院细菌耐消毒剂的情况。     

亚抑菌浓度抗生素对高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因表达的影响

目的 探究在亚抑菌浓度抗生素作用下,高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因表达水平的变化.方法 采用纸片扩散法、Vitek-2 compact法测定菌株对临床常见抗菌药物的敏感性,并用微量肉汤稀释法检测菌株对头孢西丁和阿米卡星的MIC值.聚合酶链式反应(PCR)对荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)及毒力相关基因(rmpA、aerobactin、kfu、alls、magA、wcaG 、qmH、mrkD)进行检测.根据菌株对两种药物的MIC值,配制1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC亚抑菌浓度抗生素梯度.运用qRT-PCR检测1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC浓度头孢西丁、阿米卡星对菌株处理后毒力基因相对表达量的改变,SPSS软件16.0版本对其差异进行比较分析,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)及ERIC-PCR检测菌株之间的同源性.结果 共收集57株高毒力肺炎克雷伯菌,对大多数临床常用抗生素保持敏感,PCR结果显示K1型有17株,K2型21株,K20型2株,K57型8株,有9株未检出血清型.rmpA、aerobactin基因检测全部阳性,wcaG、kfu、magA 3个基因分别检出17株、21株、16株.fimH、mrkD全部阳性.亚抑菌浓度头孢西丁及阿米卡星作用下,与对照组相比,3种浓度(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)的2个抗生素对2种毒力基因均有明显的抑制作用(P＜0.05),头孢西丁的抑制程度最高.3种浓度抑制程度相比,以1/2MIC抗生素抑制效果最强.结论 高毒力肺炎克雷伯菌对临床常用抗生素有较高的敏感性,血清型K1、K2是高毒力肺炎克雷伯菌的常见血清型,在亚抑菌浓度头孢西丁、阿米卡星作用下,rmpA、aerobactin毒力基因表达下降.     

肺炎克雷伯菌致肝脓肿的临床和微生物学特征分析

目的分析肺炎克雷伯菌致肝脓肿的临床和微生物学特征,为肝脓肿患者治疗方案的制定提供依据。方法收集163例肺炎克雷伯菌肝脓肿患者的临床资料,经拉丝试验将感染菌株分为高黏表型菌株和非高黏表型菌株,采用VITEK2型全自动微生物分析仪进行药敏试验,PCR扩增法检测细菌的毒力基因和荚膜血清型,并对结果进行统计学分析。结果肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于50岁以上的中老年人（79.1%）,临床表现以发热最为常见（88.9%）,其中49.7%的患者有糖尿病病史;163株肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药率为0~13%,50株（30.7%）菌株具有高黏表型。高黏表型菌株荚膜血清型主要为K1和K2型,非高黏表型菌株荚膜血清型以K1型为主。此外,两组菌株毒力基因（气杆菌素和rmpA）携带率的差异无统计学意义（P＞0.05）。菌株毒力基因携带情况、荚膜血清型对患者预后好转率的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。采取引流治疗的患者预后好转率显著高于未引流患者（P＜0.05）。结论肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于中老年人,菌株对常用抗菌药物的耐药率较低,高黏表型菌株不能完全代表菌株的高毒力,菌株毒力基因的携带及荚膜血清型对患者预后无影响,及时引流对治疗肝脓肿患者有重要意义。     

肠杆菌科细菌mcr-1流行病学研究

目的探讨临床常见肠杆菌科细菌携带质粒介导多黏菌素耐药基因（mcr-1）的情况,为医院感染防控提供依据。方法收集2018年1月至2022年3月浙江省台州医院临床分离得到的菌株共1980株,包括大肠埃希菌1400株,肺炎克雷伯菌580株。采用PCR检测mcr-1基因;利用微量肉汤稀释法和E-test法检测抗生素对mcr-1阳性菌株的最低抑菌浓度;采用接合试验检测mcr-1基因在可转移质粒上的位置;通过提取细菌DNA基因组进行全基因组测序,并对测序结果进行多位点序列分型、质粒Inc分型和耐药基因识别等分析。结果在1400株大肠埃希菌中,共检测出6株携带mcr-1,阳性率为0.43%;580株肺炎克雷伯菌,仅1株检出mcr-1,阳性率为0.17%。其中5株菌株接合试验成功。6株大肠埃希菌的ST型分别是ST648、ST95、ST359、ST602、ST453、ST156,肺炎克雷伯菌是ST25。质粒Inc分型结果显示不同菌株携带相同类型质粒,提示该类质粒可以在菌株间水平传播。耐药基因分析发现7株细菌均携带大量的耐药基因,其中1株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时携带mcr-1和碳青霉烯耐药基因。结论mcr-1在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分离率相对较低,然而考虑到含有mcr-1的质粒在不同细菌之间水平传播的潜力,以及mcr-1与同一质粒内的多个耐药基因整合的能力,在临床环境中要加强对多重耐药菌的管理。     

产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和克雷伯菌的主要基因型分布特点。方法用表型确证试验筛选出临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌114株。应用PCR方法扩增产酶株的TEM、SHV和CTX-M基因。结果PCR结果显示TEM、SHV和CTX-M基因的总阳性率分别为40.4%、20.7%和83.3%,其中大肠埃希菌分别为48.1%、1.3%和93.5%,肺炎克雷伯菌分别为24.3%、81.1%和62.2%。46.8%的大肠埃希菌和51.4%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因。结论产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV。大多数菌株同时携带多个基因。     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床特点及感染菌的分子特征

目的 研究肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床情况及微生物特点,有助于为临床快速识别,有效控制提供依据。方法 收集衢州市人民医院2013年1月至2019年12月符合肝脓肿诊断,由肺炎克雷伯菌引起的完整病例,分析临床特征,微量肉汤稀释法进行药敏试验,PCR方法检测血清荚膜型和毒力基因。结果 肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于男性,37.83%(14/37)患者有糖尿病史,37.83%(14/37)患者伴胆囊结石伴胆囊炎。脓肿以单发为主,单发脓肿以肝右叶为主,占74.28%(26/35)。40.54%(15/37)患者发生转移性感染,32.43%(12/37)患者发生肺部感染。实验室检查:WBC增高(13.94±6.37)×109/L,CRP显著增高(148.85±56.75)mg/L,对多种抗生素敏感。78.37%(29/37)株肺炎克雷伯菌产高黏液表型。血清荚膜型以K1、K2型为主,携带多种毒力基因,毒力基因检出情况:rmpA+为78.37%(29/37),iroN+为72.97%(27/37),kfu+为64.86%(24/37)。结论 肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于有肝胆疾病或糖尿病的患者,以单发脓肿为主,多数患者可以发生转移,严重者甚至引起失明、中枢神经系统感染,多以携带多种毒力基因、高黏液表型、血清荚膜型以K1、K2型为主的肺炎克雷伯菌引起。及时了解本地区的菌株分子特点有助于临床医生早期诊断和治疗。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla_KPC-2,此外还有3株菌同时携带bla_NDM-1;还检测出了不同型别的β-内酰胺类（TEM、SHV、CTX-M等）、氨基糖苷类（rmtB）、磷霉素类（fosA）、喹诺酮类（qnr）、四环素（tet）、磺胺类（sul）、甲氧嘧啶（dfrA）等耐药基因;检测出5株耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌,携带耐碳青霉烯酶基因同时携带高毒力质粒及多种亚型;23株CRKP中毒力质粒相关的毒力因子rmpA和rmpA2的携带率分别为21.7%和60.9%。结论 23株 CRKP菌株以重症医学科和呼吸肿瘤内科检出率最高;标本类型以痰液和血液为主,提示呼吸道和血流感染为 CRKP 感染的防控重点;23 株 CRKP 均携带 bla_KPC-2;CRKP 菌株 MLST 分型以 ST11为主,占73.9%;荚膜K抗原类型均为KL64。     

临床分离133株肺炎克雷伯菌耐药机制和基因分型研究

目的 研究临床分离肺炎克雷伯菌的耐药机制及基因多态性.方法 用WHONET5.4分析菌株药敏情况.PCR检测菌株Ⅰ类整合酶、ISCR和ESBLs基因;ERIC-PCR检测基因型,SPSS分析其多态性.结果 除亚胺培南和美洛培南,产ESBLs菌的耐药率明显高于不产ESBLs菌(P<0.005).对Ⅰ类整合酶、ISCR、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M,88株产ESBLs株的阳性率分别为59.1%、43.2%、69.3%、4.5%、45.5%;45株不产ESBLs株的阳性率分别为40.0%、15.6%、22.2%、4.4%、6.7%.根据指纹图谱把133株肺炎克雷伯菌分为126种,经SPSS系统聚类分析,归为20个大类.结论 南方医院产ESBLs肺炎克雷伯菌主要是CTX-M基因型,整合子和ISCR可以共存;ERIC-PCR是一种效果较好的基因分型方法,该院肺炎克雷伯菌呈散发存在.     

肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与毒力基因分布及相互关系研究

目的：研究肺炎克雷伯菌的耐药性与毒力基因的分布及二者间的关系,为临床合理使用抗菌药物和控制感染提供依据。方法分离出172株肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法（K‐B法）做药物敏感试验;聚合酶链反应（PCR）检测 rmpA、aer‐1、aer‐2、magA、gyrB‐2、ybt、wcaG毒力基因。结果172株肺炎克雷伯菌分离株对头孢菌素类头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟与头孢曲松的耐药率分别为38．4％、34．9％、33．1％、32．0％。 rmpA、aer‐1、aer‐2、magA、gyrB‐2、ybt、wcaG 毒力基因的阳性率分别为49．4％、55．8％、42．4％、16．3％、51．7％、53．5％、20．9％。肺炎克雷伯菌毒力基因分布与耐药性呈负相关,差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论肺炎克雷伯菌毒力基因数与耐药性密切相关,临床应注意抗菌药物的合理应用,防止肺炎克雷伯菌耐药性的产生和传播。     

宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因检测

目的 了解近三年宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒AmpC酶基因流行状态.方法 用K-B法对临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作耐药表型分析,对可能产生Am-pC酶的菌株通过聚合酶链反应(PCR)检测AmpC酶基因,然后用三维试验予以证实.结果 140株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒AmpC酶基因阳性率2004、2005和2006年分别为4.4%(2/45)、8.6%(3/35)和13.3%(8/60);其中2004、2005年所检出的均为DHA基因型,2006年分别从2株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌中检出ACT-1基因.结论 宁波地区临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶基因的流行率有增长趋势.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药型与基因分型

目的 分析肺炎克雷伯菌的耐药现状,探讨其耐药型与基因组型间的关系,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)各基因型的流行状况.方法 用纸片扩散法检测117株肺炎克雷伯菌对20种抗生素的耐药情况.用PFGE实验探讨耐药表型与基因组型间的关系.用PCR扩增所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因片段,分析ESBL各基因型的流行状况.结果 肺炎克雷伯菌耐药情况严重,产ESBL肺炎克雷伯菌检出率达到43.59%.PFGE将117株肺炎克雷伯菌分为3群,群间相似度为37.30%,没有发现特异的ESBL条带.PCR扩增检出SHV型15株,占29.40%;TEM型39株,占76.50%;CTX-M型9株,占17.60%.同时携带SHV、CTX-M基因者有19株,占37.30%.结论 该院肺炎克雷伯菌的耐药现象严重、多重耐药现象突出,ESBL检出率高.该次实验未发现由同一菌株所致的医院感染,肺炎克雷伯菌的耐药表型与PFGE基因分型结果 可以表现一致,也可以表现为不同.产ESBL肺炎克雷伯菌的基因型以TEM和SHV为主,同一菌株携带多个基因的现象较为普遍.     

大肠埃希菌和克雷伯菌的qnr基因流行情况调查

目的了解上海部分医院大肠埃希菌和克雷伯菌qnr基因流行情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)对267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌(其中产酸克雷伯菌4株)的qnr基因进行筛选,全自动细菌鉴定仪VITEK系统进行鉴定和最低抑菌浓度测定,并采用PCR检测qnr基因阳性菌株Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因。结果在267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其中1株为大肠埃希菌,2株为肺炎克雷伯菌。3株qnr基因阳性菌株均产超广谱内酰胺酶(ESBLs),呈多重耐药性,且Ⅰ型整合酶均阳性、Ⅱ型整合酶均阴性。结论在所收集的大肠埃希菌和克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其阳性率并不高。3株qnr基因阳性菌株均产ESBLs,且呈多重耐药性,qnr基因存在于Ⅰ类整合子上。     

大肠埃希菌和克雷伯菌的qnr基因流行情况调查

目的 了解上海部分医院大肠埃希菌和克雷伯菌qnr基因流行情况.方法 采用聚合酶链反应(PCR)对267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌(其中产酸克雷伯菌4株)的qnr基因进行筛选,全自动细菌鉴定仪VITEK系统进行鉴定和最低抑菌浓度测定,并采用PCR检测qnr基因阳性菌株Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因.结果 在267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其中1株为大肠埃希菌,2株为肺炎克雷伯菌.3株qnr基因阳性菌株均产超广谱内酰胺酶(ESBLs),呈多重耐药性,且Ⅰ型整合酶均阳性、Ⅱ型整合酶均阴性.结论 在所收集的大肠埃希菌和克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其阳性率并不高.3株qnr基因阳性菌株均产ESBLs,且呈多重耐药性,qnr基因存在于Ⅰ类整合子上.     

高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌流行病学和分子生物学分析

目的 对沈阳市第四人民医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的流行病学分析,并对其中高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的表型、耐药基因、荚膜血清和毒力因子进行探究,为深入了解CR-hvKP的耐药机制、进化途径以及鉴别依据提供参考。方法 收集2017—2019年我院住院患者临床样本中分离出的肺炎克雷伯菌（KP）,使用全自动微生物分析仪鉴定和药敏实验,再利用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）和EDTA-改良碳青霉烯灭活实验（eCIM）方法进行菌株表型检测,PCR方法进行碳青霉烯耐药基因检测。通过拉丝实验筛选CR-hvKP,采用PCR进行荚膜血清型和毒力因子检测。结果 本研究共收集到KP 1 531株,其中CRKP 160株（10.45%）,主要来源于痰液标本,占比53.13%。对头孢菌素类、青霉素类、美罗培南、亚胺培南完全耐药,对复方磺胺甲噁唑和替加环素敏感,耐药率分别为45%和10%。CRKP携带blaKPC 基因127株,blaNDM基因26株,同时携带2种基因3株,携带blaOXA-48基因2株,未检测出任何基因2株。mCIM对碳青霉烯酶检出率为95.56%, eCIM对丝氨酸酶检出率为93.18%,对金属β-内酰胺酶检出率为96.55%。拉丝实验初步筛选得到6株CR-hvKP,分离率3.75%,低于其他已报道医院检出率。除1株产K2型荚膜血清菌株来自血液标本外,其余5株来自痰标本,产K1型荚膜血清。6株CR-hvKP全部携带耐药基因blaKPC和4种毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN。结论 沈阳市第四人民医院CRKP检出率位于全国平均水平,CRKP对多种抗菌药物耐药,对替加环素敏感,主要产KPC类碳青霉烯酶。CR-hvKP检出率低于其他已报道医院,具有产K1型荚膜血清,携带blaKPC耐药基因和多种毒力因子的特点。当K1型产KPC类碳青霉烯酶CRKP同时携带毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN,可进化成为CR-hvKP,提示临床应注意鉴别并进一步加强监测,以防止高毒力耐药菌株的传播和流行。