c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达与垂体腺瘤侵袭性的研究

目的　同时检测c fos、c jun、c myc基因蛋白在垂体腺瘤中表达及特点 ,探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。方法　 6 0例垂体腺瘤分为侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤两组 ,采用免疫组化EnVision法检测c fos、c jun、c myc基因蛋白。结果　c fos、c jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,c myc在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;c fos、c jun、c myc三者同时在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　c myc蛋白在侵袭性垂体腺瘤中高表达 ,可能影响其生长及生物学行为 ,c myc可做为衡量垂体腺瘤侵袭性的一个参考指标。     

双向电泳分析二烯丙基二硫诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的 以二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性早幼粒细胞性白血病HL60细胞分化为模型，利用双向凝胶电泳(2-DE)技术分析比较DADS诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法 细胞形态学观察与NBT还原反应结合验证HL60细胞的分化；用双向电泳技术分析蛋白表达差异。结果 分化后细胞形态发生明显变化，细胞核变小；NBT还原能力明显增强。双向电泳技术分析筛选了32个差异点。结论 双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达的变化，DADS诱导HL60细胞分化后导致部分蛋白的表达增加和降低。     

AG490对胆囊癌细胞JAK2/STAT3信号传导通路的抑制作用研究

目的研究JAK激酶抑制剂AG490对人胆囊癌细胞株GBC-SD生长增殖的影响,探讨AG490对JAK2/STAT3信号传导通路的抑制作用及其对胆囊癌治疗的意义。方法培养GBC-SD细胞,根据研究目的设置实验组和对照组,在第一项实验中,实验组以3个浓度梯度的AG490作用于GBC-SD细胞,对照组加入等量PBS,继续培养,24 h后以MTT法测定OD值,反映各组细胞的增殖活性;在第二项实验中,实验组以100μmol/mol的AG490作用24 h,对照组平行培养,收集两组细胞进行免疫印迹法检测,观察AG490对细胞中JAK2、STAT3蛋白表达的影响。结果 AG490能有效抑制胆囊癌细胞增殖,且抑制作用呈浓度依赖性,即浓度越高,抑制作用越明显,不同浓度组细胞增殖抑制率差异有统计学意义(P0.05);AG490作用后细胞中JAK2、STAT3蛋白浓度降低,与对照组比较差异亦有统计学意义(P0.05)。结论 AG490可以抑制细胞中JAK2、STAT3蛋白的表达,通过抑制JAK2/STAT3信号传导通路发挥抑制胆囊癌细胞增殖的作用。     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（18mer，21mer）对人白血病HL—60细胞中c－myc基因表达的抑制作用。用HL－60活细胞计数，RNA含量的RT－PCR测定和c－myc基因蛋白的免疫组化染色检查。结果：两个反义寡核苷酸都能抑制HL－60细胞的增殖，增殖抑制率为11％～75％。反义核酸还抑制c－mycmRNA和Myc蛋白的表达，而对c－mcy基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖没有影响。结论：反义寡核苷酸能抑制c－myc基因的过度表达。     

DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制。方法采用MTT法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平。结果DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性，且DADS（20μmol／L）与ATRA（10^-6mol／L）对HL-60细胞增殖活性影响相近（P〈0．01），DADS（20μmol／L）作用12h后能引起G2，M期细胞百分数增高并达到最大值，上调cyclinBl的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位。结论DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点，它的激活与cyclinB1细胞质定位有关。     

AG490对喉癌细胞STAT3信号传导通路的抑制作用

目的 探讨JAK激酶抑制剂AG490对人喉鳞癌细胞株Hep-2的增殖及凋亡的影响,揭示AG490对STAT3信号传导通路的抑制作用,探讨AG490在喉癌治疗中的意义.方法 应用AG490作用于Hep-2细胞,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,固定化蛋白质印迹法(Western b1ot)检测STAT3和p-STAT3蛋白的表达.结果 AG490能有效抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖,该抑制作用具有时间与浓度依赖性的特点.AG490诱导喉癌细胞凋亡,且随作用时间延长,凋亡率增加.AG490能抑制STAT3和p-STAT3蛋白在Hep-2细胞的表达.结论 AG490可以下调Hep-2细胞中STAT3和p-STAT3蛋白的表达,抑制喉癌细胞增殖,促进喉癌细胞凋亡.     

AG490对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及侵袭性的影响及机制

目的：探讨JAK2激酶（Januskinase2,JAK2）特异性抑制剂AG490（tyrphosin AG490）对人宫颈癌Hela细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力的影响及其机制.方法：用不同浓度的JAK2激酶抑制剂AG490处理Hela细胞,MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Western Blot检测信号传导与转录激活因子3（Stat3）、磷酸化Stat3（P-Stat3）、基质金属蛋白酶-2（Mmp-2）和血管内皮生长因子（Vegf）蛋白的表达.结果：AG490能明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖,使细胞周期阻滞,促进宫颈癌Hela细胞凋亡,并可使P-Stat3,Mmp-2和Vegf的蛋白表达水平明显降低.结论：AG490通过阻断JAK2/STAT3信号通路活化,抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡,同时下调P-Stat3,Mmp-2和Vegf表达,抑制宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力.阻断JAKs/STATs信号转导通路可能成为治疗宫颈癌及抑制其侵袭转移的一种新的策略.     

AG490对人胃癌裸鼠移植瘤中瘦素、JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨在AG490干预下,瘦素(leptin)和JAK2/STAT3信号通路对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,以及与其基因表达水平之间的关系。方法建立人胃癌SGC-7901细胞BALB/c-nu雄性裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机平均分为4组,A组为空白对照组,B组腹腔注射AG490,C组腹腔注射AG490和碧生源牌减肥茶灌胃,D组腹腔注射5-FU。记录各组裸鼠肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率,RT-PCR检测肿瘤中leptin、JAK2、STAT3 mRNA表达水平。结果AG490、5-FU可抑制人胃癌移植瘤的生长,同时均可降低leptin表达水平;AG490可同时降低JAK2、STAT3mRNA的表达水平,而5-FU不能降低JAK2、STAT3mRNA的表达;碧生源牌减肥茶对瘤重和leptin、JAK2、STAT3mRNA表达水平无影响。结论 AG490可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路降低leptin的表达,进一步抑制胃癌细胞增殖。leptin的调控除了JAK2/STAT3信号通路外可能还存在其他途径。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

【摘要】 目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及意义。方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组（正常的PASMCs）、0μM 组（予30 μg/L PDGF-BB 孵育48h)和25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组（25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组分别给予25/1、50/3、100/5μmol/L AG490/5-Aza共同孵育细胞）。采用RT-qPCR检测IL-6、GATA6、JAK2及STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测GATA6、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结果 与对照组比较,0 μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达均增加,GATA6mRNA及蛋白水平降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达升高（P＜0.05）。与0μM AG490组比较,25、50、100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2和STAT3mRNA的表达均降低,GATA6mRNA及蛋白表达升高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,50和100μM组中p-STAT3/STAT3水平降低（均P＜0.05）;与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6mRNA表达降低,GATA6蛋白、p STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,JAK2、STAT3mRNA水平无显著差异（P＞0.05）;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6mRNA表达增高(P＜0.05)。结论 AG490及5-Aza对 PDGF-BB诱导的PASMCs增殖具有抑制作用,该作用可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制IL-6调节GATA6启动子甲基化有关。     

蝌蚪提取液诱导人早幼粒白血病细胞分化的实验研究

目的 :探讨蝌蝌提取液 (T871)对白血病细胞的诱导分化作用。方法 :利用细胞生长曲线、形态学观察、细胞免疫化学及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察了T871诱导HL 60细胞分化的作用和分化过程中癌基因c myc、c myb表达的变化。结果 :T871能抑制HL 60细胞的增殖 ,形态学表现为类似单核 /巨噬细胞 ,同时T871还能使HL 60细胞的NBT还原能力、ANAE活性显著增强 ,同时伴有癌基因c myc、c mybmRNA表达的下调。结论 :T871能诱导HL 60细胞向单核 /巨噬细胞方向分化 ,c myc、c myb癌基因可能参与了此过程     

马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的观察马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK—STAT通路的影响。方法马钱子碱和／或JAK—STAT途径特异性抑制剂AG490培养多发性骨髓瘤U266细胞,MTT法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响,计算IC50值,用于实验。RT—PCR法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞stat3、star5mRNA表达的影响。结果（1）马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性。（2）马钱子碱AG490均可下调stat3、stat5mRNA表达水平（P〈0．05）,而马钱子碱作用强于AG490组,并呈时间依赖性。马钱子碱＋AG490组作用强于马钱子碱、AG490单独作用组,呈时间依赖性。结论马钱子碱能下调stat3、stat5mRNA表达水平,抑制细胞JAK—STAT信号转导通路,从而抑制多发性骨髓瘤U266细胞增殖。     

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

二烯丙基二硫抑制HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达调控

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达的影响。方法采用MTT和细胞记数法分析DADS对细胞生长的影响、蛋白印迹法检测细胞内c-myc蛋白表达水平。结果 DADS能抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05),DADS(20μmol/L)作用12 h后能下调c-myc蛋白的表达水平。结论 DADS抑制HL-60细胞增殖,其机制可能与下调c-myc表达水平密切相关。     

高压氧治疗外伤性癫痫大鼠模型的机制

目的：探讨高压氧治疗外伤性癫痫的机制。方法采用大脑皮层注射氯化亚铁建立外伤性癫痫大鼠模型,将癫痫大鼠分为无接受高压氧治疗的模型组及接受高压氧治疗的治疗组,将正常大鼠设立为正常组,对3组进行行为学观察及脑电图记录。取脑组织观察神经细胞形态改变,检测各组标本 c －fos mRNA、c －jun mRNA、c －myc mRNA 的表达水平。结果治疗组脑细胞形态学改变相对于模型组更少有神经元变性及凋亡。治疗组的c －jun mRNA、c －myc mRNA 的表达水平较模型组明显下降（P ＜0．01）。结论高压氧治疗外伤性癫痫通过阻断c －jun、c －myc 基因介导的细胞凋亡通路而起到治疗效果。     

鱼藤酮通过调控JAK/STAT3通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：探究鱼藤酮通过调控酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：将口腔鳞状细胞癌SCC25细胞分为对照组、低浓度鱼藤酮组(5μmol/L)、中浓度鱼藤酮组(10μmol/L)、高浓度鱼藤酮组(20μmol/L)、JAK2抑制剂AG490组(40μmol/L AG490)。MTT法检测各组SCC25细胞活力;克隆形成实验检测SCC25细胞增殖情况;流式细胞术检测SCC25细胞凋亡情况;Western blotting检测SCC25细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较,低浓度鱼藤酮组、中浓度鱼藤酮组、高浓度鱼藤酮组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平呈剂量依赖性显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平呈剂量依赖性显著增加(P<0.05～P<0.01),AG490组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平显著降低,...     

AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察AG490对前列腺癌DU145细胞增殖及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:DU145细胞分组培养,对照组单纯用DMEM高糖培养基培养,实验组给予终浓度为10、25、50及80μmol/L的AG490,分别培养24、48和72h后,采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率,Western blot检测作用72h后STAT3信号通路相关蛋白(p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL)。结果:AG490能够抑制DU145细胞的增殖,呈剂量(F=786.170,P<0.001)、时间依赖性(F=354.570,P<0.001)。AG490作用于DU145细胞72h后,p-JAK2、STAT3、p-STAT3、CyclinD1及BCL-xL蛋白的表达均降低。结论:AG490能抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,其机制可能与阻断STAT3信号通路有关。     

Expression of oncoproteins c-fos and c-jun in hypertrophic scars and chronic dermal ulcers and their regulation of basic fibroblast growth factor

目的　探讨c fos与c jun两种原癌基因产物在溃疡与增生性瘢痕创面表达的特征与规律以及与不同组织修复结局发生的关系。方法　 16例标本均取自于外科手术患者 ,其中增生性瘢痕 8例 ,溃疡创面 8例 ,另有正常对照皮肤 5例取自增生性瘢痕患者作为对照。用免疫组化法 (ABC法 )检测c fos与c jun两种癌蛋白以及bFGF在三种组织切片的分布特征。结果　在正常皮肤c fos与c jun的阳性表达主要见于表皮基底细胞和少量皮下成纤维细胞 ,但在相应部位c jun的表达较c fos为弱。在增生性瘢痕 ,c fos与c jun均出现强阳性表达 ,主要见于成纤维细胞。在溃疡组织 ,c fos与c jun的联合表达多见于毛细血管内皮细胞、部分炎症细胞以及成纤维细胞胞浆。结论　增生性瘢痕与溃疡创面c fos与c jun表达量与部位同正常皮肤存在显著差异 ,提示这两种原癌基因产物在影响和调控组织修复中有重要作用。     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.