树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和小鼠脾淋巴细胞(小鼠脾LC)的最佳效靶比并观察被有效激活的TIL和小鼠脾LC等对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:从荷瘤小鼠四肢长骨提取DC,联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏DC,然后依据不同的激活效靶比用致敏DC体外激活TIL、小鼠脾LC,分别检测、比较被不同程度激活的TIL、小鼠脾LC以及未激活的小鼠脾LC、未激活的TIL对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果:①当DC:靶细胞(E/T)为1:400和1:200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱;当E/T为1:100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当E/T=1:50时,杀伤活性增加,与前三者比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而当E/T=1:25、1:12.5和1:6.25时,杀伤活性与E/T=1:50时比较无明显变化(P＞0.05);②当E/T=1:50时,未经DC激活的小鼠脾LC(A组)杀伤率为(9.73±1.40)%,未经DC激活的TIL(B组)和DC激活的小鼠脾LC(C组)杀伤率分别为(50.91±2.36)%和(49.70±2.70)%,DC激活的TIL(D组)的杀伤率为(73.49±2.46)%.A组与其他组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组与其他各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:①当E/T=1:50时,DC能很好的发挥抗原提呈作用,使小鼠脾LC和TIL得以充分激活;②充分激活的小鼠脾LC或TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性较未激活的小鼠脾LC或未激活的TIL均具有明显的提高,尤以激活的TIL的杀伤活性最强.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞体外抗小鼠乳腺癌活性的研究

目的:探讨致敏的树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外抗小鼠乳腺癌活性.方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对小鼠C127乳腺癌细胞、小鼠MA782乳腺癌细胞和小鼠B16黑色素瘤细胞的杀伤活性.结果:经C127细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL具有很强的对C127细胞的杀伤活性[杀伤活性为(70.21±2.86)%],明显高于其对MA782和B16细胞的杀伤活性[杀伤活性分别为(51.31±3.25)%,(31.41±2.65)%],也明显高于未经DC激活的TIL、C127-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对C127细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(48.30±2.97)%,(47.76±3.43)%和(17.23±2.56)%]和对MA782细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(38.52±2.87)%,(36.62±2.75)%和(18.07±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(25.38±2.63)%,(24.82±2.81)%和(17.34±2.81)%],同时B16细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(TIL来源于C127瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性.结论:经C127细胞全细胞性抗原致敏的DC能诱导TIL产生高效而特异的体外抗小鼠乳腺癌免疫.     

大肠癌肿瘤抗原修饰的树突状细胞活性检测

目的:测定经大肠癌肿瘤抗原修饰的树突状细胞(DC)的活性. 方法:分离结肠癌患者的外周血单个核细胞,应用粒细胞/ 巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4进行体外诱导,获取DC,以流式细胞仪进行表型鉴定;用Lovo细胞制备大肠癌肿瘤抗原并用以修饰DC,以肿瘤抗原修饰后的DC为刺激细胞,以自体淋巴细胞为效应细胞,采用MTT法检测刺激细胞与效应细胞在不同比例(1:10,1:100,1:1 000)以及不同共孵时间(24 h,48 h,72 h)下,效应细胞对大肠癌细胞的排斥杀伤率.结果:从大肠癌患者外周血单个核细胞中成功诱导出表达CD11c、CD80和HLA-DR的DC,经肿瘤抗原修饰后,上述分子表达上调.肿瘤抗原修饰后的DC与淋巴细胞以1:100共孵48 h时,淋巴细胞的肿瘤细胞排斥杀伤率较高.结论:从大肠癌患者外周血中分离诱导出的DC,被肿瘤抗原修饰后,在体外可激活自体淋巴细胞,提高淋巴细胞的杀瘤活性.     

M蛋白致敏树突状细胞诱导的抗骨髓瘤细胞效应

目的:探讨M蛋白致敏树突状细胞(DC)诱导激活的自体T细胞对骨髓瘤细胞特异性免疫杀伤效应.方法:取多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4和TNF-α体外联合诱导生成DC,用DEAE-纤维素提取法自MM患者血清中分离、纯化M蛋白.以M蛋白冲击致敏DC(同时设未致敏的DC为对照),流式细胞术分析DC免疫表型,并与自体T淋巴细胞进行混合淋巴细胞反应.51Cr释放法测定T细胞对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、U266细胞)的杀伤活性.结果:经M蛋白致敏的DC激发自体T细胞增殖的能力明显强于未致敏的DC(P＜0.05);同时负载M蛋白DC激活的T细胞杀伤活性也明显强于对照组(P＜0.01),而两组T细胞对U266细胞均无明显杀伤活性.结论:M蛋白致敏DC能有效诱导自体T细胞对骨髓瘤细胞的特异性杀伤作用.     

DC联合SEA激活TIL体外杀伤小鼠肝癌细胞活性研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和H22细胞全细胞性抗原致敏DC,然后用已致敏的DC联合SEA激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞的杀伤活性,并与对照组进行比较。结果TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(12.26±1.28)%],用不同方式激活的TIL对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应方式激活的脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性;SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(64.35±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(75.23±3.21)%],而已致敏DC联合SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(86.29±3.83)%]。结论用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA能显著激活TIL产生高效的对H22细胞的杀伤活性。     

脐带血树突状细胞疫苗体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的 :制备人脐带血来源的树突状细胞 (DC )疫苗 ,并观察其在体外对人肝癌细胞的杀伤活性。方法 :rhGM CSF10 0 μg/mL、rhTNF α 5 0u/mL诱导人脐带血CD3 4+ 干细胞向DC分化 ,用超声破碎的人肝癌细胞BEL 740 2裂解物冲击DC ,制备DC疫苗。活细胞计数和中性红比色法检测DC疫苗致敏的脐带血或外周血淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性。结果 :脐带血CD3 4+ 细胞在细胞因子诱导下 ,细胞体积增大 ,变为不规则形 ,细胞数量增多 ,形成细胞集落。在培养后期集落周围的细胞伸出长的树枝状突起并不断从集落脱落下来。活细胞计数和中性红比色法显示负载肿瘤抗原的DC致敏的淋巴细胞在体外对BEL 740 2的杀伤活性明显强于未致敏的淋巴细胞 (P <0 0 1) ,DC致敏的脐带血来源淋巴细胞和DC致敏的外周血来源淋巴细胞的杀伤活性分别为 44 0 9%和 47 92 % (P >0 0 5 )。结论 :人脐带血干细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DC。经肝癌细胞裂解抗原致敏、人脐带血来源的DC疫苗 ,能增强淋巴细胞对相应人肝癌细胞的体外杀伤效应 ,而且DC疫苗对脐带血来源的初始型淋巴细胞和外周血来源的淋巴细胞有同样的激活作用     

自体肿瘤抗原修饰的树突状细胞活化T淋巴细胞的杀瘤效应

目的:观察自体肿瘤抗原修饰的树突状细胞(DC)活化的T淋巴细胞的杀瘤效应.方法:取结肠癌患者原发病灶手术标本,贴壁法培养获取结肠癌细胞,制备肿瘤抗原.分离同一患者外周血单个核细胞,体外诱导为DC,用肿瘤抗原修饰.尼龙棉柱过滤获取外周血T淋巴细胞.将肿瘤抗原修饰的DC与T淋巴细胞按1∶100的比例共孵12 h、24 h、36 h、48 h,MTT法观察T淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤作用.结果:肿瘤抗原修饰36 h后,DC的CD11c、CD80、HLA-DR表达均较修饰前增高,并且高于肿瘤抗原修饰24 h、48 h的DC(P均＜0.05).肿瘤抗原修饰36 h的DC与自体T淋巴细胞按1∶100共孵育36 h,T淋巴细胞的肿瘤细胞杀伤率大于共孵育12 h、24 h、48h组(P均＜0.05).结论:肿瘤抗原修饰的DC在体外可以增加T淋巴细胞的活性,以DC∶T淋巴细胞为1∶100共孵36 h时,T淋巴细胞活性最高.     

树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的特异性杀伤效应。方法 :从人外周血中分离出外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcell,PBMC) ,在GM -CSF和IL - 4的作用下培养 7天诱导出DC ,然后PBMC或DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL ;在调节好一定浓度靶细胞 (人肝癌细胞系HepG2及人肺腺癌细胞系A5 4 9)中加入效应细胞 (DC或PBMC) ,4 8h后瑞氏染色计数残存细胞数 ,计算杀伤率。结果 :DC激活的CTL对HepG2 杀伤率为 71.6 % ,而PBMC(APC ,非T细胞 )激活的CTL杀伤率为 4 3.8% ,两者有显著性差异 ,P <0 .0 1。此外 ,DC诱导的肝癌细胞抗原特异性CTL对肺癌细胞的杀伤率仅为 2 3%。结论 :DC诱导的CTL比PBMC高效 ,而且具有较高的特异性。     

DC联合香菇多糖激活TIL体外抗小鼠肝癌研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的树突状细胞(dendritic cell,DC)联合香菇多糖激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法:从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,体外致敏DC,然后用已致敏的DC联合香菇多糖激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞和S180细胞的杀伤活性。结果:各组效应细胞对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应的效应细胞对S180细胞的杀伤活性;TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(9.89±1.28)%];香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(62.46±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(72.35±3.21)%],而已致敏DC联合香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(82.32±3.83)%],它们之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合香菇多糖能显...     

BGM细胞,Hela细胞,HEL细胞与A549细胞对HSV-1敏感性的比较

用单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１）感染ＢＧＭ细胞、Ｈｅｌａ细胞、ＨＥＬ细胞及Ａ５４９细胞，利用空斑试验，比较四种细胞对ＨＳＶ－１的敏感性。结果示，ＨＳＶ－１在ＢＧＭ细胞培养中空斑形成单位（ＰＦＵ）数最多，出现细胞病变的时间早。提示ＢＧＭ细胞可为ＨＳＶ－１的分离培养提供一种新的、敏感细胞。     

CRYOPRESERVATION OF HEMATOPOIETIC CELLS

The results of our studies on cryopreservation of hematopoietic cells are reported. Freezing tech niques, the effect of freezing rate and cryopreserva- tive agent on the viability of bone marrow cells, .and transplantation of cryopreserved bone marrow cells are described. The use of liquid nitrogen for the preservation of hematopoietic cells from dif ferent sources aids in the treatment of many organic .diseases including some malignant tumors.     

人类自然杀伤细胞对靶细胞的选择性结合

采用单个细胞水平细胞毒方法研究比较了正常人外周血自然杀伤(NK)细胞对不同靶细胞结合与杀伤活性的差别。发现NK细胞对人胚胎成纤维细胞和低分化鼻咽癌(CNE-2)细胞的结合率明显高于对人成骨肉瘤细胞(OS-732)和PLC/PRF/5人肝癌细胞,结合并杀伤新鲜切除人肝癌细胞,而对同一病人的癌周肝细胞则无作用;在同一株CNE-2细胞中,NK多选择性地与核浆比例大的靶细胞结合。以上结果说明NK细胞在发挥自然细胞毒过程中具有一定的选择性,选择性地结合并杀伤分化差或幼稚的靶细胞。     

内皮细胞对平滑肌细胞增殖和脂质代谢的影响

本研究证明:自兔血浆分离得到的低密度脂蛋白(LDL)具有促进家兔主动脉平滑从细胞(SMC)的体外增殖作用,LDL与融合的家兔主动脉内皮细胞(EC)作用后的条件培养液则无促SMC增殖作用;稀疏生长EC条件培养液能提高SMC的LDL受体活性,促进胞内胆固醇积聚;LDL与融合EC作用后的条件培养液能抑制SMC LDL受体活性,抑制胞内胆固醇积聚;并使与天然LDL竞争结合LDL受体的能力明显下降。上述结果提示:不同生长状态的EC对SMC增殖及脂质代谢起不同的作用。     

骨髓像解析

本文复习了160例正常骨髓像。按形态学及造血细胞克隆增殖分化形成集落以及构成集落细胞的观点,提出骨髓像解析问题。其目的在于了解多种血细胞存在的正常范围和各种血细胞数间的关系,企望对骨髓像给予合理的解释,为诊断血液系统疾病提出依据。     

大鼠肝Ito细胞的体外培养及肝素对其抑制作用的观察

用胶原酶，ＰｒｏｎａｓｅＥ灌流消化肝脏及Ｎｙｃｏｄｅｎｚ等密度离心成功地分离正常大鼠肝Ｉｔｏ细胞（ＮＩｔｏ）及肝纤维化大鼠Ｉｔｏ细胞（ＣＩｔｏ），并培养传代。刚分离的细胞在紫外线照射下可见很快消退的自发荧光；胞质内有大量脂滴，随培养时间延长，胞质内脂滴减少，微丝增加，内质网扩张、增多；结蛋白（Ｄｍ）免疫组化染色阳性。上述结果证实，分离细胞为Ｉｔｏ细胞。经观察，ＣＩｔｏ比ＮＩｔｏ生长快，体积大，表达α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ），Ⅰ及Ⅳ型前胶原能力强。肝素在体外不但抑制Ｉｔｏ细胞的生长，而且抑制其表达α－ＳＭＡ，Ⅰ及Ⅳ型前胶原。     

人鼻咽部的APUD细胞

从12例婴幼儿、少年儿童及成人尸体鼻咽部连续切片标本中,证实这些标本均存在APUD细胞。本资料通过改良嗜银法检验发现嗜银细胞;采用Fontana—Masson亲银反应发现黑素细胞;在铅苏木精染色的切片标本中亦见APUD细胞的阳性反应。对不同年龄期的人鼻咽部APUD细胞作了计数和分布描述,并讨论了其分布与鼻咽部肿瘤可能存在的关系。     

LAK细胞对人肝癌细胞及乙型肝炎病毒的杀伤活性

由健康人外周血制备的ＬＡＫ细胞加ｒＩＬ－２体外培养时间分别为４天和７天，其对人肝癌细胞的杀伤活性分别是５８．７％及４３．２％；其对人肝癌细胞所分泌的ＨＢＶ表面抗原和ｅ抗原也有一定的杀灭活性；结果揭示，ＬＡＫ细胞对与肝炎病毒密切相关的肝癌治疗有着潜在的临床意义。     

淋巴管内皮细胞培养技术的改进

①目的改进淋巴管内皮细胞的培养方法，为该方面的基础和临床研究提供良好的平台。②方法本研究采用的研究方法包括细胞培养、免疫组织化学、光镜观察、透射电镜观察、扫描电镜观察等。③结果猪胸导管内皮细胞具有一般淋巴管内皮细胞的特征。在所培养的细胞中，经第Ⅷ因子鉴定的内皮细胞约占95％。在细胞消化过程中，一次消化法比传统的方法更为简便。明胶喷涂培养皿更有利于细胞生长。综合法纯化淋巴管内皮细胞可获得较纯的内皮细胞。④结论猪胸导管是淋巴管内皮细胞培养的较理想来源；在细胞培养过程中，采用一次消化法、明胶喷涂堵养皿、综合法纯化培养淋巴管内皮细胞可得到更好的效果。     

几种脊椎动物心肌细胞的超微结构观察

①目的进一步了解动物心肌细胞的种属特性。②方法应用电子显微镜对鲤、蟾蜍、鳖和家鸽等几种脊椎动物心肌细胞进行了观察。③结果这几种动物心肌细胞的侧面连接较多见。除家鸽外，心肌细胞的肌原纤维的排列比较松散。所观察各种属动物的心肌细胞均含有单位膜包绕的特殊颗粒，以心房肌细胞为多，但这几种动物心肌细胞的特殊颗粒在大小、形态、分布等方面均有明显差异。家鸽心肌细胞的特殊颗粒小，常成群分布于肌膜下方，并可见颗粒外排迹象。其它种属的特殊颗粒大小不等，多位于核周区。横小管系统以家鸽心室肌最易辨认，其它均少见。家鸽心肌细胞中的肌原纤维较其它动物密集，且排列整齐。④结论脊椎动物心肌细胞的超微结构有种属特性。