人血小板低密度脂蛋白受体的探讨

用~(125)Ⅰ标记(Iodogen法)低密度脂蛋白(~(125)Ⅰ-LDL),其比放射性为(1.94-1.0)×10~4Bq/μg,标记率为98.44±0.9％。~(125)Ⅰ-LDL与洗涤法分离的血小板结合,37°C下孵育60 min,结合达到平衡,不需二价阳离子存在。未标记的LDL可抑制~(125)Ⅰ-LDL与血小板的结合,而纤维蛋白原,白蛋白等无此作用。每个血小板约可结合3504±735个LDL分子,具有饱和性,解离常数Kd值为(4 5±2.1)×10~(-9) mol/L。高密度脂蛋白能抑制结合。结果提示血小板有LDL特异性受体,LDL有可能通过受体介导影响血小板功能。     

人胚肝低密度脂蛋白受体的提纯和鉴别

报道了用两步法快速分离人胚肝低密度脂蛋白受体的方法。肝细胞膜用非离子型去污剂TritonX-100溶解后,经DE52纤维素离子交换层析和LDL偶联的Sepharose 4B亲和层析,将受体纯化了500倍。纯化后的低密度脂蛋白受体具有完整细胞和粗制细胞膜上受体的所有特征:(1)能与~(125)I-LDL高亲和性结合,并呈现明显的剂量效应;(2)与LDL的结合需要Ca~(2+),EDTA可阻断其结合;(3)能与抗LDL受体的单克隆抗体相互作用;(4)分子量为130kd。     

老年大鼠血小板反应性及血小板膜LDL受体活性的改变

本文利用受体放射配基分析方法观察不同年龄大鼠血小板聚集性、血浆脂质水平及血小板膜LDL受体活性的改变。结果表明,老年大鼠血小板对ADP诱导的聚集反应性明显增强;血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平增高;血小板膜LDL受体活性增强,解离常数显著低于对照组。本文作者认为血小板膜受体活性的增强及血浆LDL水平的增高可促进LDL与血小板的结合,提高了LDL对血小板功能的影响,与老年大鼠血小板高反应性改变可能有关。     

糖基化低密度脂蛋白受体途径代谢与动脉粥样硬化关系的实验研究

本文旨在观察低密度脂蛋白(LDL)糖基化对其受体途径代谢的影响。以密度梯度超速离心法分离人血清LDL,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯度后用一氯化碘法将其标记成~(125)I-LDL。在培养的人成纤维细胞上进行LDL放射受体分析并检测细胞内总胆固醇含量。该受体最大高亲和性结合(Bmax)为47ngLDL/mg细胞蛋白,亲和常数(Km)为9.4μg/ml。糖基化LDL的受体结合、摄入和降解值显著低于对照LDL(P<0.01),而糖基化LDL孵育的细胞,其总胆固醇含量却明显增高(P>0.01)。结果提示,LDL糖基化可能是糖尿病人易患脂代谢障碍和动脉粥样硬化的重要机制。     

糖尿病患者巨大血小板比率、低密度脂蛋白和脂蛋白a的变化分析

目的:研究糖尿病患者巨大血小板比率P-LCR、低密度脂蛋白LDL和脂蛋白aLP(a)的变化.方法:应用全自动血细胞分析仪XE-2100L和全自动生化仪DXC-800检测67例糖尿病患者巨大血小板比率P-LCR、血小板分布宽度PDW、平均血小板体积MPV、血小板压积PCT、血小板计数PLT、低密度脂蛋白LDL、高密度脂蛋...     

用酶标配体法研究低密度脂蛋白受体活性

人低密度脂蛋白用过氧化物酶标记(LDL-HRP)后,与成纤维细胞共同孵育,然后用肝素将结合在受体上的LDL-HRP洗脱下来,测定肝素洗液中LDL-HRP量和细胞数,并计算每个细胞表面的功能性受体数.结果表明,在普通培养液中,每个细胞表面平均有(7.5～8.2)×10~3个LDL受体;其活性受培养液中胆固醇浓度调节;胰岛素cGMP、可提高受体活性并促进细胞增殖;cAMP提高受体活性但抑制细胞增殖;放线菌素D抑制细胞增殖并降低受体活性.以LDL-HRP为探测剂,可对LDL受体进行超微结构形态学定位,根据酶反应产物的多少,也可以粗略地估计LDL受体活性.     

家兔HDL的纯化和鉴定及其功能的初步研究

流行病学调查及动物实验结果均表明,高密度脂蛋白(HDL)具有抗动脉粥样硬化作用。作者为进一步了解HDL在细胞水平上的作用,建立了用密度梯度区带超速离心直接从新鲜家兔血清中分离纯化HDL的方法;将HDL加入正常及高脂血兔血清,观察低密度脂蛋白(LDL)通过平滑肌细胞(SMC)LDL受体的cpm,并分别与各自未加HDL组比较,以了解HDL在正常及高脂情况下对LDL受体的作用.     

低密度脂蛋白受体研究及临床应用(综述)

70年代Brown和Goldstein等发现,哺乳动物和人体细胞表面存在特异结合低密度脂蛋白(LDL)的受体,此后又从牛肾上腺皮质分离并纯化了LDL受体,并作了大量生化特性研究。近年来应用分子生物学技术确定LDL受休基因定位、基因结构、突变类型及其临床病理学,     

脂多糖上调小鼠肝脏PCSK9升高血浆低密度脂蛋白胆固醇

目的:研究感染和炎症时前蛋白转化酶枯草溶菌素9 ( proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在调节血浆低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)代谢中的作用及其可能的分子机制?方法:用全自动生化仪监测小鼠血浆总胆固醇?高密度脂蛋白胆固醇?甘油三酯?磷脂以及谷氨酸氨基转移酶含量?同时,用快速液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分析混合的小鼠血浆?血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)浓度用酶联免疫吸附法测定?用定量PCR法检测肝脏组织的PCSK9?LDL受体等脂代谢相关基因mRNA丰度,并用Western blot 分析肝组织中LDL受体表达变化?结果:研究发现低剂量脂多糖(liposacaridica,LPS)注射24 h后血浆谷氨酸氨基转移酶无明显变化,小鼠血浆LDL-C增高43.02%,高密度脂蛋白胆固醇增高30.09%?甘油三酯增高27.21%,磷脂增高25.50%?LPS注射组动物的血浆SAA明显增多至(1 271.05 ± 94.13) ng/ml,增多的SAA主要与高密度脂蛋白和低密度脂蛋白结合?LPS处理诱导肝脏PCSK9基因表达上调,抑制肝脏LDL受体的蛋白表达?结论:研究表明LPS引起肝细胞中PCSK9上调,LDL受体蛋白表达受抑制,同时小鼠血浆LDL-C迅速增多,提示PCSK9抑制LDL受体通路可能通过影响血浆脂蛋白代谢在炎症导致的宿主反应中起重要作用?     

人血浆脂蛋白对血小板的作用

低密度脂蛋白(LDL)对血小板聚集(PAg)、释放β血小板球蛋白(βTG)、生成血栓烷A_2(TxA_2)和膜流动性有明显的活化作用,并与浓度与孵育时间有关。超过生理浓度的LDL可直接激活血小板。高密度脂蛋白(HDL)可能有阻抑LDL作用的生理性调控能力。极低密度脂蛋白(VLDL)作用不肯定。     

猴内皮细胞连续细胞株低密度脂蛋白受体的结合特性

本文用细胞-生物素-亲和素-酶联测定法(细胞-BA-ELSA)和生物素-亲和素-酶联免疫测定法(BA-ELISA)研究了RF/6A细胞(猴内皮细胞连续培养株)的低密度脂蛋白(LDL)受体结合特性.结果显示:这一内皮细胞株的LDL受体的离解常数(Kd)为9.6μg/ml,最大高亲和性结合量(Bmax)为211ng/mg细胞蛋白.当细胞生长至融合状态时,其LDL受体活性只有未融合时的三分之二.细胞在高脂培养液(254μg胆固醇/ml)、普通培养液(49μg胆固醇/ml)和无脂培养液中,其LDL受体活性分别是119±8ng/mg细胞蛋白、155±13ng/mg细胞蛋白和280±25ng/mg细胞蛋白,三组相互比较P<0.01,显然受体活性受培养液中胆固醇浓度的调节.     

低密度脂蛋白自身免疫与动脉粥样硬化

天然低密度脂蛋白（LDL）在正常情况下由LDL受体识别，LDL和LDL受体结合后内吞人细胞与溶酶体结合。在溶酶体酶的作用下，蛋白质降解为氨基酸，胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸。此受体受到细胞内胆固醇含量的下降调节，当细胞内胆固醇的含量增多时，LDL受体的量便会减少。     

促进LDL受体产生治疗遗传性高胆固醇血症

美国国立卫生研究院(NIH)专题小组宣布对有争论的脂质问题取得一致意见以后,出现了治疗高胆固醇血症的一种新的有效方法。此治疗方法是以低密度脂蛋白(LDL)受体有清除血液中LDL的作用为基础。动脉粥样硬化斑中的胆固醇主要是来自血液循环中的LDL,血液中LDL水平越高,动脉粥样硬化的发展就越快。得克萨斯大学达拉斯卫生科学中心的遗传学教授Joseph L Goldstein博士报告说,流行病学研究已表明在西方工业化国家包括美国,半数以上的人血液循环中LDL水平高于使动脉粥样硬化加速发展的阈值。LDL受体不仅为细胞提供胆固醇,而且还正常地清除血液中75％的LDL。     

内皮细胞对平滑肌细胞增殖和脂质代谢的影响

本研究证明:自兔血浆分离得到的低密度脂蛋白(LDL)具有促进家兔主动脉平滑从细胞(SMC)的体外增殖作用,LDL与融合的家兔主动脉内皮细胞(EC)作用后的条件培养液则无促SMC增殖作用;稀疏生长EC条件培养液能提高SMC的LDL受体活性,促进胞内胆固醇积聚;LDL与融合EC作用后的条件培养液能抑制SMC LDL受体活性,抑制胞内胆固醇积聚;并使与天然LDL竞争结合LDL受体的能力明显下降。上述结果提示:不同生长状态的EC对SMC增殖及脂质代谢起不同的作用。     

肝细胞生长因子对培养大鼠系膜细胞低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对培养大鼠肾小球系膜细胞转录及表达低密度脂蛋白(LDL)受体的影响.方法:以10、20、50、100 ng/ml HGF与大鼠系膜细胞在高LDL环境(250 μg/ml)中共孵育,应用RT-PCR及酶联免疫吸附方法,观察大鼠系膜细胞LDL受体的转录与表达的变化.结果:HGF可时间依赖及浓度依赖地在转录水平与蛋白水平增加培养大鼠系膜细胞LDL受体表达,并且不被高LDL环境所抑制.结论:HGF通过促进系膜细胞表达LDL受体,增加系膜细胞对LDL的摄取,可能参与了脂质肾损伤过程.     

新型降脂药LY295427的药理学机制

LY295427(4-allylcholestan-3-ol)代表一种新型降脂药,它通过固醇调控因子结合蛋白(SREBP)作用于低密度脂蛋白受体(LDLR),进而增大血浆低密度脂蛋白LDL的清除率,以便达到降低胆固醇的作用效果。 LY295427能使受抑制的氧化固醇(oxysterol)介导的固醇调控因子结合蛋白的活化过程出现逆转,使活化转变而成活性,从而激活其调控LDLR基因。由于LDLR被活化,使LDL的代谢增加从而提高了血浆中LDL的清除率。 LY295427对氧化固醇的作用在于它能够增加氧     

以放射配基法比较四种培养细胞LDL受体活性

低密度脂蛋白(LDL)受体在脂代谢调控及动脉粥样硬化中起关键作用。笔者建立的放射配基测定法实用、可靠、精密度高,以此比较了人胚肺成纤维细胞,人胚皮肤成纤维细胞,恒河猴胚肾上皮细胞和猴内皮细胞的 LDL 受体活性,可作为研究 LDL受体活性及影响因素的重要手段。     

猪细胞使胆固醇陷入绝境

由遗传性极高水平胆固醇引起心脏病发作的早期死亡危险人群有朝一日可以用猪肝细胞移植方法治疗。据美国研究人员称,猪细胞可以清除血液中大量形成凝块的脂肪。家族性高脂固醇血症是一种遗传性疾病,使病人不能够去除血液中低密度脂蛋白(LDL)型胆固醇。此病患者的肝细胞缺乏能正常清除血液中脂肪物质的受体。携带一个有缺陷LDL受体基因(杂合子)的病人血液中胆固醇水平是正常人的2～3倍。在2个LDL受体基因都有缺陷时,胆固醇水     

胃癌组织的低密度脂蛋白受体分析

在对胃癌组织和同体正常胃组织进行低密度脂蛋白(LDL)受体饱和分析和Scatchard作图基础上测定了胃癌组织和同体正常胃组织的蛋白质和DNA含量,及LDL受体水平(各15例),以探讨胃癌与LDL代谢之间的关系。结果表明,1.胃癌组织蛋白质和DNA含量均明显高于正常胃组织;2.从LDL受体饱和分析和Scatchard作图表明胃癌组织的LDL受体的亲和性和特异性与相应正常胃组织比较差异无显著性;3.胃癌组织的LDL受体水平明显升高,最高达相应正常组织的4倍。     

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。