大鼠在体肠吸收穿心莲内酯的特征研究

目的 为探讨穿心莲内酯生物利用度低的原因,考察穿心莲内酯肠道吸收特性,肝肠循环和肠道酶代谢特点。方法 采用大鼠在体肠灌流模型。运用HPLC法测定肠灌流液、胆 汁以及经肠道酶降解后样品中穿心莲内酯的量。结果 穿心莲内酯在不同肠段的吸收率,以十二指肠最高,达40%,而在结肠最低,仅有10%。穿心莲内酯在十二指肠灌流液中的生物降解最显著 (1 h降解约50%),在回肠、结肠中则几乎无降解反应。穿心莲内酯有胆汁排泄,其排泄量为灌流药物总量的0.76%。结论 穿心莲内酯在大鼠肠道的吸收较差,而在十二指肠中吸收表现较好是由于存在较强的肠道酶代谢作用。同时,穿心莲内酯存在明显的肝肠循环。穿心莲内酯生物利用度低的原因与肠吸收差、肠道酶代谢作用强和肝肠循环有关。     

穿心莲内酯微乳在大鼠体内的吸收机理研究

目的 以穿心莲内酯微乳为对象,探讨微乳制剂的吸收机理及影响吸收的因素.方法 采用大鼠原位灌注实验法,探讨载体抑制剂、能量抑制剂、P-糖蛋白抑制剂对穿心莲内酯微乳在大鼠小肠内吸收行为的影响.结果 穿心莲内酯微乳在小肠的吸收需要载体;受到P-糖蛋白外排作用的影响;可能不耗能.结论 微乳制剂在小肠中可能存在被动转运和淋巴吸收...     

穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度、温度和抑制剂对穿心莲内酯吸收的影响。用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且受温度和碘乙酰胺影响,但不受外排抑制剂维拉帕米和MK-571的影响。结论 穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收主要是由载体介导的主动转运。     

柴胡皂苷d的体内外肠道吸收机制研究

为揭示柴胡皂苷d（SSd）的体内外肠道吸收机制,采用Caco-2单层和大鼠在体单向肠灌流模型,研究了不同实验条件（时间、浓度、温度、pH、肠段）、转运蛋白抑制剂、细胞旁途径增强剂、代谢酶抑制剂等因素对SSd体内外肠道吸收的影响。研究结果表明,SSd的表观渗透系数（P_app）和有效渗透系数（P_eff）分别为4.75 × 10^-7 ~ 6.38 × 10^-7 cm/s和0.19 × 10^-4 ~ 0.27 × 10^-4 cm/s,提示其属于低渗透性化合物,SSd的跨膜转运具有浓度（0.5 ~ 5 μmol/L）和时间（0 ~ 180 min）依赖性,回肠是其主要吸收部位;P-糖蛋白抑制剂和细胞旁途径增强剂均显著增强SSd的体内外吸收（P < 0.05）;有机阴离子转运多肽（OATPs）抑制剂和有机阳离子转运蛋白（OCTs）抑制剂对SSd肠道吸收影响的体内外相关性较差,这可能与上述转运蛋白在空肠中表达量较低有关。本研究结果表明,SSd的肠道吸收涉及被动扩散、主动转运以及细胞旁通路途径等方式,P-糖蛋白在SSd的主动转运中发挥重要作用。     

钩藤碱在Caco-2细胞模型中吸收规律研究

目的 建立体外模拟体内肠道细胞——人结肠癌上皮细胞（the human colon adenocarcinoma cell line,Caco-2）的Transwell模型,以此研究钩藤碱在Caco-2细胞模型上的跨膜转运特征。方法 采用聚酯碳酸酯膜连续培养Caco-2细胞21 d,形成致密的单层细胞模型。然后对影响钩藤碱在Caco-2细胞模型上转运特征的因素(包括浓度、时间及跨膜转运蛋白P-糖蛋白)进行考察;同时采用液相色谱-质谱法对溶液中钩藤碱的含量进行测定。结果 钩藤碱在Millicell系统上的转运量具有一定的浓度-时间依赖性,主要以主动转运的方式进行吸收,且随着时间和药物浓度的增加,转运量明显增加。不同浓度钩藤碱从细胞基底侧（basolateral, BL）到细胞刷状缘侧（apical,AP）的表观渗透系数（apparent permeability coefficient, Papp）与AP侧到BL侧的Papp比值均在1.5以上,且钩藤碱从BL侧到AP侧的外排速率明显高于从AP侧到BL侧的吸收速率。当加入P-糖蛋白抑制剂后,药物由BL侧向AP侧的转运量显著减少,而由AP侧到BL侧的转运量显著增加。结论 钩藤碱在Caco-2细胞上转运存在一定的浓度及时间依赖性,且P-糖蛋白介导钩藤碱在Caco-2细胞上转运。     

Caco-2 细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在 Caco-2 细胞单层模型中的吸收转运机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型研究熊果酸在有或无 P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质 pH 值对 Caco-2 细胞摄取熊果酸的影响。采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数 (Papp)。结果 浓度在 10～40 μmol/L 内,Caco-2 细胞对熊果酸摄取量呈线性增加。双向转运研究发现加入 P糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后,其 Papp 发生显著改变,表观渗透率由 3.445 下降至 1.386。结论 熊果酸在 Caco2 细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程。     

白坚木碱类二聚体在Caco- 2细胞模型中的吸收机制研究

目的 考察白坚木碱二聚体（10- dehydroxyl- 12- demethoxy- conophylline,wtdr- 11）在人类结肠癌细胞系Caco- 2细胞模型中吸收和转运机制。方法 建立Caco- 2单层细胞完整模型,采用超高效液相色谱- 荧光法（ultra- high performance liquid chromatography- fluorescence, UPLC- FLR）测定细胞模型中wtdr- 11的浓度并计算表观渗透系数（apparent permeability coefficient,Papp）;分别考察不同浓度、时间、温度、pH值、P- 糖蛋白（P- glycoprotein, P- gp）抑制剂（维拉帕米和环孢素A）对wtdr- 11在Caco- 2细胞内摄取的影响;考察时间变化对wtdr- 11在Caco- 2细胞中双向转运［分别从细胞刷状缘侧（apical,AP）→细胞基底侧（basolateral,BL）和BL→AP方向］的影响。结果 wtdr- 11的吸收随着时间和药物浓度的增加而增加,但温度、pH值和P- gp抑制剂等因素对Caco- 2细胞吸收该药物的影响无统计学意义（P>0.05）。跨膜转运实验中,Papp＞10-6 cm/s,外排率<1.5。结论 wtdr- 11的主要吸收机制可能是被动扩散,wtdr- 11可能不是P- gp转运蛋白的底物。     

脱水穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究脱水穿心莲内酯（DAL）在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察DAL在Caco-2细胞单层模型中的双向转运,考察时间、DAL浓度、温度和P-糖蛋白（P-gp）抑制剂维拉帕米对DAL吸收的影响。采用LC/MS/MS方法检测DAL浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 DAL在Caco-2细胞模型中的双向转运,随时间和浓度的增加,DAL的吸收具有时间、浓度依赖性,未出现饱和趋势;不受温度和P-gp抑制剂维拉帕米的影响。结论 DAL在Caco-2细胞模型中的吸收主要是靠浓度扩散的被动转运。     

药物转运体在反式白藜芦醇肠道吸收中的作用

目的：通过体内和体外模型研究多药耐药相关蛋白（Mrp-2）外排底物溴磺肽钠对反式白藜芦醇（trarts-resvera-trol，TR）肠道吸收的影响，并对转运体在TR肠道吸收中的作用进行研究。方法：应用离体肠外翻模型，测定不同时间点时肠囊内TR的浓度，寻找TR在肠中吸收的最佳部位；观察多种P-糖蛋白及Mrp-2抑制剂对TR吸收的影响；根据离体肠外翻吸收试验结果，选择溴磺肽钠作为促吸收剂，研究不同给药途径的溴磺肽钠对TR在大鼠体内药动学行为的影响。结果：TR在不同肠段均具有很高的通透性（Papp〉1&#215;10^-6cm／s），回肠是TR的最佳吸收部位。Mrp-2外排抑制剂丙璜舒及底物溴磺肽钠都能够显著增加TR在回肠部位的吸收；P-糖蛋白及Mrp-2共同底物甲氨碟呤也能够增加TR的肠吸收；而P-糖蛋白抑制剂地高辛和维拉帕米无此作用。整体动物实验结果，发现预先给大鼠灌胃溴磺肽钠，可以显著提高TR的口服吸收，TR的生物利用度提高4倍；而溴磺肽钠通过尾静脉注射给药无此作用。结论：Mrp-2参与TR的肠道外排过程，P-糖蛋白对其外排无影响。溴磺肽钠通过灌胃给药途径可增加TR的吸收及生物利用度。     

在体单向肠灌流模型研究千金子甾醇在大鼠肠吸收特性

目的：研究千金子甾醇在大鼠肠道内的吸收情况以及P-糖蛋白（ P-gp）和多药耐药相关蛋白（ MRP2）对千金子甾醇肠吸收的影响。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型,运用高效液相色谱法测定十二指肠、空肠、回肠、结肠灌流液中千金子甾醇的含量,计算吸收速率常数（ Ka ）和表观渗透系数（Papp）。结果千金子甾醇在大鼠结肠的Ka 及Papp最高（P＜0．05）。加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后,千金子甾醇在结肠段的Ka 及Papp显著增加;而加入MRP2抑制剂吲哚美辛后,千金子甾醇在大鼠结肠段的Ka及Papp普遍降低。结论千金子甾醇在肠道中的主要吸收部位为结肠,推测千金子甾醇可能为P-gp的底物,而非MRP2的底物。     

白藜芦醇衍生物(BTM-0512)在大鼠体肠吸收特性研究

目的:研究白藜芦醇衍生物[(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯(BTM-0512)]在大鼠肠道的吸收特性。方法:采用大鼠在体肠循环实验,考察不同的药物浓度、肠段及胆汁对吸收参数的影响。BTM-0512在大鼠肠循环液中的药物浓度采用HPLC法测定;循环液中酚红浓度采用UV法测定。结果:在肠道正常PH值情况下,低、中、高3个浓度的BTM-0512的吸收速率常数(K_a)分别为0.6290、0.5329(扎胆管)、0.5330(未扎胆管)、0.6791h~(-1),表明不同浓度BTM-0512在肠道的吸收速率常数相近,且胆汁对BTM-05 12肠道吸收没有影响(P>0.05);在十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收速率常数分别为0.9492、0.5216、0.3835、0.1185 h~(-1),统计结果显示,不同肠段间吸收有明显差异(P<0.05)。结论:BTM-0512在肠道内是以被动扩散的方式被吸收,呈现一级动力学过程。因BTM-0512在整肠段均有吸收,剂型设计时可考虑肠溶制剂。     

缬沙坦大鼠在体肠吸收动力学

通过大鼠在体单向肠灌流模型(SPIP),采用反相高效液相色谱法测定大鼠肠液中缬沙坦的浓度,研究缬沙坦的肠吸收动力学与P-糖蛋白(P-gp)和有机阴离子转运多肽(OATP)对缬沙坦肠吸收的影响。结果表明,缬沙坦为全肠段吸收,吸收速率与灌流液的pH和肠段部位有关,吸收速率按十二指肠、空肠、结肠和回肠顺序下降。缬沙坦在十二指肠的非线性吸收动力学参数为Ka=0.328 h-1;Vm=72.652μmol/(L.h);Km=10.968μmol/L;Vms=69.115μmol/(L.h);Kms=0μmol/L。空肠、结肠和回肠的吸收速率常数分别为(0.595±0.091),(0.586±0.153)和(0.551±0.030)h-1。与原药组相比,含P-gp抑制剂药物组Papp显著增加,含OATP抑制剂药物组Papp显著减少(P<0.05)。缬沙坦的肠吸收机制为主动转运-被动扩散混合吸收,符合非线性动力学过程。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.3...     

糖尿病对乳腺癌耐药蛋白表达和功能的组织特异性损伤作用

首先从在体水平研究糖尿病能否导致大鼠皮层、海马、肝、肠黏膜和肾中乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的功能和表达发生改变以及胰岛素治疗能否逆转糖尿病引起的这种改变;进一步通过体外Caco-2和HepG-2细胞模型研究糖尿病血清中是否存在异常成分影响BCRP的功能和表达。通过单次给予链脲菌素(65mg/kg,ip)诱导糖尿病模型,三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）/BCRP的表达分别由QT-PCR和Western blot实验测定,体外通过测定Caco-2和HepG-2细胞中哌唑嗪的摄取研究BCRP的功能改变。在体QT-PCR分析结果表明：5周和8周糖尿病大鼠的皮层、肝和肠黏膜中,ABCG2的表达均显著降低,而在海马和肾中其表达却显著增加。Western blot实验结果在大部分组织中与QT-PCR结果相一致。离体实验结果表明在Caco-2和HepG-2细胞中,高胰岛素和高血糖均可以抑制BCRP的功能。由此证明糖尿病对ABCG2/BCRP的表达和功能具有组织特异性的损伤作用,并且在大鼠肝和肠黏膜中,BCRP功能的改变可能是由高血糖水平引起的。     

药物转运蛋白对灯盏花素小肠吸收的影响

目的:研究药物转运蛋白P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP2)对灯盏花素小肠吸收的影响。方法:HPLC法测定大鼠肠液中灯盏花素的浓度,以大鼠在体单向灌流实验(SPIP)研究药物的小肠吸收,计算不含抑制剂药物组和含抑制剂药物组的小肠表观渗透系数(Papp)。结果:含P-gp抑制剂药物组与原药组相比,Papp没有显著变化;含MRP2抑制剂药物组与原药组相比,Papp显著增加。结论:P-gp对灯盏花素的小肠吸收基本没有影响,而MRP2可将吸收的灯盏花素从肠上皮细胞内又转运回肠腔,从而降低灯盏花素的吸收。     

药物从人小肠上皮细胞模型排放的动力学模型

一种体外培养的人小肠上皮细胞模型（Ｃａｃｏ－２）已应用于药物在小肠细胞中的摄入、排放和过细胞输运等过程的研究。本工作旨在对排放过程的动力学模型进行探讨。实验测定多种药物在Ｃａｃｏ－２细胞模型的排放，分别用动力学一级、二级及多项式方程对排放进行数据拟合，用ＡＩＣ（Ａｋａｉｋｅ’ｓｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉｏｎ）值评判拟合的优劣，并将拟合结果与实际排放作比较。结果：动力学二级模型的拟合度最好，由拟合得到的排放初速和最大排放量等数据与实验量相符合。结论：药物从Ｃａｃｏ－２细胞的排放是表观二级的。由此可以计算药物排放的初速、最大排放量及半衰期等重要的动力学参数。     

甘氨酸对梗阻性黄疸大鼠肠道屏障的保护作用

目的:观察甘氨酸(Gly)对梗阻性黄疸大鼠肠道屏障的影响。方法：选择成年雌性Wistar大鼠60只，随机均分为3组：假手术组（A）、胆总管结扎组(B)和胆总管结扎＋甘氨酸组(C)。手术结扎胆总管复制梗阻性黄疸模型。甘氨酸用药方法为术前5 d及术后自由饮用含5％甘氨酸的水溶液，术后第21天处死大鼠，检测血清胆红素水平和肠道匀浆组织NO含量，并观察肠道形态学变化和黏膜厚度、绒毛高度。结果：与假手术组（A）比较，胆总管结扎组（B）血清胆红素水平、肠组织中NO含量均明显增高（P<0.01）, 肠绒毛高度、黏膜厚度均明显 降低（P<0.01）,肠道组织结构损害较重。胆总管结扎＋甘氨酸组(C)肠组织中NO水平较胆总 管结扎组(B)明显降低（P<0.01），肠道组织结构损害较轻。虽然胆总管结扎＋甘氨酸组(C)胆红素水平较假手术组（A）增高（P<0.01），但是肠组织中NO水平、肠绒毛高度、黏膜厚 度均无显著变化（P>0.05）。结论：梗阻性黄疸时，NO水平增高，肠道屏障功能受到严重 破坏，甘氨酸能降低内毒素的生物学效应，减少NO的产生，有助于梗阻性黄疸时的肠道屏障功能保护。     

人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价

 目的 利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法 使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果 使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500 Ω·cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)<5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论 含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。     

二甲双胍-白藜芦醇复合物油包水型纳米乳在体肠吸收及其药代动力学研究

考察二甲双胍-白藜芦醇复合物油包水型纳米乳（metformin-resveratrol compound water-in-oil nanoemulsion,MRCE）在大鼠体内的在体肠吸收特性和药代动力学行为。通过构建大鼠在体肠单向灌流模型,研究MRCE在不同肠段的吸收情况,大鼠被随机分为两组,二甲双胍和MRCE灌胃给药后,在预设时间点取血,HPLC法测定肠灌流样品和各时间点血样中二甲双胍的含量,绘制血药浓度-时间曲线,DAS 2.1.1软件处理并分析药代动力学数据。MRCE在各肠段的吸收速率常数（K_a）、有效渗透率（P_eff）和吸收百分率（PA）均显著高于二甲双胍（P < 0.05）;MRCE的血药浓度-时间曲线下面积（AUC_{0-72 h}）、半衰期（t_1/2）和平均滞留时间（MRT_{0-72 h}）分别为二甲双胍的1.68、11.25和6.97倍（P < 0.01）。MRCE的相对生物利用度为167.6%。MRCE的AUC_{0-72 h}的90%可置信区间为156.9%~187.4%,不在生物等效性标准区间内。MRCE肠道吸收情况明显优于游离二甲双胍;结果表明,MRCE提高了二甲双胍的口服生物利用度,且与二甲双胍生物不等效。