益气消癍汤治疗特发性血小板减少性紫癜实验研究

目的：益气消癍汤对特发性血小板减少性紫癜（ITP）小鼠模型IL-2、IL-6、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响,为探讨中药疗效的作用机制及临床用药提供依据。方法：采用免疫法腹腔注射APS（豚鼠抗小鼠血小板血清）建立ITP小鼠模型,将50只BALB/C小鼠随机分为5组,分为正常组、模型组、泼尼松组、维血宁组、益气消癍汤组,观察小鼠一般情况、脾脏、外周血小板、骨髓巨核细胞及血清IL-2、IL-6、TGF-β1的水平。结果：治疗后,各组均能提高ITP小鼠模型体重,而泼尼松组、益气消癍汤组体重上升优于维血宁组,有显著性差异。各组均能缩小ITP小鼠模型脾脏,有显著性差异;益气消癍汤组、泼尼松组缩小脾脏明显,优于维血宁组。各药组均能提高血小板计数,有显著性差异;益气消癍汤组、泼尼松组提高血小板效果更好,有显著性差异。各组均能降低ITP小鼠模型骨髓巨核细胞,有显著性差异;益气消癍汤组、强的松组下降明显,有显著性差异。用药后,各组ITP小鼠模型IL-2、IL-6、TGF-β1水平均降低,泼尼松组、维血宁组、益气消癍汤效果相当。结论：益气消癍汤对ITP模型小鼠有明显治疗效果。     

紫癜康颗粒对免疫性血小板减少性紫癜模型小鼠外周血小板、TPO的影响

目的:通过观察免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠外周血小板计数、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)含量的变化及紫癜康颗粒对其干预作用,探讨外周血小板计数、TPO含量变化与ITP发病之间的内在关系。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,中药对照组,西药对照组,紫殿康高、中、低剂量组,共7组,每组12只,采用腹腔注射豚鼠抗BALB/c小鼠血小板血清(APS)的方法造模,观察14 d,采用全自动血细胞分析仪检测外周血小板计数;酶联免疫方法检测ITP模型小鼠外周血TPO含量。结果:ITP时小鼠外周血小板计数、TPO含量明显降低,与对照组比较有统计学意义(P0.05);紫癜康颗粒可以明显提高血小板计数和TPO的含量,而中剂量组疗效最佳。结论:ITP小鼠存在外周血小板数量的减少;调节巨核细胞的正性作用因子TPO参与了ITP的发病过程并发挥重要作用;紫癜康颗粒可明显提高外周血小板数量和TPO的含量,使ITP得以改善。     

凉血散血方对免疫性血小板减少症模型大鼠CD40L 表达的影响

目的 探讨凉血散血方对免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenia,ITP）模型大鼠白细胞抗原分化群40 分子配体（cluster of differentiation 40 ligand,CD40L）表达变化与作用机制.方法 将大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组、凉血散血方高、中、低剂量组,用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清（APS）法造ITP 模型,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠外周血CD40L 的变化,造模前后及给药后检测ITP 模型大鼠血小板数值变化.结果 模型组CD40L水平明显高于空白组,血小板计数明显低于空白组,两组相比较差异有统计学意义（P〈0.01）;与模型组比较,各治疗组CD40L 水平降低（P〈0.01 和P〈0.05）,血小板数值升高（P〈0.01）;中药高剂量组与强的松组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 凉血散血方能使ITP 模型大鼠外周血小板破坏减少,其作用机制可能与下调CD40L 水平有关.     

血小板无力症患者其血小板GPⅡb／Ⅲa受体检测及其机制的探讨

目的：探讨血小板无力症（Glanzmann’s thrombasthenia，GT）患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法：采用流式细胞仪检测血小板糖蛋白Ⅱb（GPⅡb，CD41）／Ⅲa（GPⅢa，CD61）含量，并通过血小板聚集试验，血小板黏附试验和血块收缩试验对血小板功能进行检测。结果：GT患者血小板糖蛋白Ⅱb（GPⅡb，CD41）／Ⅲa（GPⅢa，CD61）含量明显低于正常，血小板聚集试验，血小板黏附试验和血块收缩试验明显较正常低下，出血时间较正常明显延长。结论：血小板GPⅡb／Ⅲa量的减少及功能障碍是导致血小板无力的原因，其机制可能与相关基因突变有关。     

血小板特异性自身抗体和淋巴细胞亚群检测在免疫性血小板减少症中的临床价值

目的检测血小板特异性自身抗体和外周血淋巴细胞亚群在免疫性血小板减少症(ITP)患者中的水平,并探讨两者之间的联系以及自身抗体与ITP病情间的关系,评价其在ITP中的临床价值。方法应用改良的单克隆抗体俘获血小板抗原(MAIPA)法检测40例ITP患者血小板膜糖蛋白(GPⅡbⅢa、GPIbα)特异性自身抗体;利用流式细胞术(FCM)检测ITP患者外周血淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD19+CD5+)水平。结果 ITP组抗GPⅡbⅢa抗体阳性30例,抗GPIbα抗体阳性26例,其中25%患者仅为单一抗GPⅡbⅢa抗体阳性,15%患者仅为单一抗GPIbα抗体阳性,50%患者为双抗体阳性,10%患者为双抗体阴性。非免疫性血小板减少组与对照组均为阴性。单抗体阳性组采血时血小板计数平均值明显低于双抗体阴性组(P<0.05);双抗体阳性组血小板计数平均值亦明显低于单抗体阳性组和双抗体阴性组(P<0.05)。ITP组与正常对照组相比较,CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分率以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比例减低,CD3+CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率均明显高于对照组(P<0.05)。双抗体阳性组CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率明显高于单抗体阳性组(P<0.05)。结论血小板特异性自身抗体检测对鉴别ITP和非免疫性血小板减少症有一定价值,自身抗体与ITP的病情有一定关系;血小板特异性自身抗体和T、B淋巴细胞可能共同参与了ITP的发病过程,并在其中起重要作用。     

Clinical value of specific autoantibodies against platelet glycoprotein and lymphocyte subpopulations in immune thrombocytopenia

目的 检测血小板特异性自身抗体和外周血淋巴细胞亚群在免疫性血小板减少症(ITP)患者中的水平,并探讨两者之间的联系以及自身抗体与ITP病情间的关系,评价其在ITP中的临床价值.方法 应用改良的单克隆抗体俘获血小板抗原(MAIPA)法检测40例ITP患者血小板膜糖蛋白(GPⅡbⅢa、GPIbα)特异性自身抗体;利用流式细胞术(FCM)检测ITP患者外周血淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD19+CD5+)水平.结果 ITP组抗GPⅡbⅢa抗体阳性30例,抗GPIbα抗体阳性26例,其中25%患者仅为单一抗GPⅡbⅢa抗体阳性,15%患者仅为单一抗GPIbα抗体阳性,50%患者为双抗体阳性,10%患者为双抗体阴性.非免疫性血小板减少组与对照组均为阴性.单抗体阳性组采血时血小板计数平均值明显低于双抗体阴性组(P<0.05);双抗体阳性组血小板计数平均值亦明显低于单抗体阳性组和双抗体阴性组(P< 0.05).ITP组与正常对照组相比较,CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分率以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比例减低,CD3+CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率均明显高于对照组(P<0.05).双抗体阳性组CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率明显高于单抗体阳性组(P<0.05).结论 血小板特异性自身抗体检测对鉴别ITP和非免疫性血小板减少症有一定价值,自身抗体与ITP的病情有一定关系;血小板特异性自身抗体和T、B淋巴细胞可能共同参与了ITP的发病过程,并在其中起重要作用.     

宁血饮对ITP模型小鼠血小板系统和免疫功能的影响

目的 观察宁血饮对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠血小板系统及免疫功能的影响.方法 建立ITP模型小鼠,并分为空白对照组,模型组,筪血小板胶囊组,宁血饮高、低剂量组,每组12只.于造模后第7天开始分组给药,连续给药8 d.检测各组血小板计数,外周血T淋巴细胞亚群、血小板相关抗体,骨髓巨核细胞计数和产板巨核细胞计数等,称脾脏质量,计算脾脏系数.结果 宁血饮高剂量组血小板计数升高,骨髓巨核细胞计数减少,产板巨核细胞计数增多,血小板相关抗体水平降低,脾脏质量及脾脏系数减少,T淋巴细胞亚群失调得到改善,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).升血小板胶囊组血小板计数升高,骨髓巨核细胞计数减少,产板巨核细胞计数增多,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).宁血饮低剂量组血小板系统有所改善,但与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 宁血饮高剂量对ITP模型小鼠血小板系统和免疫相关指标的异常有明显改善、调节作用,而升血小板胶囊仅能改善血小板系统,宁血饮低剂量则无明显影响.     

流式细胞术检测血小板相关抗体和CD 61诊断特发性血小板减少性紫癜

目的探讨流式细胞术（flow cytometry method,FCM）联合检测血小板表面CD 61和血小板相关抗体（PAIg）在特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）诊断和鉴别诊断中的价值。方法用FCM法检测30例健康体检者、59例ITP患者和24例继发性血小板减少非ITP患者PAIg（包括PAIgA、PAIgM、PAIgG）表达率、荧光强度和CD 61表达率,并对三组人群结果进行比较;并将ITP患者PAIg、CD 61表达水平与血小板数量进行相关性分析。结果 ITP患者和非ITP继发性血小板减少患者的PAIgA、PAIgM、PAIgG表达率和荧光强度均显著高于健康对照组（均P〈0.01）;然而,两组患者之间比较,差异均无显著性意义（P〉0.05）。ITP组CD 61表达率显著低于非ITP组（P〈0.05）,而非ITP组和对照组无显著性差异（P〉0.05）。PAIgA、PAIgM、PAIgG与血小板计数均呈显著负相关,其中以PAIgA相关性最强。重度ITP患者PAIg表达率明显高于轻度ITP患者,而CD 61表达率显著低于轻度ITP患者,两组差异均有显著差异（P〈0.05）。结论同时检测血小板表面CD 61和PAIg可以用于ITP诊断、鉴别诊断和病情监测,流式细胞术具有灵敏、快速、简便等特点,具有较好的实用价值。     

血小板特异性抗体、血小板相关抗体、网织血小板联合检测对血小板减少的鉴别诊断

目的探讨血小板相关抗体（PAlgG）、网织血小板（RP）及血小板特异性抗体（抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPIb、抗P-选择素）检测对区别免疫性与非免疫性血小板减少性紫癜的诊断。方法本院75例血小板减少性紫癜患者，其中35例是特发性血小板减少性紫癜（ITP），40例为非免疫性血小板减少性紫癜，同时以PAlgG、RP及抗GPⅡb／Ⅲa、抗GPIb、抗P-选择素进行检测，其中血小板特异性抗体用改良单克隆抗体免疫固相法（MAIPA）检测，PAlgG、RP用流式细胞术测定。结果35例ITP患者有22例血小板特异性抗体检测至少一项阳性，占61．5％，非免疫性血小板减少患者均为阴性反应；ITP患者RP平均值30．5±5．5，非免疫性血小板减少患者为26.5±5.0（P〉0.05）；ITP患者PAIgG均值为38．5±6．0，非免疫性血小板减少患者为36．6±6．2（P〉0．05）。结论免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜患者RP和PAlgG结果均显示增高，但差异无显著性；血小板特异性抗体检测是特异性较强的一项指标，对提高ITP确诊率及鉴别免疫性和非免疫性血小板性紫癜有意义。     

紫癜颗粒对ITP小鼠外周血小板调控因子影响

目的：原发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）是临床常见的出血性疾病,其发病机制尚未明确。该文从血小板计数和细胞因子考察ITP的发病机制以及紫癜颗粒对ITP小鼠的影响。方法：采用免疫造模法,建立慢性ITP模型。空白组、模型组按0.3 mL/20 g体重剂量胃饲蒸馏水,各给药组分别按12 g/kg体重剂量分别胃饲中药对照药、西药对照药和紫癜颗粒,每日1次,连续给药14 d。血细胞计数仪测定小鼠外周血血小板计数,双抗体夹心ELISA法检测骨髓白介素3（IL-3）、白介素6（IL-6）、白介素11（IL-11）、转化生长因子（TGF-β1）、血小板生成素（TPO）浓度。结果：各给药组药物均能提高ITP小鼠外周血血小板计数,有统计学意义（P〈0.05）;与模型组比较,各给药组血IL-3浓度明显降低,IL-6浓度明显降低,IL-11浓度明显降低,中药对照组和治疗组TGF-β1浓度明显降低,中药对照组和治疗组TPO浓度明显升高,有统计学意义（P〈0.05）;与各给药组比较,治疗组优于其他给药组,有统计学意义（P〈0.05）。结论：中药对照药、西药对照药和紫癜颗粒均能够治疗ITP小鼠,以紫癜颗粒效果最优。紫癜颗粒能够升高ITP小鼠外周血小板计数,降低IL-3、IL-6、IL-11浓度和TGF-β1浓度,升高TPO浓度。     

小柴胡汤对原发性血小板减少性紫癜小鼠的干预作用

目的:通过观察小柴胡汤对原发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠的体重增长率、外周血血小板计数、出血时间和骨髓巨核细胞数量的影响来探讨小柴胡汤的药效。方法:建立ITP模型小鼠,将之分为正常组、模型组、激素组和小柴胡汤组,于造模后第14天开始分组给药,共14d,分别于给药前后称重、测出血时间;给药前、给药后4d、7d及14d测外周血血小板计数;造模21d处死,剥离股骨取骨髓测巨核细胞计数和分类。结果:ITP模型小鼠体重增长率下降,血小板计数持续降低,出血时间延长,骨髓巨核细胞增多,产板巨核细胞减少,与正常组相比有明显差异(P<0.05);小柴胡汤组体重增长率明显提高,与模型组、激素组相比有显著差异(P<0.05),给药组均使血小板计数上升、出血时间缩短、骨髓巨核细胞减少,产板巨核细胞增多,与模型组比较有显著差异(P<0.05)。结论:小柴胡汤能提高ITP模型小鼠体重增长率,提升血小板计数,促进骨髓巨核细胞成熟。     

祛风凉血法对慢性特发性血小板减少性紫癜患者T细胞亚群及NK细胞的影响

【目的】探讨祛风凉血法在治疗慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）中的作用。【方法】将确诊为慢性血热妄行型ITP患者13例给予祛风凉血中药（主要由苍耳子、蝉蜕、防风、荆芥、水牛角、丹皮、仙鹤草、生地、侧柏叶、赤芍、三七末、甘草等组成）治疗,观察治疗前后ITP患者外周血T细胞亚群和自然杀伤细胞（NK细胞）的变化,并与正常对照组进行比较。【结果】治疗前患者外周血T细胞亚群CD3、CD4、CD4／CD8比值（PCD4/PCD8）和NK细胞水平均低于正常对照组,而CD8含量明显增多（P〈0．001）;经祛风凉血法治疗后,T淋巴细胞CD3、CD4、PCD4／PCD8和NK细胞均有不同程度的上升,而CD8含量则有所下降,与治疗前相比差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．001）。【结论】祛风凉血法治疗慢性血热妄行型ITP的机理之一可能与其调节T淋巴细胞亚群及NK细胞水平有关。     

Establishment of a mouse model of cyclophosphamide-induced thrombocytopenia and determination of platelet function in this model]

OBJECTIVE: To establish a mouse model of acute hematopoietic failure and explore the pathological basis of platelet changes in bone marrow suppression. METHODS: An initial large dose of cyclophosphamide (200 mg/kg) was injected through the tail veins of the mice, follow by daily intraperitoneal injection starting on the next day for 7 d. The number and morphology of the cells in the peripheral blood and bone marrow were observed by means of cell counting and smear, respectively, with the platelet aggregation determined using ADP. The coagulation time was measure by turbidimetry. RESULTS: The amount of platelets, erythrocytes, leukocytes and the nucleated cells in mice bone marrow was significantly lowered in the mouse models in comparison with the control mice, and the normal hematopoietic tissues were depressed. The blood platelets in the models were lowered by 49%, an amplitude of declination significantly greater than that occurring in the erythrocytes and leukocytes (by 28% and 25% respectively). Though the mean platelet volume and percent platelet aggregation underwent no obvious changes, the coagulation time was significantly shortened. CONCLUSION: The methods we described for establishing mouse models of hematopoietic failure induced by cyclophosphamide is rapid and highly efficient, and may facilitate ready preparation of mouse models of thrombocytopenia which respond strongly to cyclophosphamide without blood platelets function impairment.     

难治性血小板减少性紫癜靶向干预治疗及免疫功能分析

目的 探讨重组人血小板生成素（rhTPO）联合达那唑对难治性特发性血小板减少性紫癜（ITP）的疗效及免疫功能变化的临床意义.方法 收集难治性血小板减少性紫癜56例采集患者治疗前和治疗1月后外周血,用流式细胞术分别检测外周血淋巴细胞亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4/CD8、CD19＋、及CD4＋CD25＋调节性T细胞比例.结果 rhTPO联合达那唑治疗难治性ITP总有效率为69.2%.与正常对照组相比患病组CD8＋细胞比例增高（P＜0.01）,CD4＋细胞比例减少,CD4/CD8比值降低（P＜0.05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例下降明显,B细胞比例无明显变化.与治疗前相比治疗后ITP患者CD8＋细胞比例减少（P＜0.001）,CD4＋细胞比例增高（P＜0.001）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例降低（P＜0.001）,CD4/CD8比值和B细胞比例无明显变化（P＞0.05）.结论 难治性ITP患者存在明显的T细胞免疫紊乱,rhTPO联合达那唑治疗ITP可以明显提升血小板,并且血小板的升高与CD4＋细胞比例和CD4＋CD25＋调节性T细胞比例与呈正相关.     

脑缺血再灌注小鼠血小板膜糖蛋白的变化

夹闭小鼠双侧颈总动脉 ,建立脑缺血再灌注动物模型。应用流式细胞术检测再灌注后 3、6、1 2、2 4、48、96h的血小板膜糖蛋白CD31、CD6 1和CD6 2 p的表达。结果显示血小板膜糖蛋白CD31在再灌注 3h时表达增高 ,2 4h达到高峰 ,到 96h仍未降到正常水平。CD6 1在再灌注 3h时表达增高 ,持续到 2 4h,48h时恢复到正常水平。CD6 2 p在再灌注3h时表达增高 ,1 2h达到高峰 ,之后缓慢降低 ,到 96h时仍处较高水平。结论 :脑缺血再灌注可以导致血小板膜糖蛋白CD31、CD6 1、CD6 2p表达量增加 ,可能促进血小板活化、引发血栓形成     

环磷酰胺诱发小鼠血小板减少症模型的建立及其血小板功能的测定

目的建立环磷酰胺诱发急性造血功能抑制的动物模型,探讨血小板在骨髓抑制中发生变化的基础和意义。方法采用环磷酰胺首次大剂量200 mg/kg·b.w.尾静脉注射腺磷酸,次日连续7 d以维持剂量30 mg/kg·b.w.腹腔注射。观察其外周血和骨髓液中细胞数量和形态的变化,用光密度法测定ADP诱导的血小板聚集百分率;玻璃毛细管法测定凝血时间,评价血小板功能的改变。结果用该方法诱导小鼠后,其红细胞、白细胞、血小板和骨髓有核细胞计数均明显减少(P<0.01),血象和骨髓象检查显示正常造血组织被抑制,其中血小板的降低最为显著,达到49%。血小板平均血小板体积和血小板聚集百分率未有改变(P>0.01),凝血时间缩短。结论环磷酰胺可以快速、高效诱导小鼠急性造血功能障碍,尤其血小板减少模型发生时间快,反应强度强,而对血小板功能未有影响,其模型结果稳定,发生率较高。     

血小板活化功能对2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的影响

目的:探讨2型糖尿病患者血小板活化功能对颈动脉粥样硬化(CAS)的影响,以及与血糖控制水平的相关性。方法:选取234例2型糖尿病患者,监测其血压、血糖、血脂及糖化血红蛋白水平。颈部血管彩色多普勒超声检查将患者分为CAS组(102例),及未发现CAS组(132例)。将CAS组患者根据糖化血红蛋白测定水平分为血糖控制良好组(HbA1C<7%,42例),血糖控制不良组(HbA1C>7%,60例)。应用流式细胞仪和单克隆抗体技术测定CAS组和未发现CAS组不同血糖控制水平时的血小板活化功能相关指标:颗粒膜蛋白140(CD62p)、溶酶体整合膜糖蛋白(CD63)、血小板质膜表面糖蛋白GP-IIbIIIa(CD41/CD61)值。结果:2型糖尿病并发CAS组患者血小板表达CD62p、CD63、CD41/CD61较未发现CAS组患者显著升高(P<0.01),并与血糖水平呈明显相关性,在CAS组患者中HbA1C<7%患者组表达CD62p、CD63、CD41/CD61水平均较HbA1C>7%组明显降低(P<0.01)。结论:血小板活化功能指标(CD62p、CD63、CD41/CD61)在2型糖尿病并发CAS患者中明显增强,并与血糖控制水平显著相关;2型糖尿病并发CAS患者,并且血糖控制不佳患者需早期积极控制血糖,给予抗血小板治疗,预防心脑血管疾病。