Y迷宫训练对成年大鼠海马齿状回细胞的增殖作用

目的观察Y迷宫训练对成年大鼠海马齿状回(dentategyrus,DG)神经干细胞/前体细胞的增殖作用。方法通过Y迷宫训练,用5溴2脱氧尿嘧啶核苷(5bromo2deoxyuridine,BrdU)标记增殖细胞,用ABC免疫细胞化学方法观察成年大鼠海马齿状回细胞的增殖情况。结果Y迷宫训练组海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),且Y迷宫训练成绩的优劣与海马齿状回神经细胞增殖的多少存在相关性,学习成绩良好组齿状回BrdU阳性细胞数显著多于学习成绩低劣组(P<0.05)。结论Y迷宫训练可促进成年大鼠海马齿状回神经干细胞/前体细胞的增殖。     

Noggin蛋白对D 半乳糖致衰老小鼠学习记忆及海马齿状回神经发生的影响

目的观察侧脑室注射Noggin蛋白后对D 半乳糖致衰老模型小鼠学习记忆行为能力与海马齿状回神经发生的影响。方法采用皮下注射D 半乳糖构建衰老小鼠模型后,连续7?d侧脑室注射Noggin蛋白,对照组同时注射等量生理盐水,造模42?d后对各组小鼠进行Y迷宫学习记忆能力测试,用BrdU标记海马齿状回增殖细胞。 结果Y迷宫检测结果表明,模型组小鼠学习记忆能力较正常对照组明显降低（P<0.05）,而模型治疗组小鼠学习记忆能力较模型对照组明显改善（P<0.05）;模型组与模型对照组小鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数较正常对照组减少（P<0.05）,而模型治疗组BrdU阳性细胞数较模型组、模型对照组显著增多（P<0.05）。结论侧脑室给予Noggin蛋白可改善衰老模型小鼠的空间学习及记忆能力,可能与Noggin能保护海马神经元并促使齿状回神经干细胞增殖有关。        

丙泊酚对发育小鼠海马齿状回神经干细胞的影响

目的 观察丙泊酚对发育小鼠海马齿状回神经干细胞的影响.方法 将健康同窝日龄7 d(P7)的C57小鼠分为3组:高剂量丙泊酚组、低剂量丙泊酚组和10％脂肪乳对照组.所有小鼠P7接受药物处理.高剂量丙泊酚组腹腔注射丙泊酚60mg/kg;低剂量丙泊酚组腹腔注射丙泊酚30 mg/kg;对照组腹腔注射同等体积的10％脂肪乳.部分小鼠注药24 h(P8)后处死,其余小鼠饲养至日龄14 d(P14)处死.采用免疫组织化学法检测海马齿状回中Ki67、巢蛋白(Nestin)、脑脂结合蛋白(BLBP)及神经元核心抗原(NeuN)的形态及表达量.结果 高剂量丙泊酚组P8小鼠海马齿状回中Ki67标记的神经干细胞数量较10％脂肪乳对照组明显减少(P＜0.01),且Nestin及BLBP标记的干细胞纤维数量、长度均受损(P＜0.05).P14小鼠海马齿状回中NeuN阳性细胞数量低剂量丙泊酚组与10％脂肪乳对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而高剂量丙泊酚组较10％脂肪乳对照组显著减少(P＜0.01).结论 高剂量丙泊酚可抑制海马齿状回神经干细胞的增殖,损伤神经干细胞突起数量及突起形态,导致神经元成熟障碍.     

癫痫发作对幼鼠及成鼠远期认知功能和海马神经发生的影响

目的观察癫痫发作对幼鼠及成鼠远期认知功能及海马神经发生的影响。方法将3周龄和成年雄性SD大鼠,以氯化锂-匹罗卡品药物造模,根据取脑组织时间分为幼鼠及成鼠2周实验组、4周实验组,并设相应的对照组。利用Morris水迷宫观察4周组的认知功能;BrdU标记后,免疫荧光染色和激光共聚焦显微技术比较幼鼠及成鼠2周组海马齿状回颗粒细胞层神经细胞的增殖、4周组新生细胞的分化。结果水迷宫实验显示幼鼠及成鼠4周实验组的潜伏期均较对照组延长（P〈0.05）,成鼠较幼鼠延长更为明显。幼鼠2、4周实验组海马齿状回颗粒细胞层BrdU阳性细胞增殖数均高于对照组（P〈0.05）;成鼠2、4周实验组均低于相应对照组（P〈0.05）。结论癫痫发作可导致认知功能下降,成鼠比幼鼠下降明显;癫痫发作使幼鼠海马齿状回颗粒细胞层神经细胞的增殖增加,使成鼠的增殖降低。     

乙酰胆碱对大鼠齿状回成年神经发生的作用观察

目的 观察乙酰胆碱(ACh)对大鼠海马齿状回颗粒细胞下层成年神经发生的作用和影响. 方法 通过立体定位经侧脑室药物注射建立试验动物模型,实验组给予ACh,假手术组给予生理盐水,对照组只麻醉动物,不做任何手术处理,术后2h经腹腔给予核苷酸类似物BrdU.4周后处死动物,采用免疫组化的方法 观察并计数海马齿状回颗粒细胞下层新生神经元.结果 实验组海马齿状回BrdU+和BrdU+/CaBP+双标的细胞数目为637.00±39.50、491.00±47.29/hippocampi(N=3,n=36),而假手术组和对照组分别为339.00±17.62、305.00±17.62/hippocampi(N=3,n=36)和336.00±49.05、304.00±30.44/hippocampi(N=3,n=36),实验组分别与假手术组和对照组比较都有统计学差异(P<0.05),假手术组与对照组之间比较无统计学差异(P>0.05). 结论 乙酰胆碱可以增加海马齿状回颗粒细胞下层新生神经元的数目,由此可能促进学习和记忆的形成.     

成年海马齿状回神经发生研究进展

大量研究表明成年海马齿状回存在神经发生,海马齿状回的神经干细胞位于海马门区与颗粒细胞层间的下颗粒带,其终生保持着增殖分化的能力。海马齿状回的神经发生受到生活环境、生长因子、应激及学习和记忆等多种因素的调控。海马齿状回神经干细胞产生的新的神经元可能与学习、记忆等功能密切相关。     

慢性砷中毒对成年小鼠齿状回超微结构及学习记忆的影响

目的   观察慢性砷中毒对小鼠海马齿状回超微结构的改变及小鼠学习记忆的影响。方法   选取健康成年昆明小鼠80只,雌雄各半,分为对照组、慢性砷中毒低、中、高剂量组,每组20只,各染砷组分别以蒸馏水、1/5 LD50、1/10 LD50、1/40 LD50A s2O3灌胃,连续3个月,根据其体重变化随时调整用药剂量。灌胃结束后,采用Y-电迷宫检测各组小鼠学习记忆行为,透射电镜观察齿状回细胞超微结构的变化。结果   高剂量砷中毒组学习、记忆的Y-迷宫测试次数明显高于对照组（P＜0.05）,电镜下观察中毒组齿状回神经元,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体减小,核染色质电子密度增高。结论   慢性砷中毒明显损害成年小鼠学习记忆的能力,可能与海马齿状回神经元受损有关。     

健脑方促进脑缺血后大鼠海马神经发生的作用研究

目的观察中药健脑方对脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生以及空间学习记忆功能的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。采取永久结扎双侧颈总动脉制作全脑缺血模型。术后治疗组给予健脑方灌胃干预,模型组给予等量生理盐水。使用BrdU标记技术观察缺血后海马齿状回的神经发生,采用Morris水迷宫试验评价大鼠空间学习能力。结果模型组和治疗组海马齿状回BrdU阳性细胞数分别在缺血后第7天达到最高峰。而缺血后7、14、20、28 d治疗组BrdU阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05或P<0.01)。水迷宫试验显示术后第14天治疗组大鼠寻台平均时间明显短于模型组(P<0.05)。结论健脑方能持续明显促进脑缺血后大鼠海马齿状回神经发生,并改善大鼠的空间学习能力。     

空间记忆维持期小鼠海马酪氨酸激酶B含量的变化

目的观察Morris水迷宫实验中小鼠记忆维持阶段海马酪氨酸激酶B(trkB)蛋白和mRNA的表达情况。方法将28只C57BL/6品系小鼠分为实验组(n=14)和对照组(n=14),实验组参加水迷宫实验,包括4 d训练和1 d探索实验;对照组仅参加1 d探索实验。记录训练期小鼠的潜伏期、游泳距离和平均游泳速度;探索实验中记录小鼠穿越平台次数和平台象限滞留时间百分比。探索实验结束后采用ELISA法测定小鼠海马trkB蛋白含量,采用Real-Time PCR法测定trkB mRNA表达。结果水迷宫训练期,实验组小鼠潜伏期和游泳距离随训练次数增加逐渐缩短(P<0.05);探索实验中实验组小鼠穿越平台次数和平台象限滞留时间百分比明显高于对照组(P<0.05);两组小鼠海马trkB蛋白和mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Morris水迷宫实验显示,小鼠形成对平台空间位置的长期记忆;但在记忆维持阶段,小鼠海马trkB合成没有增加。     

激光共聚焦显微镜观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的增殖

目的 观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的形态及其分布.方法 新生7 d SD大鼠每天2次腹腔注射Brdu,至出生20 d及32 d分别取脑片标本,用Tritc(罗丹明)标记的麦芽凝集素及FITC标记的小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体行免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察大鼠海马齿状回神经干细胞的形态、分布特点及数量变化.结果 激光共聚焦显微镜观察显示,出生20 d大鼠海马齿状回Brdu阳性细胞主要聚集在颗粒下层,呈条带状分布,在海马的其他区域也有呈散在的阳性细胞存在,而出生32 d大鼠海马齿状回的神经干细胞呈散在分布,数目明显少于20 d大鼠.结论 新生SD大鼠海马齿状回存在一定数量的神经干细胞,其数量随着大鼠年龄的增大而减少.     

胰岛素逆转1型糖尿病脑病模型大鼠海马齿状回神经发生障碍与空间学习记忆异常的研究

目的揭示海马齿状回神经发生与1型糖尿病脑病发病的相互关系以及用胰岛素干预后所发生的变化。方法分别用链脲佐菌素和胰岛素建立1型糖尿病脑病大鼠模型和胰岛素治疗大鼠模型,采用Morris水迷宫以及5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU,一种神经干细胞DNA合成的标记物）单标、BrdU＋NF（神经丝,成熟神经元的标志物）双标、BrdU＋GFAP（胶质原纤维酸性蛋白,成熟星形胶质细胞的标志物）双标的免疫组织化学方法,测试大鼠的空间学习记忆能力,并在光镜下观察处于海马齿状回神经发生过程中的细胞存活、迁移和分化的程度。结果1型糖尿病脑病模型大鼠的空间学习能力,海马齿状回BrdU单标、BrdU＋NF双标和BrdU＋GFAP双标的阳性细胞数均明显下降（P〈0.01）;用胰岛素治疗后可提升以上各项指标几乎接近正常水平（P〈0.01）,但各种阳性细胞形态以及细胞迁移的方向、路径和终点均不受到明显的影响。结论个体内长期缺乏胰岛素,导致海马齿状回神经干细胞生存率和分化率下降,可能是诱发1型糖尿病脑病的一个因素;尽早用胰岛素进行干预可逆转神经发生障碍和学习记忆异常,这将有利于防治该脑病的发生。     

Effect of behavior training on learning and memory of young rats with fetal growth restriction

Objective： To investigate the effect of behavior training on the learning and memory of young rats with fetal growth restriction （FGR）. Methods： The model of FGR was established by passive smoking method to pregnant rats. The new-born rats were divided into FGR group and normal group, and then randomly subdivided into trained and untrained group respectively. Morris water maze behavior training was performed on postnatal months 2 and 4, then learning and memory abilities of young rats were measured by dark-avoidance testing and step-down testing. Results： In the dark-avoidance and step-down testing, the young rats＇ performance of FGR group was worse than that of control group, and the trained group was better than the untrained group significantly. Conclusion： FGR young rats have descended learning and memory abilities. Behavior training could improve the young rats＇ learning and memory abilities, especially for the FGR young rats.     

外源性胰岛素样生长因子-1对老年小鼠认知功能的影响

摘要：目的  探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对老年小鼠认知功能的影响机制。方法  给予老年C57/BL6小鼠侧脑室注射IGF-1，Western blot检测胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）蛋白的表达，5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）荧光染色标记海马齿状回增殖的细胞，尼氏染色标记海马齿状回神经元，用Morris水迷宫实验和跳台实验评定老年小鼠学习记忆能力。结果  Western blot检测显示，IGF-1组老年小鼠海马中IGF-1R表达与对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。BrdU染色结果显示，IGF-1组海马BrdU阳性细胞数与对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。尼氏染色结果显示，IGF-1组神经元细胞数与对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。水迷宫实验结果显示，经过训练后，IGF-1组老年小鼠的逃避潜伏期短于对照组，穿过平台的次数与对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。跳台实验结果显示，与对照组比较，IGF-1组老年小鼠的基础错误次数减少，而潜伏期延长（P <0.05）。结论  老年小鼠注射IGF-1后，其认知功能有一定改善，IGF-1可以提高老年小鼠认知功能。

     

低频电针对SAMP8小鼠海马齿状回PHF1表达的影响

目的观察低频电针对SAMP8小鼠海马齿状回PHF1蛋白表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的神经生物学机制。方法将24只5月龄的SAMP8小鼠随机分为模型组、电针组和假电针组,每组8只,同龄正常老化SAMR1小鼠8只作为对照组。电针组取穴百会、肾俞,肾俞穴双侧交替,电针选连续波,频率2 Hz,留针20 min,1次/d,6次为1个疗程,共5个疗程。假电针组仅针刺至百会、肾俞穴皮下,接电针连线但不予通电。采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,透射电镜观察海马突触超微结构,免疫组化法检测海马齿状回PHF1蛋白的阳性表达。结果①Morris水迷宫显示:对照组小鼠逃避潜伏期明显短于模型组、假电针组、电针组(P<0.05),在目标象限停留时间明显延长(P<0.05);与电针组、假电针组比,模型组小鼠的逃避潜伏期均明显延长(P<0.05),在目标象限停留时间均明显缩短(P<0.05);电针组改善SAMP8小鼠学习记忆能力明显优于假电针组(P<0.05)。②透射电镜显示:对照组、电针组小鼠海马可见大量突触,突触轮廓完整,分界清楚。模型组、与假电针组突触间隙模糊,突触前膜、后膜不清晰、变薄,典型的突触结构消失。③免疫组化显示:电针组小鼠海马齿状回PHF1阳性细胞数明显少于模型组及假电针组(P<0.05)。结论低频电针改善AD学习记忆能力,可能与保护海马突触结构,降低海马Tau蛋白的磷酸化有关。     

化学点燃癫痫大鼠在水迷宫中学习记忆能力与海马中nNOS表达的关系

目的 :观察印防己毒 (Picrotoxin ,PTX)化学点燃癫痫大鼠在水迷宫中学习记忆能力及其与大鼠海马中nNOS表达变化的关系 ,为进一步研究癫痫患者的记忆损害的治疗提供线索。方法 :4 4只雄性SD大鼠随机分为点燃组和对照组 ,分别用PTX和生理盐水腹腔注射 ,根据点燃情况点燃组再分为全面发作 (A)、频繁发作 (B)和部分发作 (C)和迷宫对照 (D)组 ,对照组再分为迷宫训练组 (E)和对照组 (F)。然后进行水迷宫行为测试评价其学习记忆能力。用免疫组化测定各组大鼠海马中nNOS表达变化。结果 :癫痫大鼠在水迷宫测定中 ,除B组第 1天的成绩较对照组差外 ,其余各组及B组在第 2、3、4、5天中寻找平台的潜伏期时间与对照组相比没有显著性差异。点燃各组对平台空间位置的记忆的能力较对照组要差 ,差异有显著性。大鼠海马中 ,A、B、C、E组nNOS神经元表达增加 ,D组表达减少。结论 :PTX化学点燃癫痫大鼠在水迷宫中学习记忆能力下降 ,发作频繁者 ,学习记忆受损明显 ,与发作的严重程度无关。水迷宫训练可使化学点燃癫痫大鼠海马中nNOS表达增高 ,对记忆损害有保护作用。     

条件恐惧刺激对成年大鼠海马齿状回新生神经细胞的影响

目的 研究条件恐惧刺激后大鼠海马内新生神经细胞的表达变化,探讨恐惧情绪性记忆的神经牛物学机制.方法 24只成年雄性大鼠随机分成条件恐惧刺激组和对照组,实验动物刺激前3 d腹腔内注射Brdu标记神经干细胞,实验组动物采用单调声配对电击大鼠足底造成条件恐惧刺激模型,对照组仅给予单调声刺激.刺激前和刺激后7,14d分别行动物行为学检测(静止不动时间);动物存活7,14d后处死,冰冻切片行Brdu的免疫组织化学染色.结果 条件恐惧刺激后,行为学检测结果显示实验组大鼠静止不动时间百分比显著高于对照组[分别为(88.68%、91.33%)和(11.18%、14.23%),P<0.01]及电击前(24.11%、16.11%,P<0.01);Brdu免疫组化染色显示条件恐惧刺激后实验组7,14d组大鼠海马齿状回内Brdu免疫阳性细胞少于同时间点的对照组[分别为(1364±21)个、(296±22)个和(1567±28)个、(580±5)个,14d组差异具有显著性P<0.05].结论 条件恐惧刺激后大鼠海马齿状回新生神经元的减少可能与恐惧等情绪性记忆有关.

Abstract：

Objective To investigate neurogenesis in the dentate gyrus of adult rat following conditioned fear stimulus.Methods 24 adult male rats were randomly divided into conditioned fear stimulus group and control group,and all rats were intraperitoneally injected bromodeoxyuridine(BrdU)3 days before conditioned fear stimuli.Animals in conditioned fear stimulus group were given monotone matching foot shock and made conditioned fear stimulus model,animals in control group only give monotone.Freezing time was detected before stimuli and 7th,14th days after stimuli,then rats were sacrificed 7th or 14th day after fear conditioned stimulus,and immunohistochemistry for Brdu was detected.Results Behavioral assessment showed that the percents of freezing time in conditioned fear stimulus group 7th,14th days after conditioned fear stimulus were significantly high(88.68%,91.33%)than those in control group(11.18%,14.23%,P<0.01)and before stimulus(24.11%,16.11%,P<0.01).Compared to control group(1567±28,580±5),Brdu positive cells in dentate gyrus of rat in conditioned fear stimulus group(1364±21,296±22)were decreased,and it reached to a statistical significance on 14th day (P<0.05).Conclusion The decreased neurogenesis in the dentate gyrus of adult rat following conditioned fear stimuli may have relation to fear and other emotion memory.     

利多卡因对慢性应激成年小鼠海马齿状回神经元再生的影响

目的观察利多卡因对慢性应激成年小鼠海马齿状回神经元再生的影响及其作用机制。方法将24只重约16—26g的成年雄性昆明种小鼠随机分为3个组（n=8）：（1）正常对照组（C组）：只注射生理盐水不接受应激刺激;（2）单纯慢性应激组（s组）：每日注射生理盐水后接受不同应激原的交替刺激;（3）慢性应激复合利多卡因用药组（L组）：每日注射利多卡因后接受不同应激原的交替刺激;反复应激14d后注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记处于分化期的细胞。实验结束时取小鼠肾上腺HE染色,并取海马区冰冻切片应用免疫组织化学的方法分别观察不同组小鼠Brdu阳性细胞和脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的情况。结果与C组比较,S组小鼠肾上腺皮质排列不整、髓质结构不清;海马齿状回BrdU标记的新生细胞及脑源性神经生长因子减少（P〈0．05）;L组与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成年小鼠海马齿状回存在神经元再生现象,慢性应激可以抑制神经元再生,利多卡因能够阻止这种抑制并可能是通过影响肾上腺皮质功能和脑源性神经生长因子等来促进神经元再生的。