蛋白酶体抑制剂通过内质网应激诱导DU145细胞凋亡机制的探讨

目的探讨蛋白酶体抑制剂(EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡机制是否与内质网应激(Er-stress)有关。方法用不同浓度的EPO处理DU145细胞,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Er-stress相关分子同源蛋白质(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X盒结合蛋白1(XBP-1)、剪接型X盒结合蛋白1信使核糖核酸(XBP-1s m RNA);Western blot检测CHOP和GRP78的表达。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并且呈现浓度梯度依赖性,处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后,CHOP、剪接型X盒结合蛋白1(XBP-1s)、GRP78 m RNA明显升高,72 h最明显。低剂量组与高剂量组48 h CHOP和XBP-1s的表达比较差异均有统计学意义,两组48和72 h GRP78比较差异均有统计学意义。EPO处理后,XBP-1和XBP-1s基因转录水平升高,而XBP-1s随处理时间增长基因转录水平变化不明显。EPO处理后,CHOP和GRP78不断增加,72 h两种蛋白质均达到最高值,并且低剂量组与高剂量组在72 h比较差异有统计学意义。结论 EPO能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活Er-stress,诱发内质网的相关分子CHOP、XBP-1s、XBP-1、GRP78的表达有关。     

低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激逆转前列腺癌紫杉醇耐药

目的 探讨低频超声联合微泡造影剂辅助紫杉醇逆转前列腺癌耐药的作用和机制.方法 筛选超声辐照紫杉醇耐药前列腺癌细胞株PC-3R的非毒性照射时间;将PC-3R细胞随机分为对照组、紫杉醇组(PTX组)、低频超声组(LFUS组)、紫杉醇和低频超声组(PTX+LFUS组),以及紫杉醇和低频超声联合微泡剂组(PTX+ LFUS+ UCA组),分别进行干预.AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡;q-PCR法检测各组细胞Bcl-2和多耐药基因表达变化;Western blot检测各组细胞GRP78和c-jun蛋白表达.GRP78 siRNA转染PC-3R细胞,微泡和低频超声联合处理后,Western blot检测GRP78蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡情况.结果 低频超声照射频率1 MHz,强度1.2 W/cm2,非毒性照射时间为10 s.与单纯应用紫杉醇相比低频超声辅助紫杉醇处理前列腺耐药细胞可显著提高细胞凋亡率(P＜0.01),联合微泡剂照射后,凋亡率进一步提高(P＜0.01),并下调Bcl-2和多耐药基因的表达.PTX+ LFUS+UCA组内质网应激相关蛋白GRP78的表达较PTX组和PTX+LFUS组升高,c-jun的表达下降(P＜0.01).应用siRNA干扰GRP78基因表达后,细胞凋亡率下降(P＜0.01).结论 低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激,抑制其下游JNK/c-jun通路下调多耐药基因及凋亡抑制基因的表达,提高化疗药物诱导细胞凋亡的作用,逆转肿瘤细胞的耐药性.     

间歇性缺氧通过内质网途径诱导滋养层细胞凋亡

目的 分析间歇性缺氧对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)内质网应激及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 选用人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo),间歇性缺氧-24 h组和间歇性缺氧-48 h组分别进行24 h和48 h的间歇性缺氧处理,空白对照组始终置于常氧中培养。观察间歇性缺氧对细胞凋亡与增殖,以及内质网应激相关分子、细胞凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。结果 与空白对照组比较,间歇性缺氧组CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X-盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA和蛋白表达水平显著增加,早期凋亡率显著增加,Caspase-3蛋白、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)mRNA和蛋白表达水平显著增加,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平显著增加,并随缺氧时间延长而增加(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧可显著抑制HTR8/SVneo细胞增殖,并随缺氧时间延长而细胞活力降低(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧组细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CyclinD3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,并随缺氧时间延长而降低(P<0.05)。结论 间歇性缺氧可能通过调控HIF-1α,激活内质网应激途径,进而抑制滋养层细胞增殖,诱导其凋亡。     

电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注大鼠GRP78和Caspase-12基因表达的影响

目的 观察电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)大鼠脑GRP78和Caspase-12基因表达的影响,探讨针刺发挥脑保护作用是否与内质网应激凋亡通路有关. 方法 100只大鼠随机分为5组,每组20只,即正常组、假手术组、手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组. 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO) 脑 I/R 模型. 采用 TUNEL 染色法, 检测大鼠神经细胞凋亡指数; 采用实时定量多聚酶链式反应 (Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR),检测GRP78、Caspase-12 mRNA表达. 结果 与正常组和假手术组相比,手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数升高,GRP78和Caspase-12 mRNA表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01); 与手术造模组相比, 依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数和Caspase-12 mRNA表达均明显降低 (P<0.01), GRP78 mRNA表达明显升高(P<0.01);与依达拉奉组相比,针刺干预组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05). 结论 针刺内关、百会穴可以有效抑制脑缺血神经元细胞凋亡,其保护机制可能上调内质网应激保护性GRP78表达,同时抑制促凋亡Caspase-12表达有关.     

联麦氧钒对糖尿病大鼠内质网应激介导心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的:探讨联麦氧钒(BMOV)对糖尿病(DM)大鼠内质网应激(ERS)介导的心肌细胞凋亡的抑制作用及可能的机制,为临床研究糖尿病心肌病(DCM)提供理论依据。方法:健康雄性Wistar大鼠35只,随机选取10只作为对照组,给予柠檬酸缓冲液(55 mg·kg^-1),正常饮水,维持4周。其余25只大鼠腹腔注射链佐脲酶素(STZ)1周建立DM模型,空腹血糖≥13.3 mmol·L^-1大鼠定为DM模型;选择20只随机分为DM组和BMOV组,每组10只。DM组大鼠正常饮水,继续维持3周。BMOV组大鼠饮水中加入BMOV,共维持3周。取各组大鼠心肌组织行TUNEL染色观察细胞凋亡情况;Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、X盒结合蛋白1(XBP-1)水平;qPCR法检测各组大鼠心肌组织中XBP-1 mRNA表达水平。结果:TUNEL染色,对照组大鼠心肌组织中见极少的凋亡细胞,凋亡指数(AI)为0.80±0.63;DM组较对照组心肌细胞凋亡明显增加,AI升高(P<0.05);BMOV组较DM组心肌细胞凋亡明显减少,AI降低(P<0.05);Western blotting法检测,与对照组比较,DM组大鼠心肌组织中GRP78、CHOP和XBP-1表达水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,BMOV组大鼠心肌组织中GRP78、CHOP和XBP-1表达水平明显降低(P<0.05);qPCR法检测,与对照组比较,DM组大鼠心肌组织中XBP-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与DM组比较,BMOV组大鼠心肌组织中XBP-1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:BMOV对DM大鼠心肌细胞具有保护作用,其机制可能与抑制心肌细胞ERS及其介导的细胞凋亡有关联。     

阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78(endoplasmic reticulummolecular chaperon)和GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少(P<0.05或0.01)。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组(P<0.05或0.01)。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01)。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。     

牛磺熊脱氧胆酸对棕榈酸诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用

目的:探讨牛磺熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对棕榈酸(palmitate)诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用?方法:分别用不同浓度棕榈酸(0.25?0.50?1.00 mmol/L)?棕榈酸(0.50 mmol/L)加TUDCA(100 μmol/L)培养INS-1细胞24 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞早期凋亡,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78的表达?结果:与对照组相比,棕榈酸组(浓度≥0.5 mmol/L)的INS-1细胞凋亡率显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞凋亡率显著下降(P < 0.05)?此外,棕榈酸组(0.5 mmol/L)INS-1细胞内质网应激相关蛋白GRP78的表达显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞GRP78蛋白表达显著下降(P < 0.05)?结论:TUDCA能够减少游离脂肪酸引起的INS-l细胞凋亡,对INS-1细胞发挥保护作用?而减少内质网应激蛋白的表达,缓解内质网应激可能是其作用机制之一?     

重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡

目的: 观察新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法: 将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate, 4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4 PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： 感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4 PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rL-RVG组明显降低(P<0.05)。结论： rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。     

乳浆大戟提取物对人胃癌和肺癌细胞增殖的影响

【目的】 探讨中药珍珠梅黄酮纳米粒(TTF1-NP)对人肝癌HepG-2细胞的内质网应激作用机制。 【方法】 通过MTT法观察不同时间(24、48、72h)、不同浓度(50、100、200 μmol/L)的TTF1-NP对人肝癌HepG-2细胞及正常肝细胞的增殖抑制影响;通过H-E、Hoechst和AO/EB染色观察TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化,利用流式细胞凋亡技术检测人肝癌HepG-2细胞的凋亡情况,蛋白质印迹和免疫细胞化学染色技术检测TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的内质网应激起始蛋白GRP78及内质网应激凋亡蛋白CHOP、JNK及caspase-4的表达情况。 【结果】 MTT法检测细胞增殖抑制结果显示:不同浓度的TTF1-NP抑制人肝癌HepG-2的生长,呈一定的浓度和时间依赖关系。形态学检测结果:TTF1-NP作用后细胞数减少,形态改变,细胞变圆,变小,细胞核固缩,碎裂,细胞深染(H-E染色);随着TTF1-NP浓度增加,细胞染为红色(AO/EB染色);随着TTF1-NP浓度增加,细胞减少,细胞核内可见颗粒块状蓝色荧光(Hoechst染色)。流式凋亡检测结果:对照组细胞凋亡率为4.9%;50、100、200 μmol/L的 TTF1-NP作用人肝癌HepG-2细胞后,凋亡率为凋亡率为20.1%、86.2%、93.8%。蛋白质印迹检测结果显示,对照组细胞内CHOP、GRP78、JNK及caspase-4表达量很低,随着TTF1-NP浓度增加,上述蛋白表达逐渐升高,免疫细胞化学染色检测结果与蛋白质印迹检测结果基本相同。 【结论】 TTF1-NP可以诱导人肝癌HepG-2细胞,内质网应激途径是其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用机制之一。     

益气补肾活血中药改善糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织学研究

【目的】观察益气补肾活血中药芪鹿丹对糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织学影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为正常组与造模组,造模组大鼠给予链脲佐菌素(剂量45 mg/kg)一次性腹腔注射复制糖尿病大鼠模型;造模成功大鼠行胫骨内种植体植入手术,术后第8天随机分为模型组、西药组(盐酸二甲双胍,剂量为0.2 g.kg-1.d-1)、中药组(芪鹿丹,剂量为4 g.kg-1.d-1);分别于第2、8、12周检测各组大鼠的空腹血糖(FBG),并于12周末处死大鼠,观察种植体周围骨组织形态变化。【结果】给药第2、8、12周中药组与西药组均可显著降低FBG水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),且中、西药2组间比较差异无统计学意义(P>0.05);中药组与西药组结合骨板的宽度,种植区成骨细胞个数、种植区骨细胞个数及非种植区骨细胞个数均显著高于模型组(P<0.05),且中药组作用优于西药组(P<0.05),可改善种植体周围骨组织形态学变化。【结论】芪鹿丹对糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织形态学变化具有一定改善作用。     

细胞凋亡的线粒体通路

对细胞死亡的研究可以追溯到一个多世纪以前.但是直到最近一二十年,人们才认识到:细胞死亡是一个主动过程,是细胞外界环境因素与细胞自身综合作用的结果;正如细胞有丝分裂一样,该过程的启动和进行受到基因的精确调控;细胞死亡源于这些基因产物的相互作用. 根据起源、性质和生物学意义可将细胞死亡分为两种不同的类型,即凋亡(apoptosis)或称程序性细胞死亡(programmed cell death)和坏死(necrosis).前者是一种受基因调节的自主控制过程,在生物个体发育和生存中起着非常重要的作用;而坏死则是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡.在体内,两者最大的区别是前者不能引起机体炎症反应,而后者则可引起炎症反应.因此在生理和绝大多数病理条件下的细胞死亡都呈现凋亡或程序性细胞死亡的典型特征.     

缺氧预处理对人心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及其机制

探讨缺氧预处理（PC）对于人类心肌细胞缺氧复氧（H／R）损伤的影响及其机制。方法：在体外分离的人心房和心室肌细胞的H／R模型上观察缺氧PC的作用，及蛋白激酶C（PKC）抑制剂与蛋白磷酸酶激动剂和抑制剂对PC现象的影响。结果：缺氧PC明显减轻H／R造成的心肌细胞损伤，PKC抑制剂H_7和蛋白磷酸酶激动剂BDM分别完全消除PC的细胞保护，而蛋白磷酸酶抑制剂OA则能模拟PC的上述保护效应。结论：人类心肌细胞存在缺氧PC现象，其保护机制可能涉及PKC激活和蛋白磷酸化过程。     

黄芩苷对脂多糖诱导的肠道上皮细胞凋亡及迁移能力的影响

【目的】探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的IEC-6细胞凋亡及迁移能力的影响。【方法】以LPS诱导IEC-6细胞建立细胞损伤模型,采用四甲基偶唑盐（MTT）法和酶联免疫吸附（ELISA）法试剂盒分别检测LPS对IEC-6增殖及分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的影响;应用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察和分析黄芩苷低、中、高剂量组（剂量分别为2.5、5.0、10.0μg／mL）对LPS诱导的IEC-6细胞核凋亡形态学改变及凋亡率的影响;应用细胞划痕实验检测黄芩苷对LPS诱导的IEC-6细胞迁移能力的影响。【结果】与对照组比较,1.0μg/mL LPS组IEC-6细胞生存率显著降低, TNF-α、 IL-6分泌量及细胞凋亡率显著增加,细胞迁移能力显著下降（均P<0.05）;与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量组凋亡细胞均不同程度减少,高剂量组细胞凋亡率显著降低（P<0.05）,细胞迁移显著提高（均P<0.01）。【结论】黄芩苷可抑制LPS诱导的肠道上皮细胞的凋亡,并能提高其迁移能力。     

骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞增殖和成骨分化潜能的影响

目的:探讨骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞的增殖能力以及成骨分化潜能的影响.方法:MTT法检测在含有不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液中人牙周韧带细胞的增殖特性;检测不同浓度骨碎补柚皮苷作用后人牙周韧带细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性的改变.结果:骨碎补柚皮苷≥0.01 μmol/L时能增进人牙周韧带细胞增殖(P<0.05),并能增加其ALP活性(P<0.05).结论:骨碎补柚皮苷可提高人牙周韧带细胞的增殖能力及成骨分化的潜能.     

细胞粘附分子在炎症角膜中的表达

目的：研究细胞粘附分子（ｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ,ＣＡＭｓ）在炎症角膜中的表达,探讨其在角膜炎症发生机制中的作用。方法：采用冰冻切片免疫组织化学染色方法检测了１８只炎症角膜、３只正常角膜和２只圆锥角膜组织中细胞间粘附分子１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ１,ＩＣＡＭ１）、人类白细胞抗原ＤＲ（ｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎＤＲ,ＨＬＡＤＲ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ２和ＣＤ２０的表达及变化。结果：正常角膜中,ＩＣＡＭ１主要表达于角膜缘血管内皮细胞,基质细胞、角膜内皮细胞中仅有微弱表达或不表达。炎症角膜中,基质细胞、内皮细胞和血管内皮细胞的ＩＣＡＭ１表达增强,尤其在炎症细胞浸润处最为显著;原不表达ＩＣＡＭ１的上皮细胞亦出现异常表达;ＩＣＡＭ１和ＨＬＡＤＲ常共同表达于同一部位,炎症明显组角膜ＩＣＡＭ１和ＨＬＡＤＲ的表达水平明显高于炎症轻微组;炎症浸润细胞中表达ＬＦＡ１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）的细胞较表达Ｍａｃ１（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）的细胞多;浸润淋巴细胞以Ｔ（ＣＤ２）淋巴细胞为主;属非炎症性病变的圆锥角膜中Ｉ     

食管癌中p27表达及其临床意义

目的 :探讨食管癌组织中 p2 7表达及其临床意义。方法 :采用免疫组化染色( SP)法 ,对 1 1 0例食管癌及 30例癌旁组织 p2 7进行检测 ,并进行统计学分析。结果 :1 1 0例食管癌组织中 ,5 1例 p2 7表达呈阳性 ,阳性率达 46.4% ,癌旁组织中 2 2例呈阳性 ,阳性率 73.3% ,二者之间有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,p2 7表达与肿块大小、淋巴结转移、病理分级和预后显著相关 ( P<0 .0 5 )。结论 :p2 7表达可作为食管癌诊断指标之一 ,与其生存预后有关。     

酸浆苦素B的体外抗肿瘤活性研究

【目的】研究苦蘵中提取的酸浆苦素B （physalin B, PhB）的体外抗肿瘤活性。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞形态观察法研究PhB对2种肿瘤细胞株HepG2和SGC7901增殖的抑制作用及形态的影响,并与抗癌药物羟基喜树碱（hydroxycamptothecine, HCTP）作对照比较;采用4’6－二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色法观察PhB诱导HepG2和SGC7901细胞凋亡。【结果】 MTT实验结果显示PhB对HepG2和SGC7901的生长均有明显的抑制作用,并具有一定的时间剂量依赖关系,且高浓度时作用优于阳性对照药HCTP,倒置相差显微镜结果也显示其显著改变了细胞形态,并能够证实MTT实验结果的可靠性; DAPI染色结果表明PhB可促进HepG2和SGC7901细胞凋亡。【结论】苦蘵提取物PhB对肿瘤细胞HepG2和SGC7901具有一定的增殖抑制作用。     

原卟啉钠的制备及其体外抗乙型肝炎病毒作用的实验性研究

目的:提取原卟啉钠并体外观察其抗乙肝病毒的作用及其细胞毒性作用。方法:从抗凝猪血中提取血红素,经氯化血红素、原卟啉二甲酯等中间制备过程,最后制成原卟啉二钠。将NAPP水溶液160μg/m l,80μg/m l,40μg/m l,20μg/m l,10μg/m l分别加入H epG 2.2.15细胞株培养悬液中,8d后检测上清液中HBeA g的含量,并计算HBeA g抑制率、细胞存活率、HBeA g抑制率为50%时的药物浓度、实验组存活细胞为对照组的50%时的药物浓度和治疗指数。结果:所制得的NAPP为紫褐色晶体,可溶于水和甲醇,不溶于氯仿、乙醚、丙酮,难溶于稀酸,纯度为91.4%。当加人的NAPP浓度为160μg/m l和80μg/m l时,HBeA g抑制率分别为73.45%和37.25%,细胞存活率分别为96.30%和97.35%。NAPP对分泌HBeA g的治疗指数为7.23。结论:这是一种较理想的制备NAPP方法,且NAPP可有效抑制HBV-DNA的表达和复制,对靶细胞(肝细胞)无细胞毒作用。     

低氧浓度改变对神经干细胞增殖分化及HIF-1α表达的影响

目的:探讨不同的低氧浓度下离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的增殖分化及HIF-1α的表达情况,以此分析HIF-1α对神经干细胞的增殖分化作用。方法:体外低氧条件下(3%O2和10%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的神经干细胞,实验组分为3%O2低氧1、3、5d组;10%O2低氧1、3、5d组,常氧为对照组。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞。RT-PCR检测实验组细胞HIF-1αmRNA的表达。结果:各低氧组NSCs内HIF-1αmRNA的表达量均明显高于对照组,且10%O2组与3%O2组相比,低氧5dHIF-1αmRNA的表达量显著增加;实验组NSE阳性神经元的比率均明显高于对照组,10%O2组与3%O2组相比,低氧5d10%O2组中NSE阳性神经元的比率明显增高。结论:低氧可促进NSCs增殖分化及HIF-1αmRNA的表达,且HIF-1αmRNA的表达量与低氧浓度及时间有关。     

成纤维细胞三维培养物的超微结构

目的：研究成纤维细胞在疤痕形成中的作用。方法：采用可渗性胶原膜（Ｃｅｌｇｅｎ○Ｒ）作为底物,改进成纤维细胞的三维培养,６周培养后的培养物用醋酸铀和硝酸铅双重染色后用电镜进行观察。结果：发现培养物不仅有多层化结构、细胞外间质和肌成纤维细胞,而且培养物底层有肌成纤维细胞和大量胶原。结论：本文所揭示的成纤维细胞培养模型有利于创伤愈合,尤其是增生性疤痕和疤痕疙瘩的研究