三七不定根的离体诱导与培养

目的:探讨三七不定根的诱导与体外培养方法。方法:通过从大田栽培三七外植体、再生苗外植体和愈伤组织诱导3种途径获得不定根,考察2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、吲哚-3-丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)等植物生长物质对不定根诱导的影响,比较4种不定根与其母体分离方式对其体外液体培养的影响。结果:3种方法均获得不定根,幼嫩花蕾愈伤组织是诱导不定根的理想材料;IBA诱导不定根的能力最强;采用将不定根连其母体组织一起在液体培养系统中连续培养后再分离的方法建立了液体培养体系。结论:成功诱导三七不定根并建立了液体培养体系。     

三七总皂苷对腹膜间皮细胞表达MCP-1的影响

目的:研究三七总皂苷对腹膜间皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的影响。方法:原代培养腹膜间皮细胞,研究不同浓度三七总皂苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的腹膜间皮细胞表达MCP-1的影响,研究三七总皂苷作用不同时间对脂多糖诱导的腹膜间皮细胞表达MCP-1的影响。结果:不同浓度三七总皂苷可以抑制脂多糖诱导的腹膜间皮细胞MCP-1mRNA和蛋白表达,这种作用随三七总皂苷浓度的增加而增强;三七总皂苷作用不同时间可抑制脂多糖诱导的腹膜间皮细胞MCP-1mRNA和蛋白表达,这种作用随三七总皂苷作用时间的延长而增强。结论:三七总皂苷可抑制脂多糖诱导的腹膜间皮细胞MCP-1表达,呈浓度和时间依赖性。     

三七总皂苷对以尿酸钠诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的:观察三七总皂苷片剂对以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1诱导血管内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养的血管内皮细胞,以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1为凋亡诱导因子,建立血管内皮细胞凋亡诱导模型,继而采用2.5、5、10μg.mL-1浓度的三七总皂苷进行干预,用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用实时定量PCR检测ICAM-1基因的表达。结果:三七总皂苷组2.5μg.mL-1明显抑制细胞凋亡(6.9±1.07)%,与模型组比较P0.01;能显著抑制ICAM-1基因的表达。结论:三七总皂苷能明显抑制以尿酸钠(MSU)100μg.mL-1诱导的血管内皮细胞凋亡。     

三七根及花总皂苷抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集研究

目的:考察三七根和花总皂苷抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集(TC IPA)作用。方法:应用B ron氏比浊法分别从体外、体内考察三七根和花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导的血小板聚集能力。结果:三七花总皂苷在120、240、480 mg/L质量浓度下对TC IPA均有一定的抑制作用,三七根总皂苷只在高、中剂量抑制TC IPA。体内实验三七根和三七花总皂苷各剂量均可显著抑制TC IPA,且呈剂量依赖关系。三七花作用效果优于三七根。结论:三七根和花总皂苷具有抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集能力,具有潜在的抗肿瘤血行转移能力。     

三七总皂苷对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响

目的:研究三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果:AngⅡ(10^-7mol·L^-1)孵育48h后心肌细胞凋亡明显多于对照组;三七总皂苷(25,50,100mg·L^-1)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组。结论:三七总皂苷对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制心肌细胞内钙超载有关。     

中药诱导大鼠间充质干细胞向神经干细胞分化研究

目的筛选具有诱导大鼠自体骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的有效中药成分。方法用分别舍有黄芩苷、三七总皂角苷、红景天苷和察丹酚酸B的诱导培养基对经培养传代的大鼠间充质干细胞进行诱导培养．并设对照组,再将以上4种中药单体诱导的间充质干细胞和对照组细胞用抗神经元特异烯化酶（NSE）抗体、抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）抗体和抗Nestin抗体进行免疫组化鉴定,以明确大鼠间充质细胞经这4种中药单体诱导后生长的细胞的性质。结果4种中药单体诱导的间充质干细胞都表达NSE、GFAP和Nestin,这些细胞形态均表现出具有丰富的胞体和明显的突起,对照纽则为胞体较小、呈圆形或椭圆形,突起少且短,甚至没有突起的细胞。结论三七总皂苷、红景天苷、黄芩苷和察丹酚酸B具有诱导间充质干细胞向神经细胞分化的作用．     

三七总皂苷对新生大鼠心肌细胞肥大的影响及机制

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法采用MTT法检测细胞毒性;采用相差显微镜测量细胞大小,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标;RT-PCR检测心肌细胞原癌基因c-fos mRNA的表达。结果三七总皂苷能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大,蛋白质合成速率的显著增加及心肌细胞原癌基因c-fos mRNA表达的增强,其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦相似。结论三七总皂苷可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这与其抑制了原癌基因c-fos的表达有关。     

三七皂苷R1对UV辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的 探讨三七皂苷R1对UV诱导的人皮肤成纤维细胞的保护作用及其相关分子机制.方法 采用不同剂量UV照射原代培养的人皮肤成纤维细胞,同时加入三七皂苷R1干预处理,倒置相差显微镜观察细胞损伤的形态学变化,并用MTT法检测其增殖活性,比色法检测成纤维细胞培养上清中羟脯氨酸的含量,ELISA法检测成纤维细胞MMP-1蛋白水平.结果 UVB、UVA辐射成纤维细胞后,细胞损伤程度呈剂量依赖性,加入三七皂苷R1后,体外培养成纤维细胞未出现明显的数量上和形态学改变;三七皂苷R1浓度为5,20 μg·mL-1时经UV照射的FB细胞增殖活性增加;三七皂苷R1浓度为5,20 μg· mL-1时抑制MMP-1的分泌.结论 UVB、UVA辐射对皮肤成纤维细胞具有明显的损伤作用,而三七皂苷R1对其具有一定的保护作用.     

三七叶器官获得胚状体和再生植株的研究

目的：研究和改进三七组培技术。方法：以三七叶片和叶柄的愈伤组织为外植体,以MS+2,4-D 1.5 mg·L^-1为基本培养基,再分别添加LFS,BA,KT或ZT各0.5 mg·L^-1,于暗处培养,诱导胚状体发生,再在光下培养,诱导胚状体萌发成苗。结果与结论：只有添加LFS的培养基能诱导胚状体发生,45～60 d是高峰期,最终发生率达85％左右,叶片愈伤组织优于叶柄愈伤组织。胚状体在光下培养,多数可以转绿萌发,30％可以发育成健壮的再生植株。     

菊三七组织培养的研究

目的　探讨菊三七诱导愈伤组织的过程 ,为快速繁殖幼苗奠定基础。方法　以菊三七的根、茎、叶为外植体 ,采用 MS培养基 ,附加不同的植物激素进行实验。结果　以菊三七的叶片为外植体 ,在培养基 MS 1.0 mg/ LNAA 4 .0 m g/ L 6- BA上 ,愈伤组织诱导率可达 64%。愈伤组织在适宜的分化培养基上 ,成苗率可达 86.7%。结论　通过诱导愈伤组织的途径 ,可以达到快速繁殖菊三七的目的     

三七遗传改良的研究进展

三七Panax notoginseng作为传统名贵中药材,市场需求量大,人工种植是保障三七原料供给的主要措施之一。但三七在种植过程中对生态环境要求苛刻,面临着生长分布区域狭窄、连作障碍严重等诸多问题,加之三七良种对三七种植产业贡献率较低,三七品种化制度尚未建立。因此,从三七种质资源收集与鉴定、新品种选育、三七重要性状及关键基因挖掘、分子标记开发、组学技术应用等方面对三七遗传改良工作进行整理,为今后三七的新品种选育工作提供参考。     

三七化学成分的研究历程和概况

三七Panax notoginseng为五加科人参属植物,在我国已有400多年的栽培历史,其作为一种名贵中药,具有化瘀止血、消肿止痛等功效。三七复杂的化学成分是其良好功效的基础。目前已从三七中发现了百余种化合物,其中有效成分以皂苷类成分和三七素为主。对三七中皂苷类和非皂苷类成分的研究历程和概况进行了综述,并根据不同化合物的特点,探讨了各类化合物今后的研究方向,以期为三七的进一步研究提供有益参考。     

三七中皂苷成分及其药理作用的研究进展

三七是我国传统中药材,具有抗炎、止血、抗衰老、抗肿瘤等药理活性。三七主要活性成分为皂苷,目前已获取70多种皂苷成分。将从三七的不同部位角度,对三七中皂苷成分进行综述。由于大部分皂苷成分均从三七根中获取,而固液分离法和液液分离法是获取皂苷的传统方法,故将进一步根据获取方法的不同,对三七根中的皂苷成分进行概述。同时将对三七中皂苷成分药理活性进行简单概述,为三七研究与开发提供有价值的参考。     

三七花及其易混淆品的微性状鉴别

目的:研究市售五加科植物三七(Panax notoginseng),人参(P.ginseng),西洋参(P.quinquefolius)的干燥花序的微性状特征,为该类药材的微性状鉴别提供科学的理论依据。方法:利用中药微性状鉴定法对市场上销售的3种花序的不同部位运用电子目镜进行拍照,采用Photoshop CS6软件程序合成高清晰度微性状特征图片来对微性状特征进行鉴别研究,并对其表面微性状特征进行描述。最后归纳、总结出各药材的鉴别要点。结果:微性状鉴别较明显的区别点集中在总花梗、小花梗、雌蕊方面,其中三七花总花梗和小花梗表面有非腺毛,小花梗表面白色突起呈不规则排列,雌蕊柱头分开,并且含有棕黄色树脂道;人参花总花梗和小花梗表面无非腺毛,雌蕊柱头常不分开,含不明显的黄色树脂道;西洋参花总花梗和小花梗表面有非腺毛,小花梗表面白色突起呈规则排列,雌蕊柱头不分开,无明显树脂道。结论:通过微性状鉴别法,可以清楚地看出各部位的微性状特征,能有效的对三七花、人参花、西洋参花进行区别,为三七花的真伪鉴别及质量评价提供依据。     

三七生长年限对5个皂苷及其抗血栓作用的影响

目的 通过比较分析不同生长年限对三七质量、皂苷含量及抗血栓作用的影响,为确定三七药材适宜的采收年限提供数据支持。方法 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定三七中人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、三七皂苷R₁ 5个主要皂苷,比较1—6年不同生长年限的三七有效成分的积累情况。同时,利用斑马鱼血栓模型比较1、2、3年生三七的抗血栓作用。结果 1—3年生三七质量、5个皂苷含量均随生长年限的增加逐渐累积,其中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量均较高,随年限变化最显著;而4—6年生三七中质量、皂苷含量受批次个体等影响较大,皂苷含量波动较大,与3年生三七相比差异无统计学意义。1—3年生三七抗血栓作用比较中发现,在相同剂量下,生长年限越长,疗效越好;在相同生长年限下,剂量越大,疗效越好。结论 综合品质、产量、种植成本及活性等因素,结合目前产地种植三七的实际情况,3年生三七整体品质较高且趋于稳定,可为三七标准化采收提供依据。     

基于决策树模型的文山三七种植面积估算方法研究

通过研究基于遥感的中药材种植面积提取方法,实现中药材种植面积消长趋势的动态监测,可为中药资源保护和利用提供决策支持。该文以云南省文山州三七种植为例,以国产"高分一号"(GF-1)16 m的多光谱遥感影像为数据源,选取能够最大程度反映文山三七棚和背景地物波谱差异的时相,根据地物的波谱特征构建决策树模型实现文山三七种植面积的提取。结果表明:基于决策树模型的遥感分类方法可以有效地提取出研究区内的三七种植地块并估算出种植面积,该方法可为三七种植面积提取提供技术支撑。     

基于粒子群-随机森林算法和气象数据的三七叶面积生长预测模型

目的 基于数据挖掘技术,建立三七叶面积生长预测模型,对于三七整个生长期的精准管理与决策提供参考。方法基于粒子群-随机森林算法,采用2018、2019年4～10月云南省红河自治州泸西县三七种植基地棚内气象因子数据以及三七叶面积生长数据作为训练集和测试集构建生长预测模型。结果 通过特征工程中皮尔森系数分析可知,三七叶生长与土壤温度、上方水蒸气压和下方水蒸气压等气象因子呈正相关,其中土壤温度正相关程度最大,其皮尔森相关系数在0.75～0.90;下方土壤热通量与三七叶生长呈负相关,其皮尔森相关系数为-0.4～-0.3;通过粒子群优化随机森林算法训练的生长预测模型,其均方根误差(root mean square error,RMSE)收敛时值为0.021 82,模型优化后的三七叶生长预测模型决定系数R2达到0.999 97。结论 通过多种算法对比实验结果表明,粒子群-随机森林算法构建的三七叶面积生长预测模型具有较高的预测精度。该方法为三七叶的生长预测提供了新的研究思路。     

三七药材质量特征和商品规格等级标准研究

通过市场调查和文献研究,了解三七药材质量特征和商品状况。并从市场和产地采集样品进行分析,结合生产实际,修订三七药材商品规格等级标准。该研究将三七药材按照不同部位和采收时间划分为主根(又分为春七和冬七)、筋条和剪口共4种规格,春七和冬七又按个头大小简化为20头、30头、40头、60头、80头、120头、无数头和等外8个等级。在此基础上分析比较了三七不同规格、等级间药材的密度和内在成分含量的差异,并探讨了产地、种植年限、采挖时间对三七商品规格等级影响,修订完善了三七药材商品规格等级标准。同时,建议《中国药典》在中药材三七项下按照药用部位和规格进一步细分药材的质控指标,并明确各中药材"采收年限"和药材密度,合理引导中药材生产,保证药材质量。     

6种人参属药材体外抗凝血活性与皂苷含量的相关性研究

目的分析不同功效的6种人参属药材提取物的体外凝抗血活性差异。方法采用凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)实验,探讨6种人参属药材提取物抗凝血活性的差异性;分析其抗凝血活性与皂苷含量的相关性。结果竹节参、珠子参及三七可显著延长PT、APTT,降低FIB水平,呈现明显的量效关系;而人参、西洋参及屏边三七无显著变化。竹节参、珠子参提取物的抗凝血活性明显强于三七提取物。6种人参属药材中人参皂苷含量与其抗凝血活性的相关性分析表明,PT与人参皂苷Rb2含量呈现显著的正相关;且人参皂苷Rb2可显著延长PT、APTT。结论 6种人参属药材抗凝血活性存在差异,且抗凝血活性与人参皂苷Rb2含量相关。     

三七细胞色素P450酶基因PnCyp450_3响应丛枝菌根真菌诱导的表达特性分析

目的 基于三七根转录组数据库,克隆三七皂苷合成关键酶细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因,对其进行生物信息学分析,明确其对丛枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi,AMF）诱导的响应,为进一步研究其催化特性奠定基础。方法 基因PnCyp450_3开放阅读框（open reading frame,ORF）克隆及克隆载体构建依据相应试剂盒说明书,通过化学转化法及氨苄青霉素抗性标记筛选阳性克隆。利用各种在线工具或软件完成生物信息学分析及系统发育树构建;基因表达特性分析采用实时荧光定量（real-time fluorescence quantitative,qPCR）技术。结果 成功克隆了1个三七细胞色素P450超家族基因PnCyp450_3,其ORF全长1617 bp,编码538个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为59 690,等电点（pI）为8.50,含有5个保守结构域。组织表达特性结果显示,在主根、须根部位,PnCyp450_3均可响应根内球囊霉（Glomus intraradices）的诱导而显著上调表达（P<0.05）,其中主根相对表达量最高（1.85倍）,须根次之（1.22倍）。结论 PnCyp450_3是一个编码538个氨基酸的CYP450超家族基因,在主根、须根中均可响应根内球囊霉的诱导而显著上调表达,为深入研究三七皂苷合成关键酶基因响应生物因子诱导的调控机制提供了数据支持,具有重要的参考价值。