当归补血汤水提液预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制研究

目的探讨当归补血汤预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制。方法复制缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,以始终在正常培养条件下的心肌细胞为正常对照组,将预先加入当归补血汤的细胞(当归补血汤组)在正常条件下培养24 h,与未处理细胞(模型组)同时进行缺氧/复氧培养,JC-1染色,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,RT-PCR荧光相对定量检测B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、bcl-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3(Bnip3)的mR NA表达水平,Western blot检测细胞色素C蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组线粒体膜电位下降的细胞比例显著增加(P0.05),细胞内ROS水平增加明显(P0.05),细胞色素C蛋白表达显著升高(P0.05),Bcl2 mR NA表达水平明显降低(P0.05),Bax mR NA表达水平显著升高(P0.05)。当归补血汤干预后,与模型组比较,线粒体膜电位下降的细胞明显减少(P0.05),细胞色素C蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl2 mR NA水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧后,线粒体膜电位明显下降,细胞色素C释放增加。当归补血汤可能通过促进Bcl2表达,减少ROS产生等机制稳定心肌细胞线粒体膜电位,减轻复氧后对线粒体功能的损伤作用。     

丹酚酸B调控NIX介导的线粒体自噬保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

探讨丹酚酸B保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制是否与调控NIX介导的线粒体自噬有关。体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、丹酚酸B组(50μmol·L~(-1)),缺氧4 h复氧2 h建立缺氧/复氧损伤模型。正常组:高糖DMEM培养基培养;模型组:无糖无氧DMEM培养基培养,缺氧、复氧均不加任何药物;丹酚酸B组:缺氧同时加入用无糖DMEM培养基配制的丹酚酸B,其余过程同模型组。CCK-8法检测心肌细胞活力,微量酶标法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)变化,萤光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ、凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及线粒体自噬受体蛋白NIX表达。与正常组相比,模型组H9c2心肌细胞活力、ATP水平降低(P0.05),LDH漏出、ROS生成增多(P0.01),ΔΨm降低(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、cleaved caspase-3、NIX蛋白表达均升高(P0.05);与模型组相比,丹酚酸B可显著升高细胞活力、降低LDH漏出量和ROS水平(P0.01),升高细胞内ATP含量(P0.05)及ΔΨm(P0.01),降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P0.01),下调cleaved caspase-3和NIX蛋白表达(P0.05)。丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与抑制线粒体自噬发生有关,其具体机制可能为抑制NIX介导的线粒体自噬激活,从而升高ΔΨm,降低ROS生成,降低cleaved caspase-3和LC3-Ⅱ蛋白表达,升高细胞活力。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

槲皮黄酮对膀胱癌细胞抑制作用的机制研究

以BIU-87细胞为模型,探讨槲皮黄酮对膀胱癌细胞的抑制作用机制。体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87,将不同浓度槲皮黄酮加入处于对数生长期的BIU-87细胞中共培养,采用CCK-8法检测槲皮黄酮对BIU-87细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测分析槲皮黄酮诱导BIU-87细胞的凋亡作用和细胞周期;Western blot技术检测分析了细胞中抗凋亡蛋白Bal-2,Bal-x L的表达量及TAK1/JNK信号通路中蛋白的表达水平。CCK-8实验发现,不同浓度槲皮黄酮处理BIU-87细胞24 h或48h后,药物对BIU-87细胞增殖抑制作用均明显高于对照组(P0.05);流式细胞术结果显示,不同浓度槲皮黄酮对BIU-87细胞的凋亡率均显著高于对照组,呈剂量时间依赖性,细胞周期G_0/G_1期细胞逐渐减少,G_2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显;Western blot检测发现槲皮黄酮处理的BIU-87细胞中Bal-2,Bal-x L蛋白表达水平降低,并且p-TAK1,p-MKK4/7,p-JNK表达水平也降低。槲皮黄酮可抑制BIU-87细胞增殖,促进BIU-87细胞凋亡,其机制可能与抑制TAK1/JNK信号通路进一步降低了Bal-2,Bal-x L的表达有关。     

左归丸对自然衰老小鼠卵母细胞线粒体功能的改善作用

目的探讨左归丸对自然衰老小鼠卵母细胞线粒体功能的改善作用。方法将10只2月龄小鼠作为青年对照组,将30只11月龄小鼠随机分为衰老空白组、左归丸低剂量组(1.2 g·kg~(-1),相当于临床用量)和左归丸高剂量组(12.0 g·kg~(-1)),每组10只。小鼠灌胃给药,每天1次,连续60 d。末次给药后,小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG,5 IU),48 h后再注射人绒毛膜促性腺激素(hCG,8～10 IU)诱导。16 h后解剖并分离卵母细胞。采用生物发光法测定卵母细胞三磷酸腺苷(ATP)含量;电镜观察线粒体的数目、形态和结构;JC-1染色法检测线粒体膜电位;Western Blot法检测卵母细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PCG-1α)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)和PTEN诱导蛋白激酶1(PINK1)的表达水平。结果与青年对照组比较,衰老空白组小鼠的卵母细胞ATP含量明显降低(P 0.01),线粒体数目明显减少(P 0.01),空泡增多,膜电位降低(P 0.01),PCG-1α、OPA1及PINK1蛋白表达水平明显下调(P 0.01)。与衰老空白组比较,左归丸高、低剂量组小鼠的卵母细胞ATP含量明显提高(P 0.01),线粒体结构得到改善且数目明显提高(P 0.05),线粒体膜电位明显升高(P 0.01),PCG-1α、OPA1及PINK1蛋白表达明显上调(P 0.01)。结论卵母细胞线粒体功能降低可能是小鼠卵母细胞衰老的机制之一,而左归丸能够改善自然衰老的线粒体功能,可能与其通过促进线粒体自我更新的动力过程有关。     

去甲斑蝥素诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用及其相关分子机制。方法体外培养A431细胞,分为对照组和NCTD低、高剂量组(20,40μmol·L~(-1))。采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位(MMP)变化、Caspase-3及Caspase-9酶活性变化;Western Blot法检测对细胞Bcl-2及Bax蛋白表达水平的影响。结果采用NTCD处理A431细胞48 h,与对照组相比,NCTD低、高剂量组均能抑制细胞增殖能力(P0.05),并明显诱导细胞凋亡(P0.05),提高细胞内的ROS水平(P0.05,P0.01)和MDA含量(P0.05,P0.01),降低细胞MMP(P0.05,P0.01)。同时,NTCD可以抑制Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达,并能够明显升高细胞的Caspase-3及Caspase-9酶活性。结论 NCTD可能通过提高细胞内ROS水平的途径诱导A431细胞发生凋亡。     

益脉颗粒对高脂大鼠心肌缺血再灌注损伤后线粒体动力学的影响

目的探讨益脉颗粒对高脂大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)后线粒体动力学的影响。方法选取40只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、高脂模型组、益脉颗粒高剂量组、益脉颗粒中剂量组、益脉颗粒低剂量组5组,每组8只。采用高脂膳食喂养的方法复制高脂大鼠模型,再通过可逆性左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI模型,假手术组仅穿线不结扎。药物组大鼠给予相应的药物灌胃,每日3次,疗程1周,假手术组和高脂模型组给予等量的0.9%氯化钠注射液。治疗结束后,通过Western Blot检测心肌细胞内线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1与融合蛋白Mfn1、Mfn2、OPA1及线粒体生物合成关键调控因子PGC-1α的蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌OPA1、Mfn1、PGC-1α蛋白表达降低,Mfn2、Drp1、Fis1蛋白表达增加(P 0.01)或(P 0.05)。与模型组相比,益脉颗粒高、中剂量组大鼠心肌Drp1、Fis1蛋白表达降低,益脉颗粒低剂量组大鼠心肌Fis1蛋白表达降低(P 0.01)或(P 0.05);益脉颗粒高剂量组大鼠心肌Mfn2蛋白表达降低,Mfn1、OPA1蛋白表达升高,益脉颗粒中、低剂量组大鼠心肌Mfn1、OPA1蛋白表达升高(P 0.01)或(P 0.05),Mfn2蛋白表达有降低趋势;益脉颗粒高、中、低剂量组大鼠心肌PGC-1α蛋白相对表达量显著增强(P 0.01)或(P 0.05)。药物组大鼠心脏PGC-1α、OPA1、Mfn1蛋白相对表达量显著增强(P 0.01)或(P 0.05),Mfn2、Drp1、Fis1蛋白表达下降(P 0.01)或(P 0.05)。结论益脉颗粒可能通过调控线粒体融合、裂解、合成等相关蛋白,调控线粒体动态平衡进而对高脂血症大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护作用。     

脾气虚大鼠股四头肌线粒体蛋白质控的研究

目的:主要通过检测线粒体蛋白质控(mitochondrial protein quality control, MPQC)网络主要成分的表达,初步探讨脾气虚骨骼肌线粒体损伤的可能机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚模型组(模型组),每组8只;透射电镜观察股四头肌线粒体超微结构;提取股四头肌线粒体,ELISA法检测内ATP、反应性氧簇(reactive oxygen species, ROS)和超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)水平,比色法检测谷胱甘肽(glutathion peroxidase, GSH-Px)活性;Western Blotting法检测股四头肌线粒体内热休克蛋白70(hot shock protein 70, Hsp70)、Lon蛋白酶(Lon protease, LonP)和ClpXP复合物表达。结果:与正常组比较,模型组线粒体较小,数量减少,嵴减少;ATP和SOD水平下降(均P0.01),ROS水平升高(P0.05);LonP表达下降(P0.05),ClpP表达上升(P0.05)。结论:MPQC网络异常与脾气虚骨骼肌线粒体损伤有关。     

健脾化痰祛瘀方对动脉粥样硬化巴马小型猪心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

目的:观察健脾化痰祛瘀方对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪心肌细胞氧化应激及凋亡的影响。方法:健康巴马小型猪15只,月龄6～8个月,随机分为正常对照组、模型组、中药治疗组3组,每组5只。造模:正常对照组予基础饲料喂饲,模型组、中药治疗组采用高脂高热量喂养。药物干预:高脂喂饲24周后健脾化痰祛瘀组予健脾化痰祛瘀方药搅拌于饲料中喂食。检测各组巴马小型猪的心肌ROS、CAT、MDA、GSH-PX的含量;Western Blot方法检测各组巴马小型猪心肌细胞Bax、Bcl-2、Cyto C、Caspase3的含量。结果:(1)与正常对照组相比,模型组心肌线粒体ROS、MDA含量明显上升(P0.05、P0.01),CAT、GSH-PX含量明显下降(P0.01);与模型组相比,中药治疗组心肌线粒体ROS、MDA含量明显下降(P0.01),CAT、GSH-PX含量明显上升(P0.05)。(2)与正常对照组相比,模型组心肌细胞Bax、Cyto C、Caspase3蛋白表达明显上升(P0.01),Bcl-2蛋白表达明显下降(P0.01);与模型组相比,中药治疗组心肌细胞Bax、Cyto C、Caspase3蛋白表达明显下降(P0.01、P0.05),Bcl-2含量明显上升(P0.05)。结论:(1)健脾化痰祛瘀方可以减少脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪心肌线粒体ROS、MDA的生成,增加其抗氧化酶CAT、GSH-PX的表达,从而减少了心肌线粒体的氧化应激水平。(2)健脾化痰祛瘀法可以减少脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪心肌细胞Bax、Cyto C,Caspase3表达,增加Bcl-2的表达,进而改善心肌细胞凋亡水平。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

丁香苦苷不同给药途径的药物动力学研究

目的:研究并比较丁香苦苷单体两种给药途径在家兔体内的药物动力学过程,考察丁香苦苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:家兔静脉注射丁香苦苷注射液和灌胃给予丁香苦苷水溶液,采集血样,固相萃取小柱活化方法处理血浆后高效液相色谱法测定丁香苦苷血浆浓度,采用药动学软件3P97进行数据处理,确定药动学参数。结果:丁香苦苷静脉给药后在体内符合二室模型分布,其主要药动学参数分别如下:T1/2α为2.41min,T1/2β为15.38min。灌胃给药后丁香苦苷的药动学行为符合一级吸收二室模型,Cmax为17.91min,T1/2(α)为9.642min,T1/2(β)31.748min。绝对生物利用度为35.9%。结论:丁香苦苷单体经口服和静脉两种给药途径给药后,吸收和消除均较快。     

病性变化和转化的哲理数学原理

病性的变化和转化以及疾病的传变是中医病理学的2个核心问题。它们可分别从阴阳五行数学的公理1和公理2、3得到圆满的解释。病性变化,其症结在于主导属性明晰度的大小发生变化;病性转化,其症结则在于主导属性明晰度的正负号发生变化。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

Evaluation of estrogenic activity of alcoholic extract of rhizomes of Curculigo orchioides

The rhizomes of Curculigo orchioides Gaertn. (Amaryllidacea) is an important Ayurvedic as well as Unani drug. It is present in several drug formulations used in the treatment of menorrhagia and other gynecological problems. In this study, we conducted a comparative study of estrogenic activity of alcoholic extract of Curculigo orchioides with diethylstilbestrol in bilaterally ovariectomized young albino rats. Bilaterally ovariectomized albino rats were divided into five groups (n=9) receiving different treatments, consisting of vehicle (0.6% w/v sodium carboxy methyl cellulose), ethanolic extract of rhizomes of Curculigo orchioides at three different doses (viz., 300, 600, 1200 mg/kg body weight) and standard drug diethylstilbestrol (DES) at a dose of 2 mg/kg body weight. All these were administered orally daily for 7 days. Estrogenic activity was assessed by taking percentage vaginal cornification, uterine wet weight, uterine glycogen content and uterine histology as parameters of assessment. Alcoholic extract of Curculigo orchioides showed a significant increase in percentage vaginal cornification, uterine wet weight (P<0.001), uterine glycogen content (P<0.001) and a proliferative changes in uterine endometrium compared to the control.     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

对中医学科建设与学科带头人培养的思考

通过中医学术发展的历史沿革回顾,提出了中医药学科建设的总体构思,指出要发展一个大的一级学科,首先要有教育,这是发展学科的基础;其次是科研来提高教育水平,并指导临床;再次是临床;三者缺一不可。同时提出了学科带头人应具备的条件及如何培养学科带头人。     

胃脘痛证候量化诊断的探讨

目的:探讨胃脘痛证候的量化诊断规律。方法:以因子分析方法对808例胃脘痛患者的临床四诊信息进行分析。结果:因子分析从胃脘痛临床症状中提取12个因子,分别代表脾胃湿热、脾胃虚寒、肝胃气滞、气阴两虚、胃热炽盛、胃阴亏虚、肝胃郁热、脾胃气虚等8个证候,同时对各个证候进行量化。结论:因子分析所得的胃脘痛的常见证候分类及量化诊断为临床辨证提供客观依据。     

中医方剂学考试改革的探索与实践

传统的闭卷考试不能很好地反映方剂学教学的效果,因此,我们试行了以多种形式相结合的考试改革,考试成绩由笔试、机试、平时3个方面组成。结果大大提高了学生分析问题和解决问题的能力,激发了学生学习的兴趣,提高了教师教学水平,带动了教学改革和教学研究的全面进行。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论,分析了中药产业竞争力提升的环境与条件,提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。