毛蕊异黄酮通过调控TREM-1表达对重症急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

目的:探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)对重症急性胰腺炎(SAP)腺泡细胞损伤的影响及其分子机制。方法:将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组(AR42J细胞)、SAP组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖)、SAP+Calycosin-L组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+10μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-M组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+50μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-H组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+si-NC组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-NC)、SAP+si-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-TREM-1)、SAP+Calycosin+pcDNA组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA)及SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA-TREM-1)。酶联免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、髓样细胞表达触发受体-1(TREM-1)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TREM-1 mRNA表达。结果:与Con组比较,SAP组细胞凋亡率,IL-6、TNF-α水平,Bax、cleaved-caspase3、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。与SAP组比较,SAP+Calycosin-L组、SAP+Calycosin-M组及SAP+Calycosin-H组SAP腺泡细胞IL-6、TNF-α水平,Bcl-2、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加,均呈浓度依赖性(P<0.05)。与SAP+si-NC组比较,SAP+si-TREM-1组SAP腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05)。与SAP+Calycosin+pcDNA组比较,SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮可通过调控TREM-1表达减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,保护SAP腺泡细胞免受损伤。     

大黄素减轻胰腺腺泡AR42J细胞内质网应激的研究

目的:探讨大黄素对胰腺腺泡AR42J细胞内质网应激的影响。方法:AR42J细胞以1×105个/m L接种于6孔培养板中,分为正常对照组、模型组(雨蛙素终浓度为1×10-7mol·L-1,脂多糖终浓度为10 mg·L-1)、大黄素组(终浓度为10,20,40μmol·L-1),每组设3个复孔,培养24 h待细胞贴壁后弃上清,对照组加入单培、模型组加入用单培配置的造模液、治疗组在加入造模液前15~20 min分别加入不同浓度大黄素。37℃,5%CO2条件下继续培养3 h后,试剂盒检测细胞内蛋白酶、脂肪酶表达水平;光学显微镜观察细胞形态;激光共聚焦显微镜检测内质网钙离子水平;Western blot方法分析内质网应激相关信号分子的蛋白表达情况。结果:大黄素能显著抑制AR42J细胞合成蛋白酶、脂肪酶,减少细胞内钙离子水平,抑制内质网应激。结论:大黄素能够减轻雨蛙素联合脂多糖导致的胰腺腺泡细胞损伤,其作用机制与抑制细胞内钙超载及内质网应激有关。     

大黄及大黄蒽醌类有效成分对胰腺腺泡细胞损伤的保护作用

目的 探讨大黄及大黄蒽醌类有效成分对胰腺腺泡细胞AR42J损伤的保护作用。方法 取生长良好的AR42J细胞,以1×105·mL-1浓度接种于6孔板中,设空白对照组、模型组、大黄含药血清（10 %,5 %,2.5 %,1.25 %,0.625 %）组,每组3个复孔,培养24 h待细胞贴壁后弃上清,空白对照组加入含10 %空白血清培养液、模型组用含10 %空白血清培养液配置造模液（雨蛙素终浓度为10-7 mol·L-1,脂多糖终浓度为10 mg·L-1）、大黄含药血清组分别加入不同浓度的含药血清,继续培养24 h后,检测细胞上清液中淀粉酶含量,取细胞检测细胞内胰蛋白酶、脂肪酶的含量。另取AR42J细胞,以1×105·mL-1浓度接种于6孔板中,设正常对照组、模型组、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚组,上述大黄蒽醌类成分分别设10,20,40, 80 μmol·L-1共4个剂量,每组3个复孔,在37 ℃、5 % CO2条件下,分别培养3,6,12,24 h后,取细胞上清液,检测上清液中淀粉酶的含量。结果 大黄含药血清在2.5 %到10 %浓度范围内,能显著抑制AR42J细胞内蛋白酶、脂肪酶含量,降低细胞培养上清液中淀粉酶的水平。对大黄蒽醌的研究结果提示,大黄素在模型复制3 h后即能显著降低AR42J细胞分泌淀粉酶,且呈明显的剂量依赖性,在24 h内,大黄素各剂量组均表现出较强的抑制淀粉酶的作用;芦荟大黄素及大黄酸在40和80 μmol·L-1剂量下也能显著降低细胞上清液中淀粉酶水平,而大黄素甲醚及大黄酚作用较弱。结论 大黄蒽醌是大黄保护胰腺腺泡细胞损伤的重要物质基础,其中,大黄素的作用最强。     

大黄诱导急性胰腺炎大鼠早期腺泡细胞凋亡的研究

目的:探讨大黄素治疗急性胰腺炎(AP)的作用机理。方法:SD大鼠32只,随机分为对照组、急性胰腺炎模型组、大黄素治疗组,用雨蛙素制作大鼠AP模型,大黄素组分成二个亚组,分别在模型制作后1h、12h腹腔内注射大黄素2.5mg/kg,2h后重复1次,测定24h后各组大鼠血清TNF-α、IL-6,并取胰腺组织作病理学检查,同时应用TUNEL技术分析大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的变化。结果:发现造模1h后大黄素给药组血清TNF-α、IL-6水平明显降低,胰腺组织病变程度减轻,胰腺腺泡细胞凋亡指数较模型组高(P<0.05)。造模12h后大黄素给药组与模型组无显著差异。结论:早期给予大黄素可明显抑制大鼠TNF-α、IL-6的释放,诱导胰腺腺泡细胞凋亡,从而改善大鼠AP的病情发展。     

五味子乙素调控miR-22-3p/RUNX3分子轴对重症急性胰腺炎腺泡细胞损伤影响的研究

目的：探讨五味子乙素（Sch B） 调控miR-22-3p/runt 相关转录因子3（RUNX3） 分子轴对重症急性胰腺炎（SAP）腺泡细胞损伤的影响。方法：将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 分为Con 组、SAP 组、SAP+Sch-L 组、SAP+Sch-M 组、SAP+Sch-H组、SAP+anti-miR-NC 组、SAP+anti-miR-22-3p 组、SAP+Sch+miR-NC 组、SAP+Sch+miR-22-3p 组。除Con 组外，其余各组采用10 nmol/L 雨蛙素联合10 mg/L 脂多糖刺激AR42J 细胞24 h 构建SAP 细胞模型。SAP+Sch-L 组、SAP+Sch-M 组、SAP+Sch-H 组采用浓度为10、20、40 μmol/L 的Sch B 处理细胞；SAP+anti-miR-NC 组、SAP+anti-miR-22-3p 组为分别转染antimiR-NC、anti-miR-22-3p；SAP+Sch+miR-NC 组、SAP+Sch+miR-22-3p 组为分别转染miR-NC、miR-22-3p mimics 并用40 μmol/L的Sch B 干预。酶联免疫吸附法测定细胞培养液上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） 表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR 检测miR-22-3p 和RUNX3 mRNA 表达水平；BCA 法检测RUNX3、B 细胞淋巴瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved-caspase3） 表达水平；双荧光素酶报告基因实验检测miR-22-3p 与RUNX3 的靶向结合关系。结果：与Con 组比较，SAP 组AR42J 细胞IL-6、TNF-α、miR-22-3p、Bax、cleaved-caspase3 的表达及细胞凋亡率升高（P＜0.05），RUNX3、Bcl-2 的表达降低（P＜0.05）。与SAP 组比较，SAP+Sch-L组、SAP+Sch-M 组、SAP+Sch-H 组IL-L、TNF-α、miR-22-3P、Bcl-2 表达降低（P＜0.05），Bax、cleaved-caspase3、RUNX3 表达及细胞凋亡率升高（P＜0.05），且呈剂量依赖性（P＜0.05）。与SAP+anti-miR-NC 组比较，SAP+anti-miR-22-3p 组细胞IL-6、TNF-α、Bcl-2 的表达降低（P＜0.05），细胞凋亡率及Bax、cleaved-caspase3、RUNX3 的表达升高（P＜0.05）。与SAP+Sch+miR-NC 组比较，SAP+Sch+miR-22-3p 组细胞IL-6、TNF-α、Bcl-2 的表达升高（P＜0.05），细胞凋亡率及Bax、cleavedcaspase3、RUNX3 的表达降低（P＜0.05）。结论：Sch B 可通过下调miR-22-3p/RUNX3 分子轴减轻SAP 腺泡细胞损伤。     

隐丹参酮缓解雨蛙素联合脂多糖诱导的小鼠重症急性胰腺炎的作用探讨北大核心CSCD

目的探究隐丹参酮(CPT)对雨蛙素联合脂多糖(LPS)诱导的重症急性胰腺炎(SAP)小鼠模型的疗效及胰腺组织中信号传导子和转录激活子3(STAT3)、核转因子-kappa B(NF-κB)通路蛋白和炎症因子表达的影响。方法将C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、处理组(高、低剂量组),每组5只,处理组分别予以5、10 mg/kg CPT预处理,采用雨蛙素(50μg/kg)联合LPS(20 mg/kg)造模;采用HE染色、免疫组化染色观察病变及p-STAT3表达情况;采用试剂盒检测血清淀粉酶、脂肪酶活性;通过Western Blot检测STAT3、NF-κB通路蛋白及炎症因子表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性及病理学评分明显升高(P<0.01),炎细胞浸润明显(P<0.01),STAT3、p-STAT3、NF-κB p65、IL-6表达增加(P<0.01);与模型组比较,处理组血清脂肪酶活性及组织病理学评分明显降低(P<0.01),炎细胞浸润显著减少(P<0.01),STAT3、p-STAT3、NF-κB p65、IL-1β、IL-6表达降低(P<0.01),IκBα表达升高(P<0.01)。结论CPT可缓解雨蛙素联合LPS诱导的小鼠SAP,其潜在作用机制可能与下调STAT3和NF-κB通路相关。     

黄芪多糖对骨髓间充质干细胞向肿瘤相关成纤维细胞分化中IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路的影响

目的观察黄芪多糖(APS)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)分化中对IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路的影响,探讨其可能的调控机制。方法以白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导BMSCs,建立向TAFs方向分化的炎性微环境模型;采用CCK-8法分别检测不同浓度IL-6/STAT3通路阻断剂AG490和TNF-α/NF-κB通路阻断剂BMS345541对BMSCs和诱导后BMSCs增殖能力的影响,Western blot检测阻断剂所对应的靶向蛋白JAK2和IKKβ的表达。将BMSCs分为空白组、模型组、模型+AG490组、模型+BMS345541组、模型+APS组,检测各组TAFs标记分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)和IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路关键蛋白STAT3、p65的表达。结果与空白组比较,模型组BMSCs增殖水平明显增强(P0.05);10μmol/L AG490和5μmol/L BMS345541较模型组BMSCs抑制作用明显增强(P0.05)。10μmol/L AG490对应的靶蛋白JAK2较其他各组表达减弱,5μmol/L BMS345541对应的靶蛋白IKKβ较其他各组表达减弱,故选为最佳作用浓度。通路阻断剂干预结果表明,与空白组比较,模型组TAFs标记分子α-SMA、FAP和通路关键蛋白STAT3、p65表达均明显升高(P0.05);与模型组比较,各干预组TAFs标记分子α-SMA、FAP和通路蛋白STAT3、p65表达均明显下降(P0.05)。结论 APS对IL-6、TNF-α诱导的BMSCs向TAFs方向分化有抑制作用,其机制可能与调控IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路有关。     

大黄素和大承气汤治疗重症急性胰腺炎小鼠对比研究

目的通过重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)小鼠模型,观察并对比大黄素和大承气汤对SAP小鼠的治疗效果。方法采用雨蛙素联合脂多糖诱导SAP小鼠模型(SAP组),给予大黄素(Emodin组)或大承气汤(DCQD组)干预,与对照组(Control组)比较观察造模后胰腺坏死情况,对胰腺炎症程度进行病理学评分;同时检测血清淀粉酶(Amy)、血清炎症因子-白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果与Control组相比,SAP组小鼠血清Amy、IL-1β、IL-6以及TNF-α的水平显著升高(P0.05),胰腺组织光镜下各项各项病理学评分均显著升高(P0.05);与SAP组相比,Emodin组和DCQD组的上述指标均显著降低(P0.05);与DCQD组相比,Emodin组Amy、TNF-α、IL-6、水肿项评分、炎症项评分、坏死项评分和总分降低程度不及DCQD组(P0.05),IL-1β和出血项评分未见明显差别。结论大黄素和大承气汤可显著降低SAP小鼠淀粉酶和相关炎症因子表达,改善胰腺损伤,但大黄素的整体治疗效果不及大承气汤。     

益心泰对心肌缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察益心泰对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其保护心肌的作用机制。方法采用结扎冠状动脉前降支法建立MIRI大鼠模型。实验大鼠随机分为假手术组、模型组和益心泰低、中、高剂量组。TTC染色检测心肌梗死面积,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、LC3、Beclin1、p62、JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)表达明显升高(P0.01);心肌梗死面积显著增加(P0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P0.01);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin 1蛋白表达明显升高(P0.01),p62蛋白表达明显降低(P0.01);Bax/Bcl-2和Caspase-3蛋白表达升高,细胞凋亡率明显上升(P0.01);p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT显著降低(P0.01)。与模型组比较,益心泰各剂量组大鼠CK-MB及c TnⅠ表达明显降低(P0.01);心肌梗死面积显著减少(P0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P0.01);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin 1蛋白表达明显降低(P0.01),p62蛋白表达明显升高(P0.01);Bax/Bcl-2比值和Caspase-3蛋白表达降低,细胞凋亡率明显降低(P0.01);p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT显著升高(P0.01)。JAK2特异性抑制剂AG490可逆转益心泰对MIRI大鼠JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达、心肌损伤标记物、细胞凋亡、自噬及炎症反应的影响。结论益心泰可通过激活JAK2/STAT3信号通路减轻MIRI大鼠炎症反应、抑制细胞凋亡及过度自噬,从而保护心脏。     

木犀草素通过调控JAK2/STAT3信号通路对Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探究木犀草素通过调控JAK2/STAT3信号通路对Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法木犀草素(10、20、30、40μmol/L)、JAK2抑制剂AG490(40μmol/L)单独或共同处理Hela细胞24 h。利用MTT检测Hela细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达。结果木犀草素(30、40μmol/L)处理24 h后可抑制Hela细胞的增殖,促进Hela细胞凋亡(P0.01)。与对照组比较,AG490、木犀草素(40μmol/L)单独处理Hela细胞24 h,p-JAK、p-STAT3及Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加。与AG490组相比, AG490与木犀草素(40μmol/L)共同处理Hela细胞,细胞增殖能力下降(P0.01)。结论木犀草素可能通过JAK2/STAT3信号通路来调控Hela细胞的增殖和凋亡。     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的干预研究

目的观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠系膜血管周围肥大细胞脱颗粒的干预作用。方法选用雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、大黄素对照组、DMSO对照组、模型组、大黄素提前干预组、大黄素造模后干预组,每组8只;逆胰胆管注入3%牛磺胆酸钠诱导SAP模型,造模后24 h处死各组大鼠;HE染色观察胰腺组织病理学变化,从水肿、腺泡细胞坏死、炎症及出血等方面对胰腺损伤进行病理学评分;生化方法测血清淀粉酶水平;甲苯胺蓝染色肥大细胞,计算肥大细胞脱颗粒率。结果大黄素提前干预和造模后干预均能减轻SAP大鼠胰腺病理变化,胰腺水肿、腺泡细胞坏死、炎症及出血评分均显著低于模型组;与模型组比较,大黄素提前干预和造模后干预血清淀粉酶水平降低,但差异无统计学意义;甲苯胺蓝染色显示模型组肠系膜血管周围出现密集的肥大细胞,部分肥大细胞呈脱颗粒状态;与模型组肥大细胞脱颗粒率(0.31±0.10)比较,大黄素提前组(0.22±0.10)和造模后干预组(0.23±0.05)均显著降低。结论大黄素能减轻SAP大鼠胰腺病理改变,减少肠系膜血管周围肥大细胞的脱颗粒率。     

大承气汤干预重症急性胰腺炎并发肝损伤的作用机制

目的探讨大承气汤对重症急性胰腺炎并发肝损伤小鼠的影响。方法 40只小鼠随机分为正常组、模型组及大承气汤低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),每组8只。采用雨蛙素(50μg/kg)联合脂多糖(7.5 mg/kg)腹腔注射造模,并于造模前30 min及造模后3、6 h用不同剂量的大承气汤灌胃3次,造模后10 h收集样本。ELISA法检测各组血清淀粉酶、TNF-α、ALT、AST水平,HE染色观察各组小鼠胰腺及肝脏的病理改变,Western blot、RT-PCR法分别检测肝组织RIP1、RIP3、TNF-α、MCP1蛋白及mRNA表达。结果与模型组相比,大承气汤组血清学指标(淀粉酶、TNF-α、ALT、AST)及胰腺、肝损伤好转(P<0.01),RIP3、TNF-α、MCP1蛋白及mRNA表达降低(P<0.01)。结论大承气汤可减轻雨蛙素联合脂多糖引起的SAP并发肝损伤小鼠模型,其机制可能与抑制RIP3-MCP1信号通路、减轻炎性反应有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨姜黄素改善脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用研究

目的探讨姜黄素通过抑制Janus激酶2-信号转导转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的机制。方法将30只雄性小鼠分为对照组、模型组和姜黄素干预组。姜黄素干预组连续灌胃给予姜黄素(100 mg/kg)7 d,每日1次,末次给药1 h后模型组和姜黄素腹腔注射给予脂多糖(10 mg/kg),对照组给予腹腔注射等量生理盐水,6 h后麻醉处死大鼠,进行小鼠肺组织切片观察,计算大鼠肺组织湿干重(W/D)比,检测支气管肺泡灌洗液中蛋白、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)水平,同时检测肺组织中JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果对照组小鼠肺组织切片未见明显异常,模型组小鼠肺组织切片见肺泡壁部分增厚,细支气管腔内有大量脱落炎细胞及渗出物,泡壁毛细血管充血严重,姜黄素干预组小鼠肺组织病理症状较模型组轻;与对照组比较,模型组肺组织W/D和支气管肺泡灌洗液中蛋白、TNF-α、IL-8含量增加,给予姜黄素干预后,上述指标均降低;小鼠肺组织中JAK2和STAT3蛋白表达变化不显著,模型组小鼠肺组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达较对照组增加,给予姜黄素干预后,小鼠肺组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达降低。结论姜黄素可以通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤。     

基于JAK 2/STAT 3信号通路探讨三棱莪术及配伍干预大鼠子宫内膜异位症的配伍研究

目的:基于Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK 2/STAT 3)信号通路,探讨三棱莪术配伍抗炎、促进内膜细胞凋亡,干预大鼠实验性子宫内膜异位症(EMS)的配伍机制。方法:通过自体子宫移植建立大鼠EMS模型,B超检测异位病灶体积。将造模成功的大鼠,按照病灶体积均衡分为模型对照组、三棱20 g/kg组、莪术20 g/kg组、配伍组(三棱莪术等比配伍,20 g生药/kg)和阳性组(AG490 4 mg/kg),每组10只。另设10只大鼠为假手术对照组。给药4 w后,分别以B超和卡尺测量病灶体积,吸取腹腔液后,取异位内膜组织,苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态;酶联免疫吸附(Elisa)法测定腹腔液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real Time-PCR)技术检测内膜组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)、Bax和Bcl 2的mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blot)法测定内膜组织中JAK 2和STAT 3蛋白的磷酸化表达。结果:造模成功后,B超检测腹壁下方可见子宫内膜异位病灶,HE染色显示异位内膜形态与正常子宫内膜相似。与假手术对照组大鼠相比,模型对照组大鼠腹腔液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著升高(P<0.01),内膜组织中JAK 2和STAT 3蛋白的磷酸化表达显著上调(P<0.01)。与模型对照组大鼠相比,AG490 4 mg/kg、三棱、莪术以及配伍组异位病灶体积均显著减小(P<0.01),异位内膜组织萎缩,腹腔液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显降低(P<0.05或P<0.01),内膜组织中Caspase 3和Bax的mRNA表达显著上调(P<0.01),Bcl 2的mRNA表达显著下调(P<0.01),莪术组和配伍组的JAK 2和STAT 3蛋白的磷酸化表达明显下调(P<0.01)。结论:三棱莪术配伍能够通过抗炎、促进细胞凋亡,使EMS大鼠病灶缩小,其作用与抑制JAK 2/STAT 3信号通路有关。     

JAK-STAT信号通路与类风湿关节炎相关研究进展

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种抗原驱动、T细胞介导及与遗传因素相关的慢性、炎症性自身免疫性疾病。白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等致炎性细胞因子在其发生发展过程中起重要作用,主要通过核因子NF-κB途径、MAPK途径、PI3K途径和JAK-STAT途径进行信号转导。而JAK/STAT信号通路是近年发现的重要的信号转导通路,参与调控人体多种器官和组织的发育、生长和分化。研究证实,在RA起病和关节破坏过程中,JAK/STAT信号通路发挥着重要的调控作用。JAK/STAT信号通路通过多种途径参与炎性反应,与RA关系密切。因此,了解JAK/STAT信号通路与RA之间的关系,能为开发新的抗RA药物提供新的理论依据。     

大黄及大黄素对大鼠胰腺细胞外基质降解作用的影响

目的从胰腺细胞外基质降解环节探讨大黄及大黄素对模型大鼠血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1含量的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄治疗组、大黄素治疗组4组,每组10只。结扎胰胆管并腹腔注射雨蛙素50 ng/g建立大鼠胰腺细胞外基质沉积动物模型,造模前后各3天给予相应药物3 ml灌胃干预,采用ELISA法测定血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1含量。结果与假手术组比较,其余各组大鼠血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,大黄治疗组及大黄素治疗组大鼠血清MMP-2、MMP-9升高,TIMP-1降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大黄及大黄素可通过促进胰腺细胞外基质的降解,防止胰腺纤维化的形成。     

粉防己碱拮抗胆盐致大鼠胰腺腺泡细胞损伤的作用及其机制

目的:研究粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对去氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SDOC)导致的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的保护作用及其机制。方法:胶原酶法分离大鼠胰腺腺泡细胞,预先以Tet(50μmol/L、100μmol/L)处理15min后,再经SDOC(50μmol/L)或正常培养液处理,在不同的时间点(30min,1h,4h,10h)采集上清液、检测其中丙二醛含量、超氧化物歧化酶、磷脂酶A2的活性;MTT法检测胰腺腺泡细胞的活性;采用灌流方式给予药物或刺激剂,激光共聚焦显微镜观察经Fluo-3/AM负载的单个胰腺腺泡细胞(Ca2+)i。结果:Tet可减轻SDOC所致的细胞损伤(P<0.05);抑制SDOC诱发的胰腺腺泡细胞(Ca2+)i升高(P<0.05);降低细胞培养上清液中丙二醛含量和磷脂酶A2的活性、增加超氧化物歧化酶的活性。结论:Tet可能通过抑制钙超载、增强抗氧化能力以及降低胰酶活化的机制,发挥对胰腺腺泡细胞的保护作用。     

大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠STAT3表达的影响

目的:探讨大黄附子汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠炎症反应及胰腺信号转导与转录激活因子(STAT3)表达的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组、SAP模型组、大黄附子汤组,每组15只。各组大鼠按造模后处置时间分为3、6、12h3个亚组,每亚组5只。采用5%牛黄胆酸钠胰胆管注射法制备SAP大鼠模型,实验前1h分别灌胃给予生理盐水或大黄附子汤,分别于术后3、6、12h取血,测定血清淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平,处死大鼠,取胰腺组织行HE染色检测胰腺病理改变,免疫组化染色检测(STAT3),p-STAT3蛋白表达。结果:大黄附子汤能显著降低SAP大鼠血清淀粉酶、TNF-α、IL-6水平,减轻胰腺炎细胞浸润及组织损伤,降低STAT3,p-STAT3蛋白表达。结论:大黄附子汤通过降低SAP大鼠TNF-α、IL-6水平,减少胰腺STAT3,p-STAT3蛋白表达,减轻胰腺过度的炎症反应,进而发挥保护胰腺作用。