补阳还五汤对大鼠坐骨神经横断吻合术后MAP-2，NF-M，GAP-43蛋白表达的影响

目的 探讨补阳还五汤对坐骨神经横断吻合术后，大鼠坐骨神经中微管相关蛋白-2（MAP-2），神经丝蛋白（NF-M），生长相关蛋白-43（GAP-43）表达量的影响，探究补阳还五汤促进周围神经再生的机制。方法 实验选取SD大鼠作为实验对象，实验模型选取坐骨神经横断模型，随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组高、中、低剂量（29.6，14.8，7.4 g·kg^-1）组、弥可保（0.156 mg·kg^-1）组，模型组、假手术组给予等体积蒸馏水灌胃。造模成功后各组使用相应药物干预4周，4周后测试各组大鼠的坐骨神经功能指数（SFI），斜板实验度数及坐骨神经苏木素-伊红（HE）染色，并通过免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠坐骨神经吻合处的MAP-2，NF-M，GAP-43的蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠SFI，斜板实验度数，MAP-2，NF-M，GAP-43表达量显著增高（P<0.01）；与模型组比较，补阳还五汤高、中、低剂量组SFI，斜板实验度数，MAP-2，NF-M，GAP-43表达量均明显增加（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤对大鼠坐骨神经横断吻合术后神经再生具有十分积极的作用。     

补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成促进侧脑室下区神经母细胞迁移

目的: 研究补阳还五汤诱导脑缺血后血管生成对侧脑室下区神经母细胞迁移的影响及机制. 方法: 采用线栓法诱导小鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血30 min,分假手术组、模型组、补阳还五汤组和内皮抑素组.补阳还五汤组缺血后24 h开始灌胃补阳还五汤(20 g·kg^-1),内皮抑素组在灌胃补阳还五汤同时皮下注射内皮抑素(10 μg/只),每天1次,连续14 d.缺血后第14天,采用免疫荧光法检测缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和蛋白表达. 结果: 与模型组比较,补阳还五汤组缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著增多(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达增加(P<0.01);与补阳还五汤组比较,内皮抑素组小鼠缺血周边区微血管密度和神经母细胞数量显著减少(P<0.01),SDF-1和BDNF mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.01). 结论: 补阳还五汤促进脑缺血后血管生成有助于侧脑室下区神经母细胞向缺血周边区迁移,机制可能与上调SDF-1和BDNF表达有关.     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马形态学和β淀粉样蛋白水平的影响

目的: 研究补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马形态学、脑和脾脏脏器指数、β淀粉样蛋白(Aβ)水平的影响. 方法: 雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性药吡拉西坦0.62 g·kg^-1组、补阳还五汤高、中、低剂量组(37.06,18.53,9.26 g·kg^-1).以同遗传背景的C57小鼠为正常对照组.ig给予补阳还五汤,连续治疗28 d后取材,观察小鼠海马镜下形态结构、脑和脾脏脏器指数,采用双抗体夹心法测定海马组织Aβ水平. 结果: 与C57对照组比较,模型组小鼠神经元数量减少、发生变性,脑和脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05),Aβ水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组海马神经元细胞形态改善明显,脑和脾脏脏器指数明显升高(P<0.05),Aβ水平明显降低(P<0.05). 结论: 补阳还五汤能维持阿尔茨海默病小鼠神经元的正常形态结构,升高脑和脾脏脏器指数,降低Aβ水平.     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后神经干细胞增殖的影响

目的: 研究不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后室下区神经干细胞增殖的影响。 方法: 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血24 h后分别ig黄芪剂量为120, 60, 30, 15 g的补阳还五汤(剂量分别为13.07, 7.61, 4.88, 3.55 g·kg^-1),并ip 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50 mg·kg^-1),1次/d,连续14 d。在缺血后第1, 7, 14天,采用改良的神经症状严重程度评分和角实验评价感觉运动功能;缺血后第14天,采用BrdU/Nestin免疫荧光双标检测室下区神经干细胞增殖情况。 结果: 与模型组比较,在缺血后第7, 14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著改善神经症状评分和减少大鼠右转次数(P<0.01或P<0.05);缺血后第14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著促进室下区神经干细胞增殖(P<0.01)。 结论: 大剂量黄芪组方的补阳还五汤能显著促进脑缺血后室下区神经干细胞增殖和神经功能恢复,以黄芪剂量为120 g的效果最佳。     

补阳还五汤通过甲酰肽受体2减轻大鼠脑缺血再灌注后氧化应激损伤

目的 探讨补阳还五汤通过甲酰肽受体2（FPR2）对脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激反应的抑制作用及神经保护作用。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤联合FPR2抑制剂（Boc-2）组，假手术组仅游离血管，不做插线处理。其他各组运用改良Longa法构建大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血2 h后再灌注；再灌注后补阳还五汤组和补阳还五汤联合Boc-2组给予补阳还五汤（16 g·kg^-1）灌胃，每日2次；补阳还五汤联合Boc-2组术前30 min腹腔注射Boc-2 （0.4 mg·kg^-1）；假手术组与模型组给予等体积生理盐水。再灌注24 h后，退化神经元染色（FJC）观察FJC阳性细胞数目的变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血侧脑组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax）和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达；生化试剂盒检测缺血侧脑组织中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），谷胱甘肽（GSH），一氧化氮（NO）水平；免疫荧光检测还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶2（NOX2）平均荧光强度。结果 与假手术组比较，模型组的FJC阳性细胞数目增加（P<0.01），Bcl-2表达减少（P<0.01），Bax和cleaved Caspase-3表达增加（P<0.01），NO和MDA含量增加（P<0.05，P<0.01），GSH和SOD活性下降（P<0.05，P<0.01），NOX2表达增加（P<0.01）；与模型组比较，补阳还五汤组FJC阳性细胞数目减少（P<0.01），Bcl-2表达增加（P<0.01），cleaved Caspase-3和Bax明显减少（P<0.05，P<0.01），NO和MDA减少（P<0.05，P<0.01），GSH和SOD增加（P<0.01），NOX2表达减少（P<0.01）。给予Boc-2后，补阳还五汤的作用部分被抑制。结论 补阳还五汤可以减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤，抑制细胞凋亡，其作用机制可能与FPR2调控NOX2的表达有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制

目的 探讨补阳还五汤联合骨髓间质干细胞（BMSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）的作用机制。方法 用不同浓度（12.5、25、50 g·kg^-1）的补阳还五汤灌胃,通过改良Tarlov评分测定大鼠脊髓功能,筛选出补阳还五汤最合适的浓度。再将SD大鼠分为6组,即假手术组（灌胃等体质生理盐水）、模型组（灌胃等体质生理盐水）、补阳还五汤组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤）、BMSCs移植组（尾静脉注射BMSCs 1 mL）、补阳还五汤+BMSCs组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤同时尾静脉注射BMSCs 1 mL）、补阳还五汤+BMSCs+LY294002组（灌胃25 g·kg^-1补阳还五汤,同时尾静脉注射BMSCs 1 mL和LY294002 40 mg·kg^-1）,各10只。改良Tarlov评分、斜板试验和皮层体感诱发电位波潜伏期测定大鼠脊髓功能;免疫组化法检测脊髓组织中5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）标记的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脊髓组织中磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖蛋白130（gp130）、白细胞介素-6（IL-6）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显降低（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显升高（P<0.05）。与模型组比较,假手术组和各治疗组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度均明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显降低（P<0.05）。和BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低（P<0.05）,移植5周后,补阳还五汤+BMSCs组Brdu标记阳性细胞数明显增多（P<0.05）。和补阳还五汤+BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高（P<0.05）,皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低（P<0.05）,移植5周后,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Brdu标记阳性细胞数明显增多（P<0.05）。结论 补阳还五汤通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号促进BMSCs迁移进而恢复脊髓功能。     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠血清IL-1,IL-6,IL-10的影响

目的:观察不同黄芪剂量的补阳还五汤对局灶性脑缺血模型动物血清细胞因子的影响。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血动物模型,在缺血后24h采静脉血,以酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中IL-1,IL-6和IL-10含量的变化。结果:脑缺血24h大鼠血清中IL-1,IL-6,IL-10水平均显著升高(P<0.01);不同黄芪剂量配伍组成的补阳还五汤编号中药Ⅰ～Ⅴ均能显著降低脑缺血模型大鼠血清中IL-1和IL-6水平(P<0.01),显著升高IL-10水平(P<0.01);中药Ⅳ降低脑缺血模型大鼠血清IL-1水平较中药Ⅴ显著(P<0.01)。结论:不同黄芪剂量配伍组成的补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠血清细胞因子的影响是其对脑缺血保护作用的可能机制之一;以180g黄芪配伍组成的补阳还五汤作用最优。     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化作用与紧密连接蛋白的关系

目的: 探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS) 的保护作用与紧密连接蛋白表达的关系. 方法: 将40只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,Rho激酶抑制剂Y-27632组.以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常组,每组8只动物.模型组和治疗组均采用0.1 g·kg^-1·d^-1的Hcy造模,造模同时,治疗组分别补阳还五汤(5,10,20 g·kg^-1·d^-1)组,Y-27632 50 mg·kg^-1组,ig.8周后采用Western-blot检测主动脉组织claudin蛋白的表达变化和反转录PCR(RT-PCR)检测连接蛋白包括咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白(claudin)、带状闭合蛋白(zonula occludens, ZO)、连接黏附分子(junction adhesion molecule, JAM)的mRNA的表达变化. 结果: 与正常组对比,Western-blot检测模型组AS病变明显,模型组与正常组比claudin蛋白表达明显减少,RT-PCR检测模型组与空白组相比,claudin,JAM,Zo,Occludin的mRNA的表达明显降低,不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时上调血管组织中Claudin,JAM,Zo,Occludin的表达水平. 结论: 补阳还五汤能显著的增加血管组织中Claudin,occludin,JAM,Zo表达量,说明补阳还五汤抗hcy所致的AS与增强血管组织中紧密连接蛋白有关.     

补阳还五汤精简方对脑缺血模型大鼠神经功能及脑梗死面积的影响

目的探讨补阳还五汤精简方对缺血性脑损伤的保护作用。方法采用大脑中动脉线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,实验大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等容积无菌蒸馏水,连续7 d。运用Matlab软件编程分析数据,观察各组大鼠神经功能、体质量、脑梗死面积和脑干湿重的变化。结果脑缺血后大鼠出现大面积脑梗死、脑组织水肿和神经功能障碍。与模型组比较,补阳还五汤精简方中、低剂量组均能改善模型大鼠的各项指标,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论补阳还五汤精简方对脑缺血损伤具有保护作用,给药量以中剂量最佳。     

补阳还五汤及其精简方抗脑缺血损伤功效比较

目的评价补阳还五汤及其精简方对脑缺血损伤的保护作用。方法体内实验:SD大鼠按体质量随机分为假手术组、局灶性脑缺血(MCAO)模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方组,每组10只,观察各组大鼠体质量、脑梗死面积和脑含水量等指标的变化。体外实验:采用过氧化氢(H2O2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)致损,建立体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分为正常组、空白对照组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方不同浓度组(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/mL)及模型组,MTT法考察补阳还五汤及其精简方对模型细胞的保护作用。结果体内实验表明,补阳还五汤及其精简方给药7 d后,均能恢复MCAO模型大鼠的体质量、降低脑梗死面积、减轻脑组织水肿,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),两方组间比较差异无统计学意义(P0.05);体外实验表明,补阳还五汤及其精简方与细胞作用2 h即能发挥保护作用,对H2O2所致的氧化应激损伤有明显的保护作用,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),细胞存活率升高,同一浓度两方组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论体内外实验均表明,补阳还五汤精简方在抗脑缺血损伤方面功效显著,且药效不亚于补阳还五汤,在保证药效的前提下大大节约了中药资源。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠神经功能及细胞形态的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用。方法:189只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组63只,常规饲养1周后,采用线栓法制备脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组动物于术后2 h后开始给药,给药剂量为5 g.kg-1.d-1,每日ig 1次。各组又分为三个亚组即分别于给药后7,14,21 d 3个时间点处死动物,观察各组不同时间点的脑梗死面积、神经功能评分及脑组织形态学变化。结果:各时间点补阳还五汤组脑梗死面积明显小于同时相模型组,其神经功能评分也均较模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);且补阳还五汤组海马和皮质细胞形态明显改善,细胞排列较模型组整齐。结论:补阳还五汤促进脑缺血损伤后神经恢复和组织修复,具有脑保护作用。     

补阳还五汤与六味地黄丸合方对脑缺血大鼠APP蛋白及突触重构的影响

目的:探讨补阳还五汤、六味地黄丸及合方对脑缺血大鼠学习记忆及海马轴突淀粉样前体蛋白(APP)、生长相关蛋白(GAP-43)和突触素(SYP)表达的影响。方法:采用大脑中动脉永久性缺血模型,雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、补阳还五汤组、六味地黄丸组及合方组。造模后48 h开始灌胃给药,每天1次,补阳还五汤组每天灌胃13 g.kg-1,六味地黄丸组每天灌胃9.1 g.kg-1,合方组每天灌胃22.1 g.kg-1,模型组和假手术组每天灌胃等剂量的生理盐水。每组动物连续给药30 d后进行行为学检测。治疗30 d后,利用Morris水迷宫检测学习记忆功能;Western blot检测轴突淀粉样前体蛋白(APP)及突触分子标志SYN、GAP-43蛋白的表达。结果:脑中动脉永久性缺血30 d后,空间参考记忆明显受损;补阳还五汤、六味地黄丸及合方均能不同程度提高大鼠空间参考记忆,特别是合方组大鼠在定位航行实验第2天的逃避潜伏期较模型组明显减少(P<0.05),补阳还五汤组和合方组大鼠穿环次数较模型组显著性增加(P<0.05);合方组大鼠首次穿越原平台所在位置时间也较模型组明显缩短(P<0.01)。脑缺血大鼠海马APP蛋白表达明显上调,GAP-43、SYN蛋白明显减少,与假手术组差异显著(P<0.01或P<0.05);合方及补阳还五汤治疗可明显下调海马APP蛋白表达,上调海马GAP-43、SYN蛋白,较模型组有统计学差异(P<0.05);六味地黄丸组大鼠海马APP蛋白较模型组没有明显差异,海马GAP-43、SYN蛋白明显上调,差异显著(P<0.05)。结论:补阳还五汤与六味地黄丸合方治疗在减轻缺血脑区轴索损害,降低海马APP蛋白异常积聚的同时,可诱导GAP-43、SYN的合成而促进神经元突起再生,促进学习记忆功能的康复。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠PTEN mRNA的影响

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)mRNA表达与血小板活化的影响。方法:将无特定病原体(SPF)级SD大鼠60只随机分为假手术组、模型组、氢氯吡格雷组、补阳还五汤高、低剂量组,每组12只。氢氯吡格雷组ig给予氯吡格雷6.8 mg·kg-1·d-1,补阳还五汤高、低剂量组分别ig给予补阳还五汤26,6.5 g·kg-1·d-1,其余各组ig给予生理盐水,连续给药14 d后,采用大脑中动脉线栓法复制大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型,并在造模前2 h给予相应ig处理,造模60 min后拔除栓线再灌注12 h后收集相应标本保存,测定各组大鼠血浆P-选择素(CD62P)含量与海马组织PTEN mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,模型组神经行为评分显著增加,与模型组比较,各用药组的神经行为评分显著降低;与假手术组比较,模型组血浆中CD62P表达显著升高(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤组与氢氯吡格雷组均能显著抑制血浆中CD62P表达(P0.05),但补阳还五汤组与氢氯匹格雷组之间抑制作用无显著性差异;与假手术组比较,模型组PTEN mRNA表达显著增加;与模型组比较,各用药组的PTEN mRNA表达显著降低(P0.05),以补阳还五汤高剂量组尤为明显。结论:补阳还五汤对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护机制可能与下调PTEN基因过表达及抑制CD62P表达有关。     

补阳还五汤抑制同型胱氨酸介导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨补阳还五汤抑制同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)介导的血管平滑肌细胞增殖及其作用机制。方法:雄性SD大鼠补阳还五汤给药剂量为14.9 g.kg-1.d-1,给药7 d制备含药血清,取适量含药血清配制含药血清为5%,10%,20%3种培养基,取对数期细胞,按照分组将5%,10%,20%含药血清培养基预处理细胞1 h后加入Hcy 2 mmol.L-1作用24 h,流式细胞技术测定细胞周期,Western-blotting(WB)测定增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的蛋白表达量,用荧光探针DCFH-DA试剂盒对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的聚积量进行测定。结果:补阳还五汤能抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期的进程,其中5%含药血清组细胞处在S+G2期为47.34%(P<0.05),10%含药血清组为38.81%(P<0.01),20%含药血清组为27.95%(P<0.01),下调细胞内PCNA的表达(P<0.01),测得补阳还五汤给药组细胞内ROS的荧光强度较Hcy组弱。结论:补阳还五汤能显著抑制Hcy介导的VSMC增殖,其作用机制可能是通过降低细胞内ROS的聚积量。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响

目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg~(-1))。连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况。结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异。结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关。     

补阳还五汤加味预防动脉粥样硬化形成机制

目的:探究补阳还五汤加味对动脉粥样硬化(AS)形成的预防及机制研究。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)随机分为Apo E-/-小鼠组、模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组,另以正常雄性C57BL/6J小鼠设组。模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组采用高脂饮食造模。第4周后,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组分别灌以补阳还五汤20 g·kg~(-1)+水蛭粉0.46 g·kg~(-1),辛伐他汀3 mg·kg~(-1)。第9周后,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)值,取动物主动脉根部经苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化并测量纤维帽厚度和内-中膜厚度、检测主动脉p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白表达变化。结果:血脂水平,与C57BL/6J小鼠正常组比较,Apo E-/-小鼠组和模型组TC,TG,LDL-C均升高且HDL-C均降低(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组与辛伐他汀组均能降低Apo E-/-小鼠TC,TG,LDL-C水平,同时升高HDL-C(P0.05,P0.01)。HE染色,C57BL/6J小鼠正常组主动脉管壁无斑块形成,Apo E-/-小鼠组管壁有极少斑块形成,内-中膜略有增厚。模型组斑块形成明显,内-中膜明显增厚。补阳还五汤加味组与辛伐他汀组较模型组斑块减少,内-中膜厚度减少。蛋白表达,与C57BL/6J小鼠正常组比较,模型组主动脉组织中p38MAPK的蛋白表达量增多(P0.01),ERK5的蛋白表达量减少(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组均能降低p38MAPK蛋白的表达量(P0.01),增加组织中ERK5蛋白的表达(P0.01)。结论:补阳还五汤加味与辛伐他汀均有预防AS的作用。补阳还五汤加味预防AS发生的机制可能与干预MAPK信号通路中的p38MAPK,ERK5途径有关。     

补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠1周,制备3种补阳还五汤含药血清和空白血清。将BMSCs分为补阳还五汤6.5 g·kg~(-1)组(用含10%6.5 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤13 g·kg~(-1)组(用含10%13 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤26 g·kg~(-1)组(用含10%26 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),空白组(用含10%空白血清培养)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)和磷酸化丝(苏)氨酸蛋白酶(p-Akt)(Ser473)蛋白的表达。结果:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用BMSCs 48,72 h后,细胞增殖活性较空白组明显升高(P0.05);3种补阳还五汤含药血清作用48 h后,BMSCs在S期的细胞比率随着药物浓度的升高而升高,与空白组比较有统计学意义(P0.05);13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用48 h后,PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白表达较空白组显著增强(P0.01)。结论:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清可能通过活化PI3K/Akt信号通路促使细胞进入S期,增强BMSCs增殖活性。     

基于PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨补阳还五汤对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

目的:探讨补阳还五汤改善蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的相关分子机制。方法:将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤低、高剂量组(13,26 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只。按照10 mL·kg~(-1)每天灌胃给药2次,连续7 d。采用二次枕大池注血法制作蛛网膜下腔出血模型,评估各组大鼠1,3,5,7 d的神经功能评分,利用苏木素-伊红(HE)染色对各组大鼠基底动脉直径进行测量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基底动脉脑组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),内皮型一氧化氮合酶(eNOS),神经型一氧化氮合酶(n NOS)蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑脊液中一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显下降(P 0. 05),基底动脉直径明显缩小(P 0. 05),基底动脉脑组织p-PI3K,p-Akt,eNOS,n NOS蛋白的表达明显降低(P 0. 05),脑脊液中NO明显减少(P 0. 05),ET-1明显升高(P 0. 05);与模型组比较,不同剂量补阳还五汤组(26,13 g·kg~(-1)·d~(-1))在治疗后3～5 d后大鼠神经功能评分均有不同程度升高,基底动脉直径明显增宽(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达明显升高(P 0. 05),NO明显升高(P 0. 05),ET-1明显下降(P 0. 05);与低剂量组比较,经过7 d的补阳还五汤治疗后高剂量组神经功能评分明显升高(P 0. 05),基底动脉直径增宽更明显(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达更高(P 0. 05),NO升高更明显(P 0. 05),ET-1下降更明显(P 0. 05)。结论:补阳还五汤对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用可能与上调PI3K/Akt/eNOS信号通路中的p-PI3K,p-Akt,eNOS的表达,从而增加NO产生有关。     

补阳还五汤对慢性脑供血不足患者血栓前状态因子的影响

[目的]探讨补阳还五汤对慢性脑供血不足患者血管内皮功能障碍和血栓前状态的干预效果.[方法]90例慢性脑供血不足患者随机分为A组(对照组)、B组(补阳还五汤组)、C组(联合用药组)各30例,分别观察3组患者用药前和用药3个月后一氧化氮(NO)、血管内皮素-1(ET-1)、纤维蛋白原(FIB)、组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)和组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的变化,并进行对比分析.[结果]B组、C组经过治疗后,NO水平升高,ET-1水平和FIB减低,t-PA活性增强,PAI-1活性降低,两治疗组组间相比差异无统计学意义(P>0.05),两治疗组治疗后分别与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]服用补阳还五汤能够有效改善慢性脑供血不足患者的血栓前状态,可以作为脑血栓形成的一级预防治疗.     

补阳还五汤对Cav^-1-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响

目的观察补阳还五汤对Cav-1^-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将野生型小鼠(WT)及Cav-1^-/-小鼠(KO)随机分为假手术组、模型组与补阳组。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,干预10 d后运用Ayelet Levy 14分评分法观察小鼠神经功能评分。免疫组化和qRT-PCR分别检测小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达。结果与假手术组比较,各模型组小鼠均出现明显神经功能障碍(P<0.01),且PI3K、Akt蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01),PTEN蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),WT模型组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA表达更显著,且神经功能评分优于KO模型组(P<0.01,P<0.05);WT补阳组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的调控程度及神经功能恢复程度均优于WT模型组和KO补阳组(P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过Cav-1调控PI3K/Akt信号通路活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。