基于“质-量”双标的枳壳质量分析方法研究

目的 建立以对照药材为基准物质的定性和不依赖多种对照品定量的枳壳Aurantii Fructus药材“质-量”双标控制方法。方法 采用HPLC技术，以对照药材为基准物质建立枳壳特征图谱，通过Q-TOF-MS技术，鉴定共有峰的化学成分，以对照药材和供试药材特征峰的相似度，明确药材真伪，即“质”；对内标成分“柚皮苷”进行准确定量，以内标成分计，计算不同批次供试品中各特征峰的相对含量，取“平均数－标准差”作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成分的相对含量下限，依据特征峰相对含量下限明确枳壳药材优劣，即“量”。结果 建立的特征图谱及含量测定方法符合方法学考察要求；确定了11个共有色谱峰，鉴定出了7个化学成分，分别为圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、川陈皮素、橘皮素，各枳壳供试药材与枳壳对照药材的相似度均大于0.90；规定了枳壳药材特征峰化学成分相对含量下限。结论 该方法不依赖多种对照品，能清晰、快速地判断药材的真伪优劣，为枳壳的质量控制方法提供参考。     

枳壳水提液三种黄酮成分含量比较研究

目的建立枳壳水提液中黄酮类成分含量测定方法,并比较不同黄酮成分之间的含量。方法采用回流方法制备枳壳供试品溶液,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm,建立枳壳水提液黄酮成分的HPLC测定方法,对在江西省不同时间采收的枳壳药材进行黄酮成分含量的比较分析。结果通过与对照品比对,从15批枳壳水提液HPLC图谱中确定了3个黄酮特征峰,分别为柚皮苷、新橙皮苷、异柚皮苷,三种黄酮成分的含量趋势为柚皮苷〉新橙皮苷〉异柚皮苷。以新橙皮苷峰为参照峰,15批样品HPLC图谱中各共有峰的相对保留时间的相对标准偏差（RSD）均小于0.805%,说明方法具有较好的重现性和稳定性。但共有峰的相对峰面积变化较大,说明不同样品中化学成分的含量变化较大。结论本文首次对枳壳药材水提液中柚皮苷、新橙皮苷、异柚皮苷三种黄酮成分进行分析比较研究,可对枳壳药材质量评价及枳壳临床用药提供指导。     

HPLC法测定枳壳不同炮制品中活性成分

目的研究不同方法炮制对枳壳中9个活性成分的影响。方法采用RP-HPLC法测定枳壳不同炮制品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏、川陈皮素、桔皮素和葡萄内酯的量。结果与生品相比,枳壳经药典法、樟帮生品、樟帮法及建昌帮法炮制后活性成分的量均存在变化。结论枳壳经麸或蜜麸炒制可使黄酮苷类成分的量增加,脂溶性成分的量减少;枳壳经樟帮法发酵后黄酮苷类成分的量减少,脂溶性成分的量增加。     

正交试验法优选蜜糠炒枳壳炮制工艺

目的: 优选并确立建昌帮枳壳蜜糠炒制工艺,为规范蜜糠炒建昌帮特色饮片的炮制工艺提供参考. 方法: 以柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷及醇溶性浸出物含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、加蜜糠量、炮制温度对蜜糠枳壳炮制工艺的影响.采用HPLC测定柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷含量,流动相乙腈-水(18:82,磷酸调pH 2),检测波长283 nm. 结果: 温度对炮制工艺具有显著性影响,最佳枳壳蜜糠炒制工艺为炮制时间80 s,加蜜糠量0.10 g·g^-1,炮制温度240℃;醇溶性浸出物、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷质量分数分别为28.242%,4.782%,0.160%,2.819%. 结论: 优选的炮制工艺合理、可靠、重复性好,适用于蜜糠枳壳的工业化生产.     

不同产地枳壳药材HPLC指纹图谱及其柚皮苷、新橙皮苷和辛弗林含量分析

 目的 研究枳壳药材的HPLC指纹图谱及测定其柚皮苷、新橙皮苷和辛弗林3种成分的含量,以建立药材有效的质量评价方法。方法 通过建立HPLC指纹图谱和有效成分含量测定方法,对来自10个产地的枳壳药材进行分析。色谱条件为Alltima C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm;流动相为乙腈-0.1％十二烷基磺酸钠和0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱。流速为1.0 mL·min-1;指纹图谱检测波长为 224 nm,柚皮苷和新橙皮苷含量的检测波长为283 nm,辛弗林含量的检测波长为224 nm。结果 得到分离度、重现性均较好的枳壳药材HPLC指纹图谱,标示了6个共有色谱峰,对10批来自不同产地的枳壳的色谱指纹图谱进行了相似度评价;应用HPLC-DAD测定了10种枳壳样品中柚皮苷、新橙皮苷和辛弗林的含量,结果显示,不同产地枳壳药材中柚皮苷、新橙皮苷和辛弗林含量差异较大。结论 该方法简便准确,灵敏度高、重复性好,可以作为枳壳药材的质量控制方法。不同产地的枳壳药材有效成分(柚皮苷、新橙皮苷和辛弗林含量具有明显差异。     

RP-HPLC法测定枳壳药材中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷

目的 建立用RP-HPLC对枳壳中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷同时定量的方法，并对不同产地枳壳药材进行考察。方法 高效液相色谱法，色谱柱为Waters Sunfire columns C₁₈(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(19∶81)；检测波长283 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。同时测定了枳壳中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量。结果 柚皮苷在0.147～2.944 μg线性关系良好(r=0.999 9)、橙皮苷在0.050～1.006 μg线性关系良好(r=0.999 9)、新橙皮苷在0.065～1.309 μg线性关系良好(r=0.999 9)。平均回收率柚皮苷为103.31%，RSD为1.45%；橙皮苷为103.13%，RSD为1.96%；新橙皮苷为97.42%，RSD为2.49%。结论 本方法测定了3个不同产地、不同批号枳壳样品中3种化学成分的量，该方法分离度好，快速，简便，重现性好。     

基于指纹图谱和UPLC-MS/MS定量测定对不同产地陈皮的质量评价研究

目的 采用HPLC指纹图谱与化学计量学相结合、UPLC-MS/MS测定多黄酮成分含量的方法,测定不同产地陈皮质量,为其鉴别和质量控制提供依据。方法 采用HPLC-DAD指纹图谱检测并结合“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012A版）”建立6个产区,49个不同批次陈皮药材（S1～S49）指纹图谱,并进行相似度评价和共有峰确认,结合聚类分析（hierarchical clustering analysis,HCA）、主成分分析（principal component analysis,PCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA）等化学计量学综合分析。采用UPLC-MS/MS法建立了8个黄酮类成分柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陈皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素和芸香柚皮苷的含量测定方法对60批7个产地陈皮药材进行评价。结果 建立了49批不同产地陈皮药材的指纹图谱,相似度为0.864～0.999,共标定了11个共有峰,HCA分析49批陈皮明显分为4类;PCA得到5个主成分的累积方差贡献率为92.748%;OPLS-DA表明8、7、10和11号峰可能是影响陈皮药材质量的差异标志物;含量测定结果表明不同产地陈皮中黄酮类含量存在显著差异,广东新会以川陈皮素和橘皮素为主要标志成分,四川荷花池以木犀草苷为差异性成分,江西樟树以柚皮素和柚皮苷为差异性成分,广西玉林则以橙皮素、橙皮苷和芸香柚皮苷为主,重庆云阳以川陈皮素和橙皮苷为主。结论 建立了稳定性强的不同产地陈皮HPLC指纹图谱和8个黄酮类UPLC-MS/MS定量测定方法,结合化学计量学可用于陈皮药材综合评价和质量控制。     

基于指纹图谱和网络药理学的江枳壳质量标志物预测分析

目的 基于指纹图谱和网络药理学方法分析预测道地药材江枳壳中潜在的质量标志物（Q-Marker）。方法 对18批江枳壳药材分别建立超高效液相色谱（UPLC）、气相色谱-质谱（GC-MS）指纹图谱，并结合化学计量学方法，筛选出Q-Marker候选成分。运用网络药理学构建“核心成分-靶点-通路”网络，预测江枳壳Q-Marker及核心靶点，再用分子对接方法验证江枳壳Q-Marker生物活性。结果 18批江枳壳药材运用UPLC、GC-MS指纹图谱结合化学计量学分析，共筛选出9个Q-Marker候选成分，通过网络药理学分析，预测川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯为江枳壳Q-Marker，作用于核心靶点转化蛋白p21/H-Ras-1（HRAS）、肿瘤蛋白抗原p53（TP53）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、转录因子AP-1（JUN）、糖原合成酶激酶-3β（GSK3B）、肿瘤坏死因子（TNF）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑因子1A（CDKN1A）、环磷酸腺苷（cAMP）依赖性蛋白激酶催化亚基α（PRKACA）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、环腺苷酸反应元件结合蛋白1（CREB1），发挥胃肠动力、抗抑郁、抗炎、抗肿瘤等作用；分子对接表明川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯与筛选出的10个核心靶点有较好的结合能力，体现了江枳壳Q-Marker较好的生物活性。结论 从挥发性和非挥发性成分两方面着手全面预测江枳壳Q-Marker，为江枳壳药材质量的控制和进一步研究其药效相关机制提供参考。     

枳壳趁鲜切制工艺优选及药效研究

目的研究不同切制时间、干燥方法对枳壳趁鲜切制饮片的药典指标成分的影响,比较优选趁鲜切制工艺饮片与传统饮片成分和药效的差异。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸水(20∶80,p H3.0),体积流量1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长283 nm,进样量20μL,对不同工艺枳壳趁鲜切制饮片的柚皮苷和新橙皮苷的含量进行测定,优选趁鲜切制的时间及干燥方法,观察优选趁鲜切制工艺饮片与传统饮片对小鼠肠推进率、胃排空率、胃泌素等的影响。结果同一产地枳壳趁鲜切制晒干品指标成分柚皮苷和新橙皮苷含量高于相应天数的60℃烘干品,晾晒3 d切制晒干的饮片含量最高,优选的趁鲜切制工艺饮片在肠推进率、胃排空率、胃泌素指标上与传统饮片差异不显著(P0.05),血液流变性指标差异显著(P0.05)。结论优选的枳壳趁鲜切制工艺为鲜枳壳横向对半切,晾晒3 d,再切薄片,晒干。所得趁鲜切制饮片与传统饮片在胃肠动力学药效指标上作用强度相当。     

正交法优选蜜麸炒樟帮枳壳炮制工艺

目的:用正交试验法优选并确立樟帮枳壳蜜麸炒工艺,为规范蜜麸炒樟帮枳壳饮片的炮制工艺提供技术参数。方法:以柚皮苷含量、新橙皮苷含量、橙皮苷含量、色度差为指标,采用正交试验法对炮制温度,炮制时间,加麸量、加蜜量4因素,每个因素取4个水平,进行枳壳麸炒工艺优选考察。结果:炮制温度,炮制时间对实验结果均有显著影响,确定最佳枳壳麸炒工艺为:炮制温度200℃,炮制时间120s,加麸量10%,加蜜量15%。结论:正交试验确定的最佳工艺合理、可靠、重复性好。     

常用中药陈皮、枳实和枳壳的研究进展及质量标志物的预测分析

柑橘属中药陈皮Citri Reticulatae Pericarpium、枳实Aurantii Fructus Immaturus、枳壳Aurantii Fructus均为常用理气药,但三者在功效、主治方面各有侧重。从本草考证、化学成分、药理作用3个方面对芸香科柑橘属中药陈皮、枳实、枳壳进行总结、比较与分析,进一步基于质量标志物(Q-marker)的核心概念并结合药效、药性、药动学的研究进行分析,对其质量标志物进行预测,为建立和完善药材质量标准提供理论依据。     

西瓜霜发酵菌种的分离及鉴定

目的 对西瓜霜中的发酵菌种进行分离、鉴定,探讨西瓜霜发酵炮制的内涵,为西瓜霜的规范化生产和质量控制方法的建立提供依据。方法 模拟传统工艺生产西瓜霜的温度、湿度等条件,以西瓜为培养基,发酵制备西瓜霜,分别用PDA、CZA及Sabourand等培养基,采用平板划线法,分离、纯化西瓜霜发酵液中的微生物。采用形态学鉴定及DNA的ITS序列对比法鉴定分离出的菌种。结果 西瓜霜炮制发酵中共分离鉴定出6种真菌,分别为镰孢霉属Fusarium的WF-1,青霉属Penicillium的WF-2,毛霉属Mucor的WF-3,交链孢霉属Alternaria的WF-4、WF-5、WF-6。结论 西瓜霜的制备是以西瓜为培养基,在特定的环境条件,尤其是高盐条件下,通过耐高盐自然真菌发酵炮制而成,而不是传统上认为的渗析制成的芒硝的细小结晶。     

山楂、泽泻、决明子与红曲霉混合发酵产物对高血脂大鼠调脂作用研究

目的探究山楂、泽泻、决明子与紫色红曲霉混合发酵产物(调脂中药红曲)对食源性高脂血症大鼠血脂水平的调节作用。方法以高脂饲料连续饲喂SD大鼠4周建立高脂血症动物模型,将实验大鼠分为对照组、模型组、调脂中药红曲预防组、脂必泰胶囊阳性组、大米红曲组、调脂中药红曲治疗组。分别连续给药4周,测定各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平变化。结果调脂中药红曲预防组造模同时连续给药4周后,大鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著降低(P0.001),HDL-C水平显著升高(P0.05)。造模4周后给药4周的治疗实验结果表明,与给药前组相比,大米红曲组大鼠血清TC、LDL-C水平显著降低(P0.01),而TG、HDL-C水平变化不明显;调脂中药红曲组和脂必泰组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著降低(P0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P0.05、0.01),且其对高脂血症大鼠血脂的调节作用优于大米红曲组。对比肝脏指数和脾脏指数发现调脂中药红曲具有较好的安全性。结论调脂中药与红曲霉混合固态发酵所得产物可有效抑制食源性高脂血症的形成,对食源性高脂血症大鼠血清血脂水平有良好的调节作用,发酵产物中中药调脂成分与红曲调脂成分具有协同作用。     

枳壳多糖CALB-1的提取、分离纯化及免疫调节活性研究

目的从枳壳粗多糖中分离纯化得到精制枳壳多糖(CALB-1),并对其结构和免疫调节活性进行研究。方法采用热水提取法提取获得枳壳粗多糖(CALB),通过阴阳离子交换树脂、离子交换琼脂糖凝胶等方法对CALB进行分离纯化,得到CALB-1。采用高效液相色谱法(HPLC)测定CALB-1的相对分子质量。综合运用红外(IR)光谱、高碘酸氧化、Smith氧化降解、甲基化、扫描式电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)等方法考察CALB-1的结构及分子形态。采用体外脾细胞增殖实验及在体对小鼠单核细胞吞噬作用的影响实验测定CALB-1的免疫调节活性。结果经HPLC测定CALB-1为均一多糖,其相对分子质量为3.28×107。综合化学手段和IR光谱分析得到CALB-1为多支结构的酸性多糖,其主链主要由阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)和半乳糖(Gal)构成,且主要以1→、1→4键型存在。分子形态考察结果显示CALB-1为非晶态固体。CALB-1具有促进小鼠脾细胞增殖的作用,并可提高免疫低下模型小鼠的廓清指数(K)值和吞噬指数(α)。结论 CALB-1为多支结构的均一相对分子质量的酸性多糖,且具有较好的免疫调节作用,为枳壳多糖进一步的深入研究奠定了理论基础。     

Anti-ischemic effect of Aurantii Fructus on contractile dysfunction of ischemic and reperfused rat heart

Aurantii Fructus (AF) is one of the most well-known traditional herbal medicines frequently used for the treatment of cardiovascular symptoms in Korea. The anti-ischemic effects of AF on ischemia-induced isolated rat heart were investigated through analyses of changes in perfusion pressure, aortic flow, coronary flow, and cardiac output. The subjects in this study were divided into two groups: an ischemia-induced group without any treatment, and an ischemia-induced group with AF treatment. There were no significant differences in perfusion pressure, aortic flow, coronary flow, and cardiac output between them before ischemia was induced. The supply of oxygen and buffer was stopped for 10 min to induce ischemia in isolated rat hearts, and AF was administered during ischemia induction. AF treatment significantly prevented decreases in perfusion pressure, aortic flow, coronary flow, and cardiac output under ischemic conditions (p < 0.01). These results suggest that AF has distinct anti-ischemic effects through recovery of contractile dysfunction in ischemic heart.     

半夏曲发酵机制及主要优势真菌的发酵功能研究

目的 探讨半夏曲的自然固态发酵机制。方法 采用免培养、纯培养相结合的方法研究半夏曲发酵真菌和细菌区系构成及主要代谢功能,针对分离到的主要优势真菌的纯培养菌株,分别采用碘量法及分光光度法检测其产淀粉酶及蛋白酶情况,采用显微镜观察菌株对草酸钙结晶的破坏情况。结果 半夏曲发酵过程中检测到丝衣孢霉Byssochlamys、根霉Rhizopus、曲霉Aspergillus、米勒酵母Millerozyma、假单胞菌Pseudomonas、芽孢杆菌Bacillus等属微生物。半夏曲发酵过程中真菌数量大幅增殖,前期及末期的真菌多样性远远高于发酵旺盛期,发酵40～64 h期间的样品与其他样品的真菌区系构成存在极显著差异(P<0.01)。丝衣孢霉属是唯一参与了整个半夏曲发酵过程的优势真菌,对米勒酵母、根毛霉、曲霉的生长具有明显抑制作用。细菌的数量及多样性均低于真菌,且其数量在半夏曲发酵过程中没有明显增长。微生物群落功能预测(phylogenetic investigation of communities by reconstruction of unobserved states,PICRUS)分...     

基于仿生嗅觉技术的不同产地枳壳鉴别研究

目的建立了基于仿生嗅觉技术的枳壳气味指纹图谱鉴别方法,为枳壳质量控制提供参考。方法采用仿生嗅觉系统电子鼻(PEN3)检测不同产地枳壳气味信息,用线性判别分析(LDA)进行气味指纹图谱构建与分析,采用MATLAB 2013实现鉴别仿真。结果不同产地枳壳气味指纹图谱的整体"相貌"是相似,但各自的特征指纹峰值有明显差异。建立的枳壳气味指纹图谱可实现对不同产地枳壳的已知样品和未知样品96%的准确分类。结论该方法操作简单、重复性好、检测速度快,建立的枳壳气味指纹图谱可为其质量控制提供方法。     

基于~1H-NMR代谢组学的山楂不同炮制品对高脂血症大鼠模型的影响研究

目的探讨山楂炒制前后调脂作用的差异,筛选山楂调脂最优炮制品。方法采用高脂饲料法制备SD大鼠高脂血症模型,应用1H-NMR测定大鼠血清代谢物,结合多元统计分析方法分析给予大鼠净山楂、炒山楂、焦山楂后血清代谢物的变化,比较各炮制品对高脂血症大鼠模型的干预作用。结果山楂不同炮制品均能显著降低高脂血症模型大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,其中净山楂降低血脂作用最佳。与对照组相比,模型组大鼠血清中乳酸、丙酮酸、赖氨酸、肌酸、甘油脂、鸟氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、α-酮异戊酸、O-乙酰糖蛋白、N-乙酰糖蛋白、亮氨酸、异亮氨酸含量升高,而胆碱、丙酮、苏氨酸、鲨肌醇、谷氨酰胺、谷氨酸、单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、甘油磷脂酰胆碱(GPC)、葡萄糖含量降低。给药后山楂各炮制组大鼠血清中内源性物质的代谢状态差异明显,与炒山楂、焦山楂组相比,净山楂组调节高脂血症模型大鼠血清中差异代谢物的数量和程度更接近对照组。结论山楂炮制后调脂作用存在差异,且以净山楂效果最优,可能是通过调节氧化应激、能量代谢、氨基酸代谢及肠道菌群等发挥作用。     

炮制火候对饮片颜色的影响

目的 研究饮片炮制火侯与颜色值的相关性.方法 以分光测色技术为基础,考察炮制时不同加热温度及时间对栀子、山楂颜色值的影响.结果 栀子中火与武火炒制的颜色值曲线表现出更好的规律,明度指数(L-)值及色差(ΔE-)的平稳期出现在7min后,而色品指数(a*、b*)平稳期出现在4min后.山楂文火炒制时的L-、a-、b*值及ΔE*平稳期均出现在5min后;中火炒制时L*值及ΔE*平稳期出现在6 min后,a*、b*值的平稳期分别出现在5、8min;武火炒制时L*值及ΔE*平稳期出现8 min后,a*、b*值的平稳期出现在5 min后.结论 仪器测定及肉眼观察的炮制程度变化存在一定的相关性,测色结果可为中药炮制最佳工艺参数的确定提供参考.     

中药内服治疗痔疮的规律分析及可能机制探讨

目的 基于数据挖掘和网络药理学,探究内服中药治疗痔疮的用药规律及关键中药的作用机制,为痔疮的临床治疗和研究提供参考.方法 检索相关数据库、书籍中的有关方剂,建立中药治疗痔疮数据库.通过Microsoft Office Excel 2017统计中药的性味、归经,利用Cytoscape 3.7.2软件筛选主要中药.利用IB...