贝丹益肺胶囊对肺纤维化大鼠肺组织CatKmRNA表达的影响

目的:观察贝丹益肺胶囊对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织的Cat KmRNA的影响,探讨其防治IPF的作用机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为四组:肺纤维化、对照组、贝丹益肺胶囊组和强的松组,各组10只。模型组、贝丹益肺胶囊组和强的松组将博莱霉素(5 mg/kg)滴入大鼠气管内建立肺纤维化的模型。免疫组化检测模型大鼠肺组织的病理改变,Western blotting测定肺组织中Cat K蛋白的表达。实时荧光定量检测Cat KmRNA在IPF大鼠肺组织匀浆中的表达。结果:免疫组化染色显示模型组大鼠肺内Cat K表达显著高于对照组和贝丹益肺胶囊治疗组(P0.05)。大鼠肺内Cat KmRNA表达在模型组显著高于对照组(P0.01),在贝丹益肺胶囊治疗组显著低于模型组(P0.05)。结论:贝丹益肺胶囊可减轻肺纤维化大鼠肺组织的纤维化程度,其作用机制主要是减少Cat KmRNA在肺组织中的含量,使胶原的降解和沉积维持在一相对衡定的正常代谢状态,使肺纤维化的进展减慢或逆转。     

参蛤益肺胶囊调控慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的研究

目的:观察参蛤益肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)大鼠模型TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:随机取10只大鼠为空白组,另40只大鼠为造模组,采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法建立COPD稳定期大鼠模型。将造模成功的38只大鼠按照雌雄各半的原则随机分为模型组8只、参蛤益肺胶囊低剂量组10只、参蛤益肺胶囊高剂量组10只及茶碱组10只,空白组、模型组以蒸馏水灌胃,各给药组则灌以相应药物。检测各组大鼠血清TGF-β1水平,气道组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的基因表达及TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果:实验12周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的基因表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05);参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的蛋白表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组、茶碱组(P 0. 05),模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组(P 0. 05),茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7的基因表达高于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。实验18周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊低剂量组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组,参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7蛋白表达低于茶碱组(P 0. 05)。结论:参蛤益肺胶囊对TGF-β1/Smads信号通路有调控作用,可减少TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增加Smad7的基因表达,减轻气道重塑的程度,延缓COPD疾病发展,参蛤益肺胶囊常规高剂量在抑制Smad2表达方面疗效更佳。     

清金益肺汤对痰热蕴肺型特发性肺纤维化大鼠肿瘤坏死因子α表达的干预作用

目的：探讨清金益肺汤对痰热蕴肺型特发性肺纤维化大鼠肿瘤坏死因子α（TNF -α）表达的干预作用。方法：清洁级健康雄性 SD 大鼠40只,随机分为5组：空白对照组（K 组）、痰热蕴肺型特发性肺纤维化模型组（M 组）、中药治疗组（Z 组）、激素治疗组（J 组）、中药加激素治疗组（H 组）。采用气管内滴博来霉素的方法建立肺纤维化模型,造模结束后第2天气管内滴加脂多糖建立痰热蕴肺证模型。ELISA 法检测应用清金益肺汤后痰热蕴肺型肺纤维化大鼠肺组织 TNF -α的表达水平,光镜下观察各组大鼠肺组织的病理改变。结果：光镜下,除 K 组外,其他各组大鼠都有不同程度的肺纤维化特征性改变。与 K 组相比,M、Z、J、H 组肺组织 TNF -α的表达水平均明显增高,其差异具有统计学意义（P ＜0．01）;Z、J、H 组肺组织 TNF -α的表达水平均低于 M 组（P ＜0．01）,且 H 组低于 Z、J 组（P ＜0．01）,J组低于 Z 组（P ＜0．01）。结论：肺纤维化发生的机制可能与 TNF -α的过度表达有关,清金益肺汤可能通过抑制 TNF -α的表达而延缓痰热蕴肺型特发性肺纤维化的进展。     

虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺TGFβ1及其信号通路分子mRNA表达的影响

目的观察虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺转化生长因子beta1(TGFβ1,)及其信号通路分子mRNA表达的影响,以探讨虫草菌粉调控肺纤维化胶原代谢失衡的机制及作用靶点.方法取健康SD大鼠60只,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,于14天及28天取大鼠肺组织,运用组织芯片结合图像分析技术,通过苏木素-伊红(HE)及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,以免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白含量及原位杂交技术对转化生长因子βⅡ型受体(TGFβR Ⅱ)及smad4的mRNA表达进行定位定量分析,用实时荧光定量RT-PCR技术检测TGFβ1mRNA的表达.结果虫革菌粉在两时相皆有抑制TGFβ1 mRNA表达上调之作用(与内参校正值分别从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051,P＜0.05),而对TGFβⅡR及smad4mRNA的表达上调无明显影响(P＞0.05).结论虫草菌粉具有抑制胶原纤维过度沉积的作用,其机制可能为抑制TGF-β1mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smad,信号通路对靶基因的激活而实现的.     

羧甲基茯苓多糖对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad信号转导的影响

目的：了解羧甲基茯苓多糖（CMP）对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织TGFβ，Smad3、Smad7的影响，探讨CMP对TGFβ-Smad信号转导通路的影响及抗肝纤维化的作用机制。方法：采用SD大鼠，四氯化碳复合因素法制作肝纤维化模型，免疫组化法检测TGFβ，Western blot法检测Smad3、Smad7的表达，以香菇多糖、秋水仙碱作为阳性对照。结果：与正常对照组比较，模型组TGF-β表达显著增强（P〈0．01），Smad3高表达（P〈0．01），Smad7低表达（P〈0．01）。CMP组与模型组比较，TGF—β和Smad3的表达显著下降（P〈0．01），Smad7表达显著增强（P〈0．01），显示了较好的调节TGF—β、Smad3、Smad7表达的作用。结论：CMP对肝纤维化大鼠模型肝组织细胞TGF-β表达具有明显抑制作用、能下调Smad3的表达，上调Smad7的表达，对TGF—β—Smad系统具有较好的调节作用，可能是其抗肝纤维化的主要机制之一。     

益气养阴活血方对肺纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的 观察益气养阴活血方对肺纤维化大鼠的影响，探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法 采用博来霉素气管滴注制备肺纤维化大鼠模型，将大鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松组和益气养阴活血方高、中、低剂量组（中药高、中、低剂量组），每组8只，另取8只正常大鼠作为空白组，给药组予相应药物灌胃28 d，空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃。末次给药后，行肺功能检测，HE和Masson染色观察肺组织病理改变，免疫组化染色检测肺组织纤连蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN）表达，RT-PCR检测肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA表达，Western blot检测肺组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3、MMP9和TIMP1蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠吸气时间和呼气时间显著缩短，每分钟通气量和呼吸频率显著增加（P<0.01），肺组织结构损伤明显，肺泡塌陷、萎缩、间隔变宽，有大量胶原纤维沉积，肺组织FN和LN表达显著升高（P<0.01）,TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p...     

迷迭香二萜芬提取物对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1及其信号通路分子mRNA表达的影响

目的探讨迷迭香二萜芬提取物（diterpene phenol extract of Rosmarinus Officinalis, DERO）调控肺纤维化肺胶原代谢失衡的作用机制。方法50只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组（NS组）、博莱霉素肺损伤组（BLM组）及DERO低、中、高剂量［50、100、200 mg/（kg·d）］组（分别简称为DERO1、2、3组）,每组10只,通过博莱霉素一次性气管内滴入复制肺纤维化大鼠模型,并在肺损伤修复过程中予DERO灌胃干预,于第29天早上取大鼠肺组织,运用组织芯片,进行HE、胶原纤维染色及免疫组化、原位杂交,分别检测肺组织有核细胞数、胶原蛋白、Ⅰ型胶原（type Ⅰ collagen,Collagen-Ⅰ）和转化生长因子βⅡ型受体（transforming growth factor-beta typeⅡ receptor,TGFβRⅡ）、Smad4 mRNA的表达,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测转化生长因子beta1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）mRNA的表达。结果与NS组比较,BLM组肺组织胶原沉积明显,炎症浸润程度较重（P<0.05,P<0.01）,DERO1组与BLM组比较,两项指标差异无统计学意义（P>0.05）,DERO2及DERO3组肺组织胶原沉积及炎症浸润程度皆明显减轻（P<0.05, P<0.01）;与NS组比较,BLM组肺组织Collagen-Ⅰ、TGF-β1 RⅡ、Smad4 mRNA及TGF-β1 mRNA表达明显上调（P<0.05,P<0.01）,与BLM组比较,DERO1组4项指标变化不明显（P>0.05）,而DERO2及DERO3组,Collagen-Ⅰ、TGF-β1 RⅡ及TGF-β1 mRNA表达皆有明显下调（P<0.05,P<0.01）,但两组Smad4 mRNA下调不明显（P>0.05）,与DERO1组比较,DERO2及DERO3组除Smad4 mRNA外,余3项指标皆低于DERO1组（P<0.05）,而DERO2组与DERO3 组比较,4项指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论DERO在肺纤维化胶原代谢失衡中具有调控作用,能抑制胶原纤维的过度沉积,尤其是Collagen-Ⅰ的过度沉积,其作用机制可能主要是通过抑制TGF-β1、TGFβRⅡmRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-Smad信号通路对靶基因尤其是Ⅰ型前胶原靶基因的激活而实现的。     

虫草菌粉调控肺纤维化大鼠肺胶原代谢失衡的作用及其机制

目的探讨虫草菌粉(CS)对肺纤维化肺胶原代谢失衡的调控作用及其机制。方法 60只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组20只,再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,分别于14 d和28 d取大鼠肺组织,运用组织芯片,进行胶原纤维染色及免疫组化和原位杂交分别定量肺内胶原蛋白、I型胶原和转化生长因子βⅡ型受体(TGFβⅡ)及Smad4 mRNA,同时,运用实时荧光定量RT-PCR检测I型前胶原α链[ProcolIα1(1)]和转化生长因子(TGFβ1)mRNA的表达。结果虫草菌粉对两时相的胶原(IOD分别从0.549 2±0.210 5和0.957 8±0.375 6降至0.284 9±0.169 7和0.411 1±0.220 0)及28 d的I型胶原皆有明显抑制其过度沉积之作用(P<0.05),对两时相TGFβ1mRNA表达(从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157分别降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051)也有明显抑制作用(P<0.05),但对ProcolIα1(1)、TGFβRII及Smad4 mRNA表达无明显影响(P>0.05)。结论虫草菌粉在肺纤维化胶原代谢失衡中具有调控作用,能抑制胶原纤维的过度沉积,尤其是I型胶原的过度沉积,其作用机制可能为抑制TGF-β1 mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smads信号通路对靶基因的激活而实现的。     

当归、川芎联合应用对肺纤维化模型大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的筛选当归、川芎治疗肺纤维化模型大鼠的最佳配比,并观察其对TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法 SD大鼠分为8组,即正常对照组,肺纤维化模型组,强的松组,当归组,川芎组,当归、川芎不同配比组,复制肺纤维化大鼠模型并给予相应药物治疗,每天1次,共4周。给药结束后,检测大鼠肺功能,ELISA测定肺泡灌洗液中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(白介素-1β)、IL-6(白介素-6)、NF-κB(核因子-κB)水平。取肺组织测定羟脯氨酸水平,HE、Masson染色后观察其形态。采用免疫组化及RT-PCR技术检测肺组织TGF-β1/Smad信号通路关键分子的表达。结果当归、川芎配伍使用可不同程度改善肺纤维化模型大鼠肺功能,降低炎症因子及羟脯胺酸水平,减轻肺组织病理形态学,以1∶2组作用更明显,并可降低肺纤维化模型大鼠肺组织TGF-β1(转化生长因子-β1)、Smad2、Smad3、α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)的mRNA及蛋白表达。结论当归、川芎1∶2配伍对肺纤维化模型大鼠肺功能有一定改善作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

止喘胶囊对哮喘大鼠气道TGF-β1信号转导的干预作用

探讨止喘胶囊对哮喘大鼠气道TGF-β1信号转导的干预作用。通过长期反复给予致敏大鼠吸入不同浓度的卵蛋白,建立大鼠慢性哮喘模型。40只大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、中药组、西药组和中西结合组。原位杂交技术检测Smad．2mRNA、Smad．7mRNA表达水平。结果：各治疗组均可下调Smad-2mRNA的表达,与模型组比较有显著性差异（P〈0．05）,其中尤以中西医结合组疗效最佳,中药组与西药组效果相当（P〉0．05）。中药组可显著上调Smad-7mRNA表达水平,与模型组比较差异显著（P〈0．05）;而西药组与模型组比较,无显著性差异（P〉0．05）。结论：止喘胶囊能通过下调Smad-2mRNA,上调Smad-7mRNA的表达,阻断TCF-β1的信号转导,从而阻断哮喘气道重塑的发展。     

肺痹汤对肺纤维化大鼠肺组织中p38分裂原激活蛋白酶及转化生长因子β1的影响

目的 探讨肺痹汤防治肺纤维化作用及其机理。方法 SD大鼠随机分为假手术组，模型对照组，肺痹汤高、中、低剂量组。西药对照组，每组10只。用博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型后，肺痹汤高、中、低剂量组每天灌服肺痹汤，西药对照组灌服醋酸强的松，28天后处死大鼠，比较各组大鼠肺组织中p38分裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK）以及转化生长因子（TGF—β1）的表达。结果 模型对照组大鼠肺组织中p38 MAPK及TGF—β1表达均明显高于假手术组及各给药组（P〈0．05），肺痹汤能明显减少大鼠肺组织中p38 MAPK以及TGF—β1表达，与模型对照组比较差异具有显著性意义（P〈0．05）。结论 肺痹汤能明显减少博莱霉素所致的大鼠肺组织中p38 MAPK及TGF—β1表达，这可能是其防治肺纤维化的作用机理。．     

基于TGF-β1/Smad 通路探讨红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的观察红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用及其对转化生长因子β1（TGF-β1）/ Smad 信号通路的影响。方法采用腺嘌呤（250 mg·kg-1）灌胃建立肾纤维化大鼠模型。将SD 大鼠随机分为对照 组、模型组、氯沙坦组（9 mg·kg-1）及红花黄色素低、高剂量组（9、18 mg·kg-1）,每组10 只,灌胃给药,每天 1 次,连续30 d。检测大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;采用HE 和Masson 染色法观察大鼠肾脏组织病 理学变化;采用RT-qPCR 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 mRNA 表达情况;采用免疫组化法 及Western Blot 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组 大鼠血清Cr、BUN 含量显著升高（P＜0.01）;大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.05）,Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组比较,各给药组大鼠血清Cr、BUN 水平明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;各给药组大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）, Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。各组大鼠肾脏组织中Smad4 mRNA 及蛋白表达水平无明显 变化（P > 0.05）。结论红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/ Smad 信号通路有关。     

补肾通络方对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smads通路的影响

目的:观察补肾通络方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织病理及转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads通路蛋白的影响,揭示该方抑制肺纤维化的作用机制。方法:48只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组8只,模型组、补肾通络低、高剂量组、氢化可的松琥珀酸钠组各10只。除正常组外,各组均采用博莱霉素法诱导肺纤维化制备模型。从术后第3天开始,补肾通络高、低剂量组分别给予14. 2,7. 1 g·kg~(-1)补肾通络方药灌胃,氢化可的松琥珀酸钠组给予4. 58 g·kg-1氢化可的松琥珀酸钠溶液腹腔注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,共治疗28 d。大鼠处死后测定血清羟脯氨酸(HYP),透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN)的含量,取肺组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)及马松(Masson)三色染色法观察肺组织病理形态变化,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察各组大鼠肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3,Smad7等mRNA和蛋白表达变化。结果:与正常组相比,模型组大鼠肺纤维化明显,HYP,HA,LN含量升高(P 0. 05,P 0. 01),肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3蛋白和mRNA表达升高(P 0. 05,P 0. 01),Smad7蛋白和mRNA表达降低(P 0. 01);与模型组相比,补肾通络高剂量组血清HYP,HA,LN的含量下降(P 0. 05,P 0. 01)肺组织TGF-β_1,Smad2,Smad3蛋白和mRNA表达降低(P 0. 05),Smad7蛋白和mRNA表达升高(P 0. 01)。结论:补肾通络方可有效改善肺纤维化的病变进程,其机制可能与调节TGF-β_1/Smads通路有关。     

凉血活血法对肺纤维化小鼠羟脯氨酸和转化生长因子-β1含量的影响

目的研究凉血活血法防治肺纤维化的作用，并探讨其作用机制。方法将雄性ICR小鼠随机分为4组：阴性对照组、肺纤维化模型组、凉血活血法组、强的松阳性对照组。经鼻滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型，造模8h开始常规灌胃给药。应用凉血活血法（犀角地黄汤）防治28d后进行取材及实验指标检测：用酶联免疫吸附法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-β1（TGF—β1）含量变化，用样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量。结果肺组织病理形态学观察发现模型组小鼠肺泡炎及纤维化程度明显高于阴性对照组；与模型组比较，凉血活血法组肺组织中HYP含量显著降低（P〈0．01），BALF中TGF-β1含量显著降低（P〈0．01）。结论凉血活血法能明显减轻博莱霉素所致的小鼠肺纤维化程度，降低肺组织中HYP含量。其机制可能是通过抑制TGF—β1蛋白表达，减少胶原蛋白的产生，使肺纤维化病变减轻。     

黄芪在哮喘大鼠气道重塑模型中对TGF-β1/Smad3信号通路的调控

目的：研究转换生长因子β1（TGF-β1）/Smad3信号通路在哮喘气道重塑中的作用,探讨黄芪对TGF-β1/Smad3信号通路及哮喘气道重塑的调控作用。方法：SPF级雄性SD大鼠30只随机分为3组,分别为对照组（A组）、哮喘组（B组）、黄芪组（F组）,每组10只。用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型。应用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度（Wat）及平滑肌厚度（Wam）等重塑指标;免疫组化法及RT-PCR法检测肺组织TGF-β1、P-Smad3蛋白及mRNA的表达。结果：哮喘组大鼠Wat、Wam较对照组显著增加（均P〈0.01）,黄芪组与哮喘组比较有显著降低（均P〈0.01）,但仍高于对照组（P〈0.01）;免疫组化染色阳性结果呈棕黄色,TGF-β1蛋白表达于胞浆,P-Smad3蛋白表达于胞浆和胞核,主要表达于支气管上皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞及散在的炎性细胞。哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组（均P〈0.01）;黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组（均P〈0.01）,但仍高于对照组（均P〈0.01）。肺组织中TGF-β1 mRNA及Smad3 mRNA表达：哮喘组TGF-β1和P-Smad3的蛋白表达均显著高于对照组（均P〈0.01）;黄芪组TGF-β1、P-Smad3的蛋白表达均显著低于哮喘组（均P〈0.01）,但仍高于对照组（均P〈0.01）。结论：TGF-β1/Smad3信号通路参与了哮喘气道重塑过程,黄芪可通过调控TGF-β1/Smad3信号通路而拮抗气道重塑。     

governmental role,speed administrative system reform,and imp

重要的职责。做好构建和谐社会的舆论宣传钩ひ蜃觔eta1(TGFβ1)及其信号通路分子mRNA表达的影响,以探讨虫草菌粉调控肺纤维化胶原代谢失衡的机制及作用靶点。方法:取健康SD大鼠60只,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,于14天及28天取大鼠肺组织,运用组织芯片结合图像分析技术,通过苏木素-伊红(HE)及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,以免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白含量及原位杂交技术对转化生长因子βⅡ型受体(TGFβRⅡ)及smad4的mRNA表达进行定位定量分析,用实时荧光定量RT-PCR技术检测TGFβ1mRNA的表达。结果:虫草菌粉在两时相皆有抑制TGFβ1mRNA表达上调之作用(与内参校正值分别从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051,P<0.05),而对TGFβⅡR及smad4mRNA的表达上调无明显影响(P>0.05)。结论:虫草菌粉具有抑制胶原纤维过度沉积的作用,其机制可能为抑制TGF-β1mRNA表达的上调,从而干扰TGF--βsmads信号通路对靶基因的激活而实现的。     

三甲散加减方对实验性肝纤维化大鼠TGF—β1／Smads信号通路的影响

目的：观察三甲散加减方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1（TGF—β1）、Smad2、Smad3、Smad7，即TGF-β1／Smads信号转导通路的影响。方法：用CCl4油液诱导大鼠肝纤维化模型，随机分为4组，正常组对照组，病理模型组，阳性对照组，透邪通络组。造模的同时予药物灌胃治疗，正常组和模型组予生理盐水灌胃，10mL（kg·d），阳性对照组予秋水仙碱0．5mg／（kg·d），透邪通络组予三甲散加减方浸膏1．1mL／（100g·d）。8周后，处死各组大鼠，取肝组织，光镜下观察纤维化程度和免疫组化法检测TGF-β1、Smad2／3及Smad7的表达。结果：病理学观察和免疫组化检测显示，三甲散加减方能逆转CCl4诱导的肝纤维化，能显著降低TGF—β1和Smad2／3的表达，明显增高Smad7的表达，且效果优于秋水仙碱。结论：三甲散加减方能减轻肝纤维化大鼠的病理损害，有效降低肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3的表达，增高Smad7的表达，从而减轻或逆转肝纤维化。其机制可能与阻断TGF-β1／Smads信号转导通路有关。     

养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的研究养阴益气合剂对博来霉素诱导的肺间质纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响。方法将120只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、泼尼松组及养阴益气合剂低、中、高剂量组,采用气管滴注博来霉素的方法复制肺纤维化大鼠模型,造模后第二天各组予相应药物灌胃,连续给药28天。分别于第14天和28天分批处死大鼠,留取肺组织以实时荧光定量PCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3及Smad7表达,留取血清以酶联免疫法检测羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)表达。结果与空白组相比,模型组TGF-β1、Smad3 mRNA及HYP表达明显升高,Smad7显著减少(P0.05)。治疗后,肺纤方中、高剂量组TGF-β1、Smad3及HYP出现显著下降,Smad7表达上调(P0.05)。结论养阴益气合剂的抗肺纤维化作用可能与抑制TGF-β/Smad通路,减少细胞外基质沉积有关。     

人工冬虫夏草对特发性肺纤维化上皮-间质转分化中信号通路的影响

目的：观察肺纤维化动物模型中人工冬虫夏草（Ccs）是否通过TGFbeta1-Smad途径来影响肺间质纤维化上皮-间质转化。方法：将50只SD大鼠随机分为空白对照组、博来霉素组（BLM组）、博来霉素+冬虫夏草组（Ccs组）、空白质粒组、siRNA组（Smad3siRNA+博来霉素+冬虫夏草）,采用气管内注入博来霉素（5 mg/kg）复制大鼠肺纤维化模型,对照组给予生理盐水1.25 mL/kg。Ccs组于造模当日开始灌胃人工冬虫夏草溶液5 g/(kg·d),空白质粒组于造模第二天进行空白质粒尾静脉快速注射（3 mL/kg）。siRNA组在每天Ccs灌胃基础上于造模次日尾静脉注射Smad3 siRNA质粒（3 mL/kg）。于第28天处死动物。行HE染色,并用RT-PCR检测肺组织匀浆中上皮细胞标志物E-cad、间皮细胞标志物α-SMA以及信号通路相关分子Smad3、转化生长因子（TGF）-β1、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA的蛋白表达变化。结果：BLM组纤维化程度较重,Ccs组炎症程度明显减轻,纤维组织大量减少,siRNA组同Ccs组比较肺泡炎及纤维化程度有所加重;RT-PCR结果显示BLM组TGF-β1、α-SMA表达较对照组明显增高,siRNA组的α-SMA、CTGF表达较Ccs组有显著上升。结论：Ccs可能通过阻断TGFbeta1-Smad信号通路抑制肺纤维化的发生。     

Study on the Effect and Mechanism of Bushen Huayu Recipe(补肾化瘀方)on Endometrial Fibrosis in Rats with Uterine Adhesion Based on TGF-β1/Smad Pathway

目的:观察补肾化瘀方对宫腔粘连(IUA)大鼠子宫内膜纤维化的改善作用,探究其作用机制.方法:采取机械+感染双重损伤法建立IUA大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组、补肾化瘀方组、补肾化瘀方+SRI-011381组、SRI-011381组,每组15只.另取15只大鼠作为假手术组.药物治疗21d后,观察大鼠子宫形态,HE染色观察子宫组织病理变化,计数子宫内膜腺体数量,Masson染色观察纤维化情况,ELISA试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平,qRT-PCR检测子宫组织转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA和Smad7 mRNA表达水平,Western blotting法测定TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7、p-Smad3、p-Smad4、p-Smad7水平.结果:与假手术组比较,模型组大鼠子宫组织增粗,腺体数量减少,纤维化面积增加,血清炎症因子水平升高,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化增加,Smad7 mRNA表达及磷酸化减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,补肾化瘀方组大鼠子宫腺体数量增加,纤维化面积减少,血清炎症因子水平降低,TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、Smad4 mRNA表达及Smad3、Smad4磷酸化减少,Smad7 mRNA表达及磷酸化增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).SRI-011381可抑制补肾化瘀方的作用,促进纤维化,进一步激活TGF-β1/Smad通路(P＜0.05).结论:补肾化瘀方对IUA大鼠子宫内膜纤维化有改善作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad通路有关.