生草乌所致心脏毒性的毒代动力学/毒效动力学模型研究

目的:本文主要是探讨生草乌所致心脏毒性的毒代动力学/毒效动力学(TK-TD)的研究。创新性的应用了ADAPT 5建立了一个拥有间接响应毒效的整合TK-TD模型,作为一种新的定量框架来评估生草乌引起的异常心率合并QT间期的变化。方法:生草乌灌胃给药后大鼠体内的TK-TD模型研究:①血浆药物浓度的测定:雄性SD大鼠随机分为空白对照组和生草乌0.36 g/kg、0.42 g/kg、0.49 g/kg组,单次灌胃给药后0.5、1、1.5、2、3、5、7、10、12和24 h颈动脉取血,记录心率(HR)和QT间期指标,采用UPLC/Q Exactive MS技术测定血浆药物浓度(观测值)。②毒物代谢动力学模型建立:时间t与观测值做药时曲线关系,对4种备选TK模型进行ADAPT 5程序下的最大似然法(ML)测试分析,采用AIC和BIC较小原则选择最优拟合方法和模型,Maltab 2011b收敛和扩展数据后输出模型。③毒物效应动力学模型建立:时间t分别与HR和QT建立时效关系曲线,针对三种生物碱到达Emax的时间(t≈1.5 h～2 h)明显滞后于Cmax(t≈1 h),建立生草乌大鼠血药浓度依赖性的间接毒物效应响应模型,血药浓度-时间-毒效三者的变化速率由Hill's方程联系。④TK-TD整合模型建立。结果:TK模型为一房室线性一级消除动力学模型,0.49 g/kg生草乌QT间期存在一定剂量-时间依赖性,故对心率和生草乌0.36 g/kg QT间期建立间接毒物效应响应模型的生理相(Biophase)TD模型,对生草乌0.49 g/kg QT间期采用间接毒物效应响应模型的Jusko's间接响应(IDR)PD模型,输出TK-TD参数。结论:具有房室线性一级消除动力学和间接响应的整合TK-TD模型更适用于解释生草乌口服给药暴露与心脏毒性之间的关系,科学准确地预测生草乌对大鼠的心脏毒性。     

诃子草乌配伍与诃子制草乌水煎液中生物碱含量的比较——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅱ

目的:对生草乌、诃子制草乌水煎液及草乌诃子共煎液中生物碱含量进行比较验证蒙医理论"诃子可解乌头毒"。方法:采用HPLC测定生草乌水煎液、诃子制草乌水煎液及诃子草乌共煎液中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。色谱条件以乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.1 mol.L-1醋酸铵溶液(每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL)为流动相B。结果:双酯型生物碱的含量为诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液>生草乌煎液;单酯型生物碱的含量为生草乌煎液>诃子草乌共煎液>诃子汤制草乌煎液。结论:诃子可以使草乌中双酯型生物碱缓慢水解,诃子制草乌的毒性低于诃子草乌配伍。     

“半夏反草乌”减弱抗炎效应及其减效机制

目的:探讨反药配伍之中半夏减弱草乌抗炎效应的初步机制及其表征形式。方法:64只SD大鼠随机分为模型组,醋酸泼尼松组,草乌组,草乌与法半夏配伍9∶1组,3∶1组,1∶1组,1∶3组,1∶9组。醋酸泼尼松组按20 mg·kg-1ig,草乌组按生药量为0.6 g·kg-1ig,草乌与法半夏配伍9∶1组,3∶1组,1∶1组,1∶3组,1∶9组分别按生药量0.67,0.8,1.2,2.4,6.0 g·kg-1ig,模型对照组灌服等体积生理盐水,连续给药7 d。第7天给药1 h后,每只大鼠右足足跖皮内注射新鲜蛋清建立蛋清致大鼠足跖肿胀模型,尾静脉注射伊文思蓝(EB),ELISA法测定组织中EB含量,血清中白细胞介素-1(IL-1),前列腺素E2(PGE2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,观察草乌与不同比例法半夏配伍对足跖肿胀程度、血管通透性及炎症介质释放影响的差异;经Graph Pad Prism 5软件做四参数Hill拟合方程,评判影响足跖肿胀度较密切相关的指标。结果:与模型组比较,草乌组、草乌与法半夏各配伍组均可明显降低大鼠足肿胀程度和组织中的EB含量及血清中IL-1,PGE2,TNF-α的含量;各配伍组与草乌组比较,草乌组的抗炎作用最强(P0.05),而草乌与法半夏配伍组(9∶1,3∶1,1∶1,1∶3,1∶9)的抗炎作用随法半夏用量增加而依次减弱;血清IL-1,PGE2,TNF-α含量与足跖肿胀度相关性均较好,组织中EB含量与之相关性较差。结论:法半夏可降低乌头的抗炎活性,该作用随法半夏用量的增加逐渐增强;"半夏反草乌"中的降效作用机制可能与法半夏可对抗乌头增加炎症介质生成、增加毛细血管通透性有关;血清PGE2含量与肿胀程度相关性较好且是直接参与炎症反应的介质,故可将其作为表征半夏反草乌中减弱抗炎效应的指标。     

不同比例甘草诃子配伍制草乌对其次乌头碱含量的影响

目的 建立制草乌中毒性成分次乌头碱的HPLC定量测定方法,研究和探讨不同配伍比例下甘草和诃子对制草乌药材中次乌头碱含量的影响.方法 采用Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-5％三乙胺水溶液(72:28,V/V)为流动相,流速1.0ml.min-1,柱温30℃,检测波长235 nm,测定追踪草乌单煎及草乌-甘草、草乌-诃子合煎液中次乌头碱含量的变化.结果 次乌头碱回归方程Y=15.669X +0.180 2(r =0.999 3),在0.2 ～8.0μg·ml-1范围内,呈良好的线性关系,平均加样回收率95.31％,RSD5.14％.草乌-甘草、草乌-诃子合煎后其次乌头碱含量均低于草乌单煎,且在相同配伍比例下,草乌-诃子合煎液中的次乌头碱含量低于草乌-甘草合煎液.结论 甘草、诃子与草乌共煎均有减轻草乌毒性的作用,两个配伍药对具有一定的合理性.     

诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌的影响 ——诃子制草乌炮制原理探讨Ⅰ

目的:探讨诃子中的鞣质成分对诃子汤制草乌中生物碱类成分的影响,解析蒙药诃子制草乌的炮制原理。方法:采用HPLC测定诃子汤制草乌、清水制草乌、去鞣诃子汤制草乌中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱以及苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱的含量。结果:各炮制品中双酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.692 5%)>清水制草乌(0.565 7%)>去鞣诃子汤制草乌(0.493 8%);单酯型生物碱的含量:诃子汤制草乌(0.110 1%)>去鞣诃子汤制草乌(0.0833%)>清水制草乌(0.076 8%)。结论:鞣质可抑制生物碱类成分的溶出,使其缓慢水解进而达到降低毒性的作用。     

蒙药诃子对乌头碱所致大鼠心律失常的影响

目的:通过Langendorff离体心脏灌流技术,研究蒙药诃子对草乌中的乌头碱所致心律失常的干预作用,进一步证明诃子可解草乌的毒性并对心脏有保护作用。方法:取SD大鼠心脏挂于Langendorff离体心脏灌流系统,用Biopac多导生理记录仪记录诃子两种提取对心脏的影响,并且对两种提取物进行比较,选择对药效好并且药效快的提取物;筛选后通过Langendorff离体心脏灌流系统对诃子高剂量组、诃子低剂量组、阳性对照组对乌头碱模型组所致的大鼠心律失常的影响,以Biopac多导生理记录仪记录心电图中RR-I、HR、R-H、P-H、QRS及PRQ作为指标进行检测。结果:与模型组比较诃子高剂量组、诃子低剂量组、阳性对照组可降低HR、QRS(P0.01,P0.001),升高RR-I、PRQ(P0.001,P0.05),但是3组的恢复时间不同,诃子高剂量组:23±2min、诃子低剂量组:30±2min、阳性对照组:40±2min。结论:通过Biopac多导生理记录仪测出心电图中的RR-I、HR、R-H、P-H、QRS及PRQ数值,结果诃子两种剂量与模型组比较可恢复正常值,并且心跳可以恢复正常,证明诃子对乌头碱所致的心律失常有缓解作用,其推断对心脏有保护作用。     

草乌与瓜蒌白及半夏配伍的急性毒性研究

目的探讨与瓜蒌、白及或半夏配伍对草乌急性毒性的影响。方法采用动物急性毒性实验,以动物死亡数为观测指标,计算草乌醇提液灌服给药的LD50;固定草乌剂量在LD50,与13个不同比例的反药瓜蒌、白及或半夏配伍,探讨草乌配伍禁忌的毒性变化;选用上述实验中死亡率为75%的配伍比例,即与瓜蒌(36∶1)配伍或白及(10.8∶1)配伍,测算草乌与反药配伍的LD50。结果草乌醇提液灌服给药的LD50为8.45 g·kg-1,95%置信区间为7.58~9.43 g·kg-1。与瓜蒌或白及配伍草乌的毒性随着瓜蒌或白及用量的增大而增强;而草乌与半夏配伍小鼠死亡率没有出现上升,反而随着半夏用量的增大呈现下降的趋势。与瓜蒌(36∶1)配伍草乌配伍禁忌的LD50为6.45 g·kg-1,95%置信区间为5.64~7.34g·kg-1;与白及(10.8∶1)配伍草乌配伍禁忌的LD50为5.94 g·kg-1,95%置信区间为5.21~6.73 g·kg-1。结论草乌与瓜蒌或白及配伍的急性毒性强于单独草乌的急性毒性;但草乌与半夏配伍的毒性没有上升,表明草乌与反药配伍禁忌不是绝对的。     

利用质谱研究诃子对草乌的化学解毒作用

目的: 揭示蒙古族医药理论中诃子对草乌解毒作用的科学内涵. 方法: 采用超声提取法对草乌、草乌-诃子药对进行乙醚、无水乙醇提取,对草乌进行酸性乙醚提取,对草乌中双酯型生物碱提取部位-诃子混合后进行乙醚提取;采用电喷雾质谱技术对上述提取液进行检测. 结果: 电喷雾一级质谱图结果显示,随着诃子量的增加,草乌-诃子乙醚提取液中双酯型生物碱的相对丰度呈下降趋势,而脂型生物碱相对丰度呈上升趋势;草乌酸性乙醚提取液中脂型生物碱为基峰;草乌与草乌-诃子无水乙醇提取液中同种生物碱的相对丰度基本一致;双酯型生物碱提取部位加入诃子后,各生物碱的相对丰度与种类均无变化. 结论: 蒙古族医药理论中诃子对草乌的解毒作用是指在低极性条件下,诃子通过抑制双酯型生物碱的溶出对草乌起到减毒作用.本实验方法可用于制剂工艺为药材粉末直接混合制成的各种蒙古族成药复方的配伍机制研究.     

草乌不同炮制方法的功效对比研究

目的:研究草乌的炮制方法与镇痛、抗炎功效的相关性,确定药物发挥功效的最佳炮制方法。方法:根据草乌祛风除湿止痛的功效,选择热板痛证模型、扭体痛证模型、大鼠足肿胀模型确定草乌镇痛抗炎的最佳炮制方法。结果:诃子制草乌(方法 2)对延长热板刺激小鼠添足潜伏期,提高热板小鼠痛阀值,减少醋酸所致小鼠扭体次数的效果最为显著。结论:诃子制草乌(方法 2)镇痛作用强,同时具有明显的消炎作用,是草乌的最佳炮制方法。     

太白楤木与珠子参不同配伍对骨质疏松大鼠模型骨代谢指标及骨生物力学的影响

目的观察太白楤木与珠子参不同配伍对骨质疏松大鼠模型骨代谢指标及骨生物力学的影响。方法将120只SD大鼠按照随机数字表法分为6组,正常组、模型组、中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组及西药组,各20只。饲养1周,除正常组外,其余5组去除卵巢建立骨质疏松大鼠模型。术后2周给药,正常组、模型组正常饲养;中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组按照相应剂量(太白楤木与珠子参提取物2∶1、1∶1和1∶2配成的溶液,按0.008 1 g/kg剂量给药)灌胃;西药组予阿仑膦酸钠水溶液(阿仑膦酸钠片用蒸馏水在给药前临时配制)1.2 mg/kg灌胃。每日1次,连续灌胃12周。观察各组大鼠一般情况;观察各组大鼠骨代谢标志物血清碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)、磷(P)变化,以及大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量变化。结果模型组血清ALP高于正常组(P0.05),血清Ca低于正常组(P0.05),说明造模成功。中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组及西药组血清ALP均低于模型组(P0.05),血清Ca高于模型组(P0.05),说明治疗均有效。中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组血清ALP均高于西药组(P0.05),说明西药组对血清ALP的改善优于中药配伍组;中药配伍1组血清ALP低于中药配伍2组、中药配伍3组(P0.05),说明中药配伍1组对血清ALP的改善优于中药配伍2组、中药配伍3组。模型组大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量均低于正常组(P0.05),说明造模成功。中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组及西药组大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量均高于模型组(P0.05),说明治疗均有效。中药配伍1组、中药配伍2组、中药配伍3组大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量均低于对照组(P0.05),说明对照组对大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量的改善优于中药配伍组。中药配伍1组大鼠右侧股骨最大载荷、股骨刚度、拉伸弹性模量均高于中药配伍2组、中药配伍3组(P0.05),说明中药配伍1组改善更优。结论太白楤木与珠子参配伍可以不同程度地改善和延缓骨质疏松大鼠模型发病和进展速度,以太白楤木与珠子参2∶1配伍效果最佳,能提高和改善大鼠股骨骨生物力学性能,防止因外力发生骨折可能。     

附子与甘草不同配伍比例配伍减毒的实验研究

目的:通过平行比较附子及附子与甘草不同配伍比例对附子毒性的影响,观察甘草对附子的解毒作用,并对减毒机制进行探索性的研究。方法:平行比较了附子和附子配伍不同比例甘草对附子小鼠急性毒性,测定其半数致死剂量LD50;平行比较附子和附子配伍甘草对大鼠的心脏毒性,测定其半数中毒剂量TD50;以无血清DMEM将附子、附子-甘草3∶1、附子-甘草1∶1、附子-甘草1∶3的含药血清分别按5%,10%,20%稀释成3个浓度,观察各给药组不同浓度的含药血清对原代乳大鼠心肌细胞搏动节律、细胞存活率以及细胞内乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响。结果:附子配伍甘草后能够提高附子的LD50和TD50。同空白血清对照组比较附子含药血清能够明显增加心肌细胞搏动节律和LDH的含量(P<0.05),附子配伍不同比例甘草含药血清能够明显降低附子导致心机搏动节律的加快,降低LDH含量。随着甘草比例的增加,作用加强。但不同浓度的附子以及附子配伍甘草含药血清对细胞存活没有明显影响。结论:甘草能够通过提高附子中毒剂量,从而达到减毒作用。甘草对于附子减毒作用是通过抑制心肌细胞节律的增加,保护心肌细胞从而达到减毒作用。     

产业化生产中草乌不同炮制品的“减毒-存效”研究

研究产业化生产中草乌不同炮制品的毒性和药效的相关性,确定"减毒-存效"的最佳炮制方法。采用HPLC测定草乌及其不同炮制品中6种乌头碱类生物碱的含量;采用Bliss法分别测定草乌及其不同炮制品对小鼠半数致死量(LD50)或最大给药剂量;以二甲苯致耳肿胀法和醋酸扭体法试验考察不同炮制品的抗炎、镇痛作用。结果显示:①草乌生品中3种双酯型生物碱总量为0.358 8%;药典水煮法炮制品中3种双酯型生物碱总量为0.002 2%,3种单酯型生物碱总量为0.036 2%;常压蒸制法炮制品中3种双酯型生物碱总量为0.006 0%,3种单酯型生物碱总量为0.056 7%;②生草乌的LD50为5.4 g·kg^-1,药典水煮法和常压蒸制法炮制品的最大给药剂量为133.34 g·kg^-1;病理观察显示,与正常组比较,2种炮制品对于小鼠的心、肝、肾均有一定的损伤;③药典水煮法和常压蒸制法炮制品均具有抗炎、镇痛作用(P<0.01或P<0.05),其抗炎镇痛作用强弱为:常压蒸制法>药典水煮法。上述结果提示:生草乌毒性较大,采用常压蒸制法炮制后毒性明显降低,同时又保留了良好的的抗炎和镇痛作用;与药典水煮法相比,常压蒸制法具有工艺可操作性强、饮片质量稳定、抗炎镇痛作用更强等优势,适用于产业化生产。     

高效液相色谱法测定生诃子及炒诃子中没食子酸含量

目的：用高效液相色谱法测定诃子、炒诃子中没食子酸的含量,说明炮制对生诃子中没食子酸的含量影响,方法：Nova-pakC18色谱柱,流动相MeOH-0.025mol.L^-1,磷酸溶液（15：85）,检测波长270nm。结果：诃子中没食子酸与其它成分达到基线分离,线性范围0．52－3．12μg,相关系数r=0.9996样品平均回收率95．6％,RSD＝4．2％（n=5)。结论：炒诃子中没食子酸含量高于生诃子。     

基于均匀设计法评价瓜蒌与制川乌反药配伍组合的祛痰镇咳作用

目的:研究瓜蒌与制川乌不同配比和剂量变化对小鼠祛痰、镇咳作用的影响。方法:采用均匀设计法,按2因素7水平以小鼠气管酚红分泌量和咳嗽次数为指标,观察瓜蒌和制川乌合煎液口服给药后对小鼠祛痰、镇咳作用的影响,并选取有显著意义的配比和剂量进行验证。结果:对气管酚红分泌量的影响:合煎液多数配比能增加小鼠气管酚红分泌量;经回归分析可知,瓜蒌有祛痰作用而制川乌没有,瓜蒌与制川乌配伍存在拮抗作用,且瓜蒌-制川乌为1∶2时拮抗作用最大。对咳嗽次数的影响:合煎液所有配比均能降低咳嗽次数;经回归分析可知,瓜蒌与制川乌分别都有镇咳作用,但二者之间没有交互作用。结论:瓜蒌与制川乌配伍能拮抗瓜蒌的祛痰作用,但对镇咳效用没影响。     

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??OBJECTIVE To explore the optimum harvest time of the Mongolian medicine, Radix Aconiti kusnezoffii herbs, by analysis of the changes of the main components in different developmental stages. METHODS HPLC was used to determine the contents of the main alkaloids in 6 kinds of Radix Aconiti Kusnezoffii which were harvested in sprouting stage, early flowering stage, flowering stage and withering period, respectively. Taking the content of total alkaloids as index, the appropriate harvest time of Radix Aconiti kusnezoffii was determined. RESULTS From germination to withering period, the total alkaloids in the 6 kinds of Radix Aconiti Kusnezoffii displayed increasing and then decreasing trend. The highest contents existed in the early flowering stage and the lowest existed in the withering period. The contents of the main components were sorted from high to low in the early flowering stage, germination stage, flowering stage and withering period. CONCLUSION Based on the unique processing METHODS in Mongolian medicine and clinical medication safety, the withering period of Radix Aconiti Kusnezoffii is the best harvest time and this is consistent with the traditional Mongolian harvest period.     

寒痹贴的提取工艺优选

目的:优选寒痹贴的最佳提取工艺。方法:草乌以总生物碱的提取量为考察指标,采用正交试验优选醇提工艺;赤芍等6味中药以芍药苷的提取量为考察指标,采用正交试验优选水煎工艺。结果:寒痹贴的最佳提取工艺为草乌加70%乙醇6倍,回流2次,每次2 h;赤芍等药材加水8倍量,煎煮3次,每次1 h。结论:优选出的提取工艺合理、可行,为其生产提供了科学依据。     

风湿骨痛颗粒质量标准研究

目的　建立风湿骨痛颗粒的质量标准。方法　采用显微鉴别法对处方中制川乌、制草乌、甘草进行鉴别 ;采用 TL C法对处方中盐酸麻黄碱进行鉴别 ;用酸性染料比色法测定制剂中乌头总生物碱。结果　在显微镜检出制川乌、制草乌、甘草 ,在 TL C色谱中检出盐酸麻黄碱 ;乌头总生物碱在 5 .2 90 μg～ 2 6 .4 5 0 μg范围内显良好的线性关系 ,r=0 .9996 ,平均回收率 97.87% ,RSD=1.2 3%。结论　所建立的方法简便可行 ,重现性好 ,为风湿骨痛颗粒质量控制提供了方法。     

HPLC法同时测定达斯玛保丸中木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯

目的 建立达斯玛保丸(诃子、木香、藏木香、紫草茸、翼首草、藏茜草、安息香、麝香、铁棒锤、镰形棘豆、多刺绿绒蒿、兔耳草、金腰子、榜嘎、止泻木子)中木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯的测定方法.方法 采用HPLC法对制剂中主要成分木香烃内酯、异土木香内酯和土木香内酯进行定量分析.色谱柱为CAPCELL PAK C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液(58:42);检测波长225 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min.结果 木香烃内酯在0.199 6～3.493 μg、异土木香内酯0.2196～3.8430 μg、土木香内酯0.2106 ～3.6855 μg范围内均呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.57％、98.91％、97.21％,RSD分别为1.65％、1.37％、1.44％(n=6).结论 方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重复性好,可有效控制制剂质量.     

醋的种类对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的：探讨醋的种类对醋制草乌生物碱类成分的影响,为筛选炮制辅料用醋提供依据。方法：采用不同类型的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较采用不同类型的醋制备的草乌炮制品中生物碱的含量差异。结果：各炮制品中双酯型生物碱的含量：生草乌〉食用乙酸制草乌〉工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈龙门米醋制草乌〉玫瑰醋制草乌〉药典法制草乌;单酯型生物碱的含量：药典法制草乌〉食用乙酸制草乌〉龙门米醋制草乌≈工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈玫瑰醋制草乌〉生草乌。结论：醋制草乌可以达到炮制减毒的效果,食用醋比乙酸的减毒效果更佳。