黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆(AD)损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10~125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。     

淫羊藿中不同部位及单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的通过比较淫羊藿Epimedium brevicormon不同洗脱部位及其单体化合物对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选淫羊藿活性部位和活性成分。方法淫羊藿提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20及制备液相的分离纯化,得到不同洗脱部位和单体化合物。运用Aβ_(25-35)体外诱导的神经细胞损伤模型,采用Hoechst33342和PI双染法,对淫羊藿的不同洗脱部位和成分进行活性筛选。结果与模型组比较,除淫羊藿95%乙醇部位外,所有洗脱部位及其中的单体化合物山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)-β-D-半乳糖苷]-7-O-α-L-鼠李糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B均对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤有显著保护作用。结论淫羊藿对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其二氯甲烷-甲醇(5∶1)部位作用最强,其次是30%乙醇部位、50%乙醇部位。     

39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究

以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立茁淀粉样蛋白（Aβ_{25-35）诱导细胞损伤的阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分。方法：采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分。结果：初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40%乙醇部位（HB40）和95%乙醇部位（HB95）有较好的抗Aβ损伤活性。结论：提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值。}     

参知健脑方组分对淀粉样β蛋白β25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨SZJ对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用机制。方法:以Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及SZJ/APP17肽对SH-SY5Y细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:25μmol/L的Aβ25-35减低SH-SY5Y细胞存活率,SZJ/APP17肽预处理24h可提高SH-SY5Y细胞存活率,相同浓度Aβ25-35 SZJ预处理组与非处理组比较差异显著(P<0.05);25μmol/L Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3的表达增高,SZJ/APP17肽预处理能抑制其表达升高,与非预处理组比较差异显著(P<0.05)。结论:SZJ可对抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达有关。     

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

6种开心散类方对不同物质损伤神经细胞的保护作用

目的:研究组方相同,比例不同的6种开心散类方对模拟抑郁、阿尔茨海默病和帕金森病细胞模型的保护作用.方法:以0.4 mmol· L-1皮质酮损伤SH-SY5Y细胞,20 μmol·L-1β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤PC12细胞,250 μmol·L-1 1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)损伤SH-SY5Y细胞,建立体外模拟抑郁、阿尔茨海默病及帕金森模型,采用MTT法检测细胞的存活率及LDH法检测细胞损伤程度.结果:100,500 mg·L-1《备急千金要方》之定志小丸可显著提高皮质酮损伤的SH-SY5Y细胞的存活率并明显减少LDH的释放浓度;各开心散类方均有明显增加Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率、减少LDH的释放浓度的作用;其中以10,100,500 mg·L-1《备急千金要方》之开心散的作用最为显著;500 mg·L-1《古今录验》之茯神丸可显著提高MPP+损伤的SH-SY5Y细胞的存活率、减少LDH的释放.结论:定志小丸对皮质酮损伤的神经细胞有明显的保护作用,有潜在抗抑郁作用;6种开心散类方对Aβ25-35损伤的PC12细胞均有保护作用,有潜在抗阿尔茨海默病作用,《备急千金要方》之开心散作用最为显著;《古今录验》之茯神丸高剂量组对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用.     

甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析

目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响。采用GC-MS技术对该部位进行化学成分分析。结果甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用最强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物。结论甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物。     

人参糖蛋白降低Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡中一氧化氮释放的保护作用

目的确定人参糖蛋白的基本化学构成,探讨人参糖蛋白抗β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)引起的神经炎症和神经保护作用。方法采用超滤、葡聚糖凝胶等方法分离纯化得到人参糖蛋白(Pg Gp),采用苯酚-硫酸法测定总糖含量,Lowry法测定蛋白含量,高效液相色谱法测定纯度和分子量分布。利用MTT法考察Pg Gp(5,25,125μg/m L)对细胞存活率的影响;Griess法测定Pg Gp对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞一氧化氮释放的影响。结果Pg Gp总糖含量为25.9%,蛋白含量为73.4%,分子量分布在200~50 000 Da。Pg Gp在不影响细胞存活率情况下,中、高剂量组与模型组比较,表现出保护Aβ25-35诱导的SH-SY5Y释放NO的能力(P<0.05,P<0.01)。结论人参糖蛋白可降低Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞一氧化氮释放量,从而具有保护神经细胞的作用。     

葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体 途径凋亡的保护作用

目的:探讨葛根素对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护机制.方法:台盼蓝染色检测细胞存活率;PI单染流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期分布;ELISA和Western blotting法检测胞浆Cyt C的变化;ELISA方法检测Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9酶活性;DNA ladder分析药物对细胞凋亡的干预作用.结果:在12.5～50 μmol·L-1,葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,并呈一定的量效关系;PI单染流式细胞术检测结果显示MPP+诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,并阻滞细胞于G2/M期,预先加入不同剂量的葛根素可以逆转MPP+对SH-SY5Y细胞损伤作用.Western blotting和ELISA分析结果均显示葛根素能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Cyt C的释放.不同剂量的葛根素也能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Caspase-3和Caspase-9的活性,但对Caspase-8的活性影响不明显;DNA ladder分析也显示葛根素可以抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡.结论:葛根素可以提高MPP+诱导的SH-SY5Y损伤的细胞存活率,抑制细胞凋亡的发生,其机制可能与调节线粒体Caspase通路和干预细胞周期有关.     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。