莱菔子抑制结肠癌干细胞恶性行为的研究

目的研究中药莱菔子对结肠癌干细胞恶性行为的影响,并探讨其作用机理。方法采用无血清悬浮培养法从HT29结肠癌细胞系中诱导培养结肠癌干细胞。制备莱菔子乙醇提取物,以不同浓度(30～120μg/mL)作用于结肠癌干细胞。采用悬浮成球法检测结肠癌干细胞的自我更新能力,采用CCK-8法检测增殖能力,采用Matrigel穿膜法检测侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法检测结肠癌干细胞内长链非编码RNA HOTAIR的表达水平。结果莱菔子乙醇提取物有力抑制了结肠癌干细胞的自我更新能力、增殖能力和侵袭能力,显著下调了结肠癌干细胞内HOTAIR的表达水平。结论中药莱菔子能够抑制结肠癌干细胞的恶性行为,其作用机制与下调促癌的长链非编码RNA表达有关,在结肠癌的治疗中具有良好应用价值。     

漏芦下调促癌小RNA表达抑制胃癌细胞恶性行为的研究

目的:研究中药漏芦对胃癌细胞中促癌非编码小RNA表达、以及胃癌细胞恶性行为的影响。方法:制备漏芦乙醇提取物,以不同浓度(50~150μg/m L)作用于体外培养的人胃癌细胞AGS,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中非编码小RNA的表达水平,采用软琼脂集落形成法检测锚定非依赖性生长能力,采用划痕法检测细胞迁移能力,采用Matrigel穿膜法检测细胞侵袭能力。结果:漏芦乙醇提取物显著下调了胃癌细胞中促癌非编码小RNA mir-191-5p、miR-125b、piRNA651和piRNA932的表达水平,有力抑制了胃癌细胞的锚定非依赖性生长能力、迁移能力和侵袭能力。结论:中药漏芦能够通过下调促癌非编码小RNA的表达抑制胃癌细胞的恶性行为,在胃癌的治疗上具有良好的应用价值。     

射干提取物抑制肺癌细胞恶性行为的研究

目的:研究中药射干对肺癌细胞恶性行为的影响,并探讨其作用机理。方法:制备射干乙醇提取物,作用于体外培养的人肺癌细胞H460,采用软琼脂集落形成法检测锚定非依赖性生长能力,Matrigel穿膜法检测细胞侵袭能力,悬浮成球法检测肿瘤干细胞自我更新能力,实时荧光定量PCR法检测细胞中microRNA-21的表达水平。结果:射干乙醇提取物有力抑制了肺癌细胞的锚定非依赖性生长能力和侵袭能力,显著下调了肺癌细胞中microRNA-21的表达水平。结论:射干可以抑制肺癌细胞的恶性行为,具有良好的抗肺癌应用价值。     

溪黄草下调miR-1290表达抑制结肠癌细胞恶性行为的研究

目的研究中药溪黄草对结肠癌细胞中miR-1290表达、以及结肠癌细胞恶性行为的影响。方法制备溪黄草乙醇提取物,以不同浓度(20～80μg/mL)作用于体外培养的人结肠癌细胞HCT116,采用实时荧光定量PCR法检测细胞内和细胞培养液中miR-1290的表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕法检测细胞迁移能力,采用Matrigel穿膜法检测细胞侵袭能力。结果溪黄草乙醇提取物显著下调了HCT116细胞内和细胞培养液中miR-1290的表达水平,有力抑制了HCT116细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结论中药溪黄草能够下调结肠癌细胞对促癌性小RNA miR-1290的表达和分泌,抑制结肠癌细胞的恶性行为,在结肠癌的治疗上具有良好的应用价值。     

槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖的研究

目的探讨槲皮素治疗胃癌细胞的作用机制。方法采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC823细胞后，采用四唑盐比色试验检测癌细胞生长，分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡，分别采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素（survivin）基因mRNA、蛋白表达情况。结果槲皮素抑制胃癌BGC823细胞的恶性增殖，且呈浓度依赖性；琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示，槲皮素处理组出现凋亡现象，且呈浓度依赖性。槲皮素处理组survivin基因mRNA、蛋白表达下调，且呈时间和浓度依赖性。结论槲皮素体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖，与诱导凋亡、下调survivin基因表达有关。     

华蟾素抑制人胃癌BGC-823细胞体外侵袭、迁移的机理

目的探讨华蟾素(Cinobufacin)体外抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭的作用及其机制。方法以0.156 mg/L和0.313 mg/L华蟾素体外作用人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测华蟾素对BCG-823细胞生长的抑制效果,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测BGC-823细胞中NF-κB p56、MMP-9蛋白的表达量。结果华蟾素可浓度依赖性抑制体外BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭,同时下调BGC-823细胞中NF-κB和MMP-9蛋白表达。结论华蟾素体外可抑制胃癌的转移,该作用可能通过下调NF-κB、MMP-9的表达相关。     

解毒散结方对胃癌血管新生的影响及作用机制

目的探讨解毒散结方抑制胃癌侵袭转移作用及可能的作用机制。方法以人胃癌细胞BGC-823为研究对象,解毒散结方不同浓度组作用于胃癌细胞培养48h,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检胃癌细胞的活力,划痕实验检测细胞迁移能力,管腔形成实验检测管腔形成数量,Western blot的方法检测VEGF信号通路关键蛋白VEGF-A/VEGFR-2蛋白表达量。结果不同浓度的解毒散结方组较对照组细胞活力、细胞迁移率降低;管腔形成数量下降(P0.01,P0.05), VEGF-A/VEGFR-2蛋白表达降低,随着药物浓度增加,作用更明显。结论下调人胃癌细胞BGC-823血管新生相关信号通路蛋白表达量,进而抑制胃癌细胞增殖、迁移、管腔及血管新生是解毒散结方抑制胃癌侵袭转移的重要分子机制。     

雷公藤内酯酮抑制胃癌细胞恶性行为的作用与机理研究

目的:观察雷公藤内酯酮对人胃癌细胞恶性行为的抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:CCK-8法检测雷公藤内酯酮对BGC 823胃癌细胞增殖能力的影响,软琼脂集落形成法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞锚定非依赖性生长能力的影响,荧光定量PCR法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞中piRNA651表达的影响。结果:雷公藤内酯酮显著地抑制了BGC 823细胞的增殖能力,IC50为165.17 nmol/L;当浓度等于或大于100 nmol/L时,雷公藤内酯酮有效地抑制了BGC 823细胞的锚定非依赖性生长能力;雷公藤内酯酮有力地下调了BGC 823细胞中piRNA651的表达。结论:雷公藤内酯酮可以降低胃癌细胞中促癌的非编码RNA的表达,使其恶性行为受到显著抑制,在胃癌的治疗上具有良好的应用价值。     

藤梨根总三萜化合物通过下调N-Cadherin、Snail抑制BGC-823胃癌细胞侵袭的体内外实验研究

目的:考察藤梨根总三萜化合物(KRTC)对BGC-823胃癌细胞的侵袭能力和肿瘤活性的影响。方法:体外实验通过Transwell实验分析KRTC对BGC-823胃癌细胞侵袭能力的影响,Western blot实验分析KRTC对上皮-间质转化相关标记蛋白表达的影响;体内实验通过构建裸鼠胃癌皮下移植瘤模型研究KRTC抗肿瘤生长的有效性,并通过免疫组织化学法检测N型钙黏蛋白(N-Cadherin)、Snail的表达。结果:与表皮生长因子(EGF)组比较,EGF+KRTC组穿过聚碳酸脂膜的细胞数量明显减少(P<0.01),N-Cadherin、Snail表达明显下调(P<0.01);KRTC能够抑制BGC-823胃癌移植瘤的生长,中、高剂量组有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较,给药组中N-Cadherin、Snail的表达明显下调(P<0.01)。结论:KRTC能够抑制BGC-823胃癌细胞的侵袭并能抑制胃癌移植瘤生长,下调核转录因子Snail进而引起N-Cadherin下调可能是其实现抗胃癌的机制之一。     

金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响

目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨。方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L~(-1)),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P0.05)。结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关。本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制。     

健脾养正消癥方对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响

目的观察健脾养正消癥方体外对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响。方法采用MTT法检测该方对MGC-803细胞粘附能力的影响,细胞划痕实验检测对细胞迁移能力的影响;使用Transwell小室观察该方对趋化因子CXCL12的诱导作用的干预情况;使用Real-time PCR方法检测该方对CXCR4表达的影响。结果该方对MGC-803细胞的粘附和迁移有明显的抑制作用,并能明显抑制CXCL12诱导的胃癌细胞穿透Transwell小室的能力,下调CXCR4的表达。结论健脾养正消癥方可抑制人胃癌细胞MGC-803的的粘附侵袭,其机制有可能是通过CXCL12-CXCR4轴来调控的。     

健脾中药胃肠安对胃癌MKN45细胞侵袭迁移能力的影响

目的:研究健脾中药胃肠安对胃癌细胞MKN45侵袭、迁移等生物学行为的影响及其分子机制。方法:体外培养MKN45细胞,分为胃肠安方低剂量(0.5 mg·mL~(-1))组、高剂量(1 mg·mL~(-1))组和对照组,采用Transwell小室实验评价胃肠安方对胃癌细胞MKN45侵袭能力的影响、细胞划痕实验检测胃肠安对MKN45细胞迁移能力的影响,Western Blotting检测经胃肠安干预后的MKN45细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9的蛋白水平。结果:Transwell侵袭和迁移实验显示,胃肠安干预后的MKN45细胞穿膜数明显减少;细胞划痕实验显示,胃肠安可显著抑制MKN45细胞迁移;Western Blot结果显示,胃肠安干预后的MKN45细胞的MMP2、MMP9蛋白表达水平明显降低。结论:胃肠安可降低MKN45细胞的侵袭能力,抑制胃癌细胞迁移。胃肠安抑制人胃癌细胞MKN45的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关,这可能是胃肠安影响胃癌细胞侵袭与转移的机制之一。     

PKCαsiRNA转染对人胃癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用研究

目的：探讨PKCαsiRNA作用后的胃癌细胞株BGC823在裸鼠皮下的成瘤能力。方法：利用脂质体将PKCαsiRNA导人BGC823细胞内，然后将这种被转染的细胞接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。结果：经脂质体PKCαsiRNA作用后的胃癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低，最大抑瘤率达40．0％（P〈0．05）。首次出现目检可见肿瘤的平均时间延长为9．6天（P〈0．05）。结论：PKCαsiRNA能降低胃癌细胞的成瘤能力，抑制肿瘤生长，在胃癌的基因治疗中有一定价值。     

桔梗皂苷-D对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的:通过研究桔梗皂苷-D(Platycodin D,PD)对MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨PD抑制胃癌细胞侵袭转移的作用和可能机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞,并加入不同浓度PD(1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)进行处理,MTT检测细胞活性;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;采用RT-q PCR检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2及MDM2 mRNA表达水平;Western blot检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2及MDM2蛋白表达水平。结果:PD呈浓度和时间依赖性抑制MKN-45细胞活性及MKN-45细胞的迁移和侵袭。PD显著下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9及MDM2 mRNA和蛋白表达水平,上调TIMP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论:PD能抑制胃癌MKN-45细胞的迁移和侵袭,其作用机制与下调ICAM-1、MMP-2和MMP-9表达水平以及抑制原癌基因MDM2的表达有关。     

斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bcl-2、p53基因表达的影响

目的研究斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的影响。方法采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的变化。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达下降。结论斑蝥酸钠可抑制Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达。     

藤黄酸诱导胃癌细胞凋亡及抗肿瘤转移的实验研究

目的研究藤黄酸对人胃癌BGC-803细胞增殖和转移相关能力的影响及其机制。方法 MTT、Hoechst染色法检测藤黄酸对BGC-803细胞的增殖和凋亡的影响;侵袭小室模型等方法检测藤黄酸对BGC-803细胞侵袭、黏附、迁移的影响;运用RT-PCR、Western-blotting法分析藤黄酸对胃癌细胞凋亡和转移相关基因bcl-2、bax、细胞黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达的影响。结果 藤黄酸抑制BGC-803细胞的生长,其抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系。低浓度的藤黄酸处理BGC-803细胞后,可明显降低胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭能力。随着藤黄酸浓度的增大,bcl-2I、CAM-1 mRNA和蛋白表达均下调,bax mRNA和蛋白表达上调。结论藤黄酸对胃癌细胞BGC-803有明显的生长抑制作用,具有显著的促肿瘤细胞凋亡作用和抑制肿瘤细胞转移相关性质,其机制可能与下调bcl-2I、CAM-1及上调bax的表达有关。     

南蛇藤提取物增强抑癌基因Maspin抑制人胃癌细胞株MGC803侵袭能力的研究

目的：构建高表达抑癌基因Maspin的人胃癌MGC803细胞,研究不同浓度的南蛇藤提取物能否增强Maspin抑制胃癌细胞的侵袭能力。方法：克隆重组GV208-Maspin-EGFP慢病毒表达载体,感染人胃癌MGC803细胞。加入不同浓度的南蛇藤提取物（10、20、40 μg·mL-1）,Transwell小室法检测药物对高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞侵袭能力的影响。结果：成功构建高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞模型。各药物组Transwell小室下方穿膜细胞的数目减少,呈现一定的药物浓度依赖性。结论：南蛇藤提取物可增强抑癌基因Maspin抑制人胃癌细胞株MGC803侵袭的能力。     

南蛇藤提取物通过Cofilin1抑制胃癌BGC-823细胞转移的机制

目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制。为胃癌的中医药预防与治疗寻求新的靶点,为开发有效的抗胃癌中药奠定理论和实验基础。方法:利用前期蛋白质二维电泳技术,在胃癌中筛选出COE作用于胃癌的差异大的靶点蛋白。然后利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE(20,40,80 mg·L~(-1))干预后细胞中丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)水平的表达情况。最后利用分子克隆技术,将胃癌细胞株BGC-823中的CFL1表达抑制,然后联合COE进行干预,检测COE是否能影响胃癌细胞的侵袭转移。结果:在前期实验基础上经过细胞水平的验证,CFL1能够在胃癌细胞中稳定高表达;Western blot结果显示,COE能抑制胃癌细胞中CFL1的表达,经不同质量浓度COE(20,40,80 mg·L~(-1))处理24 h的BGC-823细胞,其CFL1的水平受到了不同程度的抑制。随着COE的浓度递增,CFL1的表达逐渐减弱。与空白组比较,COE40,80 mg·L~(-1)组CFL1表达显著减少(P0.01);利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰胃癌BGC-823细胞株后,CFL1表达受到明显抑制,与空白组比较,siRNA-CFL1慢病毒转染组BGC-823细胞中CFL1受到显著抑制(P0.01);细胞侵袭实验(transwell)显示COE能显著减少胃癌BGC-823细胞敲低表达后细胞的透膜细胞数(P0.01)。结论:COE能明显抑制胃癌BGC-823细胞的转移,其机制可能与抑制CFL1的过度表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在绿茶提取物中的含量,探讨EGCG对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响,为阐明EGCG抗肿瘤作用机制提供实验基础.方法 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定绿茶提取物中EGCG的含量.MTT法检测EGCG对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖的影响;DNA ladder法检测EGCG处理各组DNA梯度的变化.所有数据均采用SPSS12.0进行统计分析,均数比较采用t-test.结果 通过绘制标准曲线确定绿茶提取物中EGCG 的含量为9%.MTT法检测结果显示EGCG能够呈现剂量(5×10~(-3),1×10~(-2),2×10~(-2),4×10~(-2))g/L依赖性地抑制人胃癌细胞BGC823的增殖;DNA ladder法显示EGCG处理组细胞DNA呈现梯状条带,而对照组则没有这种带纹.结论 绿茶提取物中EGCG的含量为9%;EGCG能够通过诱导细胞凋亡而抑制人胃癌细胞BGC823的生长和增殖.