人肝、肾ABO血型抗原表达差异的初步研究

目的比较人肝、肾ABO血型抗原表达的差异,探索ABO血型抗原在血型抗体介导排斥反应中的作用。 方法ABO血型为A型和B型血的公民逝世后器官捐献供者各4例,O型血对照2例。获取供者肝脏和双肾后,留取肾动脉、肾静脉、肾组织、肝动脉、肝静脉、门静脉和肝组织标本,运用蛋白质印迹法(WB)和免疫组织化学法检测ABO血型抗原的含量和分布。 结果WB检测结果显示,同一供者不同部位ABO血型抗原含量并不一致。在同一个体内,A型抗原在肾组织和门静脉含量最高,在肾动脉含量最低;B型抗原在肝静脉及肾组织含量最高,在肾动脉、肾静脉及肝组织含量最低。不同个体之间,同一部位血型抗原含量差别也较大。通过免疫组织化学法检测,进一步发现血型抗原在肝、肾组织和血管中的分布与WB结果基本一致。 结论ABO血型抗原在不同血型、个体和器官之间均存在不同程度差异,这种差异也可能会影响ABO血型不相容器官移植的结局。     

miR-155反义寡核苷酸转染对人大肠癌Lovo细胞侵袭的影响

目的探讨miR-155对人大肠癌细胞侵袭能力的影响。方法大肠癌Lovo细胞分为3组：脂质体介导反义miR-155（AS-miR-155）组、无义寡脱氧核苷酸（ODN）组和对照组。测定荧光素酶活性验证3组细胞中miR-155的表达,采用Matrigel基质生长试验检测细胞生长情况,以Transwe Ⅱ方法检测细胞的侵袭力,结果与对照组和无义ODN组比较,转染AS-miR-155组Lovo细胞miR-2l表达水平降低;Matrigel基质生长试验显示,转染AS-miR-155组Lovo细胞体外培养克隆平均直径较小,Transwe Ⅱ细胞侵袭试验显示转染AS-miR-155组穿膜细胞数较少。结论 miR-2l高表达可促进Lovo大肠癌细胞侵袭生长,提示miR-155可以作为基因治疗大肠癌的候选靶点。     

RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将Bcl-xL小干扰RNA（siRNA）转染食管癌EC109细胞,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测食管癌细胞Bcl-xL mRNA和蛋白,采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型检测癌细胞增殖和侵袭力。结果与对照组相比,siRNA转染组细胞Bcl-xL mRNA和蛋白水平明显下调（P均〈0.05）,所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少（P均〈0.05）,并均呈浓度依赖性。结论采用RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达,可抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力。     

p53,Ki-67及E-钙黏蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及预后

目的:探讨p53,Ki-67及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)组织中的表达及预后的关系.方法:采用免疫组织化学法检测52例TNBC和52例非三阴性乳腺癌(non-triple-negative breast cancer,NTNBC)组织中p53,Ki-67及E-cadherin表达情况,观察3个指标与TNBC患者临床病理学特征及预后的关系.结果:TNBC组织中p53,Ki-67及E-cadherin的阳性表达率分别为67.3％,80.8％,26.9％;而在NTNBC组织中为44.2％,61.5％,48.1％(均P＜0.05).在TNBC组织中,p53表达阳性与肿瘤大小、TNM分期及组织学分级有关(均P＜0.05);Ki-67表达阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(均P＜0.05);E-cadherin表达阳性与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关(均P＜0.05).在TNBC患者中,p53,Ki-67及E-cadherin表达阳性者与阴性者总体生存率(overall survival,OS)的差异均有统计学意义(P＜0.05).Cox回归分析多因素显示:淋巴结转移、p53、Ki-67及E-cadherin表达是影响TNBC患者总体生存率的独立预后因素(均P＜0.05).结论:TNBC组织中,p53、Ki-67高表达,其表达阳性者预后差,E-cadherin低表达,其表达阳性者预后良好.联合检测p53、Ki-67及E-cadherin表达可为TNBC患者的治疗提供新靶点.     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.     

VEGF基因沉默对胰腺癌细胞化疗敏感性和Akt信号通路的影响

目的 观察靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胰腺癌BxPC3细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法 将培养后的BxPC3细胞分为单纯BxPC3细胞组、脂质体处理组、错配siRNA转染组和VEGFsiRNA转染组.以5、10、20、100、200 nmol/L的VEGF siRNA转染BxPC3细胞.采用实时定量RT-PCR和ELASA法检测细胞VEGF mRNA和蛋白的表达;MTT法检测吉西他滨对各组细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测BxPC3细胞Akt蛋白的磷酸化.结果 VEGF siRNA转染后,BxPC3细胞VEGF mRNA和蛋白呈浓度和时间依赖性明显下调,但对BxPC3细胞的增殖无明显影响.用0.2 μmol/L吉西他滨处理细胞48 h后,BxPC3细胞组、错配siRNA组及5、10、20 nmol/L siRNA组细胞的生长抑制率分别为(16.9±0.3)%、(17.3±0.3)%、(28.8±0.4)%、(52.2±0.3)%、(75.4±0.4)%,抑制率与siRNA浓度相关(r=0.928).同时,siRNA转染后细胞Akt蛋白的磷酸化被明显抑制.结论 VEGF基因在胰腺癌BxPC3细胞耐药中起着重要的作用,其机制可能与Akt蛋白磷酸化有关.     

镇江地区H pylori的cagA基因及其3′可变区结构的变化

目的:评估镇江地区H pylori临床株的cagA基因阳性率、了解菌株CagA蛋白的可能分型、其羧端可变区EPIYA的数目以及与临床结果之间有无关联.方法:培养分离来自临床胃十二指肠疾病患者的H pvlori,提取基因组DNA,通过PCR方法检测H pylori cagA基因的状况.随机选择不同病种的cagA基因阳性(cagA~ )的PCR产物.通过转化质粒,进行cagA~ PCR产物测序,通过ExPASY-Tranlation软件获得cagA基因相应的CagA蛋白的氨基酸序列.国际标准株NCTC11637的cagA基因以及CagA蛋白序列通过搜索NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库获得.结果:60株H pylori临床株中,56例为cagA~ ,阳性率达93.3%.20例测序的结果表明,CagA蛋白结构可分为2种类型,19株东亚型和1株西方型.所有19株东亚型均为Yamaoka分型的A型,所有20例菌株的EPIYA的数目均为3个,与临床结果无关联.结论:cagA基因阳性率在不同病种之间无差异.镇江地区H pylori临床株的CagA蛋白的一级结构,与日本、韩国菌株一样,主要为东亚型,其CagA蛋白羧端可变区EPIYA数目均为3个,与临床结果无关联.     

槲皮素对乳腺癌细胞侵袭及其cripto表达的影响

目的观察槲皮素（Que）对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的Que作用乳腺癌MDA-MB-468细胞,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞集落形成数,以Boyden小室模型检测癌细胞侵袭力,分别以荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测癌细胞cripto mRNA及其蛋白。结果经Que作用后,MDA-MB-468细胞恶性增殖和侵袭力均明显下降,且呈浓度依赖性（P均〈0.05）,其cripto mRNA和蛋白表达均明显下调,也呈时间和浓度依赖性（P均〈0.05）。结论Que可明显抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞的侵袭力,其机制可能与下调该细胞cripto基因表达有关。     

PLK1基因siRNA的构建及对甲状腺未分化癌细胞增殖和凋亡的影响

目的构建保罗样激酶-1（PLK1）基因小干扰RNA（siRNA）,并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成5个PLK1siRNA（S1、S2、S3、S4、S5）,转染人甲状腺癌ARO细胞后,采用实时定量RT—PCR方法筛选下凋PLK1mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染ARO细胞后,分别以实时定量RT—PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况;以MTT法检测对各组细胞增殖的影响;分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况。结果5个siRNA均明显下调PLK1mRNA水平,以S4效果最好,抑制率达91．5％。MTT结果显示,S4siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。与对照组比较,S4siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高,且呈浓度和时间依赖性（r=0．919;r=0．957）;TUNEL结果显示,S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象,且呈浓度依赖性（r=0．932）。结论PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用。PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一。     

结直肠癌组织TROP-2基因mRNA水平及临床意义

大肠癌（结肠癌和直肠癌）是常见的恶性肿瘤,多数患者确诊时已属晚期,故病死率很高。大肠癌转移的发生机理至今仍不甚清楚,如何从分子生物学的角度来探讨这一机制,是目前研究的重点。