以非那西丁为探针采用高效液相色谱法快速测定细胞色素P450 1A2的酶活性

目的 建立一种快速、高效的以非那西丁作为探针药物评价细胞色素P450 1A2(CYP1A2)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法.方法 色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(50 mm×4.6 mm I.D.,5μm);流动相为乙腈-水(含0.01%七氟丁酸),梯度洗脱,流速2.0 ml·min-1;检测波长为244 nm.非那西丁与人CYP1A2酶在37℃温孵适当时间后,加入50 μl乙腈终止反应,10 000 g离心后取上清液进样分析测定.结果 对乙酰氨基酚的保留时间为2.85 min,线性范围为1.00～200 μmol·L-1(r=0.999 9),最低定量限(LLOQ)为1.00 μmol·L-1,回收率为99.8%～102.3%;非那西丁的睬留时间为3.68 min,线性范围为1.00～200 μmol·L-1(r=0.999 9),最低定量限(LLOQ)为1.00 μmol·L-1,回收率为98.3%～101.1%.两者的日内、日间相对标准偏差均小于15%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定.结论 该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚的测定,可应用于体外CYP1A2酶活性的评价及酶动力学的研究.     

丹参总酚酸在大鼠血浆中的药动学研究

目的:考察丹参总酚酸中主要成分紫草酸、丹酚酸B在大鼠体内的药代动力学过程.方法:采用血药浓度法,HPLC法测定大鼠ig(1.0 g·kg-1)丹参总酚酸后不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件计算药动学参数.结果:紫草酸在1.0～20.0 mg·L-1线性关系良好(R2=0.993 1);回收率在97.15％ ～ 100.21％,日内、日间RSD＜ 10.23％;丹酚酸B在2.0～ 20.0mg·L-1线性关系良好(R2 =0.992 5);回收率在94.80％ ～ 99.96％,日内、日间RSD＜ 10.06％.紫草酸的t1/2为19.4 min,Cmax为14.9 mg·L-1,AUC为418.0.μg·L-1·min-1.丹酚酸B的t1/2为27.2 min,Cmax为17.1 mg· L-1,AUC为831.3 μg·L-1·min-1.结论:HPLC选择性好,灵敏度高,适用于血浆样品成分含量的测定,为进一步的复方药代动力学的研究奠定了基础.     

HPLC测定大鼠血浆和房水中的芒果苷

目的:建立了测定大鼠血浆和房水中芒果苷含量的液相色谱检测方法.方法:以对硝基苯酚作内标,甲醇-2%冰醋酸(40:60)为流动相,流速为1.0ML,min-1.在Cosmosil ODS C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)上进行分离.结果:方法的线性范围分别为血浆0.50～250.00mg·L-1,房水0.10～10.00mg·L-1,线性回归系数均在0.9954以上,日内和日间精密度RSD均小于12%,最低检量限0.05mg·L-1.结论:本方法具有简便、准确等优点,可满足芒果苷在大鼠血浆和房水中药动学研究的需求.     

RP-HPLC测定theacrine的血药浓度

目的:测定theacrine灌胃后在大鼠血浆中的血药浓度.方法:采用RP-HPLC检测血浆样品,以咖啡因为内标.色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水(25∶75)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为290nm,柱温为25℃.结果:Theacrine 血浆中质量浓度在0.5～100 mg·L-1线性关系良好(R2=0.998 9),最低定量限为0.5mg·L-1.在theacrine 血浆质量浓度为0.5,5.0,50 mg·L-1时,日内、日间精密度均小于15％,提取回收率分别为(95.8士8.6)％,(92.5士5.0)％,(90.3±5.2)％.当给药质量浓度为30 mg · kg-1时,主要药动学参数为Cmax(35.45±2.68) mg·L-1,tmax(0.51±0.13)h,t1/2(3.13±1.37)h,AUC0-∞(265.39±94.71) mg.L-1·.结论:经过系统的方法学考察,该研究所建立的测定方法灵敏度较高、重复性良好,可为theacrine在体内的代谢研究提供依据,为探讨theacrine作用机制及药效学评价奠定基础.     

HPLC同时测定千金子不同部位中4种有效成分的含量

目的:考察不同产地千金子不同药用部位中4种有效成分的含量差异,为千金子药材质量控制提供依据.方法:采用HPLC,色谱柱为Apollo C18柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长280nm,柱温室温.结果:秦皮乙素、千金子素L1、千金子素L2和千金子素L3分别在3.23 ～ 162 mg·L-1(r =0.9998),3.02～152 mg·L-1(r =1.000 0),1.84 ～91.8 mg·L-1(r =0.999 9)和3.64 ～ 182 mg·L-1(r=1.000 0)线性关系良好;平均加样回收率分别为98.2％ (RSD 1.9％),99.8％ (RSD 2.3％),100.9％ (RSD 1.9％),101.9％ (RSD 2.5％).结论:该方法简便、可靠,重复性好,结果准确,可用于比较不同产地千金子不同药用部位的质量差异.     

GC-FID测定大鼠静脉注射新型醒脑静后龙脑的血药浓度及药动学研究

目的:建立大鼠血浆中龙脑浓度的GC-FID测定方法,探讨新型醒脑静静脉注射后龙脑在大鼠体内的药代动力学过程.方法:大鼠以10.00 mg· kg-1(以艾片量计)剂量尾静脉注射新型醒脑静后,0.5,1,3,5,8,12,20,30,45 min眼底采血,分离血浆,十八烷为内标,乙酸乙酯萃取,GC-FID测定血浆中龙脑浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数.结果:龙脑血药浓度在1.67～16.67 mg·L-1线性关系良好,r =0.999 6,测得低、中、高浓度萃取回收率分别为(92.81±1.11)％,(85.38±0.86)％,(84.58±0.58)％;日内、日间精密度RSD均小于3.0％.静脉注射新型醒脑静后,龙脑在大鼠体内药动学符合二室开放模型,主要药动学参数为t1/2α=(1.18±0.20) min,t1/2β=(22.27±6.85) min,Cmax(Calc)=(18.76±2.10) mg·L-1,MRT=(23.84±7.67) min-1,AUC =(100.00±15.85) mg·min·L-1.结论:建立的GC-FID适用于龙脑血浆药物含量测定及药代动力学研究,新型醒脑静中龙脑在体内分布迅速,代谢较快.     

胶束电动毛细管色谱法测定草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的含量

目的:建立胶束电动毛细管色谱快速测定草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法.方法:采用未涂层石英毛细管(31.2 cm×75 μm,有效长度21 cm),分离电压15 kV,检测波长286 nm,背景缓冲液组成为20 mmol· L-pH 7.0硼砂-5 mmol·L-1 SDS-10％乙腈.结果:在选定实验条件下,山姜素和小豆蔻明在4 min内即可达到完全分离,并与峰面积线性关系良好,线性范围分别为25.2 ～251.1 mg·L-1(r =0.996 2),27.9 ～167.4 mg·L-1(r=0.999 5);平均回收率分别为102.4％ (RSD2.46％)和97.1％ (RSD2.72％).结论:该方法操作简便,分析速度快,用于草豆蔻样品测定,结果满意.     

HPLC测定大剂量甲氨蝶呤患者血药浓度

目的:建立HPLC测定血清中甲氨蝶呤浓度的方法。方法:采用Gold色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(19∶81,pH 7.2),检测波长306 nm,柱温35℃,样品经高氯酸沉淀蛋白后,再用氢氧化钠中和,进样。结果:血清样品回收率分别为90.2%,94.4%,101.2%,日内和日间误差RSD9.0%,最低检测浓度为0.002μmol.L-1,低浓度在0.01～1.38μmol.L-1线性良好,r=0.999 7;高浓度在1.38～103.5μmol.L-1线性关系良好r=0.999 5。结论:本方法简便、灵敏、线性范围宽、准确。     

HPLC测定藏药樱草杜鹃中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量

目的:建立藏药樱草杜鹃中金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素含量的HPLC测定方法,为药材质量控制与评价提供参考.方法:采用HPLC,Welch Ultimate XB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温30℃,流速1.0 mL· min-,进样量10μL,检测波长350 nm,流动相A乙腈-甲醇(5∶1)-B 0.1％甲酸,二元梯度洗脱.结果:3种成分在70 min内达到良好分离,金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素线性范围分别为4.41 ～88.20 mg·L-1(r =0.999 6),2.94 ～58.80 mg·L-1(r =0.9996),1.485～29.70 mg·L-1(r =0.999 6);加样回收率分别为103.37％(RSD 1.67％),98.07％ (RSD 1.41％),100.19％(RSD 1.20％).结论:方法操作简单、结果准确、重复性较好,可作为藏药樱草杜鹃质量控制的有效方法之一.     

远志寡糖酯类化合物及远志NFDE8酮Ⅲ对CYP450酶的活性影响研究

该研究采用人肝微粒体体外孵育的方法,通过特异性探针反应评价从远志中分离得到的寡糖酯类化合物tenuifoliside C,tenuifoliside D,telephiose A,telephiose C和远志酮Ⅲ对8个CYP450酶亚型的抑制作用。分别以非那西丁(CYP1A2)、香豆素(CYP2A6)、紫杉醇(CYP2C8)、双氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A4)、S-美芬妥因(CYP2C19)作为评价CYP450酶活性的体外探针药物,以高效液相色谱法(HPLC)分别测定其代谢产物对乙酰氨基酚、7-羟基香豆素、6α-羟基紫杉醇、4’-羟基双氯芬酸、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、1’-羟基咪达唑仑、4’-羟基美芬妥因的生成量,评价5个单体化合物对CYP450酶活性的影响。研究结果表明,4个寡糖酯类化合物和远志酮Ⅲ对CYP2E1有显著的抑制作用(抑制率>50%),对其他7个亚型CYP1A2,CYP2A6,CYP2C8,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A没有明显抑制作用。IC50分别为38.73,54.14,61.77,62.22,50.56μmol·L-1。     

HPLC-ELSD 同时测定白英中延龄草苷和去半乳糖替告皂苷的含量

目的:建立同时测定白英中延龄草苷(trillin)和去半乳糖替告皂苷(desgalactotigonin)含量的HPLC-ELSD法。方法:采用Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-10 mmol.L-1醋酸铵溶液52∶48,柱温25℃,流速0.6mL.min-1,进样量20μL,检测器漂移管温度为95℃,氮气流速2.3 L.min-1。结果:延龄草苷和去半乳糖替告皂苷分别在20～200 mg.L-1(r=0.999 8)和10～100 mg.L-1(r=0.999 7)内线性关系良好。延龄草苷的平均回收率为99.4%,RSD为0.90%;去半乳糖替告皂苷的平均回收率为100.3%,RSD 1.1%。结论:该方法准确,重复性良好,适用于白英药材的质量控制。     

HPLC测定宁夏枸杞中东莨菪素和东莨菪苷含量

目的:采用高效液相色谱法,建立宁夏枸杞中东莨菪素和东莨菪苷的含量测定方法.方法:色谱条件,Diamonsil C8柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A为乙腈-水-醋酸(5∶94.5∶0.5),流动相B为乙腈-水-醋酸(72∶27.5∶0.5),梯度洗脱.流速1 mL· min-1,柱温30℃,检测波长346 nm.结果:东莨菪素在0.1 ～10 mg·L-1线性关系良好,回归方程Y=32 568X+637.8(r2 =0.999 9),平均回收率98.2％,RSD 1.45％;东莨菪苷在0.1～ 10 mg·L-线性关系良好,回归方程Y=23 951X+746.7(r2=0.999 9),平均回收率101.6％,RSD 1.27％.结论:该方法准确可靠,可用于测定宁夏枸杞中东茛菪素和东莨菪苷的含量,为宁夏枸杞开发利用提供理论依据.     

HPLC测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷的含量

目的:测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷的含量.方法:采用HPLC,色谱条件为Dikma Diamonsil C18(钻石)(4.6mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1％醋酸(16∶84)为流动相,流速1 mL· min -1,检测波长332 nm,柱温室温.结果:毛蕊花糖苷在8.24 ～206 mg·L-1线性关系良好(r =0.9995),加样回收率为98.74％,RSD为2.31％(n=6),重复性RSD为2.12％(n=6).结论:该方法简便可行,重复性好,可用于裸花紫珠药材的质量控制.     

HPLC测定截叶铁扫帚不同药用部位中槲皮素、山奈酚的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定截叶铁扫帚不同药用部位中槲皮素、山奈酚含量的方法.方法:采用Daisogel Sp-ODS-BP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相甲醇-0.2％磷酸(63∶37),流速1.0 mL·min-1,柱温25℃,检测波长360nm.结果:槲皮素在6.25～100 mg·L -呈良好的线性关系(r =0.999 9),加样回收率100.75％,RSD 1.92％,山奈酚在0.638～20.4 mg·L -呈良好的线性关系(r =0.999 9),加样回收率为99.76％,RSD 1.99％.根、枝、叶部位槲皮素的平均质量分数分别为9.00,41.79,221.86 μg·g-1,山奈酚的平均质量分数分别为3.09,7.52,40.72 μg·g-1.结论:该方法简便快速,结果准确可靠,可作为截叶铁扫帚不同药用部位的含量测定方法,为合理开发利用截叶铁扫帚资源提供理论依据.     

液相色谱质谱联用法测定静脉复合麻醉患者血浆中舒芬太尼的浓度

 目的 建立液相色谱质谱联用（LC-MS/MS）测定静脉复合麻醉患者血浆中舒芬太尼的药物浓度方法。方法 血浆样品经2 mol· L^-1 NaOH溶液20 μL碱化后用乙醚萃取,以芬太尼为内标,采用LC-MS/MS测定。色谱柱为Diamonsil C₁₈柱（4.6 mm×150 mm, 5 μm）,以甲醇-5 mmol·L^-1醋酸铵-醋酸（74∶26∶0.5）为流动相,流速为0.5 mL·min^-1;质谱条件采用TIS离子源,检测方式为正离子电离,多离子反应监测（MRM）,用于定量分析的离子反应分别为m/z 387.2→m/z 238.2（舒芬太尼）和m/z 337.4→m/z 188.2（芬太尼）。结果 舒芬太尼在0.01~1.00 μg·L^-1（r=0.998 1）内线性关系良好,高、中、低3浓度的提取回收率在64.2%以上,日内、日间精密度均小于11.6%。结论 本试验建立的舒芬太尼血药浓度的测定方法简单、快速、准确、灵敏,可用于临床上复合麻醉中小剂量应用舒芬太尼患者的血药浓度测定及临床药动学研究。     

HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、 五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量

目的:建立HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量.方法:采用Phenomenex Kinetex C18柱,以乙腈-水梯度洗脱,流速1 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:五味子醇甲在21.56～215.6mg·L-1(r=0.999 9),五味子酯甲在6.500～65.00 mg·L -1(r=1),五味子甲素在3.460～34.60 mg·L-1(r=0.999 9),五味子乙素在6.920～69.20 mg·L-1(r=0.999 9),丹参酮ⅡA在2.400～24.00 mg·L-1(r =0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率五味子醇甲为97.92％,RSD 2.34％(n=6);五味子酯甲为100.28％,RSD 2.57％(n=6);五味子甲素为98.34％,RSD 2.73％ (n =6);五昧子乙素为98.06％,RSD 1.61％ (n =6);丹参酮ⅡA为99.13％,RSD 1.42％ (n =6);结论:本法简便、灵敏度高、重复性好,可用于益心舒片的质量控制.     

金铁锁体外抗氧化活性研究

目的:研究金铁锁体外抗氧化活性.方法:采用清除采用清除二苯代苦味酰基( DPPH)自由基、清除[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基及铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法,对金铁锁体外抗氧化活性进行评价,并阳性对照没食子酸丙酯(PG)、丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)比较.结果:金铁锁3个提取物体外抗氧化活性均弱于阳性对照PG,BHA,BHA.在3个提取物中,金铁锁乙酸乙酯提取物清除ABTS自由基(IC50=40.54mg·L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC=(696.9±2.42) μmol·g-1]较强;正丁醇清除ABTS自由基(IC50=83.38 mg· L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC =(166.1±1.06) μmol· g-1]次之,石油醚提取物最弱.结论:金铁锁乙酸乙酯部位体外抗氧化活性较强.     

紫丁香苷在大鼠体内的药动学研究

目的建立反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中紫丁香苷并进行药动学研究。方法大鼠血浆样品经甲醇沉淀蛋白,以甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(30∶70)为流动相,用Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm,Dikma)分离,检测波长为265 nm。结果紫丁香苷的线性范围为0.24～30.00μg/mL。日内、日间精密度RSD小于7.6%,准确度(RE)在±5.5%范围内。提取回收率大于70%。此法应用于大鼠尾静脉注射紫丁香苷(1.35 mg/kg)的药动学研究,AUC(0-t)为(3.26±0.60)μg.h/mL,t1/2为(0.41±0.04)h。结论该方法简便、专属性强,适用于紫丁香苷的药动学研究。     

三角叶黄连愈伤组织诱导和培养条件的优化

目的:对三角叶黄连愈伤组织的培养条件进行优化,建立三角叶黄连组织培养的技术体系.方法:采用响应面方法( RSM)中的Box-Behnken设计方法优化三角叶黄连愈伤组织增殖的最佳激素配比;考察不同培养基、外植体、温度、光照条件对三角叶黄连愈伤组织诱导的影响.结果:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率最高,为12.67％,最佳培养条件为(15±2)℃,暗培养.2,4-D,KT是影响三角叶黄连愈伤组织形成的主要因素,其次为NAA.结论:三角叶黄连愈伤组织诱导的最适培养基为6,7-V +2,4-D0.5 mg·L-1+KT 2.0 mg·L-1,增殖的最适培养基为6,7-V +2,4-D 4.6 mg·L-1+KT3.8 mg·L-1+NAA2.4 mg·L-1.