脾虚型慢性乙型肝炎患者树突细胞功能的变化

目的 探讨脾虚型慢性乙型肝炎患者树突状细胞(DC)的功能变化.方珐分离培养慢性乙型肝炎脾虚、非脾虚患者及健康人外周血DC,以倒置显微镜和电镜观察DC外部形态和超微结构,流式细胞仪测定DC表面HLA-DR、CD86、CD80、CD40、CD14、CD11c的表达,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能.结果 慢性乙型肝炎脾虚组DC表面的协同刺激分子HLA-DR、CD86、CD80、CD40、CD11c均较正常对照组明显降低(P<0.01);与非脾虚组相比,脾虚组HLA-DR、CD80、CD11c降低明显(P<0.05).两组DC的刺激活性均降低,且脾虚组比非脾虚组降低更明显(P<0.05).结论 慢性乙型肝炎脾虚患者的DC成熟度降低,功能缺陷,提示脾虚与DC成熟障碍具有明显的相关性.     

健脾方对慢性乙型肝炎脾虚患者树突细胞的影响

目的研究健脾方对慢性乙型肝炎患者树突细胞功能的影响。方法60例慢性乙肝脾虚患者随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组给予健脾方和干扰素(赛诺金),对照组给予赛诺金,疗程均为6个月。分离培养外周血DC,流式细胞仪测定DC表面HLA-DR、CD86、CD80、CD40、CD14、CD11c的表达,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能。结果治疗组DC表面的CD86、CD80、CD40、CD11c明显高于对照组(P<0.01或P<0.05);刺激指数、IFN-γ、IL-12、IL-10的变化亦显著优于对照组(P<0.05)。结论提示健脾方可明显改善DC的功能,调节免疫功能可能是其提高临床疗效的机理之一。     

健脾方对脾虚型慢性乙型肝炎患者树突细胞功能的影响

目的研究健脾方对慢性乙型肝炎（简称慢乙肝）患者树突细胞（DC）功能的影响。方法筛选慢乙肝脾虚证患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例。对照组给予干扰素（赛诺金500万U,肌肉注射,每周3次）,治疗组在此基础上加用健脾方（每日1剂,分2次服用）,用药6个月。分离培养外周血DC,流式细胞仪测定DC表面HLA-DR、CD86、cD80、CD40、CD14、CD11c的表达,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能,治疗前后各检测1次。结果治疗组DC表面的CD86、CD80、CD40、CD11c明显高于对照组（P〈0．01或P〈0．05）。刺激指数、IFN-γ、IL-12的变化亦显著优于对照组（P〈0．05）。结论健脾方明显改善DC的功能,调节免疫功能可能是其提高临床疗效的机理之一。     

补肾冲剂联合干扰素治疗慢性乙型肝炎及其对树突状细胞的影响

目的:观察干扰素联合补肾冲剂治疗慢性乙型肝炎(chron ic hepatitis B,CHB)的疗效,探讨该药物对CHB患者树突状细胞(dentritic cells,DCs)的影响。方法:收集CHB患者60例,随机分为治疗组及对照组,治疗组给予补肾冲剂联合干扰素治疗,对照组单用干扰素治疗,疗程均为6个月。分离扩增外周血单个核细胞中DC,流式细胞法检测DC表面CD86、CD80、CD40、CD14、CD11c、HLA-DR的表达。检测同种异体T淋巴细胞混合培养后的刺激指数及培养上清液中IFN-γ、IL-10表达。结果:治疗后治疗组ALT、AST改善较对照组明显,P<0.05;治疗后治疗组HBVDNA对数均值明显低于对照组,具有显著差异(P<0.05)。治疗后治疗组淋巴细胞混合实验中IFN-γ明显高于对照组(P<0.05)。结论:中药补肾冲剂与干扰素联合治疗CHB在改善肝功能、降低HBVDNA数量方面疗效更,且对IFN-γ有明显的升高作用,提示其疗效机理可能在于提高患者的细胞免疫能力。     

健脾方联合干扰素治疗脾虚型慢性乙型肝炎的临床观察

目的:观察健脾方联合干扰素治疗脾虚型慢性乙型肝炎的疗效。方法:慢性乙型肝炎脾虚患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例,治疗组予健脾方合干扰素,对照组予干扰素,治疗6月。结果:治疗组患者大部分临床症状明显改善;两组ALT的复常率分别为83.3%和60.0%,具有显著性差异(P<0.05);DNA对数均值变化亦优于对照组。结论:健脾方联合干扰素对脾虚型慢性乙型肝炎患者有一定的临床疗效。     

慢性乙型重型肝炎黄疸证患者外周血树突状细胞功能的研究

目的:比较慢性乙型重型肝炎阳黄证和阴黄证患者的树突状细胞功能。方法:体外培养上述病人外周血树突状细胞,流式细胞仪检测其表面分子CD80、CD86、CD40、HLA-DR、CD1a的表达,MLR中刺激T细胞的增殖和分泌IL-12、IFNα的能力。结果:阴黄证患者的DC表面分子CD86的表达较阳黄证组下降(P<0.05)。其他表面分子,如CD40、HLA-DR、CD1a和CD80,阳黄证与阴黄证两组无明显差异;经TNFα刺激后,上述各表面分子的表达较未加TNFα组均有上调,但阴黄证组CD80、CD86、HLA-DR上调的幅度低于阳黄证组(P<0.05)。阴黄证患者组自身T淋巴细胞增殖的能力较阳黄证患者组为低,但差异无显著性意义(P>0.05);经DC刺激后,阴黄证患者的T淋巴细胞的增殖效果明显低于阳黄证组(P<0.05)。阳黄证和阴黄证患者的IL-12和IFNα水平未经TNTα刺激前无明显差异,经TNTα刺激后两组的IL-12和IFNα水平较同组未经TNTα刺激者明显升高(P<0.05)。但阴黄证组上升的幅度低于阳黄证组(P<0.05)。结论:慢性乙型重型肝炎阳黄证和阴黄证患者均存在明显外周血DC功能障碍,运用TNFα激活可提高DC的部分功能,阴黄证患者的外周血DC细胞功能低下较阳黄证患者更为明显。     

补肾解毒方与健脾解毒方含药血浆对慢性乙肝病毒感染不同免疫状态患者外周血树突状细胞功能的影响

目的比较补肾解毒方和健脾解毒方对慢性乙肝病毒(HBV)感染不同免疫状态患者外周血树突状细胞(DCs)功能的影响。方法选择36例湖南中医药大学第一附属医院2010年4月—2011年1月门诊慢性HBV感染患者,根据患者免疫状态分为免疫耐受组(18例)、免疫清除组(18例),另选择10名健康人作健康组。分别采集抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养DCs,采用大鼠补肾解毒方和健脾解毒方含药血浆进行干预。对DCs进行形态学鉴定,并检测DCs表型CD1α、CD80、CD86、HLA-DR表达,观察DCs培养上清液干扰素-α(interferon-α,IFN-α)的水平。结果免疫清除组患者干预前CD80低于健康组(P<0.05);免疫耐受组患者干预前CD80、CD86、HLA-DR均低于健康组;免疫耐受组与免疫清除组干预前IFN-α低于健康组(P<0.05),免疫耐受组患者干预前CD80、HLA-DR、IFN-α低于免疫清除组(P<0.05)。与本组干预前比较,各给药组CD80表达均升高(P<0.05)。免疫耐受组患者干预后CD80、HLA-DR高于免疫清除组同期,补肾解毒方组CD86高于免疫清除组同期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾解毒方中剂量和健脾解毒方小剂量均能促进慢性HBV感染患者DCs功能的恢复,且补肾解毒方对慢性HBV感染免疫耐受期患者DCs功能的影响更为显著。     

慢性HBV感染不同免疫状态肝郁脾虚证与肝胆湿热证患者外周血树突状细胞功能研究

目的 观察慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染不同免疫状态肝郁脾虚证和肝胆湿热证患者外周血树突状细胞( dendritic cells,DCs)的功能变化,了解慢性HBV感染两证型的免疫表达特点,为中医辨证提供客观化依据.方法 选取40例慢性HBV感染患者,根据免疫状态分为两组,慢性乙型肝炎组(免疫清除状态)20例,其中肝郁脾虚证10例,肝胆湿热证10例;慢性HBV携带组(免疫耐受状态)20例,其中肝郁脾虚证10例,肝胆湿热证10例;另选取湖南中医药大学研究生志愿者体检健康者10名为健康对照组,分别对其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行体外培养,以倒置显微镜和电镜观察DCs外部形态和超微结构,检测DCs的表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD1a的表达及白细胞介素-12(IL-12)水平,采用MTT法检测其同种异体混合淋巴细胞增殖能力以比较DCs在慢性HBV感染不同阶段两证型中的功能特点,分析两证型间DCs各指标的差异.结果 与健康对照组比较,慢性HBV携带组两个证型患者CD86、CD80及HLA-DR表达率降低,慢性乙型肝炎组两个证型患者CD80表达率降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).患者组肝郁脾虚证患者CD86、HLA-DR低于肝胆湿热证,慢性HBV携带组肝郁脾虚证CD80低于肝胆湿热证,差异均有统计学意义(P＜0.05).患者组IL-12及T淋巴细胞增殖能力低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).慢性乙型肝炎组肝郁脾虚证患者IL-12及T淋巴细胞增殖能力低于肝胆湿热证,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性HBV感染不同免疫状态肝郁脾虚证与肝胆湿热证患者外周血DCs功能存在差异.DCs表型及功能检测在疾病的同一阶段可为中医辨证分型提供客观化指标,反映两证型免疫表达的特点及免疫学内涵.     

新加达原饮对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的影响

目的观察新加达原饮对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)的影响。方法对20例CHB患者均给予新加达原饮治疗,疗程12周。于治疗前及治疗4、8、12周时采集抗凝外周静脉血,分离扩增单个核细胞中DC,流式细胞法检测DC表型,同步检测患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)及HBV DNA水平,并以10例健康人作为正常对照。结果与正常对照组比较,CHB患者外周血DCs表面CD80、CD86、CD-1α、HLA-DR表达显著下降(P0.01)。经新加达原饮治疗后,DCs表面分子表达水平均提高,在治疗12周时最显著(P0.01)。与治疗前比较,CHB患者治疗后ALT升高,于治疗8周时最显著(P0.01),治疗12周时明显下降(P0.01);HBV-DNA水平下降,治疗12周时下降最显著(P0.01)。结论 CHB患者外周血DCs表面分子表达水平低下,新加达原饮能上调DC表型表达。     

乙型肝炎相关性肝衰竭阴、阳黄证患者外周血DCs功能比较研究

目的：比较乙型肝炎（HBV）相关性肝衰竭阴黄证、阳黄证患者外周血树突状细胞（DCs）功能,研究阴黄证、阳黄证两证型DCs 的免疫表达特点。方法：将HBV 相关性肝衰竭黄疸症患者分为阳黄组与阴黄组两组,另设健康对照组,以外周血来源的PBMCs 体外分离诱导培养DCs,应用流式细胞计数检测DCs 的表面分子HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1α,并检测DCs 的上清液中IFN-α、IL-4 的分泌水平,比较HBV 相关性肝衰竭患者阴、阳黄证与免疫细胞及炎症因子表达的差异。结果：与健康组比较,HBV 相关性肝衰竭患者DCs 表型HLA-DR、CD1α、CD83、CD80、CD86 表达率显著下降（P<0.01）,DCs 分泌因子IFN-α显著升高（P<0.01）;与阳黄组比较,HBV 相关性肝衰竭患者阴黄组CD83、CD86表达率显著降低（P<0.01）,IL-4 表达显著增强（P<0.01）;与阴黄组比较,阳黄证组DCs 分泌因子IFN-α表达显著增强（P<0.01）。结论：阴黄、阳黄两组HBV 相关性肝衰竭患者的DCs 功能状态均表现为细胞免疫功能低下,阴黄证患者的细胞免疫功能更低,存在抗炎症细胞因子表达增强;阳黄证患者存在炎症因子过度释放。     

补肾解毒方与健脾解毒方对慢性乙肝患者不同阶段的T淋巴细胞功能影响的研究

目的:比较补肾解毒方和健脾解毒方对乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染患者在不同免疫状态下外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响。方法:选取本院感染科2013年9月至2014年5月门诊慢性HBV感染患者40例,据患者不同免疫状态分为清除组和耐受组,另选本院健康职工10例作为对照组。采用大鼠补肾解毒药物血浆和健脾解毒药物血浆进行干预。以T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD28+分子的表达及干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的水平作为研究指标,判断干预对外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响情况。结果:各组健脾组和补肾组血浆在干预后CD3+、CD4+、CD8+、CD28+的表达均显著升高,耐受组中P<0.05,补肾组血浆干预后CD28+及CD8+分子显著高于健脾组,P<0.05;两种药物血浆分别干预后,CD28+分子表达均显著高于清除组同期,P<0.05。结论:健脾解毒法和补肾解毒法均能促进慢性HBV感染患者T细胞功能的恢复,免疫耐受期可能是中医药治疗的一个重要时期,补肾解毒药物效果优于健脾毒药物,需要分子实验和临床实验提供更多循证依据。     

Influences of AMY1 gene copy number and protein expression on salivary alpha-amylase activity before and after citric acid stimulation in splenic asthenia children

OBjECTIVE:To compare the correlations between salivary alpha-amylase(sAA) activity and amylase,alpha 1(salivary) gene(AMY1) copy number or its gene expression between splenic asthenia and healthy children,and investigate the reasons of attenuated sAA activity ratio before and after citric acid stimulation in splenic asthenia children.METHODS:Saliva samples from 20 splenic asthenia children and 29 healthy children were collected before and after citric acid stimulation.AMY1 copy number,sAA activity,and total sAA and glycosylated sAA contents were determined,and their correlations were analyzed.RESULTS:Although splenic asthenia and healthy children had no differences in AMY1 copy number,splenic asthenia children had positive correlations between AMY1 copy number and sAA activity before or after citric acid stimulation.Splenic asthenia children had a higher sAA glycosylated proportion ratio and glycosylated sAA content ratio,while their total sAA content ratio and sAA activity ratio were lower compared with healthy children.The glycosylated sAA content ratio was higher than the total sAA content ratio in both groups.Splenic asthenia and healthy children had positive correlations between total sAA or glycosylated sAA content and sAA activity.However,the role played by glycosylated sAA content in sAA activity in healthy children increased after citric acid stimulation,while it decreased in splenic asthenia children.CONCLUSION:Genetic factors like AMY1 copy number variations,and more importantly,sAA glycosylation abnormalities leading to attenuated sAA activity after citric acid stimulation,which were the main reasons of the attenuated sAA activity ratio in splenic asthenia children compared with healthy children.     

慢性无症状HBV携带者阴虚体质与人类白细胞抗原-DRB1、DQA1基因多态性的联系

目的 探讨慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carrier,ASC)阴虚体质与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1、HLA-DQA1基因多态性的内在联系。方法 将105例ASC患者进行中医体质分型及分组：阴虚质组47例和非阴虚质组58例。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术测定HLA-DRB1、HLA-DQA1等位基因型。结果 阴虚质组HLA-DRB1*09、HLA-DQA1*0301的基因频率明显低于非阴虚质组(分别为12.1% vs 27.8%,19.1% vs 39.7%),差异有统计学意义(P<0.01);HLA-DRB1*11、HLA-DQA1*0501的基因频率明显高于非阴虚质组(分别为12.1% vs 4.3%,28.7% vs 9.5%),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 HLA-DRB1*09和HLA-DQA1*0301可能是ASC非阴虚体质患者的分子基础;HLA-DRB1*11和HLA-DQA1*0501可能是ASC阴虚体质患者的分子基础。     

哮病急性期脾虚的重要性及其证候学特点

目的:探讨脾虚在哮病急性期各证型中的构成比及脾虚的中医证候学特点,为临床治疗提供一定参考依据。方法:选择符合诊断标准的哮喘急性发作期患者136例,统计脾虚在哮病急性期(寒哮、热哮、浊哮三型)所占比例,并进行中医证候学特点分析。结果:上述三型(寒哮、热哮、浊哮)其中将其分成三组病人,脾虚在三组的发生比例分别为57.7%、46.4%、73.1%。在咳嗽咳痰、咳痰量、活动后喘憋、口干、口黏、胃纳情况、腹胀、体倦乏力、恶心呕吐、少气懒言、舌体胖或边有齿痕等方面三组资料无显著性差异(P>0.05);其中在饮水、大便性状、咳痰性状方面三组资料有显著性差异(P<0.05)。结论:病例136例,其中脾虚患者77例,占56.6%;脾虚在哮病急性期的发病中占有非常重要的地位,且提示应常规给予补气健脾中药治疗。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P＜0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P＜0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.     

HBeAg阳性与阴性慢性乙型肝炎患者中医辨证及其相关指标的比较

目的探讨HBeAg阳性与阴性慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者中医辨证及其相关指标的相关性。方法对226例慢乙肝患者进行中医辨证分型,检测乙肝两对半、乙肝病毒DNA定量和肝功能、肝纤维化指标。结果各证型的乙型肝炎病毒(HBV)水平呈一定规律性,肝郁脾虚型>肝肾阴虚型>湿热中阻型>脾肾阳虚型>瘀血阻络型,随着病情的活动、病程的推延,HBV水平逐渐下降。无论HBeAg阳性与阴性,慢乙肝患者肝郁脾虚、肝肾阴虚、脾肾阳虚、瘀血阻络各型与湿热中阻型相比肝功能和肝纤维化指标均存在显著性差异。结论各证型的HBV水平呈一定规律性,提示病毒滴度与中医病因病机的转化有一定关系。湿热中阻和瘀血阻络是肝纤维化的关键。     

不同剂量运脾方对脾虚大鼠小肠功能的影响

目的观察治疗儿童厌食症的有效方药运脾方不同剂量对脾虚大鼠小肠功能的影响,探索运脾方临床治疗效果的作用机理。方法建立利血平致脾虚动物模型,设立正常组、模型组、阳性对照组(消食健儿糖浆组)、运脾方大剂量组、运脾方中剂量组、运脾方小剂量组,测定大鼠体重变化及食量消耗,观察大鼠尿D-木糖排泄率。结果运脾方能明显增加脾虚大鼠的食量和体重,增加D-木糖的排泄率。结论运脾方能够改善脾虚大鼠小肠吸收功能,并呈量效关系。     

健中愈疡片治疗脾虚型胃溃疡的临床与实验研究

目的:用临床观察及动物实验研究健中愈疡片治疗脾气虚型胃溃疡的效果及机理。方法:临床观察从症状、体征、症候疗效方面观察健中愈疡片治疗脾气虚型胃溃疡的效果,动物实验从精神、活动、食欲、皮毛及肠胀气等方面观察健中愈疡片对脾虚证的改善情况。结果:健中愈疡片组治疗后,患者胃脘疼痛、嗳气泛酸、腹胀痞满、纳呆食少、大便稀溏、体倦乏力等症状的改善与治疗前比较具有极显著性差异(P<0.01),效果优于胃舒平片组和法莫替丁胶囊组(P<0.05)。健中愈疡片组治疗后,大鼠精神转好,食欲增加,被毛转光泽,体重增加,肠胀气明显好转,与模型组比较具有极显著的差异(P<0.01)。结论:健中愈疡片正是从改善脾气虚证入手来促进脾气虚型胃溃疡患者的溃疡愈合速度和愈合质量,改善其各种临床症状,从而达到治疗目的。     

脾虚在哮病急性期的构成比及中医证候学特点

目的:探讨脾虚证候在哮病急性期中的构成比及脾虚证候学特点.方法:选择符合诊断标准的哮病急性发作期患者272例,统计脾虚在哮病急性期(热哮、浊哮、寒哮)的构成比,并对脾虚在该病的中医证候学特点进行分析.结果:哮病患者272例中,脾虚证型的哮病患者164例,占60.29％(95％ CI=52.80％～67.78％);经过辨证分型,其中脾虚证寒哮型患者52例,占寒哮型患者的57.78％ (95％ CI =44.36％～71.20％);脾虚证热哮型患者36例,占热哮型患者的64.29％ (95％ CI=48.64％～79.94％);脾虚证浊哮型患者76例,占浊哮型患者的73.08％ (95％ CI =63.11％～83.05％).结论:脾虚证候在哮病发作期占有重要地位,提示中医治疗脾虚型哮病采用补肺固卫、益气健脾治则具有重要意义.     

电针对脾虚证幼鼠海马区神经干细胞增殖和分化的影响

目的:通过观察电针对脾虚证幼鼠海马齿状回区神经干细胞增殖和分化的影响,探讨电针对中枢神经细胞损伤的保护和治疗作用。方法:4周龄SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组,每组各24只。3组再分别随机分为7、14、28和49 d等4个亚组,每亚组6只。用利血平腹腔注射联合大黄灌胃造脾虚证模型。造模结束后,电针组取双侧"足三里"和"三阴交"穴,每次电针20 min,每日1次,直至大鼠被处死。运用双重免疫组化法检测大鼠海马齿状回区5-溴脱氧尿苷(Brdu)、Brdu/巢蛋白(Nestin)、Brdu/神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Brdu/神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞数。结果:与正常组同时相比较,Brdu、Brdu/GFAP、Brdu/NSE阳性细胞的表达在模型组7 d组和14 d组显著降低(P<0.05);Brdu、Brdu/Nestin、Brdu/GFAP阳性细胞的表达高峰出现在电针组14 d组,而Brdu/NSE阳性细胞表达的高峰出现在电针组28 d组,与同时相模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脾虚证可导致神经干细胞增殖和分化能力降低。电针"足三里"三阴交"穴可促进脾虚证大鼠海马齿状回区神经干细胞的增殖,适当地促进增殖的神经干细胞向星形胶质细胞及神经元方向分化。