癌平口服液含药血清对人胃癌细胞凋亡的影响

目的：研究中药复方癌平口服液对人胃癌细胞凋亡的影响。方法：采用癌平口服液含药血清，温育体外培养的人胃癌细胞BGC-823，通过流式细胞仪细胞周期DNA含量分析，研究该方对体外培养的人胃癌细胞BGC-823凋亡的影响。结果：癌平口服液药物血清有诱导体外培养的人胃癌细胞BGC-823凋亡的作用。结论：诱导胃癌细胞凋亡是癌平口服液抗癌作用的机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

性激素对体外培养特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核系组细胞集落的作用

目的：观察雌二醇(E2)、睾酮(T)对体外培养的特发性血小板减少性紫癜(Idiopathic Thrombocytopenic purpura，简称ITP)患者骨髓巨核系组细胞(CFU--Meg)集落影响作用。方法：采用Messner甲基纤维素法体外CFU-Meg培养技术，随机将每一患者骨髓细胞培养皿分为3组，空白对照组、加E2组和加T组，观察比较3组CFU--Meg集落生成情况。结果：E1组CFU-Meg集落数明显少于空白对照组(P＜0．01)，而T组则和空白对照组无显著差异(P＞0．05)。结论；E2有明显抑制ITP患者骨髓CFU--Meg集落生成作用，而T则无明显作用。     

苦参碱对人结肠癌HT29细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究苦参碱（matrine,MA）对人结肠癌HT29细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法分别采用MTT法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、透射电镜观察MA处理HT29细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。结果2～32mg／mLMA均能抑制HT29细胞增殖（P〈0．05）,其抑制率与作用时间及浓度相关。4、8、16mg／mLMA处理HT29细胞后,G。／G,细胞明显高于阴性对照组（P〈0．05）,提示细胞周期停滞于G0／G1期。透射电镜可见,HT29细胞出现凋亡形态学改变。结论MA对HT29细胞有抑制作用,机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

苦参碱对人结肠癌HT29细胞生长抑制作用的实验研究北大核心CSCD

目的研究苦参碱（matrine,MA）对人结肠癌HT29细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法分别采用MTT法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、透射电镜观察MA处理HT29细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。结果2～32mg／mLMA均能抑制HT29细胞增殖（P〈0．05）,其抑制率与作用时间及浓度相关。4、8、16mg／mLMA处理HT29细胞后,G。／G,细胞明显高于阴性对照组（P〈0．05）,提示细胞周期停滞于G0／G1期。透射电镜可见,HT29细胞出现凋亡形态学改变。结论MA对HT29细胞有抑制作用,机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

从miRNA-17-92途径探讨小檗碱和吴茱萸碱对大肠癌HT29细胞周期调控机制

目的:探讨盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过调控miR-17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期的作用机制,为中医药防治大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,盐酸小檗碱(2.5,5.0,10.0μM)和吴茱萸碱(1.8,3.75,7.5μM)作用于稳定转染miR-17-5p和miR-20a的HT29细胞后,采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量PCR及Western印记法检测药物对HT29细胞增殖、细胞周期分布情况、mRNA表达水平及E2F1蛋白表达的影响。结果:盐酸小檗碱和吴茱萸碱可以抑制转染的HT29细胞增殖,具有时间依赖性;并且盐酸小檗碱和吴茱萸碱分别以浓度5.0、3.75μM作用转染HT29细胞72h后抑制率超过50%,因此盐酸小檗碱取2.5、10.0μM,吴茱萸碱取1.8、7.5μM用于后续实验,二者能够将细胞阻滞在S期,抑制miR-17-5p和miR-20a的表达水平及E2F1的蛋白表达。结论:盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过靶向miR-17-92抑制E2F1蛋白的表达,将细胞阻滞在S期,进而抑制大肠癌HT29细胞的增殖,为中医药防治大肠癌提供新的靶点及实验依据。     

苦参碱对HT29人结肠癌细胞凋亡及Bax和BcL-2蛋白表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌HT29细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 取HT29人结肠癌细胞体外培养,加苦参碱处理24～48 h.采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,采用Western Blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 在2～16 mg/mL苦参碱作用下,HT29细胞增殖被明显抑制,且呈剂量和时间依赖性（P＜ 0.05或P＜0.01）;给予4、8和16 mg/mL苦参碱作用HT29细胞24 h后,细胞凋亡率分别为（14.84±2.35）％、（37.80±2.49）％和（54.10±1.60）％,均明显高于对照组（4.36±0.23）％（P＜0.05）;经苦参碱作用24 h后,细胞Bax蛋白表达增加,而BcL-2表达减少,呈剂量依赖性.结论 苦参碱能抑制HT29细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与抑制BcL-2和促进Bax蛋白表达有关.     

乌梅黄连复方对人结肠癌Lovo和HT29细胞株抗增殖作用的实验研究

目的:观察乌梅黄连复方对人结肠癌细胞株(Lovo细胞和HT29细胞)增殖的抑制作用。方法:体外培养结肠癌细胞株Lovo和HT29细胞,采用不同浓度的乌梅黄连复方(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg/mL)对其进行干预,通过细胞形态学和MTT法检测乌梅黄连复方对人结肠癌(Lovo和HT29)细胞增殖的抑制作用。结果:乌梅黄连复方对人结肠癌细胞株Lovo和HT29均具有细胞毒作用,药物对Lovo细胞和HT29细胞生长抑制作用的IC_(50)分别为(7.74±0.13)mg/mL和(4.55±0.25)mg/mL。结论:乌梅黄连复方对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用。     

吴茱萸碱和小檗碱对HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响

目的：探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法：体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡变化,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果：吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论：吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞凋亡。     

鸦胆子油联合卡培他滨通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导人结直肠癌细胞周期阻滞和增殖抑制

目的:探讨鸦胆子油(Brucea javanica oil,BJO)和卡培他滨(Capecitabine,Cap)合用对体外培养的人结直肠癌LOVO和HT29细胞周期和增殖及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:以CCK-8比色法,检测不同浓度的鸦胆子油(0.0625、0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml)、卡培他滨(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400μM)作用不同时间(2h、12h、24h和48h)以及单独、联合应用对LOVO和HT29细胞增殖能力影响;PI染色分析鸦胆子油、卡培他滨以及联合应用对细胞周期的影响;免疫印迹法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,以及鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达影响;实时荧光定量PCR法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞Wnt3a、β-catenin及其下游Cyclin D1和c-Myc mRNA含量的影响。结果:结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)中β-catenin蛋白和mRNA含量均明显高于正常结直肠上皮细胞系;0.25、0.50和1.00 mg/ml鸦胆子油作用12h(分别为:93.1%,90.8%和90.5%),24h(分别为:76.7%,71.1%和72.7%)可明显抑制LOVO细胞生长,且呈现时间和剂量依赖性的变化,同时抑制HT29细胞,卡培他滨与鸦胆子油作用相同;0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独卡培他滨作用结直肠癌细胞系LOVO和HT29的细胞增殖率明显较低,且具有剂量依赖性,分别为:对LOVO分别为70.9%、67.0%、61.3%和55.7%;对HT29分别为70.1%、58.1%、48.3%和40.4%;1.00 mg/ml鸦胆子油和0.4μM卡培他滨合用于LOVO和HT29细胞48 h的增殖抑制率为55.7%和40.4%,明显低于单独使用0.4μM卡培他滨(72.5%和55.1%);DAPI染色证实,合用1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独鸦胆子油和卡培他滨作用结直肠癌细胞系LOVO和HT29增殖抑制作用更强;联合使用明显增加两种细胞G1/G0期细胞数量,同时增加G2/M细胞数量;再者,联合使用明显抑制细胞Wnt3a、β-catenin蛋白和mRNA及其下游Cyclin D1和c-Myc mRNA含量表达。结论:鸦胆子油和卡培他滨合用可抑制结直肠癌细胞增殖,促进凋亡,该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路和细胞周期阻滞实现的。     

苦参碱抑制人大肠癌HT29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨苦参碱对人大肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。方法分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、透射电镜观察细胞结构变化、基因芯片检测细胞基因表达改变。结果0.0625～0.5mg/mL苦参碱处理48h后,细胞增殖明显受抑制;但1mg/mL时增殖抑制率降低而凋亡诱导作用明显增强;苦参碱对细胞G2/M和G1/S期均有阻滞作用;电镜下可见凋亡的形态学变化;基因芯片检测发现苦参碱影响细胞增殖、周期和凋亡相关基因的表达。结论苦参碱通过影响HT29细胞一些与增殖、周期和凋亡相关基因的表达发挥增殖抑制和凋亡诱导作用,且与苦参碱质量浓度相关。     

Antitumor activity of water extract of a mushroom,Inonotus obliquus,against HT‐29 human colon cancer cells

In the current study, it was demonstrated that the hot water extract of I. obliquus (IOWE) exerts inhibitory activity against the proliferation of human colon cancer cells (HT‐29). The inhibitory effect of IOWE on the growth of HT‐29 cancer cells was evaluated by treating cells with IOWE at concentrations of 0.25, 0.5 and 1.0 mg/mL for 24 or 48 h. The IOWE inhibited cell growth in a dose‐dependent manner, and this inhibition was accompanied by apoptotic cell death. The maximum inhibitory effect (56%) was observed when IOWE was treated at a concentration of 1.0 mg/mL for 48 h. The apoptotic effect of IOWE on HT‐29 cells was also confirmed by flow cytometric analysis. In addition, the apoptotic cell percentage was closely associated with down‐regulation of Bcl‐2 and up‐regulation of Bax and caspase‐3. The results suggest that IOWE would be useful as an antitumor agent via the induction of apoptosis and inhibition of the growth of cancer cells through up‐regulation of the expression of proapoptotic proteins and down‐regulation of antiapoptotic proteins. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的：以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法：以噻唑蓝（MTT）法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果：siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义（P〈0.01）。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异（P〉0.05）。结论：采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。     

粉防己碱对人结肠癌细胞增殖的影响

目的 :观察粉防己碱对人结肠癌细胞 H T2 9增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :采用流式细胞仪分析细胞周期变化 ,并测定细胞内游离钙离子浓度水平 ;MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 :2～ 10 μg/m L 的粉防己碱 (Tet)能明显抑制 HT2 9细胞的增殖 (P<0 .0 5 ) ,其半数抑制浓度 (IC5 0 )约为 8μg/m L。 8μg/m L 的 Tet可以使细胞内游离钙离子浓度 (〔Ca2 +〕i)水平明显降低 (P<0 .0 1)。不同浓度的 Tet可使 HT2 9细胞 C1 期或 G2 + M期明显增加 ,S期细胞明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :粉防己碱通过抑制钙离子信号传递途径 ,使细胞周期进行受阻 ,可能是其抑制 HT2 9细胞增殖的一个主要机制。     

Steroidal Glycosides with Antiproliferative Activities from Digitalis trojana

The phytochemical investigation of Digitalis trojana led to the isolation of two cardiac glycosides (1, 2), one pregnane glycoside (3), three furostanol type saponins (4–6), along with three cleroindicins (7–9), four phenylethanoid glycosides (10–13), two flavonoids (14, 15) and two phenolic acid derivatives (16, 17). The structure elucidation of the isolates was carried out by NMR experiments as well as ESI‐MS. The cytotoxic activity of compounds 1–13 against a small panel of cancer cell lines, namely MCF‐7, T98G, HT‐29, PC‐3, A375 and SH‐SY5Y, was investigated. Compounds 1–6 showed antiproliferative activity against human breast MCF‐7 and colon HT‐29 cancer cell lines with IC₅₀ values ranging from 8.3 to 50 μM. In order to understand the mechanism involved in the cell death, the active compounds were tested as pro‐apoptotic agents using propidium iodide staining by flow cytometry method. No significant increase was observed in the apoptosis of the MCF‐7 and HT‐29 cancer cells. Moreover, the effects of the active compounds on cell proliferation were assessed on the same cancer cell lines by cell cycle analysis of DNA content using flow cytometry. No significative changes were observed in the cell cycle of MCF‐7, while significant changes in G₂/M cell cycle phase of HT‐29 cells were observed after treatment with digitalin (1), cariensoside (3) and 22‐O‐methylparvispinoside B (6) at 10 μM. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

黄芪多糖对毒胡萝卜素诱导人结肠癌系HT29细胞内质网应激的影响

目的探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,AP)对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导人结肠癌系HT29细胞发生内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)时内质网结构变化及相关分子GRP78和CHOP的影响。方法常规培养HT29细胞后,将细胞分为4组:①空白细胞组(Control组):细胞不做任何药物处理;②细胞模型组(Model组):采用1μmol/L Tg诱导HT29细胞建立ERS模型;③黄芪多糖低浓度组(AP-L组);④黄芪多糖高浓度组(AP-H组)。CCK8法检测黄芪多糖对HT29细胞活性,透射电镜观察内质网结构变化,Real-time PCR法检测ERS时GRP78、CHOP mRNA表达情况。结果黄芪多糖浓度分别为1、10μg/mL,且分别作用HT29细胞12、24、36、48 h时,细胞存活率随着浓度的增加而增加,说明对细胞无明显毒副作用。透射电镜观察Control组内质网结构呈网膜状结构,网膜腔不扩张;Model组内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象;AP-L组内质网网膜腔扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;AP-H组内质网形态基本恢复正常,呈网膜状结构,可见数量较少,形态较小的空泡状结构。Real-time PCR法检测结果:与Control组相比,Model组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达明显增加(P<0.05);与Model组比较,AP-L组和AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达均减少(P<0.05);与AP-L组比较,AP-H组HT29细胞GRP78、CHOP mRNA表达减少(P<0.05)。结论黄芪多糖能够抑制Tg诱导HT29细胞发生ERS,其机制可能与降低GRP78和CHOP的表达、减轻内质网应激有关。     

基于聚类分析对中药活性成分逆转HL60/HTM耐药性评价研究

目的:对具有耐药逆转作用的数种中药成分进行聚类分析。方法:MTT比色法测定补骨脂素、补骨脂甲素、姜黄素、槲皮素、贝母碱、异补骨脂定、补骨脂酚、大黄酸八种中药成分HL60/HT细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞内化疗药物HT荧光强度及细胞P糖蛋白表达;测定得到的相关数据,通过聚类分析方法进行药物分组。结果:8种药物的逆转倍数在6.2～12.5之间,HL60/HT细胞中HT浓度在9.6～25.6之间,HL60/HT细胞P-gp表达率在29.3～50.1之间。结论:基于4种实验指标可将八种药物按相似性聚类分成3组:补骨脂素、姜黄素、槲皮素3种成分为第一组,补骨脂甲素、贝母碱、异补骨脂定、大黄酸四种成分为第2组,补骨脂酚为第3组。