温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究＊

目的 观察温阳解郁颗粒（Wenyang Jieyu granule，WYJY）对皮质酮（Corticosterone，CORT）诱导损伤型小鼠海马神经细胞（TH22 cell）的保护作用，基于脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor， BDNF）/酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase B， TrkB）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extra cellular regulated protein kinases， ERK）信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型，以不同浓度的WYJY和氟西汀（Fluoxetine，FXT）含药血清作用于模型细胞，细胞增殖-毒性检测（Cell Counting Kit-8， CCK-8）法分析细胞活性，倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变，采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）、实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR， qPCR）法检测神经细胞内凋亡因子（BCL2-Associated X， Bax）、抗凋亡因子（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶（Phospho-p90RSK， RSK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein， CREB）蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果 在浓度为459.5 μmol·L^-1的CORT作用24 h后，HT22细胞的活性抑制率达到50%，在此条件作用下细胞形态结构损伤明显，凋亡程度严重，细胞上清中BDNF的含量显著减少（P<0.05），细胞内凋亡相关因子Bax/Bcl-2的比值明显升高（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）；以5%的浓度为2.85 g·kg^-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后，HT22细胞存活率明显提升（P<0.01），细胞结构的损伤明显改善，细胞凋亡程度减轻，细胞外BDNF的含量显著升高（P<0.05），细胞内Bax/Bcl-2比值显著下调（P<0.01），BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升（P<0.05，P<0.01）。结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路，放大CREB信号传导，影响Bcl-2、BDNF水平，可能是其保护海马神经元，发挥抗抑郁疗效的重要机制。     

风湿宁胶囊对类风湿关节炎风寒湿痹动物模型的关节保护及抗炎作用

目的:从抗炎及关节保护方面探讨风湿宁(FSN)胶囊治疗类风湿性关节炎(RA)的药物作用机制。方法:将120只雄性新西兰白兔随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组、风湿宁低、中、高剂量组,每组20只。除正常组外,其余各组建立胶原诱导性关节炎(CIA)加风寒湿刺激的风寒湿痹动物模型,造模成功以后,风湿宁低、中、高剂量组分别按剂量0.33,0.66,1.32 g·kg~(-1)给予风湿宁胶囊水溶液,甲氨蝶呤组给予1.0 mg·kg~(-1)的甲氨蝶呤片水溶液,正常组灌胃生理盐水,各组按剂量4 m L·kg~(-1)灌胃,每日1次,连续7 d。观察风湿宁胶囊对RA白兔风寒湿痹模型的一般情况、关节肿胀程度,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组关节滑膜组织炎症因子白细胞介素(IL)~(-1)β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α信使核糖核酸(mRNA)的表达量及核转录因子-κB(NF-κB)受体激活剂配体(RANKL)mRNA的表达量。结果:风湿宁胶囊可明显改善RA兔生存状态,减轻RA兔后肢膝关节的肿胀,降低膝关节表面温度和关节炎积分,能够显著降低RA兔滑膜组织IL~(-1)β,IL-6,TNF-α,RANKL mRNA的表达。结论:风湿宁胶囊具有抑制关节滑膜组织中炎症因子和RANKL的表达的作用,可有效减轻RA的炎症反应和骨质破坏,从而对RA取得疗效。     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

益气解毒胶囊的质量控制研究

目的建立益气解毒胶囊质量控制方法。方法采用薄层色谱法,对益气解毒胶囊中黄芪、白术、防风、黄芩进行定性鉴别;通过高效液相色谱法对益气解毒胶囊中的黄芩苷进行含量测定。结果黄芪、白术、防风及黄芩TLC鉴别图谱清晰,阴性对照无干扰;黄芩苷进样量在98.5~1970 ng范围内与峰面积呈良好线性,相关系数r=0.9995。平均加样回收率为99.32%,RSD=1.22%。结论所建立的方法简便易行,专属性强、重复性好,能有效的控制益气解毒胶囊的质量。     

双氧水冲洗治疗急性继发性腹膜炎82例临床分析

目的探讨双氧水冲洗腹腔在继发性腹膜炎手术治疗中的作用.方法选择继发性弥漫性腹膜炎患者82例,在处理腹膜炎的原发病灶后,用0.5%双氧水反复冲洗腹腔2～3次.切口用3%双氧水冲洗,所有患者腹腔内均不放置引流管.结果82例患者手术后均未出现腹腔残余脓肿、门脉感染及脓毒血症.切口感染2例.平均住院日8d.结论在处理急性继发性腹膜炎时,利用双氧水冲洗腹腔能安全有效的清洁腹腔,控制细菌繁殖,减少并发症的发生.     

风湿宁胶囊治疗类风湿关节炎机制的研究

目的观察风湿宁胶囊(FSN)对类风湿关节炎(风寒湿痹型)新西兰大白兔血清和关节滑液中白细胞介素IL-6、IL-17、IL-4、IL-10水平的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的可能机制。方法雄性新西兰大白兔120只随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组、风湿宁胶囊低剂量组、风湿宁胶囊中剂量组、风湿宁胶囊高剂量组,每组20只。除正常组外,其他组均制备RA风寒湿痹动物模型。治疗组分别给予风湿宁胶囊溶液、甲氨蝶呤悬浮液,正常对照组灌生理盐水。用药7天后用酶联免疫法测定各组血清及关节滑液中IL-6、IL-17、IL-4、IL-10的水平。结果FSN中、高剂量组和MTX治疗组血清及关节滑液的IL-6、IL-17较模型组明显降低(P0.05),而FSN低剂量组IL-6、IL-17水平的下降不明显(P0.05)。FSN各剂量组和MTX组中IL-4、IL-10水平较模型组均升高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论风湿宁胶囊不仅能下调新西兰RA大白兔血清及关节滑液中过高的IL-6、IL-17水平,而且能上调血清及关节滑液中IL-4、IL-10的水平,提示风湿宁胶囊治疗RA的机制可能是通过平衡促炎因子和抗炎因子的效应进而散寒通络,降低关节滑膜炎症,缓解临床症状。     

加味甘麦大枣汤对更年期抑郁症患者神经内分泌系统的影响

研究加味甘麦大枣汤对阳虚型更年期抑郁症患者的临床疗效及对患者神经内分泌系统的影响。采用随机双盲对照法, 将86例属于阳虚型更年期抑郁症患者随机分为治疗组和对照组,分别予以口服加味甘麦大枣汤和黛立新治疗,于治疗前、治疗2,4周后进行汉密尔顿抑郁量表(HAMD)的评分和匹兹堡睡眠质量量表(PSQI)评分,评价总体疗效,并于治疗前及治疗4周后测定患者血清单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平。结果显示治疗组有效率为88.4%,对照组有效率为81.4%,2组无显著差异;治疗后2,4周与治疗前HAMD评分比较2组均显著降低(P<0.01),2组间同时段比较并无显著性差异;治疗后2,4周与治疗前PSQI评分比较均显著降低(P<0.05),治疗4周后治疗组与对照组PSQI评分比较有差异显著(P<0.01)。治疗4周后2组血清 5-HT,NE水平较治疗前均明显升高(P<0.01),2组间比较差异无显著性;治疗4周后治疗组血清E2水平明显升高(P<0.05),FSH水平明显降低(P<0.05),LH水平有所降低,但无统计学意义,2组间比较差异无显著性。该研究提示加味甘麦大枣汤在治疗更年期抑郁症方面具有良好的作用,其临床总体疗效与黛力新相当,在改善睡眠障碍方面优于黛力新。对其作用机制研究提示加味甘麦大枣汤可能通过调整抑郁症患者5-HT,NE,E2,FSH,LH水平干预更年期抑郁症患者神经内分泌系统,从而改善患者临床症状。     

复方洋参归地丸的质量控制研究

葛根为一种常用的药食同源中药,应用历史悠久。葛根素是从葛根中提取出来的黄酮类化合物,现已制成片剂、注射剂,具有提高免疫力、增强心肌收缩力、保护心肌细胞、降低血压、抗血小板聚集等作用。综述了近年来国内外用葛根素治疗冠心病、心绞痛、糖尿病并发症、慢性咽炎、眼部疾病、脑梗死、帕金森综合征、耳聋等的临床应用研究进展,为进一步开发利用该植物药资源提供理论依据。     

助阳开郁方对抑郁症大鼠行为及海马神经可塑性的影响

目的:研究助阳开郁方对慢性应激抑郁大鼠抑郁行为和海马神经可塑性的影响。方法:将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀(3.33 mg/kg)阳性对照组及助阳开郁方高(46.8 g/kg)、中(23.4 g/kg)、低(11.7 g/kg)剂量组,每组12只。除正常对照组外其余各组在灌胃同时接受慢性不可预知温和刺激并孤养28 d。采用强迫游泳实验、悬尾实验、旷场实验对各组大鼠进行行为学评价;各组大鼠脑组织HE染色,光镜下观察海马组织CA3区和齿状回区神经元形态变化,免疫印迹法检测大鼠海马组织突触素(SYP)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达。结果:与模型组比较,助阳开郁方中、高剂量组大鼠游泳实验和悬尾实验的不动时间显著缩短,助阳开郁方高剂量组大鼠在旷场实验中穿格次数显著增多(P0.01),助阳开郁方中、高剂量组大鼠海马组织形态学明显改善,海马组织突触素和脑源性神经营养因子的表达均显著上调(P0.05或P0.01)。结论:助阳开郁方能改善慢性应激抑郁大鼠的抑郁症状,保护海马神经元,改善海马神经可塑性从而发挥抗抑郁效应。