重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

绿茶多酚抑制LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖

观察绿茶多酚对低密度脂蛋白(LDL)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和p44/42MAPK表达的影响。体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,在LDL(100 μg/ml)刺激时,应用不同剂量的绿茶多酚作用24 h后,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期,p44/42磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定MAPK蛋白表达。与未经LDL处理的平滑肌细胞相比,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖,绿茶多酚对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),并呈现剂量依赖性。流式细胞术检测表明,绿茶多酚可以使LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞大部分处于G0/G1期,与LDL组相比有明显差异(P<0.05)。LDL对磷酸化p44/42MAPK蛋白表达有显著的增强作用,此作用可被绿茶多酚抑制。绿茶多酚可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖和磷酸化p44/42丝裂素活化蛋白激酶的表达。     

巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因的原核表达比较

目的：探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法：构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果：低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两个表达体系中的表达差异，其中pETTFRX-hmGFP的重组蛋白表达水平和可溶性均比pET21b—hmGFP高。结论：对pETTFRX—hmGFP的表达条件进行了优化，为下一步hmGFP成熟重组蛋白的纯化及其荧光波谱分析奠定了良好基础。     

长柄梭罗细胞毒活性部位的化学成分研究

目的 对长柄梭罗Reevesia longipetiolata树皮具细胞毒活性的醋酸乙酯部分化学成分进行研究。方法 采用常压、加压硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱进行分离和纯化，通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果 从其醋酸乙酯部分分离得到5个化合物，分别鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol，I)、胡萝卜苷(daucosterol，Ⅱ)、白桦脂酸(betulinic acid，Ⅲ)、羽扇豆醇(lupeol，Ⅳ)和( )-儿茶素[( )-catechin，V]。结论 5个化合物均为首次从该属植物中分得，并分别讨论了它们的细胞毒活性。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL—10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH／3T3细胞，应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较，采用MTS／PES法确定NIH／3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH／3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH／3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下，一定剂量的rhIL-10可抑制NIH／3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH／3T3细胞大部分处于G0／G1期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

应用毛细管参考链介导的构象分析法进行HLA-DR4等位基因分型

目的应用毛细管参考链构象分析法对HLA—DR4进行等位基因分型，并与测序分型结果相比较，评价该方法的准确性及实用性。方法首先应用FAM标记的引物扩增HLA-DRBl等位基因为纯合型的样本DRB1*0803、DRB1*0901的第二外显子作为参考链，与标准样品HLA-DR1第二外显子杂交获得异源双链，借助测序仪通过毛细管电泳建立中国人HLA-DR48个高频率等位基因的标准迁移率，再对30例DR4样本进行分型，并与测序分型法检测结果进行比较。结果30例样本中28例与测序法测得的等位基因结果一致。结论毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高的优势，与测序法相比具有成本低、高通量的特点，值得在移植、相关疾病等领域的HLA分型中推广应用。     

基于"元精-元气论"阐释填精养脏法与干细胞移植修复组织损伤的理论同一性

干细胞具有元精属性,是元精在机体微观层面的存在形式。从胚胎发生学上看,干细胞基本符合元精所有功能特征,元精化生元气,元精体现物质结构,元气体现代谢和能量传递功能,干细胞的增殖分化及成熟后能量代谢过程即为五行(即5种能量的形式)生克制化理论下元精化生元气的过程。西医利用干细胞功能特点进行组织损伤修复的技术尝试,与中医"元精-元气论"及填精养脏治法在理论上具备同一性。肾藏五脏六腑之精,干细胞直接补充先天肾精,肾精充盛,则五脏六腑之精充盈,脏腑得以濡润而恢复阴阳和合状态,促使受损组织修复,起到任何药力所不能达的效果,可谓是中医"慢病治其本"的经典范式,为中西医结合干细胞修复组织损伤的技术革新与拓展尝试提供新的思路和方法。     

初步建立真核基因调控元件模块的搜索方法

依据基因调控知识对现有方法进行了综合及改进：(1)在序列搜索方面，结合多序列低分值查询与多个保守片段搜索两种方法获得匹配序列，然后序列相互打分，最后进行聚类分析；(2)在位点搜索方面，综合应用位置权重矩阵、成对寡核苷酸及Smith-Waterman等方法；(3)在分析系统方面，采用面向对象的程序设计方法建立跨平台、可扩展、基于数据库的分析系统。本方法对MHC基因家族的初步分析结果表明，能较准确地找到一些基因调控元件模块所在的区域。     

CCR5-894ΔC等位基因在普通人群和艾滋病病毒亚型感染者中的分布

CCR5既是一种重要趋化因子受体,也是艾滋病病毒1亚型(HIV-1)感染CD+4T细胞的协同受体.     

基因技术与中药现代化

目前,基因技术在中药领域应用较多的是基因指纹图谱,主要针对药材鉴定,而在药靶基因、毒副反应基因以及药用基因与活性蛋白/肽类等方面的研究则较少涉及。本文介绍了基因技术在上述中药研究与开发应用领域的作用。同时提出了一些新见解。