黄连解毒汤有效成分对缺氧/复氧时脑微血管内皮细胞核因子-κB的影响

目的:研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧/复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法:建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064,0.032μmol.mL^-1栀子苷,0.028,0.014,0.007μmol.mL^-1黄芩苷和0.024,0.012,0.006μmol.mL^-1小檗碱分别作用于损伤的细胞,采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术检测核因子-κB(NF-κB)亚单位p65的表达,计算平均吸光度和平均面积,比较NF-κB蛋白表达的变化,计算核移位百分率和细胞核与细胞浆的透光度比值比较NF-κB核移位的变化。结果:模型组NF-κB蛋白表达和核移位显著高于正常组(P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值低于模型组,但差异无统计学意义。所有给药组的平均面积均低于模型组(P<0.01)。所有给药组的核移位百分率低于模型组且高于正常组(P<0.01,P<0.01)。所有给药组细胞核与细胞浆的透光度比值高于模型组(P<0.01)。结论:栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧/复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞,其保护机制之一是抑制NF-κB蛋白表达和核移位。     

黄连解毒汤有效成分对缺氧-复氧时脑微血管内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的：研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对缺氧-复氧损伤时大鼠脑微血管内皮细胞的保护机制。方法：建立离体大鼠脑微血管内皮细胞缺氧4 h复氧12 h损伤模型。用0.128,0.064，0.032 μmol·mL-1栀子苷，0.028，0.014，0.007 μmol·mL-1黄芩苷和0.024，0.012，0.006 μmol·mL-1小檗碱分别作用于损伤的细胞，采用免疫细胞化学方法和图象定量分析技术，检测平均吸光度和平均面积，比较各组血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达的变化；采用RT-PCR方法检测并比较各组VCAM-1 mRNA表达的变化。结果：模型组VCAM-1蛋白表达的平均吸光度值和平均面积以及VCAM-1 mRNA表达显著高于正常组(均P<0.01)。所有给药组的平均吸光度值和平均面积均低于模型组，差异有统计学意义(均P<0.01)。0.007 μmol·mL-1黄芩苷组、0.012,0.006 μmol·mL-1小檗碱组的平均吸光度值较正常组高，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01,P<0.01)，其余各给药组与正常组的差异无统计学意义。0.014 μmol·mL-1黄芩苷组平均面积高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，其余各给药组与正常组的差异无统计学意义。各给药组mRNA表达高于正常组且低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤有效成分能够保护缺氧-复氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞，其保护机制之一是抑制VCAM-1的表达。     

RP-HPLC快速测定清胃黄连片中4种指标成分的含量

目的：建立RP-HPLC测定清胃黄连片中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和甘草酸铵4种指标成分含量的方法。方法：采用Hypersil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm)；流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液(磷酸调pH 3.0)采用梯度洗脱,检测波长230 nm；流速1.0 mL·min^-1。结果：栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和甘草酸铵的线性范围分别为：4.82～77.2,5.80～92.8,1.63～26.1 ,6.40～102 μg·mL^-1(0.999 7<r<0.999 9),平均回收率均大于98.0%。结论：该方法专属性强,结果准确可靠,重复性好,可用于清胃黄连片中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和甘草酸铵的含量测定,能更好的控制清胃黄连片的质量。     

高效液相色谱法测定安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的含量

目的：建立同时测定安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱含量的反相液相色谱法。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-6 mmol·L^-1 KH₂PO₄水溶液(pH 4.6)梯度洗脱,检测波长240 nm。结果：栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的线性范围分别为4.50～110.00,5.00～153.00,6.40～191.00 mg·L^-1；质量检测下限分别为0.77,1.53,1.43 ng；栀子苷的回收率为104.44%,RSD为1.79%；黄芩苷的回收率为96.98%,RSD为1.76%；盐酸小檗碱的回收率为101.08%,RSD为3.1%。结论：采用该方法同时测定安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱含量具有简便﹑快速﹑准确等优点。     

葛根芩连片主要活性成分的溶解度及油水分配系数的测定

目的：测定葛根芩连片中主要活性成分（葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱）及其在复方多成分环境下,于不同pH磷酸缓冲液中的溶解度及油水分配系数。方法：采用HPLC法测定葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱在不同pH介质中的溶解度,以及在正辛醇-水和正辛醇-缓冲液体系中的油水分配系数。结果：葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱的溶解度与油水分配系数随pH的变化而变化,在复方多成分背景下也会发生改变。在pH为7.4时溶解度最大,葛根素为7.56 mg?mL^-1,黄芩苷为17.07 mg?mL^-1,盐酸小檗碱为3.57 mg?mL^-1;3者油水分配系数P在pH为1.0时较大,葛根素为0.420（lgP=-0.38）,黄芩苷为10.783（lgP=1.03）,盐酸小檗碱为0.267（lgP=-0.57）。结论：葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱在pH为1.0时脂溶性均较好,推测在胃里吸收较好,在其它pH介质下脂溶性较低,推测脂溶性可能是影响其肠吸收的原因之一。     

京万红组方成分体外抗白色念珠菌抑菌效应探讨

目的:研究京万红组方成分中盐酸小檗碱、黄芩苷及冰片的体外抗白色念珠菌作用。方法:以白色念珠菌为研究对象,K-B纸片扩散法分别测定50,100,150 g·L^-1的盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片及制霉菌素药液抑菌圈直径;采用试管双倍稀释法和棋盘法,测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片、制霉菌素分别最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片两两联用及3种组分联用的MIC,计算出联合抑菌分数(FIC)。结果:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片MIC分别为160,1 280,320 mg·L^-1;MBC分别为640,20 480,640 mg·L^-1。盐酸小檗碱与黄芩苷联用FIC指数0.5,为协同作用;黄芩苷与冰片联用FIC指数为0.625,为相加作用;盐酸小檗碱与冰片联用FIC指数为0.5,为协同作用。3种组分药物联合使用FIC指数为0.375,有一定的协同作用。结论:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片对白色念珠菌均有抑制作用,且3种组分药物联合使用具有一定的协同作用。     

HPLC测定芩丹颗粒中黄芩苷、栀子苷和丹皮酚

目的 :建立HPLC测定芩丹颗粒中黄芩苷、栀子苷和丹皮酚质量分数的方法。 方法 :采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱;黄芩苷以甲醇-水-磷酸(47 ∶53 ∶0.2)为流动相;检测波长280 nm。栀子苷以乙腈-水(15 ∶85)为流动相;检测波长238 nm。丹皮酚以甲醇-水(45 ∶55)为流动相;检测波长274 nm。流速均为1.0 mL ·min^－1。 结果 :黄芩苷、栀子苷和丹皮酚分别在0.006~0.096,0.005~0.080 mg·mL^-1和0.005~0.050 mg· mL^－1线性关系良好。平均回收率分别为黄芩苷98.8%,RSD 0.75%(n＝9);栀子苷99.7%,RSD 0.94%(n＝9);丹皮酚98.4%,RSD 1.41%(n＝9)。 结论 :本方法操作简单、快速、准确、重复性好。     

基于计算机仿真技术的中药水提液中药效物质与共性高分子物质“溶液结构”及相互作用初探——以黄连解毒汤为例

目的：分析淀粉、果胶等共性高分子物质与小分子药效物质的共存状态及相互作用。方法：选择黄连解毒汤模拟液为研究对象,使用计算机仿真技术,对分析物质进行建模、体系能量最小化、计算总体系能量、计算共性高分子单独存在时的能量、计算小分子药效物质单独存在时的能量,分析淀粉、果胶等共性高分子物质与小檗碱、巴马丁、黄芩苷、栀子苷的相互作用关系。结果：淀粉、果胶与小檗碱、巴马汀为相互吸引关系,与黄芩苷为弱相互吸引关系,而与栀子苷则为相互排斥作用;淀粉与小檗碱、巴马丁、黄芩苷、栀子苷的平均相互作用能依次为-32.159,-28.630,-5.974,234.295 kcal·mol^-1,果胶与小檗碱、巴马丁、黄芩苷、栀子苷的相互作用能平均值分别为-19.717,-19.804,-1.067,253.258 kcal·mol^-1;淀粉、果胶和小分子药效物质的分离容易顺序依次为栀子苷 >黄芩苷 >巴马汀 >小檗碱。结论：共性高分子和小分子药效物质间的相互作用由范德华力占主导地位,静电作用较小（3%~15%）,相互作用能的大小和正负值与药效物质的空间位置有关。     

黄连解毒汤中小檗碱及其他成分模拟组合在脑缺血大鼠体内药动学比较研究

目的 比较基于黄连解毒汤原方比例的4种不同模拟组合中主成分小檗碱在脑缺血模型大鼠体内的药动学变化过程。方法 大鼠按体质量分为模型组和假手术组,模型组以线栓法复制大鼠脑缺血模型。每组又分为4个亚组,分别为小檗碱（247.4 mg/kg）组、小檗碱（247.4 mg/kg）＋黄芩苷（190.7 mg/kg）组、小檗碱（247.4 mg/kg）＋栀子苷（149.5 mg/kg）组、小檗碱（247.4 mg/kg）＋栀子苷（149.5 mg/kg）＋黄芩苷（190.7 mg/kg）组。各组分别于ig给药后0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、48、72 h 眼眶取血,HPLC法测定小檗碱在大鼠血浆中的浓度变化,绘制药-时曲线,DAS 2.0计算药动学参数。结果 根据统计矩参数,模型组和假手术组小檗碱的吸收顺序均为小檗碱＋栀子苷组＞小檗碱＋栀子苷＋黄芩苷组＞小檗碱组＞小檗碱＋黄芩苷组。结论 针对脑缺血模型,黄连解毒汤中的栀子苷可促进小檗碱的吸收,黄芩苷则对小檗碱的吸收有一定的抑制作用,而三者组合给药后栀子苷可以降低黄芩苷对小檗碱吸收的抑制作用。     

黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究

目的 :研究黄连解毒汤及其单味药对细胞氧化损伤保护作用的药效动力学,并对其血清药理学方法进行探讨。 方法 :采用血清药理学方法,研究黄连、黄芩、黄连解毒汤含药血清对H₂O₂所致PC12细胞氧化应激损伤保护作用的时间-效应关系;并研究黄连、黄芩、黄连解毒汤提取物和小檗碱、黄芩苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效应关系。 结果 :各药的含药血清对细胞氧化损伤都有明显的保护作用,其中以黄连解毒汤作用最强,黄芩和黄芩苷次之,黄连最弱;在试验浓度范围内,黄连解毒汤和黄芩提取物对模型细胞有剂量依赖性保护作用,而黄连没有保护作用;在0.15~10 μg ·mL^-1浓度范围内,黄芩苷对细胞模型有保护作用,且呈剂量依赖性。0.15~10 ng ·mL^-1浓度范围内,小檗碱没有明显的保护作用。 结论 :黄连解毒汤体内抗氧化作用强于各单味药;黄芩苷可能是黄芩及其含药血清中的抗氧化成份之一,而小檗碱与含药血清的抗氧化作用无关;黄连解毒汤及其单味药含药血清对细胞氧化应激模型的保护作用呈时间和剂量依赖性。     

多波长高效液相色谱法同时测定黄连解毒汤中3类成分

目的：同时测定黄连解毒汤中3类有效成分（盐酸小檗碱、盐酸巴马亭、盐酸药根碱、黄芩苷、栀子苷）的含量。方法：三波长同时检测的高效液相色谱法； Diamonsil C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相水-甲醇-0.05%磷酸（梯度洗脱）；柱温35 ℃；流速1 mL·min^-1；检测波长345,280,238 nm。结果：建立了同时对黄连解毒汤中的5个成分进行定量的测定方法,本法快速、重复性好、灵敏度高。结论：为黄连解毒汤提供了更合理、可靠的质控方法。     

RP-HPLC法同时测定四季三黄片中5种指标成分

目的 建立RP-HPLC法同时测定四季三黄片(大黄、黄芩、栀子、黄柏)中栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素和大黄酚的方法.方法 采用Thermo-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0 μm);流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液,采用梯度洗脱,检测波长分别为240 nm、345 nm、278 nm、254 nm;体积流量1.0 mL/min.结果 栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素和大黄酚的线性范围分别为:6～60 μg/mL、5.4～54μg/mL、5.3～53 μg/mL、4.3～43 μg/mL、5.8～58 μg/mL (0.999 7 ＜r ＜0.999 9),平均回收率在98.0％和102％之间.结论 该法检测效率高,专属性强,重复性好,可用于四季三黄片中栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素和大黄酚的定量测定.     

黄连解毒汤对神经细胞保护作用活性成分的筛选

目的:探讨黄连解毒汤及其主要成分小檗碱、黄芩苷、巴马汀、栀子苷对过氧化氢(H2O2)、谷氨酸(Glu)所致神经细胞损伤的影响.方法:制备H2O2,Glu损伤入神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)、小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)模型,设正常对照、模型、黄连解毒汤、小檗碱、黄芩苷、巴马汀及栀子苷组,筛选浓度为7.812 5,15.625,31.25,62.5,125,250,500 mg·L-1,应用MTT法检测药物对损伤后细胞增殖的影响.结果:黄连解毒汤能够促进SH-SY5Y细胞增殖,适当浓度的栀子苷能够促进SH-SY5Y,Neuro-2a细胞增殖,并对H2O2,Glu损伤的SH-SY5Y细胞有保护作用,对H2O2损伤的Neuro-2a也具有保护作用.结论:栀子苷可能为黄连解毒汤对神经细胞保护作用的有效成分.     

基于方证对应理论的黄连解毒汤肠道吸收分析

目的:基于方证对应理论研究正常和脑缺血病理状态下黄连解毒汤中指标成分肠吸收情况的差异性,探讨临床对症治疗脑缺血疾病的合理性。方法:以黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、栀子苷为检测指标,建立在体单向肠灌流模型,考察不同浓度黄连解毒汤在正常和脑缺血大鼠的肠吸收情况。结果:与正常组比较,不同浓度黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、栀子苷在脑缺血模型组大鼠不同肠段的肠吸收均有一定程度增加,其中盐酸小檗碱在十二指肠、空肠有显著性增加;黄芩苷在全部肠段的肠吸收均有显著性增加;栀子苷在空肠、回肠、结肠有显著性增加。结论:黄连解毒汤主要药效成分在脑缺血大鼠的肠道吸收情况优于正常组,为该复方临床对症治疗脑缺血疾病的合理性提供实验依据,体现了中医方证对应理论。     

黄连解毒汤中9种主要成分在大鼠脑组织中分布特征研究

目的建立灵敏、准确、可靠的小檗碱、小檗红碱、药根碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、京尼平苷和栀子黄素B在大鼠海马、皮层、纹状体和脑脊液组织中高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中9种主要成分在大鼠脑组织中分布研究。方法优化黄连解毒汤中9种主要成分及内标克拉霉素和氯霉素的质谱检测条件,确定分析条件并对方法学进行考察。正常大鼠ig给予黄连解毒汤,末次给药1 h后采集脑脊液、海马、皮层和纹状体样品,经处理后将该方法用于9种成分的测定。结果小檗碱、药根碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、栀子黄素B在1～250 ng/mL呈现良好的线性关系(r~20.99),小檗红碱在1～500 ng/mL具有良好的线性关系(r~2=0.991 2),京尼平苷在5～500 ng/mL具有良好的线性关系(r~2=0.999 5);各成分的日内、日间精密度RSD均小于12.94%,准确度均在-12.71%～6.91%;提取回收率均在88.02%～106.70%,基质效应均在88.92%～105.10%;短期、冻融循环和长期稳定性RSD均小于12.51%。各成分在海马、皮层和纹状体中的含量为小檗碱黄芩苷京尼平苷小檗红碱巴马汀汉黄芩素药根碱千层纸素A栀子黄素B;各成分在脑脊液中的含量为京尼平苷小檗碱小檗红碱巴马汀黄芩苷栀子黄素B药根碱汉黄芩素千层纸素A。结论该方法可用于大鼠脑组织中小檗碱、药根碱等9种成分含量的同时检测,并可用于这9种成分在大鼠脑组织分布研究,为探究黄连解毒汤治疗脑部疾病的物质基础提供依据。     

清开灵有效组分对体外缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注损伤模型,研究细胞生存活性和NO含量的变化,探讨清开灵有效组分的保护作用。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,MTT法测定细胞生存活性变化并结合硝酸酶还原法测定细胞上清NO含量。结果:模型组细胞OD值明显低于正常组,NO含量明显升高(P<0.01);清开灵各组分都显著降低上清中NO含量,而且胆酸、黄芩苷、栀子苷(12.5μg.mL-1)组和新清开灵注射液(0.03%)明显增高OD值(P<0.05)。结论:清开灵有效组分通过提高细胞生存活性、减少NO分泌而保护体外缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。