脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的：本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究，探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律，进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。方法：建立大鼠脾阴虚证衰老模型，观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化；观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控。结果：脾阴虚衰老状态下，大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降，滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力。结论：脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变，滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用。     

衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的：研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法：用聚合酶链反应（PCR）、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果：自然衰老小鼠脑组织mtDNA缺失较青年小鼠明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论：独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

脾阴虚证与自由基、能量代谢的相关性及理脾阴正方对其的作用

目的:通过观察理脾阴正方对脾阴虚证大鼠回肠组织中MDA含量、GSH-PX以及线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性的影响,探讨其对脾阴虚证大鼠自由基代谢和细胞能量代谢的恢复机理。方法:以复合因素损害大鼠,对正常对照组、脾阴虚模型组、脾阴虚中药反证组用比色法检测回肠组织中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及回肠组织线粒体Ⅰ、Ⅳ活性。结果:(1)脾阴虚模型组MDA含量明显高于正常组(P<0.05)、GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性明显低于正常组(P<0.05)。(2)脾阴虚中药反证组MDA含量低于脾阴虚模型组(P<0.05)、GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ活性活性高于模型组(P<0.05)。结论:理脾阴正方能提高大鼠回肠组织中GSH-Px、线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅳ的活性,降低大鼠回肠组织中脂质过氧化物MDA的含量,这可能是理脾阴正方对脾阴虚证大鼠自由基修复和细胞能量代谢障碍的保护机理。     

衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的:研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果:自然衰老小鼠脑组织m tDNA缺失较青年小鼠明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的m tDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论:独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

肾虚衰老与线粒体DNA氧化损伤关系的研究

目的:观察肾虚衰老与外周血线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链复合酶活力的相关性。方法:用聚合酶链反应(PCR)和酶动力学技术。结果:老年肾虚组线粒体DNA缺失较青年组和老年对照组明显增多、呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力较青年组和老年对照组明显降低。补肾方五子衍宗丸可明显减少线粒体DNA缺失、提高呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ的活力。结论:提示线粒体DNA的氧化损伤可能是肾虚的重要原因之一。     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失(P＜0.01),提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成(P＜0.05,P＜0.01);枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失(P＜0.05,P＜0.01)。结论五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠组织黏蛋白表达的影响

目的观察滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠组织黏蛋白(MUC)表达的影响,探讨其相关作用机制。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组和滋补脾阴方药组。采用复合方法建立脾阴虚证动物模型,连续38 d,滋补脾阴方药组于造模第25～38日予滋补脾阴方药药液灌胃,正常对照组和模型组予生理盐水灌胃。免疫组化观察大鼠空肠组织MUC的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠空肠组织MUC2蛋白表达有降低趋势,MUC3和MUC5AC蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,滋补脾阴方药组大鼠MUC2蛋白表达有上调趋势,MUC3蛋白表达明显降低(P0.001),MUC5AC蛋白表达有下调趋势。结论滋补脾阴方药可改善脾阴虚模型大鼠MUC的表达。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马胰岛素抵抗影响的实验研究

目的探讨滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马胰岛素信号通路改变的保护作用及其可能的机制。方法高脂饮食加注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病模型。脾阴虚模型参照经典的复合因素造模法建立。行为学测试大鼠学习记忆能力。Western blot检测海马IRE1α、JNK、IRS-1蛋白表达情况。结果脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆能力与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。滋补脾阴方药治疗后学习记忆能力改善。脾阴虚糖尿病大鼠海马中磷酸化IRS-1、JNK及IRE1α蛋白表达增强(P<0.05),滋补脾阴方药治疗后表达减弱。结论滋补脾阴方药可显著改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。其作用可能与改善内质网应激来调节胰岛素信号通路有关。     

滋补脾阴方药对脾阴虚证模型大鼠胃肠激素及胃肠免疫功能的影响

目的:观察滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠胃肠激素及胃肠免疫功能的影响.方法:将18只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组和滋补脾阴方药组,每组6只,除正常对照组外,其余各组采用饮食不节、过度劳倦、温里药伤阴的方法构建脾阴虚证大鼠模型,连续给予相应药物2周.采用ELISA法检测大鼠血清血管活性肠肽(vasoactiv...     

五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的 :研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失 (P <0 0 1) ,提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失 (P<0 0 5,P <0 0 1)。结论 :五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

脾阴虚证大鼠模型心脏组织MAPK信号转导与调控的研究

目的：通过观察脾阴虚证大鼠模型MAPK活性变化,探讨在脾阴虚状态下大鼠心脏组织MAPK活性变化规律及其调控机制,进一步揭示脾阴虚证的病理实质和滋脾阴法的作用,从而为脾实质的研究提供客观依据。方法：采用饮食不节、疲劳过度和药物损伤复合造模法塑造脾阴虚证动物模型。采用免疫沉淀法检测心脏组织中MAPK活性。结果：脾阴虚证模型组与正常对照组相比,心脏组织的细胞浆MAPK活性升高（P〈0.05）,脾阴虚证治疗组与正常对照组相比,心脏组织的细胞浆MAPK活性升高（P〈0.01）,与脾阴虚证模型组相比,心脏组织的细胞浆MAPK活性升高（P〈0.01）。结论：脾阴虚证状态下,大鼠心脏组织MAPK参与的细胞信号转导发生改变。滋脾阴方药能有效调控脾阴虚证大鼠心脏组织MAPK活性变化,可能为滋脾阴方药作用机制之一。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织和外周组织丙酮酸脱氢酶1α蛋白表达的影响

目的探讨滋补脾阴方药改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂饮食喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d。取大脑皮质、海马及胃、肝组织,采用Western blot观察各组丙酮酸脱氢酶1α(PDHE1α)蛋白表达变化。结果糖尿病组和病证组大鼠皮质PDHE1α表达低于空白组(P0.05),治疗组皮质和胃组织PDHE1α较病证组升高(P0.05)。各组大鼠海马及肝组织中PDHE1α蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论滋补脾阴方药能够调节大脑皮质及胃组织中PDHE1α蛋白表达,改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍。     

五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响

目的：研究五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活力的影响。方法：38例男性老年肾虚者采用单盲法，随机分为五子衍宗丸治疗组和安慰剂对照组，服药3个月。分别用聚合酶链反应（PCR）和酶动力学方法检测治疗前后外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体的活力。结果：五子衍宗丸可提高男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体呼吸链酶复合体I、Ⅳ活力，减少线粒体DNA缺失（P＜0．05，P＜0．01）。结论：五子衍宗丸对男性老年肾虚者白细胞线粒体DNA氧化损伤有保护作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白5 表达的影响

目的：观察脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、葡萄糖转运蛋白5（GLUT5）mRNA与蛋白表达的变化,以及滋补脾阴方药（ZBPYR）的干预作用。方法：利用饮食失常兼过劳结合燥热耗伤阴液法进行脾阴虚大鼠模型的复制,将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、脾阴虚组和滋补脾阴方药组。使用实时荧光定量PCR（qPCR）法测定空肠GLUT1、GLUT5的mRNA表达,蛋白质印迹（Western Blot）法测定空肠GLUT1、GLUT5的蛋白表达。结果：与正常组比较,脾阴虚组GLUT1、GLUT5的mRNA和蛋白表达量均下降（P<0.05）;与脾阴虚组比较,滋补脾阴方药组能够明显上调GLUT1、GLUT5的mRNA表达水平（P<0.01）,并增加GLUT1、GLUT5蛋白的表达含量（P<0.05）。结论：通过上调脾阴虚大鼠空肠GLUT1、GLUT5 mRNA和蛋白的表达,可能是ZBPYR对脾阴虚证发挥干预作用的机制之一。     

滋补脾阴方药对衰老大鼠学习记忆能力的影响及脑内机制

目的 :观察滋补脾阴方药对衰老大鼠学习记忆能力的影响 ,并探讨其脑内机制。方法 :以 2 3月龄自然衰老大鼠为研究对象 ,通过Y 电迷宫检测大鼠的学习记忆能力 ,同时 ,以免疫组化的方法检测脑内学习记忆相关脑区NMDA r、GABA、GFAP的变化。结果 :滋补脾阴方药能明显提高衰老大鼠Y -迷宫的正确次数 ,增强NMDA r、GABA的表达 ,抑制GFAP的表达。结论 :滋补脾阴方药可以通过减缓NMDA r、GABA能神经元的丧失 ,改善氨基酸递质功能 ,以及减轻反应性胶质化来提高衰老大鼠的学习记忆能力。     

补益脾胃法对脾阴虚证老龄大鼠海马超微结构的影响

目的:通过观察脾阴虚证大鼠海马细胞超微结构的变化,探讨脾虚衰老的病理变化及补益脾胃法延缓衰老的可能机制.方法:采用饮食不节、疲劳过度和燥热伤阴药物损伤等复合因素建立脾阴虚证青年大鼠及老年大鼠模型.用补益脾胃方药进行治疗.观察海马超微结构.结果:衰老大鼠海马细胞呈退行性变化,可见细胞凋亡.补益脾胃方药可以改善海马组织衰老性改变,尤其对青年脾虚证大鼠.结论:补益脾胃方药可以改善衰老大鼠海马组织细胞凋亡进程,可能是通过抗自由基及调节衰老基因起作用的.     

补益脾胃法对脾阴虚证老龄大鼠海马超微结构的影响

目的：通过观察脾阴虚证大鼠海马细胞超微结构的变化，探讨脾虚衰老的病理变化及补益脾胃法延缓衰老的可能机制。方法：采用饮食不节、疲劳过度和燥热伤阴药物损伤等复合因素建立脾阴虚证青年大鼠及老年大鼠模型。用补益脾胃方药进行治疗。观察海马超微结构。结果：衰老大鼠海马细胞呈退行性变化，可见细胞凋亡。补益脾胃方药可以改善海马组织衰老性改变，尤其对青年脾虚证大鼠。结论：补益脾胃方药可以改善衰老大鼠海马组织细胞凋亡进程，可能是通过抗自由基及调节衰老基因起作用的。     

肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响

目的:观察肾气丸对2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶活性的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组12只和造模组48只,造模组48只大鼠予以高糖高脂饲料喂养3周后,采用小剂量链脲佐菌素加氢化可的松注射造模,观察2周制备2型糖尿病(阳虚证)大鼠,随机分为模型组、肾气丸组、补阳组、罗格列酮组。给药3周后处死大鼠,采用酶联免疫分析(ELISA)法分别测定大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体及ATP酶的活性。结果:模型组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性低于正常组(P0.01);肾气丸组、罗格列酮组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显高于模型组(P0.05),但组间差异无统计学意义(P0.05);补阳组Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性明显低于肾气丸组(P0.01)。结论:肾气丸能改善2型糖尿病阳虚证大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及ATP酶的活性。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激影响的研究

目的:探讨滋补脾阴方药(ZiBu PiYin Recipe,ZBPYR)对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激相关分子表达的影响。方法:高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射建立2型糖尿病模型,在此基础上,通过复合因素造模的方法建立脾阴虚糖尿病模型,以水迷宫实验评价模型大鼠是否出现学习记忆障碍,之后观察各组大鼠海马内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和真核转录因子2的α亚单位(eukaryotic translation initiation factor 2 subunitα,eIF2α)表达的变化。结果:ZBPYR治疗后GRP78 mRNA水平降低(P0.05),GRP78、磷酸化PERK、磷酸化eif2α蛋白水平明显降低(P0.05),与脾阴虚糖尿病组相比,差异有统计学意义。结论:滋补脾阴方药可能是通过影响内质网应激PERK信号传导改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。